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DB34DB34/T3121—2018技術(shù)規(guī)程TechnicalRegulationsofPCRAssayforDetectionofFowlAviadenovirusSerotype4NucleicAcid安徽省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布I1）：PCR（PolymeraseChai）：25.1510×ExTaqbuffe根據(jù)GenBank登錄的FAdV-4(GenBank:GU188428.1)Hexon基因核苷酸序列，設(shè)計(jì)用于擴(kuò)增下游引物P2：FAdV-4（5'-TCGCAGGAAGTCGTAGTGGA-3'擴(kuò)增核酸片段大小為951bp。如果制備的核酸模板中有FAdV-4，PCR產(chǎn)物電泳后在951bp處出現(xiàn)條帶，即為陽(yáng)性，反之即為3），制備的樣品在2℃-8℃條件下保存應(yīng)不超過(guò)24h，如需長(zhǎng)期保存應(yīng)置-70℃以下，并應(yīng)避免反復(fù)8.2.3每管加入待檢樣品（已研磨好的被檢樣品上清，陽(yáng)性對(duì)照樣品和陰性對(duì)照樣品）取出離心管，室溫融化，4℃,20000g離心15min。8.2.7取出離心管，用50μL滅從ExTaq試劑盒中取出相應(yīng)的10×ExTaqbuffer(Mg2+plus)、ExTaq酶和dNTPMixture，同時(shí)421ExTaq酶2μL樣品加入配制好的瓊脂糖凝膠中，同時(shí)加入DL2000DNAMarker，之后在電壓100V下，經(jīng)15~5樣本對(duì)應(yīng)的泳道在951bp位置處出現(xiàn)明顯的條帶，表示樣品中存在Ⅰ群血清4型禽腺病毒核酸6A.1.320％十二烷基硫酸鈉（SDS）溶液（pH71mol/L三羥甲基氨基甲烷-鹽酸（Tris-HCLpH8.0）2mL0.5mol/L乙二銨四乙酸二鈉（EDTA）7A.550×TAE（三羥甲基氨基甲烷-乙酸）電泳緩沖液）（0.2mol/L磷酸氫二鈉水溶液：磷酸氫二鈉（Na2HPO4*7H2O）53.A.6.30.01mol/L、pH7.2磷酸鹽緩
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