質(zhì)檢儀器室培訓(xùn)教材-基礎(chǔ)知識篇

儀器室培訓(xùn)教材C-)

「基礎(chǔ)知聚篇)

目錄

第一部分：化驗(yàn)員的基本職責(zé)和行為規(guī)范…

第二部分：化驗(yàn)分析的基礎(chǔ)知識與基本操作

第三部分：化學(xué)分析

第四部分：儀器分析

第一部分：化驗(yàn)員的基本職責(zé)和行為規(guī)范

一、基本職責(zé)

1、遵守公司的規(guī)章制度

1.1遵守總公司的各項(xiàng)規(guī)章制度，按時上下班，不遲到不早退，有事請假。

1.2操作中，應(yīng)注意安全，加強(qiáng)個人保護(hù)意識，使用易燃易爆、劇毒等危險品及消毒鍋、電爐、電烤箱等高

溫設(shè)備時，嚴(yán)格按章行事。

1.3每天下班前檢查實(shí)驗(yàn)室的安全情況，切記關(guān)好水電門窗，保證安全。

2、嚴(yán)格執(zhí)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及操作規(guī)程，及時準(zhǔn)確完成檢驗(yàn)

2.1嚴(yán)格按取樣規(guī)定取樣，保證抽樣的代表性，并按規(guī)定分樣和留樣

2.2要認(rèn)真學(xué)習(xí)并掌握檢驗(yàn)操作規(guī)程和儀器操作細(xì)則，嚴(yán)格按規(guī)程操作，保證檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確無誤，不得錯檢、

漏檢、誤檢。

2.3接到樣品必須及時檢測，保證在檢驗(yàn)周期或規(guī)定時間內(nèi)檢出?如有特殊情況，必須向有關(guān)領(lǐng)導(dǎo)匯報(bào)。

3、準(zhǔn)確及時填寫各種記錄

3.1按要求真實(shí)、及時、正確填寫各種儀器使用記錄及批化驗(yàn)記錄?；?yàn)記錄應(yīng)如實(shí)記錄操作過程中的數(shù)據(jù)

及現(xiàn)象，并計(jì)算結(jié)果，操作人簽名后，復(fù)核人要認(rèn)真復(fù)核并簽名。

3.2及時、準(zhǔn)確填寫試劑領(lǐng)用記錄、儀器使用記錄、流動相配制記錄、色譜柱使用記錄、標(biāo)準(zhǔn)品、對照品

領(lǐng)用及使用記錄等

4、提高業(yè)務(wù)水平

認(rèn)真參加公司、處、室組織的業(yè)務(wù)技術(shù)培訓(xùn)，積極鉆研業(yè)務(wù)，努力提高技術(shù)水平

5.及時匯報(bào)異常情況

5.1熟練掌握各產(chǎn)品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)，對不合格或邊緣檢測數(shù)據(jù)及時向室主任、工程師匯報(bào)，并及時組織復(fù)測。

5.2實(shí)驗(yàn)時有異常情況及時匯報(bào)給本室工程師或室主任，并協(xié)同查找原因，妥善處理

6、自覺遵守定置定位管理

6.1做好各種檢測儀器的日常維護(hù)及保養(yǎng)。

6.2實(shí)驗(yàn)室內(nèi)各種物品放置不能隨意更換地方，不能隨便在實(shí)驗(yàn)臺

擺放東西，各種物品、試劑用完后立即放回原處。

7、完成領(lǐng)導(dǎo)交給的各項(xiàng)任務(wù)

服從安排，及時準(zhǔn)確完成臨時安排的工作任務(wù)

二、行為規(guī)范

見QC質(zhì)量管理文件（文件登記號：QC-7001A）?

第二部分：化驗(yàn)分析的基礎(chǔ)知識與基本操作

一、化驗(yàn)室的常用設(shè)備與儀器：

1:電熱設(shè)備：

1.1電爐、電熱套、電熱板：是化驗(yàn)室中常用的加熱設(shè)備，靠電阻絲通電來加熱。

注意事項(xiàng)：1：電壓電壓應(yīng)和設(shè)備本身規(guī)定的電壓相符；2：加熱容器是玻璃制品和金屬制品時，電爐

上應(yīng)墊上石棉網(wǎng)；3：防止液體濺落導(dǎo)致漏電；

1.2馬弗爐：主要用于熾灼殘?jiān)臏y定，灼燒完畢后，先切斷電源，再將爐門打開一條小縫，使溫度

慢慢降下來；夜間無人時不要用。

1.3電熱恒溫干燥箱：放入供試品時不能排列太密，散熱板上不能放置樣品；禁止烘易燃、易爆、易

揮發(fā)及有腐蝕性的物品。

L4恒溫水浴鍋：水位一定不能低于電熱管，一般不高于水浴鍋容量的2/3。

1.5真空干燥器：

2、常用玻璃儀器及洗滌方法

2.1常用玻璃儀器

名稱主要用途注意事項(xiàng)

燒杯配制溶液，溶樣加熱時置石棉網(wǎng)上

錐形瓶加熱處理樣品，滴定分析加熱時置石棉網(wǎng)上，打開塞子

碘量瓶碘量法，揮發(fā)性物質(zhì)滴定分析加熱時置石棉網(wǎng)上，打開塞子

量筒粗略量取一定體積的液體不能加熱

容量瓶配制準(zhǔn)確體積的溶液漏水的不能用，不能直接火加熱，可水浴加熱

活塞要原裝，漏水不能用，不能加熱，不能長期

滴定管容量分析的滴定操作

存放堿液，堿管不能放與橡皮作用的標(biāo)準(zhǔn)溶液

移液管準(zhǔn)確移取一定量的體積

扁形用于測定水分或在烘箱中

稱量瓶不可蓋緊磨口塞烘烤

烘干基準(zhǔn)物；高形用于稱量物質(zhì)

分液漏斗主要用于萃取分離和提取磨口塞必須原配，不能加熱

普通試管離心管可在離心機(jī)中分離溶液普通試管可直接在火上加熱，不能驟冷；離心管

和離心管和沉淀只能水浴加熱

比色管光度分析不可直接在火上加熱，不可用去污粉刷洗

抽濾瓶抽濾時接受液體屬于厚壁容器，能耐負(fù)壓；不可加熱

研缽研磨固體試劑及試樣不能研磨與玻璃作用的物質(zhì)，不能撞擊和烘烤

保持烘干或灼燒過的物質(zhì)的干底部放變色硅膠或其他干燥劑，蓋磨口處涂凡士

干燥器

燥林，不可將紅熱的物體放入

砂芯玻璃

過濾必須抽濾，不能驟冷驟熱，不能過濾HF、堿等

漏斗

2.2玻璃儀器的洗滌方法【參見質(zhì)量管理文件文件編號：】

洗滌步驟：水刷洗一一再用低泡沫洗滌液刷洗(不可用去污粉)一一沖洗洗滌劑，再用自來水洗3遍

一用蒸儲水洗三遍一一洗凈的儀器倒置時，水流出后，器壁應(yīng)不掛水珠。

幾種常用的洗液

洗液使用方法

工業(yè)鹽酸(濃或1+1)用于洗去堿性物質(zhì)及大多數(shù)無機(jī)物殘?jiān)?/p>

純酸洗液

用于除去微量的離子

(1+1)、(1+2)或(1+9)的鹽酸或

常規(guī)方法洗凈的儀器浸泡浴純酸洗液中24h

硝酸(除去Hg、Pb等雜質(zhì))

堿性洗液10%Na0H水溶液加熱使用，去油效果較好

清洗油污或其他有機(jī)物質(zhì)，洗后容器玷污處有二氧化

堿性高鋅酸鉀洗液30g/L高鎰酸鉀

鐳析出，再用濃鹽酸或草酸洗液、硫酸亞鐵、亞硫酸

溶液&lmol/L的NaOH的混合溶液

鈉等還原劑去除

酸性草酸或酸性羥胺洗液

10g草酸或1g鹽酸羥胺，溶于100ml洗滌氧化性物質(zhì)如二氧化錦

(1+4)鹽酸溶液中

碘-碘化鉀溶液

洗滌用過硝酸銀滴定液后留下的黑褐色玷污物，也可

1g碘和2g碘化鉀溶于水中，用水稀

用來擦洗沾過硝酸銀的白瓷水槽

釋至100ml

3、天平

3.1工作原理

天平從構(gòu)造原理可分為機(jī)械天平和電子天平兩大類。

機(jī)械天平的工作原理是杠桿原理；

電子天平采用電磁力平衡的原理，它是將被稱物的質(zhì)量產(chǎn)生的重力通過傳感器轉(zhuǎn)換成電信號來表示被

稱物的質(zhì)量的，稱量結(jié)果實(shí)際上是被稱物重力的大小，與重力加速度有關(guān)，因此在安裝后或移動后必須校

準(zhǔn)。

3.2電子天平的使用方法：

使用前檢查天平是否水平，調(diào)整水平一一預(yù)熱至少30分鐘一一校準(zhǔn)一一稱量一一清潔。

3.3電子天平使用注意事項(xiàng)：

在稱量之前必須要校驗(yàn)：可采用5點(diǎn)校驗(yàn)法，分別用10mg、50mg、lOOmg、1g、10g或其他重量的祛碼

進(jìn)行校驗(yàn)，誤差應(yīng)符合規(guī)定;

天平內(nèi)不得放入超出稱量范圍的物品，稱量前可在托盤天平上粗稱一下；

帶磁性的物品不得接近天平；

稱量腐蝕性、易揮發(fā)性的化學(xué)物品，應(yīng)放入密閉的容器內(nèi)稱量：熱冷的物品先放在干燥器至恒溫，再

稱量；

稱量時物品要輕拿輕放，玻璃門輕開輕關(guān)，稱量完畢后及時清掃托盤。

3.4電子天平的日常維護(hù)

天平內(nèi)硅膠應(yīng)呈蘭色，如有1/3變?yōu)榧t色，應(yīng)馬上更換硅膠并關(guān)門平衡半小時后再使用；

每次稱樣完畢后及時清掃托盤；

天平如不水平，用天平防護(hù)罩后部的水平調(diào)節(jié)腳，將氣泡調(diào)節(jié)至水平中央；

電子天平長時間不用時應(yīng)每隔一段時間通電一次，保持電子元器件干燥，特別時濕度大時更應(yīng)該通電。

二、溶液的配制與濃度計(jì)算

1、標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制與標(biāo)定

1.1幾個基本知識點(diǎn)：

①溶液的定義：一種以分子、原子或離子狀態(tài)分散于另一種物質(zhì)中構(gòu)成的均勻而又穩(wěn)定的體系叫溶液。

溶液有溶質(zhì)和溶劑組成。物質(zhì)在水中溶解能力的大小可用溶解度來衡量，即在一定穩(wěn)定下，某種物質(zhì)在100g

溶劑中達(dá)到溶解平衡狀態(tài)時所溶解的克數(shù)。

②化學(xué)試劑的分類：無機(jī)、有機(jī)、基準(zhǔn)、特效、儀器分析試劑、生化試劑、指示劑、高純物質(zhì)、標(biāo)準(zhǔn)

物質(zhì)、液晶。

溶液濃度的表示方法：在國際標(biāo)準(zhǔn)和國家標(biāo)準(zhǔn)中，A-溶質(zhì)，B-溶劑。

常用的有：B的物質(zhì)的量濃度（單位：mol/L）、B的質(zhì)量分?jǐn)?shù)（單位如：mg/g）、比例濃度（如：（1+5）

HC1溶液一表示1體積市售濃鹽酸與5體積蒸鐲水混合而成的溶液）。

常用酸、堿試劑的密度和濃度

質(zhì)量分?jǐn)?shù)物質(zhì)的量濃

名稱化學(xué)式分子量密度(g/ml)

（W%）度（mol/L）

濃硫酸H2S0498.081.849618

濃鹽酸HCL36.461.193712

濃硝酸HN0363.011.427016

濃磷酸H3PO498.001.698515

冰醋酸CII3COOI160.051.059917

高氯酸HCL04100.461.677012

濃氫氧化鈉NaOH40.001.434014

濃氨水NH317.030.902815

③滴定度：T

T------是指1ml標(biāo)準(zhǔn)溶液相當(dāng)于被測物的質(zhì)量，mg/ml或g/ml表示。

1.2、滴定分析用標(biāo)準(zhǔn)溶液的一般規(guī)定：

制備標(biāo)準(zhǔn)溶液用水，未注明其他要求時，應(yīng)符合國標(biāo)三級水的規(guī)格。

所用試劑純度應(yīng)在分析純以上；

所用天平、滴定管、容量瓶及移液管均需要定期校正；

標(biāo)定標(biāo)準(zhǔn)溶液所用的基準(zhǔn)試劑應(yīng)為容量分析工作基準(zhǔn)試劑；

制備標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度系指20℃時的濃度，在標(biāo)定和使用時，如溫度有差異，應(yīng)進(jìn)行補(bǔ)正；

標(biāo)定標(biāo)準(zhǔn)溶液時，平行實(shí)驗(yàn)不得少于8次,兩人各做4次平行測定,4次測定結(jié)果的極差不得大于0.1%。

標(biāo)定結(jié)果取平均值，濃度值取4位有效數(shù)字；

制備的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度與規(guī)定濃度相對誤差不得大于5%；

配制濃度等于或低于0.02mol/L時，應(yīng)于臨用前將高濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液用煮沸并冷卻的水稀釋，必要時

重新標(biāo)定。

碘量法反應(yīng)時，溶液的溫度不能過高，一般在15?20"C之間；

標(biāo)準(zhǔn)溶液的有效期一般為3個月。

1.3常用的基準(zhǔn)物質(zhì)

名稱化學(xué)式式量使用前的干燥條件

碳酸鈉NaC03105.99270?300C

鄰苯二甲酸氫鉀KHC8H404204.22105?110℃

重格酸鉀K2Cr207294.18120℃

三氧化二碑As203197.84濃硫酸干燥器中干燥至恒重

草酸鈉Na2C204134.00105?110C

碘酸鉀KI03214.00130℃

漠酸鉀KBrO3167.00130℃

用2%乙酸，水，乙醇依次洗滌后，放干燥

銅Cn63.546

器中保存24h以上

用1+3HCL,水，乙醇依次洗滌后，放干燥

鋅Zn65.38

器中保存24h以上

氧化鋅ZnO81.39800?900℃

碳酸鈣CaCO3100.09110℃

氯化鈉NaCL58.44500?600℃

氯化鉀KCL74.55500?600℃

硝酸銀AgN03169.87濃硫酸干燥器中干燥至恒重

1.4標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制&標(biāo)定

標(biāo)準(zhǔn)溶液一般按照物質(zhì)的量濃度來進(jìn)行配制&計(jì)算。

標(biāo)定的方法一般有兩種：直接標(biāo)定一一準(zhǔn)確稱取-定量的基準(zhǔn)物質(zhì)，溶于水后用待標(biāo)定的溶液滴定，至反

應(yīng)完全。根據(jù)所消耗的待標(biāo)定溶液的體積和基準(zhǔn)物質(zhì)的質(zhì)量，計(jì)算出待標(biāo)定溶液的準(zhǔn)確濃度。

間接標(biāo)定一一有一部分標(biāo)準(zhǔn)溶液，沒有合適的用以標(biāo)定的基準(zhǔn)試劑，只能用另一已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液來標(biāo)

定。如乙酸溶液用氫氧化鈉溶液來標(biāo)定，草酸溶液用高錦酸鉀溶液來標(biāo)定。

1.5.配制溶液注意事項(xiàng)

分析實(shí)驗(yàn)所用的溶液應(yīng)用純水配制，容器應(yīng)用純水洗三遍，特殊要求的溶液應(yīng)事先做純水的空白值校

驗(yàn)，如配制硝酸銀，應(yīng)檢查水中無氯離子，EDTA應(yīng)檢查水中無陽離子。

溶液要用帶塞的試劑瓶盛裝，見光易分解的溶液要用棕色瓶，揮發(fā)性的溶液瓶塞要緊，濃堿溶液要放

在塑料瓶中，不能用玻璃塞子；

每瓶試劑必須有表明名稱、濃度、配制日期、配制溫度、標(biāo)定人員的標(biāo)簽；

配制硫酸、磷酸、硝酸、鹽酸等溶液時，都應(yīng)把酸倒入水中；

配制有機(jī)溶劑時，應(yīng)不斷攪拌，可水浴加熱，最好在通風(fēng)廚中進(jìn)行；

不能用手接觸腐蝕性及有劇毒的溶液。劇毒廢液應(yīng)做解毒處理，不可直接倒入下水道。

2、緩沖溶液、試液

緩沖溶液是一種能對溶液的酸度起穩(wěn)定作用的溶液。向緩沖溶液中加入少量強(qiáng)酸或強(qiáng)堿（或因化學(xué)

反應(yīng)產(chǎn)生了少量酸或堿），或?qū)⑷芤荷约酉♂?，溶液的酸度基本保持不變，這種作用稱為緩沖作用，具有緩

沖作用的溶液稱為緩沖溶液。

參照藥典進(jìn)行配制，詳見2005版藥典附錄。

3、指示劑

參照藥典進(jìn)行配制，詳見2005版藥典附錄。

第三部分：化學(xué)分析

一、滴定分析

1、幾個術(shù)語：

標(biāo)準(zhǔn)溶液：已知準(zhǔn)確濃度的溶液；

滴定：將標(biāo)準(zhǔn)溶液通過滴定管滴加到被測物質(zhì)溶液中的操作；

化學(xué)計(jì)量點(diǎn)：在滴定過程中，滴定劑與被測組分按照滴定反應(yīng)方程式所示劑量關(guān)系定量地完全反應(yīng)時稱為

化學(xué)計(jì)量點(diǎn)。

指示劑：指示化學(xué)計(jì)量點(diǎn)到達(dá)而能改變顏色的一種輔助試劑；

滴定終點(diǎn)：因指示劑顏色發(fā)生明顯改變而停止滴定的點(diǎn)；

終點(diǎn)誤差：滴定終點(diǎn)與化學(xué)計(jì)量點(diǎn)不完全吻合而引起的誤差，也稱滴定誤差。

酸：根據(jù)質(zhì)子理論能夠給出質(zhì)子的稱為酸；

酸：根據(jù)質(zhì)子理論能夠接收質(zhì)子的稱為堿。

2、滴定分析分類：酸堿滴定、配位滴定、氧化還原滴定、沉淀滴定

3、酸堿滴定:

1.1方法概述：酸堿滴定法是以酸堿反應(yīng)為基礎(chǔ)的滴定方法，滴定劑通常是強(qiáng)酸或強(qiáng)堿，被測物是以酸堿

及能與酸堿直接或間接起反應(yīng)的物質(zhì)。

酸堿滴定主要掌握三點(diǎn)：學(xué)會判斷那些物質(zhì)能用酸堿滴定法測定；了解滴定過程中溶液pH的變化，尤

其是化學(xué)計(jì)量點(diǎn)附近溶液pH的變化；正確選擇指示劑。

酸堿滴定一般沒有外觀變化，常需借助指示劑的顏色改變來確定滴定終點(diǎn)。

3.2酸堿指示劑

變色原理：酸堿指示劑一般是結(jié)構(gòu)復(fù)雜的有機(jī)弱酸或弱堿，它們的酸式和其共扼共舸堿式具有不同的

顏色。在滴定過程中，溶液pH改變時，指示劑或給出質(zhì)子有酸式變?yōu)槠涔惨?guī)堿式，或接收質(zhì)子有堿式變?yōu)?/p>

其共扼酸式，引起結(jié)構(gòu)的變化。結(jié)構(gòu)的改變引起顏色的變化。

變色范圍：指示劑開始變色至變色終了時所對應(yīng)的pH范圍稱為指示劑的變色范圍。

常用的酸堿指示劑

指示劑變色范圍顏色pKnin（理PT實(shí)際濃度

酸色堿色論變色滴定終點(diǎn)

點(diǎn)）

百里酚藍(lán)（第一1.2-2.8紅黃1.62.60.1%（20%乙醇溶液）

次變色）

甲基黃2.9——4.0紅黃3.33.90.1%（90%乙醇溶液）

甲基橙3.1——4.4紅黃3.440.05%水溶液

澳酚藍(lán)3.1—4.6黃紫4.140.1%（20%乙醇溶液），

或指示劑鈉鹽的水溶液

澳甲酚綠3.8—5.4黃藍(lán)4.94.40.1%水溶液,每100mg

指示劑加

0.05mol/LNa0H2.9ml

甲基紅4.4—6.2紅黃5.05.00.1%（60%乙醇溶液）,

或指示劑鈉鹽的水溶液

濱百里酚藍(lán)6.0—7.6黃藍(lán)7.370.1%（20%乙醇溶液）,

或指示劑鈉鹽的水溶液

中性紅6.8—8.0紅黃橙7.40.1%（60%乙醇溶液）

酚紅6.7—8.4黃紅8.070.1%（60%乙醇溶液）,

或指示劑鈉鹽的水溶液

酚酸8.0—9.6無色紅9.10.1%（90%乙醇溶液）

百里酚藍(lán)（第二8.0—9.6黃藍(lán)8.990.1%（20%乙醇溶液）

次變色）

百里酚酷9.4—10.6無藍(lán)10.0100.1%（90%乙醇溶液）

混合指示劑：在酸堿滴定中，有時需要將滴定終點(diǎn)限制在很窄的pH范圍內(nèi)，可采用混合指示劑。

酸堿指示劑由于它們的指示劑常數(shù)不同，其變色范圍、理論變色點(diǎn)&實(shí)際滴定終點(diǎn)不同；各種指示劑

的變色范圍的幅度各不相同，一般不大于2個pH單位，也不小于1個pH單位；在酸堿滴定中，有時需要

將滴定終點(diǎn)限制在很窄的pH范圍內(nèi)，可采用混合指示劑。

3.3應(yīng)用實(shí)例略

4、配位滴定

4.1、方法介紹：利用形成配合物反應(yīng)為基礎(chǔ)的滴定分析方法成為配位滴定法，也叫絡(luò)合滴定。常用的滴定

劑為EDTA滴定液。常用的指示劑為金屬指示劑，如鋁黑T（EBT）、鈣指示劑（NN）、二甲酚橙（X0）、PAN、K-B

指示劑、磺基水楊酸（SS）.

4.2應(yīng)用實(shí)例

5、氧化還原滴定法

5.1方法介紹：以氧化還原反應(yīng)為基礎(chǔ)的滴定分析法。它是以氧化劑或還原劑為標(biāo)準(zhǔn)溶液來測定還原性或氧

化性物質(zhì)含量的方法。根據(jù)所用標(biāo)準(zhǔn)溶液，將氧化還原法分為以下幾類：

高鎰酸鉀法一一以高鎰酸鉀為標(biāo)準(zhǔn)溶液

重倍酸鉀法一一以重銘酸鉀為標(biāo)準(zhǔn)溶液；

碘量法一一以碘&硫代硫酸鈉為標(biāo)準(zhǔn)溶液；

澳酸鉀法一一以澳酸鉀一一溪化鉀為標(biāo)準(zhǔn)溶液

酸堿反應(yīng)是離子互換反應(yīng)，氧化還原反應(yīng)是電子轉(zhuǎn)移反應(yīng)，反應(yīng)速度快慢不一，受外界影響較大。

5.2應(yīng)用實(shí)例

6、沉淀滴定法

沉淀滴定法是以沉淀反應(yīng)為基礎(chǔ)的滴定分析法，應(yīng)用較多的是銀量法.根據(jù)所用指示劑不同可分為：

莫爾法一一以重銘酸鉀為指示劑

佛爾哈德法一一以鐵鐵磯為指示劑

法揚(yáng)司法一一采用吸附指示劑

7、滴定分析計(jì)算與數(shù)據(jù)處理

7.1.直接滴定法計(jì)算略

7.2反滴定法德計(jì)算略

二、常用理化檢測儀器與檢測方法

1、熔點(diǎn)測定

1.1熔點(diǎn)是按照規(guī)定的方法測定物質(zhì)有固體轉(zhuǎn)為液相時的溫度。它可以鑒別&檢查樣品的純雜程度。根據(jù)

待測物性質(zhì)的不同可分為3種方法：測定易粉碎的固體藥品：測定不易粉碎的固體藥品（如脂肪酸、石

蠟、羊毛脂等）；測定凡士林或其他類似物質(zhì).

1.2儀器：熔點(diǎn)儀-----加熱用容器、電磁攪拌器、毛細(xì)管（內(nèi)徑0.9—1.1mm,厚度0.10—0.15mm,廠

9cm以上）、溫度計(jì)；

傳溫液：測定80C以下的樣品，用水，用前加熱至沸脫氣，放冷。測定80℃以上的樣品，用硅油或液

狀石蠟。

藥品檢驗(yàn)用熔點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)品專供測定熔點(diǎn)時校正溫度計(jì)用。

1.3第一法的操作要點(diǎn)&注意事項(xiàng)：

1.3.1供試品的預(yù)處理一般取“干燥失重”項(xiàng)下的樣品測定。若不檢查干燥失重，對熔點(diǎn)低限在135℃以

上而受熱不分解的品種，可采用105℃干燥；對熔點(diǎn)在135℃以下或受熱分解的品種，可在五氧化二磷干燥

器中干燥過夜。

13.2取兩端熔封的毛細(xì)管，用前據(jù)掉一端，裝入供試品，借助玻璃管，使供試品緊密集結(jié)于底部，高度約

為3mmo

1.3.3溫度計(jì)懸掛于加熱容器中，使溫度計(jì)汞球的底端處于加熱面的上方2.5cm以上；升溫速率1.0~1.5℃

（熔融同時分解的樣品升溫速率為2.5?3.0℃）。

1.3.4當(dāng)傳溫液的溫度上升至規(guī)定的熔點(diǎn)低限10℃時，放入裝有供試品的毛細(xì)管，記錄供試品在毛細(xì)管內(nèi)

開始局部液化并出現(xiàn)明顯的液滴時的溫度作為初熔溫度，全部液化時的溫度作為全熔溫度。

1.3.5傳溫液的升溫速率必須嚴(yán)格按照規(guī)定操作。

1.3.6初熔之前，毛細(xì)管內(nèi)的供試品可能出現(xiàn)發(fā)毛、收縮、軟化、出汗等現(xiàn)象，在未出現(xiàn)局部液化的明顯液

滴和持續(xù)熔融過程時，均不作初熔判定。

1.3.7全熔時毛細(xì)管內(nèi)的液體應(yīng)完全澄清。

1.4結(jié)果與判斷

1.4.1對熔點(diǎn)的溫度讀數(shù)時都要估讀到0.1℃,每一個樣品至少測定3次，3次讀數(shù)的極差不大于0.5℃,

且不在合格與不合格的邊緣時，可取3次的平均值；若3次讀數(shù)超過0.5℃,可重復(fù)測定2次，取5次的平

均值。

1.4.2測定結(jié)果的數(shù)據(jù)按照0.5℃間隔進(jìn)行修約：0.1~0.2℃舍去，0.3?0.7℃修約為0.5℃,0.8~0.9℃

修約為1℃,并按照修約后的數(shù)據(jù)進(jìn)行報(bào)告。

1.4.3經(jīng)修約后的初熔、全熔或分解突變時的溫度均在各品種項(xiàng)下規(guī)定的范圍以內(nèi)時，判為符合規(guī)定，否則

不符和規(guī)定。

2、旋光度測定

2.1旋光度：許多化合物具有光學(xué)活性，即平面偏振光通過其液體或溶液時，能引起旋光現(xiàn)象，使偏振光的

平面向左或向右發(fā)生旋轉(zhuǎn)，偏轉(zhuǎn)的度數(shù)稱為旋光度。使偏振光向右旋轉(zhuǎn)者稱為右旋物質(zhì)，以“+”表示；使

偏振光向左旋轉(zhuǎn)者稱為左旋物質(zhì)，以“一"表示；

比旋度：當(dāng)偏振光通過長1dm,每1ml中含有旋光物質(zhì)1g的溶液，測定的旋光度稱為該物質(zhì)的比旋度。以

[a]J表示。通常測定溫度為20℃,使用鈉光譜的D線（589.3nm）,[a]/。表示。

2.2旋光儀：2005版藥典規(guī)定使用度數(shù)精度達(dá)到0.01°的旋光儀。

2.3比旋度的測定：

測定溫度20C±0.5℃,使用波長589.3nm的鈉D線（汞的404.7nm和546.Inm也有使用）。

純液體樣品測定時以干燥的空白測定管校正儀器零點(diǎn)，溶液樣品則用空白溶劑校正儀器零點(diǎn)。供試液

與空白溶劑用同一測定管，每次測定應(yīng)保持測定管方向、位置不變。

旋光度讀數(shù)應(yīng)重復(fù)3次，取其平均值，以干燥品或無水物來計(jì)算結(jié)果。

2.4注意事項(xiàng)：

開機(jī)前取出樣品室內(nèi)的物品，預(yù)熱20min；

溫度對物質(zhì)的旋光度有一定影響，必要時可對樣品進(jìn)行恒溫處理。

測定應(yīng)使用規(guī)定的溶劑，供試液如果不澄清，應(yīng)濾清后再用，加入測定管時，應(yīng)先用供試液沖洗數(shù)次;

如果有氣泡，應(yīng)使其浮于測定管凸徑處；旋緊螺帽，用力不要過大；兩端的玻璃窗應(yīng)用濾紙與鏡頭紙擦干。

測定管不可以在干燥箱中加熱，使用酸堿溶劑或有機(jī)溶劑后，必須立即洗脫晾干，以免造成金屬腐蝕

或橡膠墊圈老化。儀器不用時樣品室內(nèi)可放置硅膠以保持干燥。

按規(guī)定或根據(jù)讀數(shù)精度配制供試品溶液，通常是讀數(shù)誤差小于±1.0%。若供試品溶解度小，盡量使用

2dm的測定管，提高旋光度，減小測定誤差。供試液配好后及時測定。

2.5計(jì)算與結(jié)果判定：供試品的比旋度計(jì)算公式：

a

液體樣品[a]J=

Id

100a

固體樣品[a]J=

lc

式中：A為使用光源的波長；t為測定溫度；1為測定管的長度，dm；a為測得的旋光度；d為液體的

相對密度；c為100ml溶液中含有被測物質(zhì)的重量，g（按干燥品或無水物計(jì)算）。

結(jié)果的判定：藥典規(guī)定的比旋度多有上下限度或最低限度，根據(jù)公式計(jì)算得出供試品的比旋度，判定是

否合格。測定含量時，取2份供試品測定，讀數(shù)結(jié)果其極查應(yīng)在0.02°以內(nèi)，否則重做。

3、pH測定法

3.1、pll測定法：是測定水溶液中氫離子活度的一種方法，pH值即水溶液中氫離子活度（以每1000ml中摩

爾數(shù)計(jì)算）的負(fù)對數(shù)，pH=Toga”,。pH值測定常用的電極為玻璃電極和保護(hù)甘汞電極，現(xiàn)在廣泛使用指示

電極與參比電極組合一體的復(fù)合電極。

3.2、酸度計(jì)：主要有pH測量電極和pH指示器（電位計(jì)）兩部分組成.

3.3、測定方法：

嚴(yán)格按照說明書與注意事項(xiàng)操作；

測定之前，選擇兩種標(biāo)準(zhǔn)緩沖液進(jìn)行校正。儀器校正用的標(biāo)準(zhǔn)緩沖液：草酸鹽緩沖液（pHl.68）、苯二

甲酸鹽緩沖液（PH4.00）、磷酸鹽緩沖液（pH6.86）、硼砂緩沖液（pH9.18）、氫氧化鈣緩沖液（pH12.45）。

按照規(guī)定取樣或制備樣品測定。

3.4注意事項(xiàng)

測定前選用兩種pH約相差3個單位的標(biāo)準(zhǔn)緩沖液，使供試品溶液的pH處于兩者之間。

配制標(biāo)準(zhǔn)緩沖液與供試液的水為新沸過的冷水，標(biāo)準(zhǔn)緩沖液最好新鮮配制，一般可保存2?3個月。

每次更換溶液時，應(yīng)用純化水充分沖洗電極，然后將水吸干。

測定高pH供試品時，應(yīng)注意堿誤差的問題，平衡穩(wěn)定后再進(jìn)行讀數(shù)。

儀器開關(guān)、插頭應(yīng)保持干燥，注意操作環(huán)境的溫度，溫度對電極電位影響較大

新玻璃電極應(yīng)在水中浸泡24h后再用，甘汞電極中應(yīng)充滿飽和氯化鉀溶液，不得有氣泡，鹽橋中應(yīng)保

持少量的氯化鉀晶體，但不可結(jié)塊。

如用標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液校正不到規(guī)定值時，電極可能被污染，需更換。

4、氯化物檢查法

略

5、硫酸鹽檢查法

略

6、重金屬檢查

6.1、重金屬是指在規(guī)定試驗(yàn)條件下能與顯色劑作用顯色的金屬雜質(zhì)。2005版藥典采用硫代乙酰胺試液或硫

化鈉試液作顯色劑，以鉛的限量表示。

由于試驗(yàn)條件不同可分為4種方法：第一法適用于供試品不經(jīng)有機(jī)破壞，在酸性溶液中進(jìn)行顯色的重

金屬限度檢查；第二法適用于供試品需灼燒破壞，取熾灼殘?jiān)?xiàng)下遺留的殘?jiān)?jīng)處理后在酸性溶液中進(jìn)

行顯色的重金屬限度檢查；第三法用來檢查能溶于堿而不溶于酸（或在稀酸中即生成沉淀）的藥品中的重

金屬；第四法用微孔濾膜過濾，使重金屬硫化物沉淀富極成色斑，用于有色溶液或重金屬限度較低的品種。

重金屬硫化物生成的最佳pH值是3.0~3.5,選用醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2.0ml調(diào)節(jié)pH值較好，顯色

劑硫代乙酰胺試液用量以2.0ml最佳，顯色時間為2分鐘。以10~20ug的Pb與顯色劑所產(chǎn)生的顏色為最

佳目視比色范圍。

在藥品生產(chǎn)中遇到鉛的機(jī)會較多，以鉛為重金屬的代表，用硝酸鉛配制標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液。

6.2標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液：硝酸鉛溶液：每1ml中含有10ug的Pbo

6.3注意事項(xiàng)：

標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液應(yīng)在用前新鮮配制，使用的玻璃容器均不得含有鉛。

重金屬硫化物生成的最佳pH值是3.5,配制醋酸鹽緩沖液（pH3.5）時要用酸度計(jì)調(diào)節(jié)，硫代乙酰胺試

液用量以2.0ml最佳，顯色時間為2分鐘；第四法檢測限量低2?5ug的鉛，硫代乙酰胺試液用量以1.0ml,

顯色時間為10分鐘。

標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液的用量（L2.3法）以2.0ml為宜，小于1.0ml或大于3.0ml,呈色太深或太淺，不利于目

視比較。

如果需要用熾灼殘?jiān)?xiàng)下遺留的殘?jiān)鲋亟饘贂r，灼燒溫度必須控制在500?600C；某些供試品（如

安乃近，諾氟沙星等）在灼燒時能腐蝕瓷用埸而帶入較多的重金屬，應(yīng)改用石英用煙或伯生期。

灼燒殘?jiān)酉跛崽幚?，必須蒸干，至氧化氮蒸氣除盡，否則會使硫代乙酰胺試液因水解生成的硫化氫,

因氧化析出硫，影響測定，蒸干后殘?jiān)欲}酸處理，使重金屬轉(zhuǎn)化為氯化物，在水浴上蒸干除去多余的鹽

酸，加水溶解，加入酚獻(xiàn)指示液1滴，再逐滴加入氨試液，邊加邊攪拌，至溶液剛顯淺紅色，再加入醋酸

鹽緩沖液。

供試品中如有高鐵鹽，在若酸性溶液中會使硫代乙酰胺試液水解生成的硫化氫，因氧化析出硫，可加

入抗壞血酸將高鐵離子還原為亞鐵離子而消除干擾。

如果供試品自身為重金屬的鹽，在檢查其他重金屬時，必須先將供試品本身的金屬離子除去，在進(jìn)行

檢查。

藥物本身生成的不溶性硫化物，影響重金屬檢查，可加入掩蔽劑以避免干擾。

為了消除鹽酸或其他試劑可能夾雜重金屬，在配制供試品溶液時，使用鹽酸超過L0ml,或使用氨試液

超過2.0ml,以及用硫酸或硝酸進(jìn)行有機(jī)破壞，對照溶液應(yīng)取同樣量試液蒸干后，依法檢查。

當(dāng)采用第四法時，將注射器套于濾器上，讓注射器內(nèi)管自然下降，產(chǎn)生的壓力比較均勻，過濾速度

Iml/min,對于粘稠的溶液，可加壓達(dá)到此速度。注意排除氣泡，&漏氣。

5.5計(jì)算：

標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液的濃度：10ug/ml。

標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液的體積*標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液的濃度

重金屬限量％=-----------------------------------------*100%

供試品的量

重金屬的限度*供試品重量

標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液的取用量=-------------------------------------H00%

標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液的濃度

7、干燥失重

7.1方法簡述：藥品的干燥失重指藥品在規(guī)定條件下干燥后所減失重量的百分率。減失的重量主要使水分、

結(jié)晶水及其他揮發(fā)性物質(zhì)。

測定方法常采用烘箱干燥法（對熱穩(wěn)定的藥品）、恒溫減壓干燥（對熱不穩(wěn)定或其水分較難除盡的藥品）

及干燥器干燥（不能加熱干燥的藥品，減壓有助于除去水分&揮發(fā)性物質(zhì)）.

干燥器中常用的干燥劑為硅膠、五氧化二磷或無水氯化鈣，恒溫減壓干燥箱中常用的干燥劑為五氧化

二磷。

7.2、注意事項(xiàng)

干燥失重的數(shù)據(jù)將直接影響原料的含量測定結(jié)果，樣品有引濕性時，含量&干燥失重的取樣最好放在

同一時間。

供試品如未達(dá)到規(guī)定的干燥溫度即融化時，應(yīng)先將供試品在較低的溫度下干燥至大部分水分除去后,

在按照規(guī)定條件干燥。

設(shè)定烘箱的溫度時，應(yīng)注意加熱溫度有沖高現(xiàn)象，必要時先設(shè)定略低于規(guī)定溫度，待溫度穩(wěn)定后，在

調(diào)高至規(guī)定溫度。

減壓干燥，除另有規(guī)定外，壓力應(yīng)在2.67kpa(20mmHg)以下，若瓶蓋為雙層中空，瓶蓋應(yīng)放在另一個

普通干燥器內(nèi)。減壓干燥內(nèi)部為負(fù)壓，開啟前應(yīng)注意緩緩旋開進(jìn)氣閥，并避免氣流吹散樣品。

初次使用新的減壓干燥器時，應(yīng)先將外部用厚布包住，以防破碎傷人。

恒溫減壓干燥時，除另有規(guī)定外，溫度為60C,裝有供試品的稱量瓶盡量放在溫度計(jì)附近，以免溫度不均

勻產(chǎn)生溫度誤差。

多個供試品同時測定干燥失重時，不要混淆。

稱定稱量瓶&供試品以及干燥后的恒重，均應(yīng)準(zhǔn)確至0.Img位。

7.3計(jì)算：

W1+W2-W3

干燥失重％=--------------*100%

W1

8、費(fèi)休氏水分測定

第四部分：儀器分析

一、分光光度法

二、色譜法

基本原理：色譜法作為一種分離方法，它利用物質(zhì)在兩相中吸附或分配系數(shù)的微小差異達(dá)到分離目的。

當(dāng)兩相作相對移動時，被測物質(zhì)在兩相之間進(jìn)行反復(fù)多次的分配，這樣使原來原來微小的分配差異產(chǎn)生了

很大的效果，達(dá)到分離、分析及及測定一些物理化學(xué)常數(shù)的目的。其特點(diǎn)是能將復(fù)雜的混合物分離為各個

有關(guān)的組成后，逐個加以檢測。

分類：根據(jù)分離原理可以分為：吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜、與分子排阻色譜；按分離方法分

類：紙色譜法、薄層色譜法、柱色譜法、氣相色譜法和高效液相色譜法等。

1、薄層色譜法

2、高效液相色譜法

HPLC法系采用高壓輸液泵將規(guī)定的流動相泵入裝有填充劑的色譜柱進(jìn)行分離測定的色譜方法.注入的

供試品，由流動相帶入色譜柱內(nèi)，各成分在柱內(nèi)被分離，并依次進(jìn)入檢測器，有數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)記錄色譜信

號。

2.1、幾個重要的色譜參數(shù)：

固定相與流動相：色譜過程中不同組分在相對運(yùn)動、不相混溶的兩相間交換，其中相對靜止的一方稱

為固定相，另一個相對運(yùn)動的相稱為流動相。

保留時間(冊)：組分從進(jìn)樣開始到柱后出現(xiàn)峰最大值所需的時間為保留時間，而在保留時間內(nèi)流動相

流過的體積為保留體積。

死體積(Vo)與死時間(t。)：在色譜柱內(nèi)不保留組分的流出時間為死時間，；當(dāng)柱外體積可以忽略不計(jì)

時，死體積等于柱內(nèi)流動相所占有的體積。

理論板數(shù)板N=5.54(t/Wh/2)%

分離度R：兩個相鄰色譜峰的分離程度，以兩個組分保留值之差與其平均峰寬值之比表示，公式R=2

(加-tR1)/(W,+W2)，定量分析時,分離度R〉1.5。

托尾因子T：在峰高5%的峰寬與峰極大到前伸沿之間2倍距離之比，公式T=W°.蝴/2山，峰高法定量

時，T應(yīng)在0.95?1.05之間；峰面積定量時，T過大也會影響定量的準(zhǔn)確度。

2.2高效液相色譜儀介紹：

高效液相色譜儀基本組成單元：輸液系統(tǒng)、進(jìn)樣器、分離柱、檢測器和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。

2.2.1輸液系統(tǒng)：

輸液系統(tǒng)包括儲液器及脫氣裝置、高壓輸液泵和梯度洗脫裝置。

儲液器：用于存儲足夠量的、符合HPLC要求的流動相。要求：足夠的容積、與流動相不發(fā)生反應(yīng)、便

于儲存的流動相脫氣、與其它部件連接方便。流動相常用的脫氣方式：真空脫氣、在線脫氣和超聲波脫氣。

高壓輸液泵要求：流量穩(wěn)定，輸出的流動相基本無脈沖，流量精度和重復(fù)性優(yōu)于0.3%；流量范圍寬，

分析型一般可在0.1?范圍內(nèi)連續(xù)可調(diào)；輸出壓力高，密封性好；泵死體積小，有利于流動相的

更換；耐腐蝕性好；具有梯度洗脫功能。高壓輸液泵按性能可分為恒壓泵和恒流泵。恒壓泵可以輸出壓力

穩(wěn)定不變的流動相；恒流泵無論柱系統(tǒng)阻力如何變化都可以保證其流量基本不變。

梯度洗脫裝置：采用兩種不同極性的溶劑，在分離過程中按照一定程序連續(xù)改變流動相的濃度配比和

極性的一種洗脫模式。梯度洗脫可以通過流動相極性的變化來調(diào)整被分離樣品的選擇因子和保留時間，以

使柱系統(tǒng)具有最好的選擇性和最大的峰容量。

2.2.2進(jìn)樣系統(tǒng)：

進(jìn)樣系統(tǒng)是將待分析樣品引入色譜柱的裝置。包括取樣、進(jìn)樣兩種功能，有手動和自動兩種方式。手

動：注射器、閥進(jìn)樣裝置；自動進(jìn)樣器。

2.2.3色譜柱：

色譜柱擔(dān)負(fù)著樣品的分離作用，柱效高、選擇性好、分析速度快是對色譜柱的一般要求。常用的色譜

柱內(nèi)徑是2?5mm,色譜柱填充劑為化學(xué)鍵合硅膠。

色譜柱的填料：反相色譜系統(tǒng)使用非極性填充劑，以十八烷基硅烷鍵合硅膠最為常用；正相色譜系統(tǒng)

使用極性填充劑，常用的填充劑是硅膠；離子交換填充劑用于離子交換色譜；凝膠或高分子多孔微球等填

充劑用于分子排阻色譜；手性鍵合填充劑用于對映異構(gòu)體的拆分分析。

使用范圍：以硅膠為載體的一般鍵合固定相填充劑適用pH2?8的流動相。當(dāng)pH>8時，可使載體硅膠

溶解，當(dāng)pll<2時，與硅膠相連的化學(xué)鍵合相易水解脫落。色譜系統(tǒng)中需使用pll>8的流動相時，應(yīng)選用

耐堿的填充劑，如采用高純硅膠為載體并具有高表面覆蓋度的鍵合硅膠、包裹聚合物填充劑、有機(jī)-無機(jī)雜

化填充劑或非硅膠填充劑；色譜系統(tǒng)中需使用pH<2的流動相時，應(yīng)選用耐酸的填充劑，如具有大體積側(cè)

鏈能產(chǎn)生空間位阻保護(hù)作用的二異丙基或二異丁基取代十八烷基硅烷鍵合硅膠、有機(jī)-無機(jī)雜化填充劑等。

2.2.4檢測器：

最常用的檢測器為紫外檢測器，其它的有二極管陣列檢測器（DAD），熒光檢測器、示差折光檢測器、

蒸發(fā)光檢測器、電化學(xué)檢測器和質(zhì)譜檢測器。

紫外、二極管陣列、熒光、電化學(xué)檢測器為選擇性檢測器，其響應(yīng)值不僅與待測溶液的濃度有關(guān)，還

與化合物的結(jié)構(gòu)有關(guān)；示差折光檢測器和蒸發(fā)光檢測器為通用型檢測器，對所有的化合物均有響應(yīng)；蒸發(fā)

光散射檢測器對結(jié)構(gòu)類似的化合物，其響應(yīng)值幾乎僅與待測物的質(zhì)量有關(guān)；二極管陣列檢測器可以同時記

錄待測物在規(guī)定波長范圍內(nèi)的吸收光譜，故可用于待測物的光譜測定和色譜峰的純度檢查。

紫外檢測器工作原理：朗伯-比爾定律，即當(dāng)一束單色光通過樣品池時，若流動相不吸收光，則吸光度

與吸光組分的濃度和樣品池的光徑長度成正比。

優(yōu)點(diǎn)：靈敏度高、噪音低、線性范圍寬、對流速和溫度的波動不靈敏，適用于梯度洗脫及制備色譜；

缺點(diǎn)：只能檢測有紫外吸收的物質(zhì)，流動相的截止波長必須小于檢測波長。

適用范圍：大多數(shù)有紫外吸收的化合物。

熒光檢測器工作原理：具有某種特殊結(jié)構(gòu)的化合物受到紫外光激發(fā)后能發(fā)射出比激發(fā)光源波長更長的

光，稱為熒光。熒光強(qiáng)度與激發(fā)光強(qiáng)度及熒光物質(zhì)濃度成正比。

優(yōu)點(diǎn)：靈敏度高、選擇性好，是微量組分和體內(nèi)藥物分析常用的檢測器之一；缺點(diǎn)：只適用于能產(chǎn)生

熒光的物質(zhì)的檢測，影響因素較多，對溶劑的純度、pH值、樣品濃度，檢測溫度需要很好的控制。

適用范圍：主要用于氨基酸、多環(huán)芳燒、維生素、留體化合物及酶的檢測。

電化學(xué)檢測器是測量物質(zhì)的電信號變化，對具有氧化還原性質(zhì)的化合物，如硝基、氨基等有機(jī)化合物

及無機(jī)陰陽離子等物質(zhì)可采用電化學(xué)檢測器。工作原理：在兩電極之間施加一恒定電位，當(dāng)電活性組分經(jīng)

過電極表面時發(fā)生氧化還原反應(yīng)，電量的大小符合法辣第定律：Q=nFNQ-電量，n為每摩爾物質(zhì)在氧

化還原過程中轉(zhuǎn)移的電子數(shù)，F(xiàn)為法辣第常數(shù)，N為物質(zhì)的摩爾數(shù)。

優(yōu)點(diǎn)：靈敏度很高，尤其適用于痕量組分分析；缺點(diǎn)：干擾比較多，電極壽命有限，對溫度和流速的

變化比較敏感。

適用范圍：應(yīng)用范圍廣，凡具有氧化還原活性的物質(zhì)都能檢測，本身沒有氧化還原活性的物質(zhì)經(jīng)過衍

生后也能檢測。

蒸發(fā)光散射檢測器工作原理：將色譜洗脫液引入霧化器與通入的氣體混合形成均有的微小液滴，經(jīng)過

加熱的漂移管蒸發(fā)除去流動相而樣品組分形成氣溶膠，然后進(jìn)入檢測室，用強(qiáng)光或激光照射氣溶膠產(chǎn)生光

散射，用光電二極管檢測散射光。

優(yōu)點(diǎn)：通用型檢測器，對各種物質(zhì)有幾乎相同的響應(yīng)；缺點(diǎn)：靈敏度相對較低，流動相必須是揮發(fā)性

的；適用范圍：適用于揮發(fā)性低于流動相的組分，主要用于糖類、高級脂肪酸、磷脂、維生素、氨基酸、

甘油三酯等無紫外吸收或紫外末端吸收的化合物的檢測。

2.2.5HPLC的使用：

操作前的準(zhǔn)備：

流動相的制備：用高純度的試劑，水應(yīng)為新鮮制備的高純水，凡規(guī)定pH值的流動相應(yīng)使用酸度計(jì)調(diào)節(jié),

配好的流動相應(yīng)用0.45um的濾膜過濾，用前脫氣。

供試品溶液的制備：

檢查上次使用記錄和儀器狀態(tài)。

操作：

泵的操作：更換流動相，沖洗泵，調(diào)節(jié)至分析流速平衡色譜柱；

進(jìn)樣操作：把進(jìn)樣器置于LOAD位置，用平頭注射器抽取不少于定量環(huán)容積5倍的樣品，排除氣泡，插

入進(jìn)樣器底部，注入供試品溶液后，將手柄轉(zhuǎn)至INJECT位置?；虿捎米詣舆M(jìn)樣器。

色譜數(shù)據(jù)的收集和處理：使用色譜工作站采集圖譜處理數(shù)據(jù)。

清洗和關(guān)機(jī)

分析完畢后，關(guān)閉檢測器，用適當(dāng)?shù)娜軇┣逑瓷V系統(tǒng)，正相柱一般用正己烷，反相柱如使用鹽，則

先用水，然后用甲醇保存；沖洗完畢后，降低流速至0,關(guān)泵，進(jìn)樣器也應(yīng)用相應(yīng)的溶劑沖洗；關(guān)閉電源,

作好登記。

2.2.6系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：

系統(tǒng)適用性試驗(yàn)通常包括理論板數(shù)、分離度、重復(fù)性和托尾因子四個指標(biāo)。

色譜柱的理論板數(shù)(n)：在規(guī)定的色譜條件下，注入供試品溶液或各品種項(xiàng)下規(guī)定的內(nèi)標(biāo)物質(zhì)溶液，

記錄色譜圖，量出供試品主成分峰或內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰的保留時間tR和半高峰寬M2,按照n=5.54(tR/Wh/2)%

分離度(R)：無論是定性鑒別還是定量分析，均要求待測峰與相鄰峰之間有較好的分離度，分離度的

計(jì)算公式為：R=2（tR2-tR1）/（W,+W2）；

重復(fù)性：取各品種項(xiàng)下的對照溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，除另有規(guī)定外，其峰面積測量值的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差

應(yīng)不大于2.0%；

托尾因子（T）：為保證分離效果和測量精度，應(yīng)檢查待測峰的托尾因子是否符合各品種項(xiàng)下的規(guī)定，

托尾因子計(jì)算公式為：T=W°?/2di,峰高法定量時，T應(yīng)在0.95?1.05之間；峰面積定量時，T過大也會

影響定量的準(zhǔn)確度。

2.2.7測定結(jié)果處理

內(nèi)標(biāo)法：校正因子f=（A內(nèi)/C內(nèi)）/（A對/C對）

含量（C樣）=f*A樣/（A內(nèi)/C內(nèi)）

含量%=C對*（A樣/A樣內(nèi)）/C樣/（A對/A對內(nèi)）*100%

外標(biāo)法：含量%=（C對*A樣）/（C樣*A對）*100%

峰面積歸一化法：含量%=A主峰/A總*100%

雜質(zhì)檢查法：

加校正因子的主成分自身對照法

不加校正因子的主成分自身對照法

2.2.8注意事項(xiàng)

色譜柱于進(jìn)樣器及出口端應(yīng)為無死體積連接，以免試樣擴(kuò)散影響分離。

新柱或被污染的柱子用適當(dāng)溶劑沖洗時，斷開檢測器，以免污染。

使用的流動相應(yīng)與儀器系統(tǒng)的原保存溶劑能互容，否則用異丙醇過渡；

壓力表無壓力顯示或壓力波動時不能進(jìn)行分析，應(yīng)檢查泵中氣泡是否已排除，連接處有無滲漏，排除

故障后方能進(jìn)行操作。

發(fā)現(xiàn)基線波動，出現(xiàn)毛刺等現(xiàn)象，可檢查流通池內(nèi)是否有氣泡或污染，同時檢查接地是否良好；

進(jìn)樣前，色譜柱應(yīng)用流動相充分平衡：

使用色譜柱時，在規(guī)定的pH范圍內(nèi)選用流動相。

個色譜柱的使用應(yīng)予以登記；

分析完畢后，應(yīng)充分沖洗色譜系統(tǒng)。

3、高效液相色譜柱

色譜柱是色譜分析系統(tǒng)的核心部分，裝有不同類型填料的色譜柱與相對應(yīng)的流動相形成了不同的分離

機(jī)制，對絕大多數(shù)有機(jī)化合物進(jìn)行分離分析。

根據(jù)內(nèi)徑不同可分為微徑柱、分析柱、快速柱、半制備柱、制備柱。常用的普通分析柱，內(nèi)徑通常為

4.6mm,柱長15?25cm,填料粒徑5?10um。色譜柱按照固定相化學(xué)組成可分為微粒硅膠、高分子微球、微

粒多孔碳、微粒氧化鋁、微粒氧化錯等。

3.1常見色譜柱填料類型：

3.1.1硅膠：

是最早普及使用的色譜柱填料，主要缺點(diǎn)：化學(xué)穩(wěn)定性較差、熱穩(wěn)定性較差、殘留硅羥基導(dǎo)致第二效

應(yīng)。

改進(jìn)技術(shù)：峰尾：對殘留硅羥基進(jìn)行峰尾；空間保護(hù)：采用具有較大空間位阻的異丙基或異丁基硅烷

化試劑衍生硅膠，在低pH條件下不被水解；雜化顆粒技術(shù)：用有機(jī)硅氧烷取代一部分硅羥基占據(jù)固定相顆

粒內(nèi)部及表面的位置，拓寬pH范圍；極性基團(tuán)嵌入技術(shù)：將極性管能團(tuán)嵌入到烷基鍵合相中，使固定相表

面形成一層親水層，降低堿性化合物的保留；多相鍵合技術(shù)：將一層細(xì)密的丙烯橋雙配位C18硅膠鍵合到

硅膠上，抑制硅膠在高pH下溶解。

3.1.2化學(xué)鍵合固定相：

非極性鍵合相：包括不同鏈長的烷基Cl、C2、C3、C4、C5、C6、C8、C18、C22等和苯基。其中C18最

為常用。

極性鍵合相：常用的有鼠基、二醇基和氨基鍵合相。鼠基鍵合相的分離特性與硅膠相似，但極性相對

較弱，優(yōu)點(diǎn)是梯度洗脫或流動相組成改變時平衡快，對雙鍵異構(gòu)體或含不等量雙鍵數(shù)目的環(huán)狀化合物有很

好的分離能力；二醇基鍵合相對有機(jī)酸和某些高聚物有較好的分離，也可用于某些蛋白質(zhì)的水系體系排阻

色譜；氨基鍵合相首先表現(xiàn)為強(qiáng)的氫鍵結(jié)合能力，其次在酸性介質(zhì)中為弱陰離子交換作用。

離子交換鍵合相：指鍵合的有機(jī)硅烷分子中帶有固定的陽離子或陰離子交換基團(tuán)，可分為陽離子交換

劑和陰離子交換劑兩類。

手性固定相：特指利用一定的作用機(jī)制，能選擇性分離對映體的填料。

3.1.3高分子微球：

高分子微球基體主要有苯乙烯-二乙烯苯共聚物，也有聚乙烯醇、聚酯等類型。主要優(yōu)點(diǎn)是pH范圍寬，

化學(xué)惰性好，熱穩(wěn)定性好。

包裹聚合物：

是在無機(jī)載體的表面形成固載化的有機(jī)聚合物薄層，聚合物薄層表面還可以鍵合上C18、C8、NH2、CN

等，色譜過程中僅聚合物層于流動相和組分接觸，兼顧了無機(jī)載體的剛性和有機(jī)聚合物的化學(xué)穩(wěn)定性。分

離性能和使用范圍類似硅膠柱。

3.1.4微粒多孔碳填料：

微粒多孔碳填料如石墨化碳的表面是完全非極性的均有表面，是一種天然的反相填料，化學(xué)穩(wěn)定性和

熱穩(wěn)定性均很好，但機(jī)械強(qiáng)度較差，對強(qiáng)保留組分柱效較低。

3.2色譜柱的使用

3.2.1使用前注意事項(xiàng)：

色譜柱的儲存液若無特殊說明，均為有機(jī)溶劑，反相柱常用甲醇、乙懵或者高比例的甲醇/乙月青-水溶

液，正相柱常用脫水處理后的純正己烷。

使用前，一定要注意色譜柱的儲存液與待分析樣品的流動相之間是否互溶，若不互溶，必須先用異丙

醇置換掉；

反相色譜中，如果流動相中有緩沖鹽，必須先用低濃度的甲醇/乙睛-水（10?20%）沖洗，否則緩沖

鹽在高濃度的有機(jī)相中很容易析出，從而使色譜柱堵塞。

3.2.2色譜柱的使用方向：

裝色譜柱時應(yīng)使流動相流路的方向與色譜柱標(biāo)簽上箭頭所示方向一致。

3.2.3流動相：

配制時盡可能使用色譜純的試劑，水最好用超純水或重蒸水，流動相經(jīng)0.45um或0.22um的濾膜過濾;

流動相的pH必須符合色譜柱的pH值使用范圍。

3.2.4樣品

樣品溶液最好經(jīng)0.45um或0.22um的濾膜過濾；若樣品成分復(fù)雜，最好使用前置保護(hù)柱。正相色譜時,

樣品和溶劑最好脫水。

3.3色譜柱的保養(yǎng)

3.3.1反相色譜柱用后的保存：如果使用緩沖液或緩沖鹽作為流動相，每天試驗(yàn)結(jié)束后，應(yīng)用10倍柱體積

的低濃度的甲醇/乙懵-水（10?20%）沖洗，使色譜柱內(nèi)的鹽完全溶解洗脫出來，再用較高濃度的甲醇/乙

懵-水（50%）沖洗，最好用高濃度的甲醇/乙睛-水（80?100%）沖洗，使色譜柱中的強(qiáng)吸附物質(zhì)沖洗出

來。

3.3.2色譜柱的長期保存：反相柱，可以儲存于甲醇或乙月青中，正相柱可儲存于經(jīng)脫水處理的正己烷中，離

子交換柱可以貯存于含5%甲醇或含0.05%疊氮鈉中，并將色譜柱兩端的堵頭堵上。

3.4色譜柱的維修

色譜柱使用一段時間后，會發(fā)生柱壓上升，柱效降低的現(xiàn)象。這主要是柱床上端或過濾片處積累了污

染物，可通過再生予以消除。

如果柱壓突然增大，可將色譜柱出、入口端顛倒過來，用10?20倍柱體積的流動相沖洗，如果柱壓仍

然很高，可能是柱入口處的過濾片堵塞，需更換。

如果峰形變壞，表明柱入口柱床可能有塌陷，可用同型號的填料和流動相配成勻漿，將塌陷處填平。

3.5色譜柱的再生

正相柱按照極性增大的順序：依次用20?30倍柱體積的正己烷、二氯甲烷和異丙醇沖洗色譜柱，然后

按照反順序沖洗，最后用干燥的正己烷平衡。

反相柱首先用蒸儲水沖洗，再用20?30倍柱體積的甲醇和二氯甲烷沖洗，然后按照反順序沖洗，最后

用流動相平衡。

離子交換柱在低離子強(qiáng)度的緩沖液中長期使用會導(dǎo)致色譜柱失活，用稀酸緩沖液沖洗可使陽離子交換

柱再生，用稀堿緩沖液沖洗可使陰離子交換柱再生。

分析糖類的氨基柱可用0.02mol/L的磺酸溶液沖洗，然后用水平衡。

4、氣相色譜法：

氣相色譜法系采用氣體為流動相（載氣）流經(jīng)裝有填充劑的色譜柱進(jìn)行分離測定的色譜方法。物質(zhì)或

其衍生物氣化后，被載氣帶入色譜柱進(jìn)行分離，各組分先后進(jìn)入檢測器，用數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)記錄色譜信號。

4.1氣相色譜儀的介紹

氣相色譜儀由載氣源、進(jìn)樣系統(tǒng)、色譜柱、柱溫箱、檢測器和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成。

4.1.1載氣源氣相色譜儀的流動相