DB3401T 231-2021 生態(tài)環(huán)境檢測實驗室標準菌株管理規(guī)范

ICS13.020.01CCSZ003401IDB3401/T231—2021前言 2規(guī)范性引用文件 3術(shù)語和定義 4一般要求 2人員 2場所與設(shè)備 2安全防護 2記錄 25管理流程 2流程概述 2采購 2驗收 2保藏 2期間核查 2制備 3銷毀 4附錄A（資料性）菌株的代數(shù)、使用類型、繼承關(guān)系 5附錄B（規(guī)范性）標準菌株管理流程 6附錄C（資料性）記錄表 7附錄D（規(guī)范性）標準儲備菌株制備流程 附錄E（規(guī)范性）儲備菌株制備流程 附錄F（規(guī)范性）工作菌株制備流程 DB3401/T231—2021本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導(dǎo)則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔識別專利的責(zé)任。本文件由合肥市生態(tài)環(huán)境局提出并歸口。本文件起草單位：安徽海峰分析測試科技有限公司、中國建材檢驗認證集團安徽有限公司、合肥市環(huán)境監(jiān)測中心站、肥西縣環(huán)境監(jiān)測站、安徽國測檢測技術(shù)有限公司、安徽海恒檢測技術(shù)有限公司、安徽省環(huán)境檢測行業(yè)協(xié)會、合肥志鵬環(huán)保職業(yè)培訓(xùn)學(xué)校有限公司。本文件主要起草人：丁月、王家菊、程燕、劉莎莎、夏晴、夏俊雅、戴光玉、李偉、楊圣廣、張漢昌、孫美慧、王莉莉、?？?、崔建雙。1DB3401/T231—2021生態(tài)環(huán)境檢測實驗室標準菌株管理規(guī)范本文件規(guī)定了生態(tài)環(huán)境檢測實驗室標準菌株管理的一般要求和流程。本文件適用于生態(tài)環(huán)境檢測實驗室標準菌株的管理。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB19489實驗室生物安全通用要求GB/T27405-2008實驗室質(zhì)量控制規(guī)范食品微生物檢測GB50346生物安全實驗室建筑技術(shù)規(guī)范SN/T2660食品微生物實驗室菌種保藏方法3術(shù)語和定義GB/T27405-2008界定的以及下列術(shù)語和定義適用于本文件。標準菌株referencestrain至少定義到屬或種水平的菌株。按其特性進行分類和描述，有明確的來源。[來源：GB/T27405-2008，3.10]標準儲備菌株referencestocks標準菌株經(jīng)過一代轉(zhuǎn)接后獲得的同種菌株。[來源：GB/T27405-2008，3.11]儲備菌株stockculture標準儲備菌株經(jīng)過轉(zhuǎn)接后獲得的同種菌株。工作菌株workingcultures由標準菌株、標準儲備菌株、儲備菌株或4代以內(nèi)經(jīng)過轉(zhuǎn)接獲得的同種菌株，直接用于培養(yǎng)基檢驗、人員比對、陰性及陽性對照等實驗活動。代generation將微生物接種至新鮮培養(yǎng)基上或培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)生長一次即為一代。注：按照菌株的傳代過程，對各代菌株的代數(shù)、使用類型、繼24.1人員3DB3401/T231—2021制備5.6.1制備要求5.6.1.1制備過程應(yīng)在無菌條件下進行。5.6.1.2培養(yǎng)條件應(yīng)按照供應(yīng)商提供的使用說明書要求進行。5.6.1.3培養(yǎng)物應(yīng)進行標識，標識內(nèi)容應(yīng)包括名稱、菌種號、傳代日期和代數(shù)及使用類型等信息。5.6.1.4應(yīng)記錄制備信息，制備記錄表參見附錄C中的表C.4。5.6.2制備過程5.6.2.1復(fù)蘇拆開標準菌株的包裝，按照供應(yīng)商提供的使用說明書要求對標準菌株進行復(fù)蘇。5.6.2.2平板分離采用非選擇性平板對復(fù)蘇后的標準菌株進行分離、純化。5.6.2.3確認對平板分離出的菌落進行存活性、純度確認。確認合格后，方可進行制備。如確認不合格，應(yīng)及時滅菌銷毀。5.6.2.4標準儲備菌株制備挑取純菌落進行分裝保藏，即得到標準儲備菌株（第2代）。標準儲備菌株制備流程按照附錄D執(zhí)行。標準儲備菌株不應(yīng)作為標準菌株使用。5.6.2.5儲備菌株制備取標準儲備菌株，在非選擇性平板上轉(zhuǎn)種培養(yǎng)并驗證合格，挑取純菌落進行分裝保藏，即得到儲備菌株（第3代）。儲備菌株制備流程按照附錄E執(zhí)行。儲備菌株不應(yīng)作為標準儲備菌株或標準菌株使用。5.6.2.6工作菌株制備5.6.2.6.1由標準菌株制備工作菌株（第3代）取標準菌株，在復(fù)蘇、分離確認合格后，挑取純菌落轉(zhuǎn)接于斜面進行培養(yǎng)，即得到工作菌株（第3代）。制備流程按照附錄F圖F.1執(zhí)行。工作菌株不應(yīng)作為儲備菌株、標準儲備菌株或標準菌株使用。5.6.2.6.2由標準儲備菌株制備工作菌株(第4代)取標準儲備菌株，在非選擇性平板上轉(zhuǎn)種培養(yǎng)并驗證合格，挑取純菌落轉(zhuǎn)接于斜面進行培養(yǎng)，即得到工作菌株（第4代）。制備流程按照附錄F圖F.2執(zhí)行。5.6.2.6.3由儲備菌株制備工作菌株(第5代)取儲備菌株，在非選擇性平板上轉(zhuǎn)種培養(yǎng)并驗證合格，挑取純菌落轉(zhuǎn)接于斜面進行培養(yǎng)，即得到工作菌株（第5代）。制備流程按照附錄F圖F.3執(zhí)行。5.6.2.6.4由工作菌株(第3代)制備工作菌株（第4代）4DB3401/T231—2021取工作菌株（第3代），挑取純菌落轉(zhuǎn)接于斜面進行培養(yǎng)，即得到工作菌株（第4代）。制備流程按照附錄F圖F.4執(zhí)行。5.6.2.6.5由工作菌株(第4代)制備工作菌株（第5代）取工作菌株（第4代），挑取純菌落轉(zhuǎn)接于斜面進行培養(yǎng)，即得到工作菌株（第5代）。制備流程按照附錄F圖F.5執(zhí)行。銷毀5.7.1銷毀工作應(yīng)由兩人共同操作，并對銷毀過程進行嚴格監(jiān)督。5.7.2將需要銷毀的菌株和使用過的帶菌耗材經(jīng)121℃高壓滅菌至少30min，再放入實驗室生物廢棄物處理桶。需要銷毀的菌株包括但不限于：a)解凍使用后的標準儲備菌株、儲備菌株；b)經(jīng)確認或驗證不合格的菌株；c)超過保存期限的菌株；d)其他應(yīng)廢棄的菌株。5.7.3廢棄物應(yīng)按GB19489中廢物處置規(guī)定進行處理。5.7.4銷毀記錄表參見附錄C中的表C.5。5DB3401/T231—2021（資料性）菌株的代數(shù)、使用類型、繼承關(guān)系各代菌株的代數(shù)、使用類型、繼承關(guān)系見表A.1。表A.1各代菌株的代數(shù)、使用類型、繼承關(guān)系- 注：從標準菌株到標準儲備菌株、儲備菌株和工作菌株傳代培養(yǎng)次數(shù)不超過5次。6DB3401/T231—2021（規(guī)范性）標準菌株管理流程標準菌株管理流程見圖B.1。采購申請記錄合同 啟動工作計劃采購申請記錄合同 啟動工作計劃采購驗收記錄 驗收記錄驗收保藏、期間核查保藏、領(lǐng)用記錄期間核查記錄保藏、期間核查制備制備記錄制備銷毀銷毀記錄銷毀工作結(jié)束工作結(jié)束圖B.1標準菌株管理流程圖7DB3401/T231—2021記錄表C.1驗收記錄表見表C.1。表C.1驗收記錄表序號標準菌株名稱標準菌株來源菌株編號批號采購日期驗收日期驗收評價驗收人備注規(guī)格數(shù)量有效期包裝標識說明書證書存活性純度8DB3401/T231—2021C.2保藏與領(lǐng)用記錄表見表C.2。表C.2保藏與領(lǐng)用記錄表9DB3401/T231—2021C.3期間核查記錄表見表C.3。表C.3期間核查記錄表序號菌株名稱菌株來源菌株編號批號代數(shù)及使用類型保藏日期核查日期核查結(jié)果核查人備注外觀保藏條件有效期文件資料存活性純度關(guān)鍵生化特性DB3401/T231—2021C.4制備記錄表見表C.4。表C.4制備記錄表DB3401/T231—2021C.5銷毀記錄表見表C.5。表C.5銷毀記錄表注：廢棄菌株應(yīng)標明編號、數(shù)量。DB3401/T231—2021（規(guī)范性）標準儲備菌株制備流程標準儲備菌株制備流程見圖D.1。標準菌株（第0標準菌株（第0代）按說明書要求復(fù)蘇（第1代）按說明書要求的培養(yǎng)條件，在非選擇性平板上分離（第2代）對分離出的菌落進行存活性、純度確認否否銷毀符合銷毀符合是挑取純菌落，用合適的保存介質(zhì)進行分裝保藏標準儲備菌株（第標準儲備菌株（第2代）圖D.1標準儲備菌株制備流程圖DB3401/T231—2021（規(guī)范性）儲備菌株制備流程儲備菌株制備流程見圖E.1。標準儲備菌株（第標準儲備菌株（第2代）按說明書要求的培養(yǎng)條件，在非選擇性平板上分離（第3代）對分離出的菌落進行存活性、純度確認否銷毀符合否銷毀符合是挑取純菌落，用合適的保存介質(zhì)進行分裝保藏儲備菌株（第儲備菌株（第3代）圖E.1儲備菌株制備流程圖DB3401/T231—2021（規(guī)范性）工作菌株制備流程F.1標準菌株制備工作菌株流程見圖F.1。標準菌株（第標準菌株（第0代）按說明書要求復(fù)蘇（第1代）按說明書要求的培養(yǎng)條件，在非選擇性平板上分離（第2代）對分離出的菌落進行存活性、純度確認銷毀否銷毀符合是挑取純菌落轉(zhuǎn)接于斜面培養(yǎng)生長工作菌株（第工作菌株（第3代）圖F.1標準菌株制備工作菌株流程圖DB3401/T231—2021F.2標準儲備菌株制備工作菌株流程見圖F.2。標準儲備菌株（第2標準儲備菌株（第2代）按說明書要求的培養(yǎng)條件，在非選擇性平板上分離（第3代）對分離出的菌落進行存活性、純度確認否符合銷毀否符合銷毀是挑取純菌落轉(zhuǎn)接于斜面培養(yǎng)生長工作菌株（第工作菌株（第4代）圖F.2標準儲備菌株制備工作菌株流程圖DB3401/T231—2021F.3儲備菌株制備工作菌株流程見圖F.3。儲備菌株（第3儲備菌株（第3代）按說明書要求的培養(yǎng)條件，在非選擇性平板上分離（第4代）對分離出的菌落進行存活性、純度確認否否銷毀符合銷毀符合是挑取純菌落轉(zhuǎn)接于斜面培養(yǎng)生長工作菌株（第工作菌株（第5代）圖F.3儲備菌株制備工作菌株流程圖DB3401/T231—2