結(jié)締組織病相關(guān)自身抗體的解讀

自身(zìshēn)免疫性疾病相關(guān)抗體的解讀趙久良北京協(xié)和醫(yī)院風(fēng)濕(fēnɡshī)免疫科共四十五頁彌漫性結(jié)締組織(jiédì-zǔzhī)病的特點自身免疫應(yīng)答反應(yīng)強(qiáng)度與病情密切相關(guān)組織器官病理性損傷和相應(yīng)的功能障礙產(chǎn)生高滴度的

自身抗體或與自身組織起反應(yīng)的T細(xì)胞共四十五頁自身(zìshēn)抗體臨床意義與病情活動相關(guān)抗ds-DNA抗體cANCAACL診斷特異性抗Sm抗體抗CCP抗體抗SSA/SSB預(yù)測(yùcè)預(yù)后臨床亞型抗Jo-1抗Scl-70抗rRNP器官特異性CNS：抗rRNP抗體肺臟：抗Scl-70kDa

抗Jo-1抗體臨床上具有多種常用自身抗體共四十五頁自身(zìshēn)抗體檢測的價值診斷提供治療依據(jù)篩選已患病自己不知道預(yù)警抗體陽性，無臨床表現(xiàn)抗體陽性與特定的臨床事件共四十五頁常用(chánɡyònɡ)實驗室檢查方法共四十五頁共四十五頁共四十五頁間接(jiànjiē)免疫熒光法共四十五頁

間接(jiànjiē)免疫熒光下不同核型共四十五頁ANA染色(rǎnsè)模型分析（25種）均質(zhì)型H：抗DNP，dsDNA，組蛋白，核小體斑點型S：ENA核仁型N：SSc相關(guān)抗體，RNA多聚酶I，PM-SCl,u3nRNP核模型M：抗核包膜蛋白抗體（gp210，板層素），部分dsDNA著絲點型：ACA陽性(yángxìng)胞漿型：分裂間期細(xì)胞細(xì)胞漿顏色陽性，線粒體型，核糖體型，Jo-1型，細(xì)顆粒型混合型共四十五頁抗dsDNA抗體(kàngtǐ)臨床意義致病作用(zuòyòng)在SLE患者的腎臟病變處發(fā)現(xiàn)了抗DNA抗體在具有抗dsDNA抗體的人中，85%會在約5年內(nèi)發(fā)展成為SLESLE中陽性率60-90%對于未治療SLE患者，Sp90%，Se70%抗體水平與疾病活動度相關(guān)活動期陽性率80-100%，非活動期<30%共四十五頁抗ENA抗體(kàngtǐ)共四十五頁抗ENA抗體(kàngtǐ)可提取性核抗原，為核中一類(yīlèi)蛋白質(zhì)，均不含有DNA、組蛋白可以被鹽水提取ENA抗原可以從多種組織中獲得，無種屬間差異，但有明顯的組織不均一性共四十五頁共四十五頁免疫(miǎnyì)對流電泳CIEAbAgO|OOOOOOOO|OO|O陽極(yángjí)+-陰極

共四十五頁免疫(miǎnyì)雙擴(kuò)散(ID)已知Ab1:16已知Ab

Ag1:1待測血清1:41:64

U1-RNP

Sm

SSASSB共四十五頁雙擴(kuò)散法解讀(jiědú)免疫雙擴(kuò)散(ID)檢測(jiǎncè)結(jié)果判斷上圖為抗Sm、U1-RNP抗體陽性滴度均為1:4下圖為抗SSA、SSB抗體陽性抗SSA抗體滴度1:64抗SSB抗體滴度1:16共四十五頁免疫(miǎnyì)印跡法(WB法)共四十五頁與抗ENA抗體特異性結(jié)合多肽(duōtài)抗原表位抗Sm 28/29、13.5KD抗U1RNP73、32、17.5KD抗SSA 52、60KD抗SSB 45、47、48KD抗rRNP 38、16.5、15KD抗Jo-1 55KD抗ScL-7086、70KD共四十五頁免疫印跡(yìnjì)法解讀共四十五頁抗ENA及其臨床意義抗RNP CTD、MCTD、SLE抗Sm SLE30%抗SSA(Ro) pSS75%、SLE25%抗SSB(La) pSS40%、SLE10%抗rRNP SLE抗Scl-70 SSc20~30%抗Jo-1 PM30%共四十五頁抗ENA抗體(kàngtǐ)臨床意義標(biāo)記(biāojì)抗體抗Sm系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）抗Scl-70 系統(tǒng)性硬化癥抗SSA/SSB 干燥綜合征病情活動度相關(guān)細(xì)胞漿抗原 JO-1預(yù)測疾病預(yù)后和臨床亞型抗Jo-1 皮肌炎合并肺間質(zhì)病變抗rRNP 狼瘡腦病共四十五頁特殊(tèshū)問題共四十五頁ANA18項除外性診斷對于臨床不考慮CTD患者增加項目抗CENP-B抗體：ACA共包括4型，以B型為主抗核小體抗體：多見于活動性SLE，尤其是狼瘡腎炎(shènyán)，可能是SLE的特異性抗體，Se58-71%，Sp97-99%初步篩查臨床考慮CTD，但具體分型未明共四十五頁共四十五頁類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎相關(guān)(xiāngguān)抗體譜類風(fēng)濕因子靈敏度高，特異度差（63%）抗環(huán)瓜氨酸多肽抗體(kàngtǐ)CCPELISA，79%，陽性預(yù)測值84%抗角蛋白抗體（AKA）：IF抗核周因子抗體（APF）：IFMCV共四十五頁類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎

多關(guān)節(jié)炎 -關(guān)節(jié)變形 -偶見臟器累及(肺纖維化,胸膜炎,心包炎,鞏膜炎,類風(fēng)濕結(jié)節(jié)(jiéjié),血管炎) -30-50%RA患者在發(fā)病第一年可見關(guān)節(jié)損壞 -40%RA患者5年內(nèi)病情發(fā)展導(dǎo)致喪失勞動力 -根據(jù)病情的嚴(yán)重程度，壽命縮短3到14年共四十五頁類風(fēng)濕的關(guān)節(jié)損害(sǔnhài)——致畸的根源在疾病發(fā)生(fāshēng)2年內(nèi)即可發(fā)生不可逆的關(guān)節(jié)損壞，致殘率高1966~1971atMiddlesexHospital,London,UK.94例病程<1年早期RA入組90%的關(guān)節(jié)破壞（60/67）發(fā)生在兩年內(nèi)，比骨關(guān)節(jié)炎（osteoarthritis）的危害更大T.Sokka,T.Pincus:Ahistoricalperspectiveconcerningpopulation-basedandclinicalstudiesofearlyarthritisandearlyrheumatoidarthritis.ClinExpRheumatol2003;21(Suppl.31):S5-S14.28共四十五頁常規(guī)診斷方法(fāngfǎ)不能實現(xiàn)早期診斷29現(xiàn)行的美國風(fēng)濕病學(xué)會（ACR）1987年的診斷標(biāo)準(zhǔn)主要依靠臨床表現(xiàn)、X線以及類風(fēng)濕因子（RF）

檢測。符合此標(biāo)準(zhǔn)時病人常已出現(xiàn)骨關(guān)節(jié)破壞，加之RF缺乏特異性，不利于早期診斷、早期干預(yù)治療，因此臨床需要(xūyào)能用于RA早期診斷的實驗室指標(biāo)。艾脈興，曾小峰，ChinJRheumatol,June2002,Vol6,No.3共四十五頁抗CCP與類風(fēng)濕因子(yīnzǐ)（RF）的區(qū)別現(xiàn)行臨床上熟悉的實驗室診斷指標(biāo)是類風(fēng)濕因子，由于RF受某些抗原(kàngyuán)、抗體物質(zhì)的干擾，常出現(xiàn)假陽性，特異性不高。自1964年以來陸續(xù)證實抗核周因子抗體（APF）、抗角蛋白抗體（AKA）、抗絲集蛋白抗體（AFA）以及抗Sa抗體對RA具有高度特異性，可在疾病早期出現(xiàn)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，上述抗體在化學(xué)結(jié)構(gòu)上具有相關(guān)性，他們識別表位的主要抗原決定簇都含有瓜氨酸，被稱為瓜氨酸相關(guān)自身免疫系統(tǒng)，并認(rèn)為此系統(tǒng)可能在RA的發(fā)病及發(fā)展中起作用。共四十五頁抗環(huán)瓜氨酸肽（CCP）抗體(kàngtǐ)2000年,荷蘭(hélán)學(xué)者Schellekons等首次合成由21個氨基酸殘基組成、含瓜氨酸的環(huán)肽(CCP)為抗原,用ELISA方法檢測RA病人血清的抗CCP抗體并取得令人滿意的結(jié)果共四十五頁“環(huán)狀”瓜氨酸多肽抗體(kàngtǐ)比“線性”瓜氨酸多肽抗體(kàngtǐ)對類風(fēng)濕檢測更靈敏瓜氨酸多肽對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的敏感性線性49%環(huán)狀68%CCP=CyclicCitrullinatedPeptide（環(huán)瓜氨酸肽）Schellekensetal.,2000抗環(huán)瓜氨酸肽（CCP）抗體(kàngtǐ)共四十五頁抗CCP抗體(kàngtǐ)與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎共四十五頁抗CCP與RF聯(lián)檢納入(nàrù)新RA分類標(biāo)準(zhǔn)34關(guān)節(jié)受累情況受累關(guān)節(jié)數(shù)得分（0-5分）中大關(guān)節(jié)1個0

2-10個1小關(guān)節(jié)1-3個2

4-10個3至少1個小關(guān)節(jié)>10個5血清學(xué)

得分（0-3分）RF和抗CCP抗體均陰性（－）0RF或抗CCP抗體低滴度陽性（＋）2RF或抗CCP抗體高滴度陽性（＋＋）3（>正常上限3倍）

滑膜炎病程

得分（0-1分）<6周

0≥6周

1急性時相反應(yīng)物

得分（0-1分）CRP和ESR均正常

0CRP或ESR升高

1取各項評分最高分加和，總分≥6分可確診RA中華風(fēng)濕病學(xué)雜志(zázhì)2010年4月第14卷第4期《類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎診斷及治療指南》RA新四項抗CCP抗體類風(fēng)濕因子C反應(yīng)蛋白血沉共四十五頁抗CCP抗體體檢(tǐjiǎn)篩查應(yīng)用建議檢測(jiǎncè)套餐免疫性疾病基礎(chǔ)檢驗項目骨檢測項目增加抗CCP抗體聯(lián)合檢測重點群體男性、女性普遍適用（女性、家族有疾病史潛在風(fēng)險更高）結(jié)果比類風(fēng)濕因子更可靠早于影像學(xué)診斷持續(xù)陽性提示骨破壞持續(xù)加重持續(xù)陽性致殘率極高（兩年內(nèi)70%）共四十五頁抗磷脂(línzhī)抗體譜廣義抗磷脂抗體譜包括：抗心磷脂抗體(kàngtǐ)：ACL抗磷脂結(jié)合血漿蛋白抗體：β2GP1凝血酶原（PT），蛋白C，蛋白S膜聯(lián)蛋白Annexin

A2和A5抗磷脂-蛋白復(fù)合物抗體磷脂酰肌醇anti-PI，磷脂酰乙醇胺

anti-PE磷脂酰絲氨酸/凝血酶原（anti-PS/PT）波形蛋白/心磷脂復(fù)合物：anti-vimentin狼瘡抗凝物：功能性抗體，1952年發(fā)現(xiàn)，1972年命名共四十五頁狼瘡(lángchuāng)抗凝物（LAC）一種IgG/IgM型免疫球蛋白，作用(zuòyòng)于凝血酶原復(fù)合物，阻斷活化的凝血因子V與凝血酶原作用，抑制纖維蛋白的形成，致使凝血時間延長初篩試驗：活化部分凝血酶原時間(APTT)白陶土凝血時間(KCT)稀釋蛇毒凝血時間(dRVVT)稀釋凝血酶原時間(dPT)通過糾正試驗確診：若有LA，缺乏血小板正常血清不能糾正凝血時間，只有加入過量磷脂或血小板溶解物后，延長的APTT可被糾正需排除其他原因，如肝素、Ⅷ因子復(fù)合物等共四十五頁抗心磷脂(línzhī)抗體（ACL）最先發(fā)現(xiàn)的抗磷脂自身抗體之一，和血小板減少有明顯(míngxiǎn)相關(guān)性ACL陽性者，血小板減少3倍于ACL陰性者習(xí)慣性流產(chǎn)與IgG型ACL關(guān)系密切，并可能和抗體的滴定度有關(guān)檢測方法：ELISA目前尚無金標(biāo)準(zhǔn)兩種類型：38ACLIg類型與血栓形成常見疾病

2-GP1依賴高滴度IgG型密切相關(guān)自身免疫病、APS非

2-GP1依賴低滴度IgM型不引起血栓梅毒、AIDS等感染性疾病共四十五頁抗β2GP1抗體(kàngtǐ)抗B2GP1抗體(kàngtǐ)：特異度高（94.5%），靈敏度低24%結(jié)構(gòu)域1=Domain

I與臨床價值更相關(guān)

共四十五頁ANCA–熒光染色(rǎnsè)模型對應(yīng)抗原(kàngyuán)主要抗原:蛋白酶3(PR3)其它抗原:BPI,AZU等主要抗原:髓過氧化物酶(MPO)

其它抗原:

HLE,LF,CG等相關(guān)疾病

肉芽腫伴多血管炎(GPA):敏感性:73%特異性:99%感染等顯微鏡下多血管炎(MPA):

敏感性:67%特異性:99%IBD,RA,SLE等共四十五頁ANCA陽性(yángxìng)患者的疾病譜余潔等，《中華全科醫(yī)師(quánkēyīshī)雜志》2010；9:26-30CTD患者如RA、SLE和肌炎，偶可表現(xiàn)出ANCA陽性，但大多是非MPO-ANCA,和非PR3-ANCA感染性心