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DB34DB34/T3642—2020雞滑液囊支原體LAMP快速檢測技術(shù)規(guī)程TechnicalRegulationsofLAMPAssayforRapidDetectionofMycoplasmaSynoviae2020-06-22發(fā)布2020-07-22實(shí)施安徽省市場監(jiān)督管理局發(fā)布I1MS（MycoplasmaSynoviae）：雞滑液LAMP（Loop-mediatedIsothermalAmplificationAssay環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增4.5高壓蒸汽滅菌鍋25.320％十二烷基硫酸鈉（SDS）溶8.0）0.4mL，20％十二烷基硫酸鈉（SDS）溶液（pH7.2）5mL，5mol/L氯化鈉4mL，滅菌雙蒸水按照GenBank上公布的雞滑液囊支原體（MS）EF-TU基因序列（登錄號(hào)CP011096），應(yīng)用——F3：5'-CACAAATGGATGGTGCT——B3：5'-TACTGCGTCACCTTCA——FLP：5'-CGTGAACACATTCTTCTT無菌采集咽喉拭子，關(guān)節(jié)囊腫和胸部囊腫的內(nèi)部炎性分泌物，放入盛有3制備的樣品在2℃~8℃條件下保存應(yīng)不超過24h，如需長期保存應(yīng)置-70℃以下，應(yīng)避免反復(fù)凍8.1.2每管加入待檢樣品（已研磨好的被檢樣品上清，陽性對照樣品和陰性對照樣品）100取出離心管，室溫融化，4℃,12000rpm離心15min。8.1.5棄上清，沿離心管開口方向管壁緩緩滴入1mL-28.1.6取出離心管，用50μL滅菌雙蒸從BstDNAPolymerase試劑盒中取出相應(yīng)的試劑，同時(shí)取出MSLAMP引物和雙蒸水。設(shè)所需PCR的檢測總數(shù)為n，其中n為被檢樣品、陽性對照與陰性對照之和，每個(gè)樣本測111124將8.2.2中離心后的PCR管編號(hào)，放入65℃水浴鍋內(nèi)30～60min，之后置80℃溫育20min

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