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文檔簡介

實(shí)驗(yàn)二黃瓜無菌苗愈傷組織的誘導(dǎo)（一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆拯S瓜無菌苗愈傷組織的誘導(dǎo)技術(shù)，熟悉植物組織繼代培養(yǎng)操作過程。（二）實(shí)驗(yàn)原理在一定的條件下，不同器官（根、莖、葉等）來源的外植體均可以脫分化形成愈傷組織。實(shí)驗(yàn)用具：天平、燒杯、玻璃棒、量筒、移液槍、三角瓶、pH試紙、電爐、高壓滅菌鍋。無菌室、無菌濾紙、無菌培養(yǎng)皿、燒杯、解剖刀、鑷子、剪刀、酒精燈、酒精棉花、滴管、記號筆、廢液罐、火柴、光照培養(yǎng)箱。（四）實(shí)驗(yàn)步驟

配制以下培養(yǎng)基各100ml：MS2：MS+2.0mg/LBA+0.1mg/LNAAMS3：MS+2.0mg/LBA+0.5mg/LNAAMS4：MS+2.0mg/LBA+2.0mg/LNAA取200ml燒杯3只，標(biāo)記，各加入4gMS培養(yǎng)基和100ml蒸餾水，加熱直至完全溶解。各加入1mg/ml6-BA200μl，并不斷攪拌。分別加入1mg/mlNAA10、50、200μl，并不斷攪拌。用1mol/LHCl或NaOH調(diào)節(jié)pH至5.8～6.0。分裝。將3種培養(yǎng)基分別分裝到4個三角瓶中，做好標(biāo)記。滅菌。用高壓蒸汽滅菌鍋在121℃、0.1MPa條件下滅菌15～20min。操作按儀器操作步驟進(jìn)行。滅菌后待壓力下降到0Pa時取出，凝固后待用。4.接種進(jìn)入無菌室，用70％乙醇擦洗雙手和工作臺面，點(diǎn)燃酒精燈。解開三角瓶的繩子，將三角瓶按使用先后順序排好。再次消毒雙手和工作臺面，取出無菌濾紙，用無菌水潤濕。在火焰邊打開三角瓶的封口紙，燒灼瓶口和鑷子，待鑷子冷卻后取出無菌苗，放置在無菌濾紙上。剪成5～10mm小段（根部去掉部分根尖，葉片去葉緣后剪成50mm2左右的小片），每平皿接種3～5段（片）。每組接種8瓶，根、莖段、莖尖、葉各2瓶。光照培養(yǎng)箱25℃暗培養(yǎng)。作業(yè)1周后觀察培養(yǎng)體系有無污染，計(jì)算每一個平皿內(nèi)染菌外植體數(shù)和外植體外的菌落數(shù)，分析染菌原因。1周后計(jì)算每種外植體的愈傷組織誘導(dǎo)率（形成愈傷組織的外植體數(shù)/總接種外植體數(shù)×10

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