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DNA的復(fù)制一.DNA復(fù)制的推測(cè)——假說(shuō)-演繹法1.提出問題2.作出假說(shuō)3.演繹推理4.總結(jié)結(jié)論DNA以什么方式復(fù)制?沃森和克里克:半保留復(fù)制科學(xué)方法:同位素標(biāo)記法、密度梯度離心法梅塞爾森和斯塔爾:大腸桿菌DNA復(fù)制實(shí)驗(yàn)15N和14N是氮元素的兩種穩(wěn)定同位素,這兩種同位素的相對(duì)原子質(zhì)量不同,含15N的DNA比含14N的DNA密度
,因此,利用
技術(shù)可以在試管中分離開含有相對(duì)原子質(zhì)量不同的氮元素的DNA。大密度梯度離心高密度帶中密度帶低密度帶15N14N15N15N14N14N一.DNA復(fù)制的推測(cè)——假說(shuō)-演繹法1.提出問題2.作出假說(shuō)3.演繹推理4.總結(jié)結(jié)論(3)演繹推理,預(yù)測(cè)結(jié)果15N14N14N14N15N14NP:F1:F2:細(xì)胞再分裂一次15N15N轉(zhuǎn)移到含14NH4Cl的培養(yǎng)液中細(xì)胞分裂一次提出DNA離心提出DNA離心提出DNA離心高密度帶中密度帶低密度帶中密度帶如果是全保留復(fù)制,預(yù)期結(jié)果是?如果是分散復(fù)制,預(yù)期結(jié)果是?一.DNA復(fù)制的推測(cè)——假說(shuō)-演繹法1.提出問題2.作出假說(shuō)3.演繹推理4.總結(jié)結(jié)論(4)進(jìn)行實(shí)驗(yàn),總結(jié)結(jié)論DNA是半保留復(fù)制實(shí)驗(yàn)結(jié)果和預(yù)測(cè)結(jié)果一致15N14N14N14N15N14NP:F1:F2:細(xì)胞再分裂一次15N15N轉(zhuǎn)移到含14NH4Cl的培養(yǎng)液中細(xì)胞分裂一次提出DNA離心提出DNA離心提出DNA離心高密度帶中密度帶低密度帶中密度帶1.概念:DNA的復(fù)制是指以
為模板合成
的過(guò)程。主要在細(xì)胞核中,但在線粒體、葉綠體也有DNA的復(fù)制;原核細(xì)胞:主要在擬核中,在質(zhì)粒處也有DNA的復(fù)制。3.發(fā)生時(shí)期(真核生物)細(xì)胞分裂前的間期(有絲分裂前的間期、減數(shù)分裂前的間期),隨著染色體的復(fù)制而完成。真核細(xì)胞:
2.DNA復(fù)制場(chǎng)所親代DNA子代DNA4.過(guò)程:①解旋:在ATP驅(qū)動(dòng)下,解旋酶將DNA雙螺旋的2條鏈之間的氫鍵解開。②合成子鏈:以每一條母鏈為模板,以游離的將4種脫氧核苷酸為原料,按照堿基互補(bǔ)配對(duì)原則,在DNA聚合酶的作用下合成與母鏈互補(bǔ)的1條子鏈。③形成DNA:新合成的子鏈不斷延伸,每條新鏈與其對(duì)應(yīng)的模板鏈繞成雙螺旋結(jié)構(gòu)。(1)半保留復(fù)制(2)邊解旋邊復(fù)制5.DNA復(fù)制的特點(diǎn)DNA聚合酶不能催化DNA新鏈從頭合成,只能催化dNTP加入核苷酸鏈的3'-OH末端。因而復(fù)制之初需要一段RNA(DNA)引物的3’一OH端為起點(diǎn),合成5’→3’方向的新鏈。模板鏈:3’→5’;合成子鏈方向:5’→3’(3)雙向復(fù)制新合成的子鏈DNA聚合酶DNA聚合酶解旋酶游離的脫氧核苷酸前導(dǎo)鏈、后隨鏈、岡崎片段新合成的子代DNA一條鏈?zhǔn)悄0迥告湥硪粭l是新合成的子鏈6.DNA復(fù)制需要的基本條件模板原料酶能量親代DNA的兩條鏈游離的4種脫氧核苷酸解旋酶/DNA聚合酶等由細(xì)胞提供(如ATP提供)7.DNA精確復(fù)制的原因(1)DNA獨(dú)特的雙螺旋結(jié)構(gòu),為復(fù)制提供了精確的模板。(2)通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì),保證了復(fù)制能夠準(zhǔn)確地進(jìn)行。8.DNA制的意義將遺傳信息從親代細(xì)胞傳遞給子代細(xì)胞,保持了遺傳信息的連續(xù)性。新合成的子鏈DNA聚合酶DNA聚合酶解旋酶游離的脫氧核苷酸例1.下面是DNA復(fù)制的有關(guān)圖示。A→B→C表示大腸桿菌的DNA復(fù)制。D→F表示哺乳動(dòng)物的DNA復(fù)制。圖中黑點(diǎn)表示復(fù)制起點(diǎn),“→”表示復(fù)制方向,“?”表示時(shí)間順序。(1)A→F均有以下特點(diǎn):延伸的子鏈緊跟著解旋酶,這說(shuō)明DNA分子復(fù)制是______________________的。(2)若A中含有48500個(gè)堿基對(duì),假設(shè)DNA分子從頭到尾復(fù)制,則理論上此DNA分子復(fù)制約需30s,而實(shí)際上只需約16s,根據(jù)A→C過(guò)程分析,這是因?yàn)開____________________。特點(diǎn)2:雙向復(fù)制復(fù)制是雙向進(jìn)行的邊解旋邊復(fù)制特點(diǎn)1:邊解旋邊復(fù)制例1.下面是DNA復(fù)制的有關(guān)圖示。A→B→C表示大腸桿菌的DNA復(fù)制。D→F表示哺乳動(dòng)物的DNA復(fù)制。圖中黑點(diǎn)表示復(fù)制起點(diǎn),“→”表示復(fù)制方向,“?”表示時(shí)間順序。(3)哺乳動(dòng)物的DNA分子展開可達(dá)2m之長(zhǎng),若按A→C的方式復(fù)制,至少需要8h,而實(shí)際上只需要約2h,根據(jù)D→F過(guò)程分析,是因?yàn)開________________________________。(4)C與A相同,F(xiàn)與D相同,C、F能被如此準(zhǔn)確地復(fù)制出來(lái),是因?yàn)開________________________________________________________________________DNA分子中有多個(gè)復(fù)制起點(diǎn)特點(diǎn)3:多起點(diǎn)復(fù)制(真核生物)①DNA獨(dú)特的雙螺旋結(jié)構(gòu)為復(fù)制提供精確的模板。②復(fù)制過(guò)程嚴(yán)格遵循堿基互補(bǔ)配對(duì)原則。2023山東卷T5.將一個(gè)雙鏈DNA分子的一端固定于載玻片上,置于含有熒光標(biāo)記的脫氧核苷酸的體系中進(jìn)行復(fù)制。甲、乙和丙分別為復(fù)制過(guò)程中3個(gè)時(shí)間點(diǎn)的圖像,①和②表示新合成的單鏈,①的5'端指向解旋方向,丙為復(fù)制結(jié)束時(shí)的圖像。該DNA復(fù)制過(guò)程中可觀察到單鏈延伸暫?,F(xiàn)象,但延伸進(jìn)行時(shí)2條鏈延伸速率相等。已知復(fù)制過(guò)程中嚴(yán)格遵守堿基互補(bǔ)配對(duì)原則,下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是()A.據(jù)圖分析,①和②延伸時(shí)均存在暫?,F(xiàn)象B.甲時(shí)①中A、T之和與②中A、T之和可能相等C.丙時(shí)①中A、T之和與②中A、T之和一定相等D.②延伸方向?yàn)?'端至3'端,其模板鏈3'端指向解旋方向D1966年,科學(xué)家提出了DNA半不連續(xù)復(fù)制假說(shuō):DNA復(fù)制形成互補(bǔ)子鏈時(shí),一條子鏈連續(xù)形成,另一條子鏈不連續(xù),即先形成短片段后再進(jìn)行連接(如圖1)。為驗(yàn)證假說(shuō),進(jìn)行如下實(shí)驗(yàn):用3H標(biāo)記T4噬菌體,在培養(yǎng)噬菌體的不同時(shí)刻,分離出噬菌體DNA并加熱使其變性,再進(jìn)行密度梯度離心,以DNA單鏈片段分布位置確定片段大小,并檢測(cè)相應(yīng)位置DNA單鏈片段的放射性,結(jié)果如圖2。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是()A.與60秒相比,120秒結(jié)果中短鏈片段減少的原因是短鏈片段連接形成長(zhǎng)鏈片段B.DNA的半不連續(xù)復(fù)制保證了DNA的兩條鏈能夠同時(shí)作為模板進(jìn)行復(fù)制C.該實(shí)驗(yàn)可用32P標(biāo)記的脫氧核苷酸代替3H標(biāo)記的脫氧核苷酸標(biāo)記DNAD.若以DNA連接缺陷的T4噬菌體為材料,則圖2中的曲線峰值將右移D(1)將含有15N的DNA分子放在含有14N的培養(yǎng)基上培養(yǎng),復(fù)制n次,9.DNA復(fù)制的相關(guān)計(jì)算則:
共產(chǎn)生子代DNA分子______個(gè);
子代DNA分子中,含15N的DNA分子________個(gè);
子代DNA分子中,含14N的DNA分子________個(gè);
子代DNA分子中,只含15N的DNA分子______個(gè);
子代DNA分子中,只含14N的DNA分子______個(gè);2n22n02n-2(2)DNA復(fù)制中消耗的脫氧核苷酸數(shù)若親代DNA分子含有某種脫氧核苷酸m個(gè),經(jīng)過(guò)n次復(fù)制需要消耗該種脫氧核苷酸數(shù)為______________。第n次復(fù)制需要該種脫氧核苷酸數(shù)為____________。m·(2n-1)m·2n-1例3:有15N標(biāo)記的一個(gè)DNA分子放在含有14N的培養(yǎng)基中復(fù)制三次,則含15N的DNA分子占全部DNA分子的比例是_____,含15N的DNA鏈占全部DNA單鏈的比例是_____。復(fù)制8次,則含15N的DNA分子占全部DNA分子的比例是___________。含15N的DNA鏈占全部DNA單鏈的比例是__________。若該DNA分子中含堿基A50個(gè),則:復(fù)制n次產(chǎn)生子代DNA分子_______個(gè),總共需A_______________個(gè),第n次復(fù)制產(chǎn)生子代DNA分子_____個(gè),需A___________________個(gè)。
1/850×2n-11/450×(2n-1)2n2n2/28=1/272/29=1/28例4.某DNA分子中含有1000個(gè)堿基對(duì)(被32P標(biāo)記),若將該DNA分子放在只含被31P標(biāo)記的脫氧核苷酸的培養(yǎng)液中讓其復(fù)制兩次,子代DNA分子相對(duì)分子質(zhì)量平均比原來(lái)減少
。1500OPCH2
OHOOHHOHHHHH堿基
磷酸
脫氧核糖PPPPATGCPPPPATGC以每個(gè)DNA分子中的1對(duì)脫氧核苷酸為例:用是31P復(fù)制2次,得到4個(gè)DNA=8個(gè)脫氧核苷酸(6個(gè)是31P+2個(gè)是32P),算出每個(gè)脫氧核苷酸含P平均質(zhì)量=(32×2+31×6)/8=31.25;每個(gè)脫氧核苷酸含P平均質(zhì)量減少量=32-31.25=0.75;該DNA分子含有1000個(gè)堿基對(duì),每個(gè)DNA分子平均質(zhì)量減少量=1000×2×0.75=1500OPCH2
OHOOHHOHHHHH堿基
磷酸
脫氧核糖PPPPATGCPPPPATGC以每個(gè)DNA分子中的1對(duì)脫氧核苷酸為例:用是31P復(fù)制2次,得到4個(gè)DNA=8個(gè)脫氧核苷酸(6個(gè)是31P+2個(gè)是32P),用是32P復(fù)制2次,得到4個(gè)DNA=8個(gè)脫氧核苷酸(0個(gè)是31P+8個(gè)是32P),算出兩次減少的總質(zhì)量=(8-2)×(32-31)=6每個(gè)脫氧核苷酸含P平均質(zhì)量減少量=6/8=0.75;該DNA分子含有1000個(gè)堿基對(duì),每個(gè)DNA分子平均質(zhì)量減少量=1000×2×0.75=1500OPCH2
OHOOHHOHHHHH堿基
磷酸
脫氧核糖PPPPATGCPPPPATGC1個(gè)DNA復(fù)制2次,得到4個(gè)DNA=8條脫氧核苷酸鏈:用是31P復(fù)制2次,得到8條脫氧核苷酸鏈(6條是31P+2條是32P),用是32P復(fù)制2次,得到8條脫氧核苷酸鏈(0條是31P+8條是32P),該DNA分子含有1000個(gè)堿基對(duì),1條是31P鏈和1條是32P鏈的差值=(32-31)×1000=1000;兩種復(fù)制總差值=1000×6=6000子代DNA4個(gè),每個(gè)DNA分子平均質(zhì)量減少量=6000/4=1500(1)注意“DNA復(fù)制了n次”和“第n次復(fù)制”的區(qū)別,前者包括所有的復(fù)制,但后者只包括第n次的復(fù)制。(2)注意堿基的單位是“對(duì)”還是“個(gè)”。(3)切記在DNA復(fù)制過(guò)程中,無(wú)論復(fù)制了幾次,含有親代脫氧核苷酸單鏈的DNA分子都只有兩個(gè)。(4)看清試題中問的是“DNA分子數(shù)”還是“鏈數(shù)”,“含”還是“只含”等關(guān)鍵詞,以免掉進(jìn)陷阱。特別提醒:“DNA復(fù)制”相關(guān)題目的4點(diǎn)“注意”用物理性質(zhì)特殊的同位素來(lái)標(biāo)記化學(xué)反應(yīng)中原子的去向,從而示蹤物質(zhì)的運(yùn)行規(guī)律和變化規(guī)律??茖W(xué)方法:同位素標(biāo)記法1.放射性同位素3H標(biāo)記亮氨酸,研究分泌蛋白的合成與運(yùn)輸過(guò)程。14C標(biāo)記CO2,研究暗反應(yīng)中碳的轉(zhuǎn)移途徑。標(biāo)記DNA3H14C32P35S標(biāo)記蛋白質(zhì)探究噬菌體的遺傳物質(zhì)——檢測(cè)放射性2.穩(wěn)定同位素18O標(biāo)記H2O、CO2研究光合產(chǎn)物O2中氧原子的來(lái)源。——檢測(cè)密度或相對(duì)分子質(zhì)量15N標(biāo)記DNA研究DNA復(fù)制方式。01DNA的復(fù)制例1.一個(gè)被15N標(biāo)記的、含1000個(gè)堿基對(duì)的DNA分子片段,其中一條鏈中T+A占30%,若將該DNA分子放在含14N的培養(yǎng)基中連續(xù)復(fù)制3次,敘述正確的是()A.該DNA分子的另一條鏈中T+A占70%B.該DNA分子中含有A的數(shù)目為400個(gè)C.該DNA分子第3次復(fù)制時(shí)需要消耗2800個(gè)GD.經(jīng)3次復(fù)制后,子代DNA分子中含14N的比例為7/8C方法便箋復(fù)制染色體數(shù)目不變
DNA數(shù)目加倍復(fù)制產(chǎn)生的兩個(gè)子代DNA分子位于一條染色體的兩條姐妹染色單體上,由著絲點(diǎn)連在一起,在有絲分裂后期或減數(shù)第二次分裂后期著絲點(diǎn)分裂時(shí)分開,分別進(jìn)入兩個(gè)子細(xì)胞中。01DNA的復(fù)制方法便箋▲論DNA復(fù)制多少次,含有母鏈的DNA分子永遠(yuǎn)只有兩條01DNA的復(fù)制例1.一個(gè)被15N標(biāo)記的、含1000個(gè)堿基對(duì)的DNA分子片段,其中一條鏈中T+A占30%,若將該DNA分子放在含14N的培養(yǎng)基中連續(xù)復(fù)制3次,敘述正確的是()A.該DNA分子的另一條鏈中T+A占70%B.該DNA分子中含有A的數(shù)目為400個(gè)C.該DNA分子第3次復(fù)制時(shí)需要消耗2800個(gè)GD.經(jīng)3次復(fù)制后,子代DNA分子中含
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