辣椒疫霉病與炭疽病抗性評價(jià)技術(shù)規(guī)程

1辣椒疫霉病與炭疽病抗性評價(jià)技術(shù)規(guī)程本文件規(guī)定了辣椒不同品種對辣椒疫霉病與炭疽病的抗性評價(jià)中的術(shù)語與定義、培養(yǎng)基、接種體制備和供試?yán)苯诽幚?、接種、抗病性調(diào)查、抗性水平鑒定等內(nèi)容。本文件適用于內(nèi)蒙古地區(qū)辣椒不同品種對辣椒疫霉病與炭疽病的抗性評價(jià)。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB16715.3瓜菜作物種子第3部分：茄果類3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1辣椒疫霉病pepperphytophthorablight主要由辣椒疫霉菌（PhytophthoracapsiciLeonian）引起的病害，在植株的根、莖、葉、果都可發(fā)病，引起植株地上部莖葉凋萎、近地面莖部或分叉處變褐、果實(shí)腐爛等癥狀，是日光溫室辣椒生產(chǎn)上的毀滅性病害。3.2辣椒炭疽病pepperanthracnosedisease又稱辣椒輪紋病，主要由半知菌亞門的刺盤孢屬（Colletotrichumsp.）引起的真菌性病害，病斑圓形或不規(guī)則形，邊緣黑褐色，內(nèi)部凹陷，灰褐色或灰黑色，后期著生小黑點(diǎn)，病健交界明顯，天氣干燥時(shí)，病部干縮變薄成紙狀且易破裂。4培養(yǎng)基V8瓊脂培養(yǎng)基（辣椒疫霉產(chǎn)孢培養(yǎng)基）：V8汁200mL，CaCO32g，瓊脂15g，蒸餾水800mL。PDA培養(yǎng)基：200g去皮馬鈴薯切成小塊，加水煮20~30分鐘，紗布過濾后加入葡萄糖20g，瓊脂粉20g，補(bǔ)足水分至1000毫升115℃)滅菌20分鐘。5接種體制備和供試?yán)苯诽幚?.1病原物分離2從發(fā)病植株典型的病斑上采用組織分離結(jié)合單孢純化法分離病原物。分離物經(jīng)形態(tài)學(xué)鑒定確認(rèn)為辣椒疫霉（PhytophthoracapsiciLeonian）或辣椒炭疽?。–olletotrichumsp.）后，經(jīng)致病性測定后保存?zhèn)溆谩?.2接種體的繁殖和制備接種前進(jìn)行病原物接種體的繁殖，常用繁殖方法為接種到V8（疫霉病菌）或PDA（炭疽病菌）上，于25℃±1下培養(yǎng)7d，在28℃下日光照射48h誘發(fā)孢子囊，炭疽病菌可直接在PDA黑暗培養(yǎng)產(chǎn)生孢子。待培養(yǎng)基平板上產(chǎn)生大量孢子囊后加入無菌水，用玻璃或毛筆刮動平板培養(yǎng)基收集菌絲和孢子囊。將收集的培養(yǎng)物置于5℃下30min，然后置于室溫下誘發(fā)游動孢子的形成和釋放。兩層紗布過濾后得到孢子懸浮液，用蒸餾水稀釋至所需濃度5.3供試?yán)苯诽幚砉┰嚨睦苯贩N質(zhì)資源質(zhì)量符合GB16715.3，種子表面消毒后催芽，出芽后種植，按照常規(guī)種植方法進(jìn)行水、肥、蟲管理，種植后70d辣椒采收前3-4周灌根法接種疫霉病菌，或采集成熟辣椒果實(shí)用于炭疽病的試驗(yàn)接種。6接種6.1辣椒疫霉?。河霉喔臃N法接種，在距離幼苗根基部3cm直徑范圍內(nèi)扎深度4cm孔，用移液槍注入4mL孢子懸浮液。每份種質(zhì)材料接種10株，接種無菌水的幼苗作為空白對照。接種后的溫度和濕度分別控制在25~28℃和75%以上，接種7d后統(tǒng)計(jì)發(fā)病情況。6.2辣椒炭疽病：用無菌接種針在辣椒果實(shí)中上部刺1mm左右深度傷口，然后在傷口處接1μL孢子懸浮液。每個(gè)辣椒種質(zhì)資源接種6-10個(gè)果實(shí)，辣椒接種后繼續(xù)在溫室中培養(yǎng)，保持溫室的白天溫度為25℃,相對濕度60%以上。觀察接種7d后的發(fā)病情況，并記錄病斑直徑及發(fā)病率。評價(jià)不同辣椒種質(zhì)資源的抗病性。7病情調(diào)查7.1疫霉病菌：接種7d后調(diào)查發(fā)病情況，并對辣椒疫霉病分級。——0級：無病癥；——1級：幼苗根莖部輕微變黑，葉片不萎縮或可恢復(fù)性萎蔫；——2級：幼苗根莖部變黑達(dá)1～2cm，葉片不可恢復(fù)性萎蔫，下部葉片偶有脫落；——3級：幼苗根莖部變黑超過2cm，葉片明顯萎縮或落葉明顯；——4級：幼苗根莖部變黑縊縮，除生長點(diǎn)外全部落葉或植株萎蔫；——5級：整個(gè)植株枯死。7.2辣椒炭疽病接種7d后調(diào)查發(fā)病情況，并對辣椒炭疽病分級——0級，無病斑；——1級，果面有水浸狀病斑，病斑直徑≤2cm；——2級，果面有水浸狀病斑，2cm＜病斑直徑≤4cm；——3級，果面上水浸狀病斑已嚴(yán)重變軟，病斑直徑＞4cm；——4級，果面上的水浸狀病斑已完全或幾乎覆蓋果實(shí)表面。公式：病情指數(shù)=∑（各級病果數(shù)×相對級值）/（每處理調(diào)查顆數(shù)×調(diào)查最高級值）×100；8抗性水平鑒定8.1辣椒疫霉病抗性評價(jià)劃分病情指數(shù)（DI）=[∑(病級數(shù)值×該病級病株數(shù))×100]/(病級最高值×調(diào)查株數(shù))根據(jù)病情指數(shù)將抗性劃分為4個(gè)等級?！呖梗℉R）：0<DI≤10；——中抗（MR）：10<DI≤30；——中感（MS）：30<DI≤50；——高感（HS）：DI＞50。8.2辣椒炭疽病抗病性劃分標(biāo)準(zhǔn)：——