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文檔簡介
動物細胞培養(yǎng)年級:高中二年級
學(xué)科:生物學(xué)(人教版)主講人:楊思杰
學(xué)校:四川省洪雅中學(xué)校1簡述動物細胞培養(yǎng)的過程學(xué)習(xí)目標2簡述動物細胞培養(yǎng)的條件動物細胞培養(yǎng)動物細胞核移植動物細胞融合動物細胞工程是最基礎(chǔ)的技術(shù)問題:什么是動物細胞培養(yǎng)?1.概念:一、動物細胞培養(yǎng)從動物體中取出相關(guān)的組織,將它分散成單個細胞,然后在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)條件下,讓這些細胞生長和增殖的技術(shù)。動物體組織單個細胞細胞生長和增殖取出分散適宜條件問題:動物組織的選擇:
幼齡動物or老齡動物幼齡個體的細胞分化程度低、分裂能力強,易培養(yǎng)。原理地位對象目的細胞增殖(有絲分裂)動物細胞工程的基礎(chǔ)獲得細胞或者細胞產(chǎn)物胚胎或幼齡動物的細胞動物體內(nèi)的細胞之所以能夠維持正常的生命活動,是因為機體給這些細胞提供了適宜的條件。你還記得有哪些條件嗎?充足的營養(yǎng)穩(wěn)定的內(nèi)環(huán)境體外培養(yǎng)動物細胞需要滿足什么條件?動物細胞培養(yǎng)所需的基本條件營養(yǎng)物質(zhì)其他條件<<糖類氨基酸無機鹽維生素?zé)o菌、無毒的環(huán)境適宜的溫度、pH和滲透壓適宜的氣體環(huán)境2.培養(yǎng)條件:①營養(yǎng)條件:葡萄糖氨基酸無機鹽維生素問題:培養(yǎng)基的類型:
固體培養(yǎng)基or液體培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基or天然培養(yǎng)基將細胞所需的營養(yǎng)物質(zhì)按種類和所需量嚴格配制的培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基,也稱培養(yǎng)液由于人們對細胞所需的營養(yǎng)物質(zhì)尚未全部研究清楚。血清可以補充合成培養(yǎng)基中缺乏的物質(zhì),如蛋白質(zhì)、氨基酸、未知的促生長因子等。?動物血清培養(yǎng)基的構(gòu)成:合成培養(yǎng)基+血清等天然成分2.培養(yǎng)條件:②無菌無毒的環(huán)境:①對培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進行滅菌處理②在無菌環(huán)境下進行操作定期更換培養(yǎng)液無菌無毒③添加一定量的抗生素防止培養(yǎng)過程中的微生物污染思考:在細胞培養(yǎng)液中添加適量的抗生素的目的是什么?思考:為什么要定期更換培養(yǎng)液?以便清除代謝物,防止細胞代謝物積累對細胞自身造成危害2.培養(yǎng)條件:③溫度、PH、滲透壓:一般與動物體內(nèi)相同①適宜的溫度:哺乳動物細胞培養(yǎng)的溫度多以______________為宜;②適宜的pH:多數(shù)動物細胞生存的適宜pH為___________③維持適宜的滲透壓的目的:36.5±0.5℃7.2-7.4維持細胞正常的形態(tài)和功能用培養(yǎng)皿或松蓋培養(yǎng)瓶,在含有_______________和__________的混合氣體的__________2.培養(yǎng)條件:④氣體環(huán)境:動物細胞培養(yǎng)所需氣體主要有_____和______O2CO2細胞代謝所必需的維持培養(yǎng)液的pH95%空氣5%CO2CO2培養(yǎng)箱①組成不同氣體的作用是什么?②培養(yǎng)儀器(95%)空氣:(5%)CO2:CO2培養(yǎng)箱二、動物細胞培養(yǎng)過程閱讀教材P44-45,思考并回答下列問題:1.為何動物細胞培養(yǎng)過程要將組織分散成單個細胞呢?可用什么方法?2.體外培養(yǎng)動物細胞有哪些類型?3.什么是細胞貼壁?什么是接觸抑制?4.什么是原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)?5.為什么要進行分瓶培養(yǎng)?怎么處理?6.動物細胞培養(yǎng)與植物組織培養(yǎng)有什么相同之處與不同之處?取動物組織分散成單個細胞傳代培養(yǎng)用機械法或用胰蛋白酶、膠原蛋白酶等處理細胞懸液原代培養(yǎng)分瓶培養(yǎng)加培養(yǎng)液在培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶內(nèi)1.取動物組織:部位原因動物胚胎或幼齡動物的組織、器官分化程度低,分裂能力強,易培養(yǎng)2.分散成單個細胞:原因①從動物體取出的成塊組織中,細胞與細胞靠在一起,彼此限制了生長和增殖②利于細胞與培養(yǎng)液充分接觸,更易進行物質(zhì)交換問題1:常用胰蛋白酶分散細胞,這說明細胞間的物質(zhì)主要是什么成分?用胃蛋白酶行嗎?說明細胞間的物質(zhì)主要是蛋白質(zhì)。胃蛋白酶作用的適宜pH約為2,當(dāng)pH大于6時,胃蛋白酶就失去活性,多數(shù)動物細胞培養(yǎng)的適宜pH為7.2~7.4,胃蛋白酶在此環(huán)境中沒有活性,所以用胃蛋白酶不行。問題2:胰蛋白酶真的不會把細胞消化掉嗎,為什么?細胞膜的成分中含有蛋白質(zhì),而胰蛋白酶能夠水解蛋白質(zhì),因此,胰蛋白酶會把細胞消化掉。因此,胰蛋白酶處理的時間不能太長。取動物組織分散成單個細胞傳代培養(yǎng)用機械法或用胰蛋白酶、膠原蛋白酶等處理細胞懸液原代培養(yǎng)分瓶培養(yǎng)加培養(yǎng)液在培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶內(nèi)解決懸浮生長貼壁生長(大多數(shù))細胞密度過大、有害代謝物積累、營養(yǎng)物質(zhì)缺乏等接觸抑制細胞分裂受阻②制成細胞懸液,分瓶培養(yǎng)①收集細胞①原代培養(yǎng):指動物組織經(jīng)處理后的初次培養(yǎng)。②傳代培養(yǎng):分瓶后的細胞培養(yǎng)。③接觸抑制:當(dāng)貼壁細胞分裂生長到表面相互接觸時,細胞停止分裂增殖的現(xiàn)象。由于細胞之間有接觸抑制的特性,一般的正常細胞并不重疊于其他細胞之上生長,而是單層生長。癌細胞由于無接觸抑制而能夠繼續(xù)移動和增殖,導(dǎo)致細胞向三維空間擴展,發(fā)生堆積。是否接觸抑制可作為區(qū)別正常細胞與癌細胞的標志之一。動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)的概念和原理動物細胞培養(yǎng)的條
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