湖南省岳陽縣一中、湘陰縣一中2025屆高三第二次診斷性檢測生物試卷含解析

湖南省岳陽縣一中、湘陰縣一中2025屆高三第二次診斷性檢測生物試卷注意事項1．考試結(jié)束后，請將本試卷和答題卡一并交回．2．答題前，請務(wù)必將自己的姓名、準考證號用0．5毫米黑色墨水的簽字筆填寫在試卷及答題卡的規(guī)定位置．3．請認真核對監(jiān)考員在答題卡上所粘貼的條形碼上的姓名、準考證號與本人是否相符．4．作答選擇題，必須用2B鉛筆將答題卡上對應(yīng)選項的方框涂滿、涂黑；如需改動，請用橡皮擦干凈后，再選涂其他答案．作答非選擇題，必須用05毫米黑色墨水的簽字筆在答題卡上的指定位置作答，在其他位置作答一律無效．5．如需作圖，須用2B鉛筆繪、寫清楚，線條、符號等須加黑、加粗．一、選擇題：（共6小題，每小題6分，共36分。每小題只有一個選項符合題目要求）1．下列關(guān)于促甲狀腺激素和生長激素的敘述，正確的是（）A．促甲狀腺激素有高效的生物催化作用B．促甲狀腺激素可運送到下丘腦和甲狀腺C．生長激素能減少糖元生成、促進脂肪分解D．生長激素能刺激細胞增大不能刺激細胞增殖2．研究人員對某二倍體動物（2n）有絲分裂和減數(shù)分裂細胞中的染色體形態(tài)、數(shù)目進行了觀察分析。圖1為其細胞分裂中某一時期的示意圖（僅示部分染色體），圖2是不同細胞中的染色體與核DNA含量示意圖。下列有關(guān)敘述正確的是（）A．圖1細胞處于有絲分裂后期，它屬于圖2中類型c的細胞B．若某細胞屬于圖2中的類型a，且取自睪丸，則該細胞的名稱是初級精母細胞C．若圖2中類型b、c、d、e的細胞屬于同一減數(shù)分裂，則出現(xiàn)的先后順序是b、c、d、eD．在圖2的5種細胞類型中，一定具有同源染色體的細胞類型有a、b、c3．下列關(guān)于ATP的敘述，正確的是（）A．高能磷酸鍵的斷裂需要消耗水和能量B．吸能反應(yīng)所需要的能量都由ATP直接提供C．ATP中的“A”與ATP徹底水解后生成的“A”不同D．ATP中的五碳糖也是參與DNA組成的重要成分4．某種噬菌體外殼蛋白基因突變使mRNA中部出現(xiàn)一個終止密碼子，導致外殼蛋白無法合成，噬菌體不能增殖。但這種噬菌體能在大腸桿菌C品系中順利增殖，釋放子代噬菌體。下列假設(shè)最合理的是（）A．大腸桿菌C品系中某種突變型tRNA能識別并結(jié)合該終止密碼子B．大腸桿菌C品系中的某物質(zhì)能定向誘發(fā)噬菌體DNA回復突變C．大腸桿菌C品系中的核糖體能夠跳過終止密碼繼續(xù)向前移動D．大腸桿菌C品系中存在該突變mRNA的互補RNA，輔助其翻譯5．研究人員在家蠶中發(fā)現(xiàn)一種新的體態(tài)類型——短體蠶，用這種家蠶與正常體形家蠶進行雜交實驗，結(jié)果如下表所示。下列敘述正確的是雜交組合F1短體蠶正常蠶實驗一：短體蠶×正常蠶788810實驗二:短體蠶×短體蠶1530790A．可以通過連續(xù)自交多代的方式獲得純種短體蠶B．短體蠶自交后代出現(xiàn)正常蠶是基因突變的結(jié)果C．實驗一中F1個體隨機交配，F(xiàn)2中短體蠶：正常蠶=2：3D．實驗二中F1個體隨機交配，F(xiàn)2中正常蠶占4/96．下列有關(guān)敘述中，錯誤的是（）A．減數(shù)分裂聯(lián)會時期的交叉互換實現(xiàn)了同源染色體上等位基因的重組B．色盲患者男性多于女性，但男性群體中色盲的基因頻率等于女性群體C．由基因突變導致的疾病有時可以通過光學顯微鏡觀察進而確診D．生物經(jīng)過長期的自然選擇，一種基因的頻率可能降為零二、綜合題：本大題共4小題7．（9分）賓夕法尼亞州一名49歲女子體內(nèi)發(fā)現(xiàn)了一種非常罕見的大腸桿菌變種，全球沒有任何抗生素可以抵抗。甚至連柯利霉素這種被醫(yī)生視為“最后一線藥物”的抗生素，也對這種細菌束手無策。請回答下列有關(guān)問題：（1）T2噬菌體是一種專門寄生在大腸桿菌體內(nèi)的_________，該生物的遺傳物質(zhì)的基本組成單位是________________。（2）根據(jù)所學知識可判斷出：上述大腸桿菌的變種______（填“是”或“不是”）由于染色體變異所致。（3）大腸桿菌的擬核、質(zhì)粒中的DNA分子____（填“有”或“無”）游離的磷酸基團。當__________酶與DNA結(jié)合時，抗生素抗性基因開始轉(zhuǎn)錄。8．（10分）“蓮藕生態(tài)養(yǎng)魚”是種養(yǎng)復合生態(tài)型的農(nóng)業(yè)新模式，請回答：（1）荷花的花色有粉色和白色，體現(xiàn)了________多樣性；荷葉有的挺水、有的浮水，錯落有致，這種現(xiàn)象______________（填“屬于”或“不屬于”）群落的分層現(xiàn)象。（2）在相同環(huán)境及養(yǎng)殖條件下，若將某池塘中主要魚種由草食性魚更換為肉食性魚，則魚類產(chǎn)量將______________（填“增加”“不變”或“降低”），依據(jù)是___________________。（3）為了獲得更大的收益，清除池塘中各種野生植物，擴大蓮藕的種植面積，則該池塘生態(tài)系統(tǒng)的抵抗力穩(wěn)定性會_______（填“增強”或“減弱”），主要原因是_____________。（4）調(diào)查發(fā)現(xiàn)，在建設(shè)“種養(yǎng)復合生態(tài)型新模式”前蓮藕種群中DD和dd基因型頻率分別為5%和60%，現(xiàn)該種群中DD和dd基因型頻率分別為20%和70%，該蓮藕種群____________（填“發(fā)生了”或“未發(fā)生”）進化，理由是__________________________。9．（10分）沿海灘涂屬于鹽堿化草地，對該草地進行改造的程序是：種植先鋒植物——檉柳、堿蓬，增加植被覆蓋量和土壤有機物的量(枯枝落葉)→種植虎尾草、黑麥草，降低土地鹽堿化的程度→種植羊草、苜蓿，繼續(xù)降低土地鹽堿化的程度，同時獲得優(yōu)良牧草；但是隨著植物種類的增加，蝗蟲(食草)、蜈蚣(食蝗蟲)等小動物也隨之增加。（1）為了防止出現(xiàn)蝗災(zāi)，要調(diào)查東亞飛蝗成蟲的種群密度，應(yīng)采用的方法是______________，其種群的空間特征是______________________________。（2）灘涂土壤上植物優(yōu)勢種的更迭屬于________________________。（3）在灘涂改造過程中，利用信息素驅(qū)趕以牧草為食的昆蟲，信息素屬于____________信息，說明在生態(tài)系統(tǒng)中，信息具有______________的功能。這種防治害蟲的方法屬于___________(填“化學防治”或“生物防治”)。（4）改造鹽堿化草地體現(xiàn)了生物多樣性的__________________________價值。10．（10分）基因打靶技術(shù)是建立在基因同源重組技術(shù)以及胚胎干細胞技術(shù)的基礎(chǔ)上而發(fā)展起來的一種分子生物學技術(shù)。請結(jié)合圖示回答下列有關(guān)問題：注：neor是新霉素抗性基因；tk基因的表達可以使無毒的丙氧鳥苷代謝為毒性物質(zhì)，導致細胞死亡。（1）將目的基因和與細胞內(nèi)靶基因同源的DNA片段都重組到__________上，構(gòu)建打靶載體（基因表達載體）。（2）打靶載體測序驗證正確后，利用__________酶，將之線性化，以提高重組率。通過__________技術(shù)將打靶載體導入胚胎干細胞，這樣打靶載體和與細胞內(nèi)靶基因同源的區(qū)段就有機會發(fā)生同源重組。（3）為了篩選發(fā)生同源重組的細胞，可在培養(yǎng)液中加入__________。最后還需要通過__________技術(shù)鑒定同源重組的細胞（去除靶基因），將這樣的細胞通過動物細胞培養(yǎng)后，獲得大量打靶成功的細胞。其中，暫時不用的細胞進行__________保存。（4）將打靶成功的細胞注射入小鼠囊胚，移植到同種、__________的母鼠體內(nèi)，一段時間后對受體母鼠進行妊娠檢查，確保其生下嵌合體小鼠。這種嵌合體小鼠長大后，體內(nèi)同時存在被“修飾”過的基因和未被“修飾”的基因。如果某些小鼠的__________（填“體細胞”或“生殖細胞”）恰巧被“修飾”過了，則它們的雜交后代中，就可能出現(xiàn)基因完全被“修飾”過的小鼠。11．（15分）請回答生物技術(shù)相關(guān)問題：（1）從土壤中分離分解尿素的細菌時，培養(yǎng)基中加的唯一氮源__________，為這種培養(yǎng)基稱為__________培養(yǎng)基。（2）制作果酒時，葡萄汁裝入發(fā)酵瓶時，要留約的空間，目的是____________。制作果醋時，所用微生物的發(fā)酵方式為____________________。（3）提取玫瑰精油過程中，向油水混合物中加入_________以加速油水分層。分離的油層中還含有一定的水分，需加入_________將水除去。胡蘿卜素易溶于有機溶劑中，據(jù)此可用__________的方法提取。（4）制作固定化酵母細胞時，將活化的酵母細胞和海藻酸鈉溶液混合后浸泡于CaCl2溶液中。該過程中CaCl2溶液的作用是____________。

參考答案一、選擇題：（共6小題，每小題6分，共36分。每小題只有一個選項符合題目要求）1、B【解析】

激素是由內(nèi)分泌腺的腺細胞所分泌的、對人體有特殊作用的化學物質(zhì)，它在血液中含量極少，但是對人體的新陳代謝、生長發(fā)育和生殖等生理活動卻起著重要的調(diào)節(jié)作用；激素分泌過多或過少，人體會患相應(yīng)的疾病?！驹斀狻緼、激素只起調(diào)節(jié)代謝的作用，不能起催化作用，A錯誤；

B、激素可以通過體液運輸?shù)饺砀魈?，故促甲狀腺激素可運送到下丘腦和甲狀腺（但只對靶器官或靶細胞起作用），B正確；

C、生長激素能促進生長，減少糖的利用，增加糖元生成，促進脂肪分解，C錯誤；

D、生長激素可促進蛋白質(zhì)的合成、細胞增大與數(shù)目增多，促進生物的生長，D錯誤。

故選B?！军c睛】人體激素的特點有：（1）微量和高效；（2）通過體液運輸；（3）作用于靶器官、靶細胞，并且一經(jīng)靶細胞接受并起作用后就被滅活。2、C【解析】

本題結(jié)合細胞分裂圖和柱形圖，考查細胞的有絲分裂和減數(shù)分裂，要求考生識記細胞有絲分裂和減數(shù)分裂不同時期的特點。分析圖1：該細胞含有同源染色體，且著絲點分裂，處于有絲分裂后期。

分析圖2：a是染色體數(shù)為體細胞的2倍，處于有絲分裂后期；b細胞處于減數(shù)第一次分裂或者處于有絲分裂前期、中期；c可以是體細胞也可以是處于減數(shù)第二次分裂后期的細胞；d為減數(shù)第二次分裂的前期或中期細胞；e細胞為精細胞、卵細胞或極體。【詳解】A、圖1中細胞含有同源染色體，且著絲點分裂，處于有絲分裂后期，此時的染色體數(shù)為體細胞的2倍，屬于圖2中的類型a，A錯誤；

B、圖2中的類型a表示有絲分裂后期，若取自睪丸，則稱為精原細胞，不能稱為初級精母細胞，B錯誤；

C、圖中，b細胞處于減數(shù)第一次分裂或者處于有絲分裂前期、中期；c可以是減數(shù)第一次分裂間期還沒有復制時也可以是處于減數(shù)第二次分裂后期的細胞；d為減數(shù)第二次分裂的前期或中期細胞；e細胞為精細胞、卵細胞或極體；若圖2中類型b、c、d、e的細胞屬于同一減數(shù)分裂，則出現(xiàn)的先后順序是b、c、d、e，C正確；

D、圖2的5種細胞類型中，a處于有絲分裂后期、b細胞處于減數(shù)第一次分裂或者處于有絲分裂前期、中期，c可以是體細胞也可以是處于減數(shù)第二次分裂后期的細胞，d為減數(shù)第二次分裂的前期或中期細胞，e細胞為精細胞、卵細胞或極體，一定具有同源染色體的細胞類型有a、b，D錯誤。

故選C。3、C【解析】

ATP的中文名稱叫三磷酸腺苷，其結(jié)構(gòu)簡式為A-P～P～P，其中A代表腺苷，P代表磷酸基團，-代表普通磷酸鍵，～代表高能磷酸鍵。ATP為直接能源物質(zhì)，在體內(nèi)含量不高，可與ADP在體內(nèi)迅速轉(zhuǎn)化，ATP與ADP的相互轉(zhuǎn)化的反應(yīng)式為：ATP?ADP+Pi+能量，反應(yīng)從左到右時能量代表釋放的能量，用于各種生命活動?！驹斀狻緼、高能磷酸鍵的水解斷裂需要消耗水，但釋放能量，A錯誤；B、吸能反應(yīng)所需要的能量主要由ATP直接提供，B錯誤；C、ATP中的“A”是腺苷，ATP徹底水解后生成的“A”是腺嘌呤，二者不同，C正確；D、ATP中的五碳糖是核糖，而DNA的五碳糖是脫氧核糖，D錯誤。故選C。4、A【解析】

翻譯形成蛋白質(zhì)的直接模板是mRNA，核糖體沿mRNA移動，直至讀取到終止密碼翻譯結(jié)束。突變的噬菌體能在大腸桿菌C品系中順利增殖，說明能合成噬菌體的外殼蛋白，即在mRNA中部出現(xiàn)的終止密碼子能被tRNA識別并結(jié)合，使翻譯過程正常進行?！驹斀狻緼、若大腸桿菌C品系中某種突變型tRNA能識別并結(jié)合該終止密碼子，則翻譯過程不會中斷，可以合成蛋白質(zhì)，A正確；B、基因突變是不定向的、隨機的，所以這種假設(shè)不合理，B錯誤；C、翻譯過程中核糖體沿mRNA鏈移動，到終止密碼子停止，不會跳過終止密碼并繼續(xù)向前移動，C錯誤；D、即使大腸桿菌C品系中存在該突變mRNA的互補RNA，也無法改變該mRNA上的終止密碼子，因此無法輔助其完成翻譯過程，D錯誤。故選A。5、C【解析】

A．由雜交組合二數(shù)據(jù)分析可知，體形為短體的是顯性性狀，且顯性純合致死，正常體形為隱性性狀，A錯誤；B．短體蠶自交后代出現(xiàn)正常蠶是等位基因分離所致，B錯誤；C．實驗一中F1的短體蠶基因型為Aa，正常蠶基因型為aa，故F1產(chǎn)生的配子中1/4A、3/4a，F(xiàn)1個體隨機交配，由于顯性純合致死，后代中短體蠶：正常蠶＝2：3，C正確；D．實驗二中F1短體蠶基因型全為Aa，正常體形蠶基因型為aa，故F1產(chǎn)生的配子中1/3A、2/3a，F(xiàn)1個體隨機交配，由于顯性純合致死，后代中短體蠶Aa：正常蠶aa＝1：1，D錯誤；故選C。6、A【解析】

1、基因重組有自由組合和交叉互換兩類．前者發(fā)生在減數(shù)第一次分裂的后期（非同源染色體的自由組合），后者發(fā)生在減數(shù)第一次分裂的四分體（同源染色體的非姐妹染色單體的交叉互換）。2、色盲是X染色體上的隱性遺傳病。3、基因突變是由于堿基對的增添、缺失和替換導致DNA分子結(jié)構(gòu)發(fā)生改變?！驹斀狻緼、減數(shù)分裂聯(lián)會時期的交叉互換實現(xiàn)了同源染色體上非等位基因的重組，A錯誤；B、男性色盲患者多于女性患者，原因是伴X隱性遺傳方式，但人群中男性群體中色盲的基因頻率與女性群體中色盲的基因頻率相當，B正確；C、鐮刀形貧血癥是基因突變引發(fā)的疾病，可以通過顯微鏡觀察紅細胞的形態(tài)進行確診，C正確；D、生物經(jīng)過長期的自然選擇，不斷淘汰部分基因，所以可能使某種基因的頻率降為零，D正確。故選A。二、綜合題：本大題共4小題7、病毒（或DNA病毒）脫氧核苷酸不是無RNA聚合【解析】

原核生物是指一類細胞核無核膜包裹，只存在稱作擬核區(qū)的裸露DNA的原始單細胞生物。它包括細菌、放線菌、立克次氏體、衣原體、支原體、藍細菌和古細菌等。大腸桿菌屬于細菌，無染色體，且DNA為環(huán)狀。T2噬菌體是噬菌體的一個品系，屬于T系噬菌體。這是一類專門寄生在細菌體內(nèi)的病毒，具有蝌蚪狀外形，頭部呈正20面體，外殼由蛋白質(zhì)構(gòu)成，頭部包裹DNA作為遺傳物質(zhì)。侵染寄主時，尾鞘收縮，頭部的DNA即通過中空的尾部注入細胞內(nèi)。進而通過寄主體內(nèi)的物質(zhì)合成子代噬菌體?！驹斀狻浚?）T2噬菌體是一種專門寄生在大腸桿菌體內(nèi)的病毒。它的遺傳物質(zhì)的基本組成單位是脫氧核苷酸。（2）大腸桿菌是原核生物，沒有染色體。（3）由于擬核、質(zhì)粒中的DNA分子都呈環(huán)狀，故這些DNA分子無游離的磷酸基團。當RNA聚合酶與DNA結(jié)合時，抗生素抗性基因開始轉(zhuǎn)錄?！军c睛】原核生物的結(jié)構(gòu)是常見的考點也是易錯點，原核生物沒有核膜包被的細胞核。且原核生物因為結(jié)構(gòu)簡單，繁殖快速，常被用作遺傳的研究材料，應(yīng)熟悉原核生物的結(jié)構(gòu)和功能。8、基因（或遺傳）不屬于降低能量在流動過程中逐級遞減，肉食性魚所處營養(yǎng)級高，獲得的能量少減弱該生態(tài)系統(tǒng)的生物種類減少，營養(yǎng)結(jié)構(gòu)變簡單，自我調(diào)節(jié)能力減弱發(fā)生了該種群基因頻率發(fā)生了變化【解析】

生物多樣性包括基因多樣性、物種多樣性和生態(tài)系統(tǒng)多樣性。生態(tài)系統(tǒng)的穩(wěn)定性包括抵抗力穩(wěn)定性和恢復力穩(wěn)定性?！驹斀狻浚?）荷花的花色有粉色和白色，是由于基因型不同，體現(xiàn)了基因多樣性；由于荷葉是一種生物，荷葉有的挺水、有的浮水，錯落有致，這種現(xiàn)象不屬于群落的分層現(xiàn)象。（2）在相同環(huán)境及養(yǎng)殖條件下，若將某池塘中主要魚種由草食性魚更換為肉食性魚，由于該魚的營養(yǎng)級升高，根據(jù)能量逐級遞減可知，肉食性魚所處營養(yǎng)級高，獲得的能量少，故魚類產(chǎn)量將降低。（3）為了獲得更大的收益，清除池塘中各種野生植物，擴大蓮藕的種植面積，則該池塘的生物種類減少，營養(yǎng)結(jié)構(gòu)變簡單，自我調(diào)節(jié)能力減弱，故抵抗力穩(wěn)定性會減弱。（4）調(diào)查發(fā)現(xiàn)，在建設(shè)“種養(yǎng)復合生態(tài)型新模式”前蓮藕種群中DD和dd基因型頻率分別為5%和60%，Dd為1-5%-60%=35%，此時的基因頻率為D%=5%+35%×1/2=22.5%；現(xiàn)該種群中DD和dd基因型頻率分別為20%和70%，Dd為1-20%-70%==10%，則此時D%=20%+10%×1/2=25%，由于該種群基因頻率發(fā)生了變化，故該蓮藕種群發(fā)生了進化?！军c睛】判斷一個種群是否發(fā)生進化，關(guān)鍵要看其基因頻率是否發(fā)生改變。9、標志重捕法集群分布演替（或群落演替）化學調(diào)節(jié)生物的種間關(guān)系，以維持生態(tài)系統(tǒng)的穩(wěn)定生物防治直接和間接【解析】

1、生物群落不是一成不變的，他是一個隨著時間的推移而發(fā)展變化的動態(tài)系統(tǒng)．在群落的發(fā)展變化過程中，一些物種的種群消失了，另一些物種的種群隨之而興起，最后，這個群落會達到一個穩(wěn)定階段，像這樣隨著時間的推移，一個群落被另一個群落代替的過程，就叫做演替。2、生態(tài)系統(tǒng)中信息的類型：（1）物理信息：生態(tài)系統(tǒng)中的光、聲、顏色、溫度、濕度、磁力等，通過物理過程傳遞的信息。（2）化學信息：生物在生命活動過程中，產(chǎn)生的一些可以傳遞信息的化學物質(zhì)。（3）行為信息：是指某些動物通過某些特殊行為，在同種或異種生物間傳遞的某種信息。3、生物多樣性具有直接使用價值（已被利用的價值）、間接使用價值（生態(tài)價值）、潛在使用價值（未發(fā)現(xiàn)的價值）?！驹斀狻浚?）動物調(diào)查種群密度的方法是標志重捕法，蝗蟲種群往往是集群分布。（2）群落演替包括一種類型替代另一種，如苔蘚演替成草本，也包括類型不變只有優(yōu)勢種的更迭。（3）信息素屬于化學信息，用來驅(qū)趕以牧草為食的昆蟲，涉及到兩種以上的生物，因此該功能是調(diào)節(jié)生物的種間關(guān)系，以維持生態(tài)系統(tǒng)的穩(wěn)定。這種防治害蟲的方法對人類生存環(huán)境無污染，屬于生物防治。（4）改造鹽堿化草地第一得到優(yōu)良牧草，體現(xiàn)了生物多樣性的直接價值；第二改善了環(huán)境，體現(xiàn)了生物多樣性的間接價值?！军c睛】本題通過實例，考查群落的演替、生態(tài)系統(tǒng)的功能以及生物多樣性的價值和生態(tài)恢復工程，意在考查考生的識記能力和理解所學知識要點，把握知識間內(nèi)在聯(lián)系，形成知識網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的能力；能運用所學知識，準確判斷問題的能力，屬于考綱識記和理解層次的考查。10、載體（或質(zhì)粒）限制顯微注射新霉素和丙氧鳥苷DNA分子雜交液氮（或冷凍）生理狀態(tài)相同（或經(jīng)同期發(fā)情處理）生殖細胞【解析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：（1）目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸熘蝎@取、利用PCR技術(shù)擴增和人工合成。（2）基因表達載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。（3）將目的基因?qū)胧荏w細胞：根據(jù)受體細胞不同，導入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛毎姆椒ㄓ修r(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱游锛毎钣行У姆椒ㄊ秋@微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛毎姆椒ㄊ歉惺軕B(tài)細胞法。（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)；個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等?！驹斀狻浚?）分析題圖可知，將目的基因和與細胞內(nèi)靶基因同源的DNA片段都重組到載體（或質(zhì)粒）上，構(gòu)建打靶載體（基因表達載體）。（2）打靶載體測序驗證正確后，利用限制酶，將之線性化，以提高重組率。通過顯微注射技術(shù)導入胚胎干細胞，這樣打靶載體與細胞內(nèi)靶基因同源的區(qū)段就有幾率發(fā)生同源重組。（3）neor是新霉素抗性基因，tk基因的表達可以使無毒的丙氧鳥苷代謝為毒性物質(zhì)，導致細胞死亡，因此為了篩選發(fā)生同源重組的細胞，可在培養(yǎng)液中加入新霉素和丙氧鳥苷。最后還需要通過DNA分子雜交技術(shù)鑒定同源重組的細胞（去除靶基因），將這樣的細胞通過動物細胞（或克?。┡囵B(yǎng)后，獲得大量打靶成功的細胞。其中，暫時不用的細胞進行液氮（