茉莉花莖總黃酮提取及對羥自由基清除作用(一)

1、茉莉花莖總黃酮提取及對羥自由基清除作用(一)    作者：黃鎖義 羅建華 張麗丹 蒙春越 馮玲 譚勇平 何其振【摘要】 目的 充分利用茉莉花莖植物資源，避免資源的浪費，探討茉莉花莖總黃酮的提取、鑒別及對羥自由基的清除作用。方法采用超聲波乙醇浸提法從茉莉花莖中提取黃酮類物質(zhì)，對所提取的黃酮類物質(zhì)進行驗證，并用分光光度法測定含量，用茉莉花莖總黃酮對羥自由基清除作用進行試驗。結(jié)果測得樣品中總黃酮的含量C=0.409 9 mg/ml，回收率為102.4%，其純度和產(chǎn)率均較高。結(jié)論 該方法采用全物理過程，無任何污染，是提取茉莉花莖黃酮類物質(zhì)的有效途徑。茉莉花莖總黃

2、酮提取液對Fenton體系產(chǎn)生的·OH自由基有很好的清除作用。 【關(guān)鍵詞】 超聲波提??； 茉莉花莖； 總黃酮； 鑒別； 自由基；Abstract：ObjectiveTo establish a method for the extraction of total flavanone of the caudexes of Jasminum sambac and its effects on hydroxyl radicals. Methods The flavonoids were extracted with ethanol as the solvent from the caude

3、xes of Jasminum sambac air by ultrasonic wave.Spectrophotometry was used to determine the content of the flavanone of the caudexes of Jasminum sambacThe effect of extracts from the caudexes of Jasminum sambac on hydroxyl radicals was studied.ResultsBy this method the content of the total flavanone o

4、f the caudexes of Jasminum sambac was C=0.4099 mg/ml and the rate of recovery was 102.4%. ConclusionThis text provides the extraction and purifying methods to get the outcome and the purity of the flavanone is high.This method is a purely physical process and has no pollution. It is an ideal way to

5、extract the flavanone of the caudexes of Jasminum sambac air. Total flavanone from the caudexes of Jasminum sambac air has a scavenging activity on hydroxyl radicals.Key words：Ultrasonic wave treatment； The caudexes of Jasminum sambac；Total flavanone； Identification； Hydroxyl radical； Scavenging茉莉花為

6、木犀科植物茉莉的花Jasminum sambac(L)Air，為常綠灌木幼枝圓柱形，有時近倒卵形，披短柔毛，單葉對生；花期611月，花后通常不結(jié)果，多栽培濕潤肥沃土壤中，分布江蘇、浙江、福建、臺灣、廣東、四川、云南等地。具有理氣、開郁、辟穢、和中、清虛火去寒疾、治瘡毒、消疽瘤等功效，因其獨特的芳香，多作茶飲用，是具有廣泛藥用價值的植物1。茉莉花的藥理作用有2，3：散陳腐之氣，辟穢濁之毒，平肝解郁，和中止痛。用于治療下痢腹痛、瘡毒、結(jié)膜炎、耳心痛等病證，有較好的療效。茉莉花的根、葉、花均有藥用價值。根有麻醉、止痛之功效，可以用于治療失眠、頭痛、齲齒、跌打損傷；葉用于治療外感發(fā)熱、腹脹腹瀉；花可用

7、于治療腹脹腹瀉、結(jié)膜炎、皮炎、瘡毒等。有研究表明4，茉莉花含有環(huán)烯醚萜苷、黃酮苷、芐基苷等。黃酮類有效成分對治療冠心病、老年性癡呆、腦血栓、神經(jīng)系統(tǒng)疾病和消除自由基、抑菌、抗癌等方面有顯著效果，無副作用，并以此開發(fā)出多種藥品和保健食品5。目前國內(nèi)外對銀杏類黃酮的研究較多，但對于茉莉花植物中黃酮類化合物的研究還相對缺乏。目前有用水、石油醚、乙醇分別從植物中提取黃酮類化合物的報道5，但是這幾種方法提取的時間長、工藝復(fù)雜、提取效率較低。目前對茉莉花的研究多是花香精油的提取和應(yīng)用3，而提取茉莉花植物中的總黃酮及其研究國內(nèi)外尚未見報道。近年來，超聲技術(shù)應(yīng)用于提取植物中的生物堿、苷類、生物活性物質(zhì)、動物組

8、織漿的毒質(zhì)等研究已有報道6，7，表明其具有能耗低、效率高、不破壞有效成分的特點。很多研究表明，利用超聲波產(chǎn)生的強烈振動、高的加速度、強烈的空化效應(yīng)、攪拌作用等，可加速植物材料中的有效成分進入溶劑，從而增加有效成分的提取率，縮短提取時間，并且還可避免高溫對提取成分的影響7。但超聲技術(shù)應(yīng)用于提取茉莉花莖中黃酮類物質(zhì)的研究尚未見報道，為此，本文報道用超聲波乙醇浸提法提取茉莉花莖總黃酮、鑒別及提取物總黃酮對羥自由基的清除作用。1 儀器與試劑1.1 儀器KQ5200DB型數(shù)控超聲波清洗器（超聲工作頻率40KHz，昆山市超聲儀器有限公司）；UV755B紫外可見分光光度計（上海分析儀器總廠）；ZFI型三用紫

9、外分析儀(上海顧村光電儀器廠)；SHB-III循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）。1.2 試劑95%乙醇AR；亞硝酸鈉AR；硝酸鋁AR；氫氧化鈉AR；三氯化鋁AR；鹽酸AR；氨水AR；冰醋酸AR；醋酸乙酯AR；乙酸鎂AR；甲醇AR；鎂粉AR；正丁醇AR；蘆丁標準品（中國藥品生物制品檢定所）；雙氧水AR；硫酸亞鐵AR；水楊酸AR；茉莉花莖采自右江民族醫(yī)學(xué)院校園內(nèi)。2 方法與結(jié)果2.1 總黃酮成分提取 取新鮮茉莉花莖，烘干，粉碎。稱取茉莉花莖粉末約6 g，加80 ml 95%乙醇，超聲波提取2.5 h，抽濾。濾渣再加80 ml 95 %乙醇，超聲波提取2.5 h，抽濾，合并兩次濾液，減壓

10、回收乙醇至濾液僅剩57 ml左右為止，放置100 ml容量瓶中，用60%乙醇稀釋至刻度，得樣品液。2.2 測定方法依據(jù)以蘆丁為對照品測定茉莉花莖中總黃酮的含量，加入鋁離子試劑，同時控制適宜 pH值，使黃酮化合物與鋁鹽形成絡(luò)合物，在可見光區(qū)能獲得穩(wěn)定的特征吸收峰。2.3 定量實驗總黃酮的含量測定2.3.1 波長的選擇取樣品液適量，在0.30 ml 5%亞硝酸鈉溶液存在的堿性條件下，經(jīng)硝酸鋁顯色后，以試劑為空白參比液在420700 nm波長范圍測定絡(luò)合物的吸光度，絡(luò)合物于510 nm波長處有最大吸收，故測定時選用此波長。2.3.2 標準曲線的繪制 分別精密吸取蘆丁對照液（0.10 mg/ml）0.

11、00，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00 ml于10.00 ml容量瓶中，分別加入5%亞硝酸鈉溶液0.30 ml，搖勻，靜置6 min；再加10%硝酸鋁溶液0.30 ml，搖勻，靜置6 min；再加4%氫氧化鈉溶液4.00 ml，用60%乙醇稀釋至刻度，搖勻，靜置12 min，以試劑作空白參比液，于510 nm處測吸光度。吸光度測定結(jié)果見表1。表1 紫外可見分光光度計測定蘆丁對照液吸光度（略）根據(jù)上表得回歸方程：A=-0.031 1+13.518 4C，r=0.999 9。2.3.3 提取物含量的測定精密吸取樣品液0.50 ml，置10 ml容量瓶，按標準曲線的制備方法

12、測定吸光度A=0.246，根據(jù)回歸方程：A=-0.031 1+13.518 4C，計算樣品中總黃酮的含量C=0.409 9 mg/ml。2.3.4 回收實驗精密量取樣品液1.00 ml，加入標準蘆丁對照品1.00 ml（0.10 mg/ml），同前樣品測定方法操作測定吸光度，求出回收率為102.4% 。2.4 定性實驗總黃酮的鑒別2.4.1 顏色反應(yīng)紫外光下呈色反應(yīng)：取該樣品溶液點在濾紙上，在可見光下呈灰黃色，在紫外光下呈灰褐色并有熒光斑點。濃氨水反應(yīng)：取該樣品溶液點在濾紙上，將濾紙在氨水上方熏0.5 min，立即在紫外光下觀察，呈極明顯的黃褐色熒光斑點。三氯化鋁反應(yīng)：取樣品溶液點在濾紙上，滴

13、加1三氯化鋁乙醇溶液，吹干。在可見光下呈灰黃色，在紫外光下呈黃色熒光斑點。乙酸鎂反應(yīng)：取樣品溶液點在濾紙上，滴加1%乙酸鎂甲醇溶液，吹干，紫外光下呈黃色斑點。鹽酸-鎂粉反應(yīng)：取乙醇提取液1 ml于試管中加鎂粉，再加入濃鹽酸數(shù)滴（1次加入），在泡沫處呈紫紅色。2.4.2 紙層析取樣品溶液10 l點在濾紙上。用正丁醇醋酸水=415(體積比)為展開劑，上行展開5 h，取出晾干。噴1%氯化鋁乙醇溶液。吹干后于紫外光下，可見熒光斑點。2.5 總黃酮提取物對·OH清除作用參照Fenton反應(yīng)的方法建立反應(yīng)體系模型8，利用H2O2與Fe2+ 混合產(chǎn)生·OH，但由于·OH具有很高

14、的反應(yīng)活性，存活時間短，若在反應(yīng)體系中加入水楊酸，就能有效地捕捉·OH，并產(chǎn)生有色產(chǎn)物。反應(yīng)式如下：H2O2+ Fe2+ Fe3+·OH+OH- 該產(chǎn)物在510 nm處有強吸收，若在此反應(yīng)體系中加入具有清除·OH功能的被測物，便會與水楊酸競爭·OH，從而使有色產(chǎn)物生成量減少，采用固定反應(yīng)時間法，在相同體積的反應(yīng)體系(8.8 mmol/L H2021 ml，9 mmol/L Fe2+l ml，9 mmol/L 1 ml水楊酸乙醇溶液)加入一系列不同濃度的茉莉花莖總黃酮提取液，并以蒸餾水為參比，與試劑空白液比較，在510 nm處測量各濃度下的吸光度，便能測定

15、被測物(總黃酮)對·OH的清除作用，其清除率計算公式：清除率()=A0-AXA0×100以實驗的提取液總黃酮作為樣品，分別取不同體積的樣品定容到50 ml分別測其對·OH的清除作用。從圖1中可看出，茉莉花莖總黃酮提取液對由Fenton體系產(chǎn)生的·OH有一定的清除作用，隨著茉莉花莖總黃酮提取液濃度的增加，對·OH自由基的清除能力也增強，說明當黃酮類物質(zhì)的濃度增加時，其清除率也增大。3 討論實驗結(jié)果表明，本實驗方法工藝簡單，回收率為102.4%。利用本文所提供的超聲波提取、純化方法而得到的黃酮類物質(zhì)其純度較高。超聲波可以強化乙醇浸提法，達到省時、高

16、效、節(jié)能的目的，此方法采用全物理過程，無任何污染，是一條理想的提取黃酮類物質(zhì)的途徑，具有廣闊的應(yīng)用前景。黃酮類化合物是一大類天然產(chǎn)物，廣泛存在于植物界，是許多中草藥的有效成分，具有很高的藥用價值。在自然界中最常見的是黃酮和黃酮醇，其它包括雙氫黃（醇）、異黃酮、雙黃酮、黃烷醇、查爾酮、橙酮、花色苷及新黃酮類等5。天然來源的生物黃酮分子量小，能被人體迅速吸收，能通過血腦屏障，能進入脂肪組織，進而體現(xiàn)出如下功能：消除疲勞、保護血管、防動脈硬化、擴張毛細血管、疏通微循環(huán)、抗脂肪氧化、抗衰老、活化大腦及其他臟器細胞的功能。黃酮類化合物具有抗癌、抗腫瘤、抗心腦血管疾病、抗炎鎮(zhèn)痛、免疫調(diào)節(jié)、降血糖、治療骨質(zhì)

17、疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗輻射等作用910。近年來，世界上掀起了植物藥開發(fā)的熱潮，植物藥以其天然低毒的特點備受青睞，而黃酮類化合物以其廣譜的藥理作用引人矚目。茉莉花莖分布廣泛。本文實驗結(jié)果表明，茉莉花莖中含有較為豐富的黃酮，其提取物總黃酮對羥自由基具有很好的清除作用。因此，茉莉花莖具有廣泛開發(fā)和利用價值，值得綜合利用，加強資源開發(fā)?！緟⒖嘉墨I】1朱亮鋒，陸碧瑤，李寶靈，等芳香植物及其化學(xué)成分M.?？冢汉Ｄ铣霭嫔?，1993：35.2李春生.茉莉花茶與保健J.保健醫(yī)苑, 2005，1:33.3金紹黑.茉莉花香精（油）的提取J.技術(shù)與市場, 2003，3:20.4劉海洋，倪 偉，袁敏惠，等茉莉花的化學(xué)成分J.云南植物研究，2004,26(6):687.5夏杏洲，張 輝，魏傳晚.榕樹葉中黃酮類化合物的提取