3.1重組DNA技術(shù)的基本工具課件-高二下學(xué)期生物人教版（2019）選擇性必修3

怎樣培養(yǎng)出具有抗蟲性狀的抗蟲棉呢？

我國(guó)是棉花的生產(chǎn)和消費(fèi)大國(guó)，棉花在種植過程中常常會(huì)受到棉鈴蟲的侵襲，這會(huì)使棉花大量減產(chǎn)。大量施用農(nóng)藥不僅提高了生產(chǎn)成本，還可能造成農(nóng)產(chǎn)品和環(huán)境的污染，如果能培育出自身能抵抗棉鈴蟲的棉花就能解決這個(gè)問題。

棉花本身不具有“殺蟲基因”，而蘇云金桿菌有一種“殺蟲基因”，它能通過編碼產(chǎn)生抗蟲蛋白來殺死棉鈴蟲?；蚬こ淌侵赴凑杖藗兊脑竿?，通過轉(zhuǎn)基因等技術(shù)，賦予生物新的遺傳特性，創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品。從技術(shù)操作層面看，由于基因工程是在DNA分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)和施工的，因此又叫做重組DNA技術(shù)?；蚬こ痰膭e名操作環(huán)境操作對(duì)象操作水平原理結(jié)果重組DNA技術(shù)生物體外基因DNA分子水平獲得人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品基因重組1944年艾弗里等人證明了DNA可以在同種生物的不同個(gè)體之間轉(zhuǎn)移。1958年梅塞爾森和斯塔爾用實(shí)驗(yàn)證明了DNA的半保留復(fù)制。1953年沃森和克里克建立了DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)模型。1961年尼倫伯格和馬太破譯了第一個(gè)編碼氨基酸的密碼子。1967年，科學(xué)家發(fā)現(xiàn)，在細(xì)菌擬核DNA之外的質(zhì)粒有自我復(fù)制能力，并可以在細(xì)菌細(xì)胞間轉(zhuǎn)移。1970年科學(xué)家在細(xì)菌中發(fā)現(xiàn)了第一個(gè)限制性內(nèi)切核酸酶（簡(jiǎn)稱限制酶）。20世紀(jì)70年代初，多種限制酶、DNA連接酶和逆轉(zhuǎn)錄酶被相繼發(fā)現(xiàn)。1972年，伯格成功構(gòu)建了第一個(gè)體外重組DNA分子?？萍继剿髦坊蚬こ痰恼Q生1950年埃特曼發(fā)明了一種測(cè)定氨基酸序列的方法。1973年，證明質(zhì)?？梢宰鳛榛蚬こ痰妮d體，構(gòu)建重組DNA，導(dǎo)入受體細(xì)胞，使外源基因在原核細(xì)胞中成功表達(dá)，基因工程正式問世。1977年，桑格等科學(xué)家發(fā)明了DNA序列分析的方法。此后，DNA合成儀的問世為體外合成DNA提供了方便。1982年，第一個(gè)基因工程藥物-重組人胰島素被批準(zhǔn)上市。1983年，科學(xué)家采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法培育出世界上第一例轉(zhuǎn)基因煙草。1984年，我國(guó)科學(xué)家朱作言領(lǐng)導(dǎo)的團(tuán)隊(duì)培育出世界上第一條轉(zhuǎn)基因魚。1985年，穆里斯等人發(fā)明了PCR。1990年，人類基因組計(jì)劃啟動(dòng)。2003年完成21世紀(jì)以來，科學(xué)家發(fā)明了多種高通量測(cè)序技術(shù)，加速了人們對(duì)基因組序列的了解。2013年，華人科學(xué)家張鋒及其團(tuán)隊(duì)首次報(bào)道利用最新的基因組編輯技術(shù)編輯了哺乳動(dòng)物基因組。該技術(shù)可以實(shí)現(xiàn)對(duì)特定基因的定點(diǎn)插入、敲除或替換?？萍继剿髦坊蚬こ痰陌l(fā)展第3章

基因工程

第1節(jié)重組DNA技術(shù)的基本工具

第1節(jié)重組DNA技術(shù)的基本工具新課程標(biāo)準(zhǔn)核心素養(yǎng)1.簡(jiǎn)述重組DNA技術(shù)所需的三種基本工具及其作用。2.認(rèn)同基因工程的誕生和發(fā)展離不開理論研究和技術(shù)創(chuàng)新。3.進(jìn)行DNA的粗提取與鑒定。1.科學(xué)思維——模擬重組DNA分子的操作過程，說出合成新DNA分子的基本原理。2.社會(huì)責(zé)任——關(guān)注基因工程的社會(huì)議題，參與討論基礎(chǔ)理論和技術(shù)發(fā)展如何催生了基因工程。從社會(huì)中來

番木瓜容易受番木瓜環(huán)斑病毒的侵襲，當(dāng)番木瓜被這種病毒感染后，產(chǎn)量會(huì)大大下降?？茖W(xué)家通過精心設(shè)計(jì)，用“分子工具”培育出了轉(zhuǎn)基因番木瓜，它可以抵御番木瓜環(huán)斑病毒DNA雙螺旋的直徑只有2nm，對(duì)如此微小的分子進(jìn)行操作，是一項(xiàng)非常精細(xì)的工作，更需要專門的“分子工具”。轉(zhuǎn)基因木瓜環(huán)斑病毒的非轉(zhuǎn)基因木瓜限制性內(nèi)切核酸酶、DNA連接酶，載體。限制性內(nèi)切核酸酶：DNA連接酶：載體：這些“分子工具”各具有什么特征呢？那么，科學(xué)家究竟用到了哪些“分子工具”？準(zhǔn)確切割DNA分子，得到所需要的目的基因。能將目的基因連接到載體上。能將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞中。一、限制性內(nèi)切核酸酶--“分子手術(shù)刀”

1、來源：主要從原核生物中分離純化出來

2、種類：迄今分離的限制酶有數(shù)千種3、作用特點(diǎn)：具有專一性。具體表現(xiàn)如下4、作用部位:特定切點(diǎn)上的磷酸二酯鍵5'3'5'3'TAGGTATCCA磷酸二酯鍵①能夠識(shí)別雙鏈DNA分子中特定的核苷酸序列。②使每一條鏈中特定部位的磷酸二酯鍵斷開。5、兩種常用的限制酶：限制酶的命名是根據(jù)細(xì)菌種類而定，以EcoRI為例:

E：Escherichia(屬)

co：coli(種)

R：RY13(品系)

I：首先發(fā)現(xiàn)在此類細(xì)菌中發(fā)現(xiàn)的順序EcoRⅠ：大腸桿菌（Escherichiacoli）R型菌株中分離出的第一個(gè)限制酶；SmaⅠ：粘質(zhì)沙雷氏菌（Serratiamarcescens）中分離出的第一個(gè)限制酶。EcoRⅠ和SmaⅠ黏性末端黏性末端（1）EcoRI限制酶的切割:

當(dāng)限制酶在它識(shí)別序列得中軸線兩側(cè)將DNA分子的兩條鏈分別切開時(shí)，產(chǎn)生的是黏性末端。只能識(shí)別GAATTC序列，并在G和A之間切開。中軸線EcoRⅠ中軸線黏性末端（1）EcoRI限制酶的切割:

當(dāng)限制酶在它識(shí)別序列得中軸線兩側(cè)將DNA分子的兩條鏈分別切開時(shí)，產(chǎn)生的是黏性末端。只能識(shí)別GAATTC序列，并在G和A之間切開。中軸線（2）SmaI限制酶的作用只能識(shí)別CCCGGG序列，并在C和G之間切開。當(dāng)限制酶在它識(shí)別序列中軸線處切開時(shí)，產(chǎn)生的是平末端。在C和G之間切開6、結(jié)果：產(chǎn)生黏性末端或平末端7、限制酶的識(shí)別序列的特點(diǎn)(1)大多數(shù)限制酶的識(shí)別序列由6個(gè)核苷酸組成。例如：EcoRⅠ、SmaⅠ(2)少數(shù)限制酶的識(shí)別序列由4個(gè)、8個(gè)或其他數(shù)量的核苷酸組成(3)限制酶特異性識(shí)別和切割的部位具有回文序列1.你能推測(cè)限制酶存在于原核生物中的作用是什么嗎？破壞外源DNA，保護(hù)自我2.為什么限制酶不剪切細(xì)菌本身的DNA？缺乏特定的核苷酸序列3．請(qǐng)寫出下列限制酶切割形成的黏性末端，并思考同種限制酶切割產(chǎn)生的黏性末端是否相同？不同限制酶切割產(chǎn)生的黏性末端是否一定不同？同種限制酶產(chǎn)生的黏性末端相同，不同的限制酶可能會(huì)形成相同的黏性末端。4．請(qǐng)結(jié)合下圖，推斷限制酶切一次可斷開幾個(gè)磷酸二酯鍵？產(chǎn)生多少游離的磷酸基團(tuán)？產(chǎn)生幾個(gè)黏性末端？消耗幾分子水？斷開兩個(gè)磷酸二酯鍵；產(chǎn)生2個(gè)游離的磷酸基團(tuán)；產(chǎn)生2個(gè)黏性末端；消耗兩分子水。EcoRⅠ黏性末端……CTACGATGAATTCCGTAGAATTCCCTAA…………GATGCTACTTAAGGCATCTTAAGGGATT…………CTACGATG……GATGCTACTTAAAATTCCCTAA……GGGATT……AATTCCGTAGGGCATCTTAA黏性末端目的基因練習(xí)：使用EcoRI剪切目的基因G

AA

TT

CC

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AA

GG

AA

TT

CC

TT

AA

GG

C

TT

AA

AA

TT

C

GGC

TT

AA

AA

TT

C

G用同種限制酶切割(EcoRⅠ)把兩種來源不同的DNA進(jìn)行重組，應(yīng)該怎樣處理？

缺口怎么辦？G

C

TT

AA

AA

TT

C

GGCTTAA

AA

TT

C

G二、DNA連接酶--“分子縫合針”把切下來的DNA片段拼接成新的DNA分子，是靠DNA連接酶來完成的。即將雙鏈DNA片段“縫合”起來，恢復(fù)被限制酶切開的

。

DNA連接酶主要有兩類：

、

。

2.E.coli

DNA連接酶T4DNA連接酶磷酸二酯鍵1.DNA連接酶的作用AGTCATTCGATA可把黏性末端之間的縫隙“縫合”起來；（1）E.coliDNA連接酶兩DNA片段要具有互補(bǔ)的黏性末端才能拼起來。注意：DNA連接酶可連接雙鏈DNA中的DNA單鏈缺口，但不能將單個(gè)脫氧核苷酸連接到DNA鏈上?。?）T4DNA連接酶還可把平末端之間的縫隙“縫合”起來，但效率較低CCCGGGGGGCCCDNA連接酶--“分子縫合針”2類型來源功能相同點(diǎn)差別E·coliDNA連接酶T4DNA連接酶大腸桿菌T4噬菌體恢復(fù)磷酸二酯鍵只能連接黏性末端能連接黏性末端和平末端(效率較低)DNA連接酶DNA連接酶ATAGTCCGAATT連接兩個(gè)DNA片段

與DNA聚合酶區(qū)別：CAATTDNA聚合酶GAGTATCDNA聚合酶連接單個(gè)脫氧核苷酸形成單鏈DNA連接酶DNA聚合酶相同點(diǎn)作用實(shí)質(zhì)化學(xué)本質(zhì)不同點(diǎn)模板作用對(duì)象

作用結(jié)果 用途都能催化形成磷酸二酯鍵都是蛋白質(zhì)

不需要需要形成完整的重組DNA分子形成DNA的一條鏈基因工程DNA復(fù)制3DNA連接酶與DNA聚合酶的比較只能將單個(gè)脫氧核苷酸連接到已有的DNA片段上，形成磷酸二酯鍵在兩個(gè)DNA片段之間形成磷酸二酯鍵名稱作用部位作用結(jié)果限制酶磷酸二酯鍵將DNA切成兩個(gè)片段DNA連接酶磷酸二酯鍵將兩個(gè)DNA片段連接為一個(gè)DNA分子DNA聚合酶磷酸二酯鍵將單個(gè)脫氧核苷酸依次連接到單鏈末端DNA(水解)酶磷酸二酯鍵將DNA片段水解為單個(gè)脫氧核苷酸解旋酶堿基對(duì)之間的氫鍵將雙鏈DNA分子局部解旋為單鏈，形成兩條長(zhǎng)鏈與DNA相關(guān)的五種酶的比較根據(jù)所學(xué)知識(shí)，完成以下填空：①限制酶②解旋酶③DNA連接酶④DNA聚合酶⑤RNA聚合酶baA.切斷a處的酶為_______

B.連接a處的酶為_______C.切斷b處的酶為_______①③④⑤②a：磷酸二酯鍵；b：氫鍵練習(xí)：工具分子手術(shù)刀分子縫合針分子運(yùn)輸車限制性內(nèi)切核酸酶：DNA連接酶：載體：準(zhǔn)確切割DNA分子得到所需要的目的基因?qū)NA片段連接起來即能將目的基因連接到載體上將體外重組好的DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞（即能將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞中）質(zhì)粒（最常用）作為載體，將外源基因送入受體細(xì)胞。1.作用：動(dòng)植物病毒噬菌體2.種類：三、基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體——分子運(yùn)輸車

質(zhì)粒是一種裸露的、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單的、獨(dú)立于真核細(xì)胞細(xì)胞核或原核細(xì)胞擬核DNA之外，并具有自我復(fù)制能力的雙鏈環(huán)狀DNA分子。3、載體需具備的條件（1）有一個(gè)至多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)，供外源DNA插入其中。（2）能在細(xì)胞中進(jìn)行自我復(fù)制，

或整合到受體DNA上隨DNA同步復(fù)制（3）有特殊的標(biāo)記基因，便于重組DNA的篩選。

如四環(huán)素抗性基因、氨芐青霉素抗性基因。（4）對(duì)受體細(xì)胞無毒害作用，避免受體細(xì)胞受到損傷

實(shí)際上自然存在的質(zhì)粒DNA分子并不完全具備上述條件，都要進(jìn)行人工改造后才能用于基因工程操作。標(biāo)記基因的篩選原理

載體上的標(biāo)記基因一般是某種抗生素的抗性基因，而受體細(xì)胞沒有抵抗該抗生素的能力。將含有某抗生素抗性基因的載體導(dǎo)入受體細(xì)胞，抗性基因在受體細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，受體細(xì)胞對(duì)該抗生素產(chǎn)生抗性。在含有該抗生素的培養(yǎng)基上，能夠生存的是被導(dǎo)入了載體的受體細(xì)胞。如圖所示：

…ATAGCATGCTATCCATGAATTCGGCATAC……TATCGTACGATAGGTACTTAAGCCGTATG…目的基因…

TCCTAG…

AGGATCTTAAAATTCCATAC…

GAGCCATACTTAAAATTCTCGGTATGGGTATG…實(shí)例：重組DNA分子的模擬操作AATTCGGCATAC……TATCGTACGATAGGTACTTAA

…ATAGCATGCTATCCATG目的基因…

TCCTAG…

AGGATCTTAAAATTCCATAC…

GAGCCATACTTAAAATTCTCGGTATGGGTATG…GCCGTATG…載體的作用載體的必要條件載體的種類①具一個(gè)或多個(gè)限制酶切點(diǎn)，以便與外源基因連接。②能在宿主細(xì)胞中自我復(fù)制

或整合到受體DNA上隨受體DNA復(fù)制③具有某些標(biāo)記基因，便于重組DNA的篩選。①作為運(yùn)載工具，將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞中②在受體細(xì)胞內(nèi)對(duì)目的基因進(jìn)行大量復(fù)制①質(zhì)粒②病毒：噬菌體、動(dòng)植物病毒等。三、基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體--“分子運(yùn)輸車”本節(jié)小結(jié)基因工程的工具限制酶主要存在于原核生物中具有專一性(識(shí)別序列)切開DNA分子的磷酸二酯鍵產(chǎn)生黏性末端或平末端DNA連接酶連接磷酸二酯鍵種類E.coliDNA連接酶T4

DNA連接酶質(zhì)粒、噬菌體、動(dòng)植物病毒載體具備的條件具一種至多種限制酶切點(diǎn)具標(biāo)記基因能在宿主細(xì)胞中自我復(fù)制或整合到受體DNA上隨受體DNA復(fù)制【典例】1.圖甲是含有目的基因的外源DNA片段，圖乙是用于將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的質(zhì)粒（陰影部分表示抗生素抗性基因），相關(guān)限制酶的作用部位如圖所示，現(xiàn)欲培養(yǎng)轉(zhuǎn)基因抗病植株，回答下列問題。（1）上述操作中不宜選用SmaI，原因是SmaI會(huì)破壞__________和__________________。（2）在基因工程的操作中，不宜選用EcoRI，原因是用EcoRI切割外源DNA片段后，_____________________________________________________?？共』蚩股乜剐曰蚰康幕蛑挥幸粋?cè)含有黏性末端，不能插入到質(zhì)粒中2.用限制酶切割時(shí)需注意的事項(xiàng)(1)獲取目的基因和切割載體時(shí),通常使用同種限制酶,目的是

。但是使用該法缺點(diǎn)是容易發(fā)生

，為了避免上述情況發(fā)生，可采取的措施是

。(2)獲取一個(gè)目的基因需限制酶切割

次,共產(chǎn)生

個(gè)游離的磷酸基團(tuán)。(3)選擇限制酶切割位點(diǎn)的基本原則：

①切割目的基因時(shí)：

。②切割質(zhì)粒時(shí)：

。為了產(chǎn)生相同的黏性末端，便于連接兩4分別使用兩種限制酶去切割目的基因和運(yùn)載體目的基因、質(zhì)粒的自身環(huán)化以及目的基因與質(zhì)粒反向連接能切下目的基因且不破壞目的基因至少保留一個(gè)完整的標(biāo)記基因，便于篩選練習(xí)與應(yīng)用3.如圖是培育表達(dá)人乳鐵蛋白的乳腺生物反應(yīng)器的技術(shù)路線用圖2中的人乳鐵蛋白目的基因和圖1所示的質(zhì)粒構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，選用的限制酶是

（從“EcoRⅠ”“BamHⅠ/HindⅢ”“SmaⅠ/HindⅢ”中選擇）．不能選擇其他限制酶的理由分別是：

。BamHⅠ/HindⅢ若選EcoRⅠ會(huì)破壞質(zhì)粒的復(fù)制原點(diǎn)；若選SmaⅠ/HindⅢ，則構(gòu)建的重組質(zhì)粒沒有標(biāo)記基因或復(fù)制原點(diǎn)(1)限制性內(nèi)切核酸酶均能特異性地識(shí)別6個(gè)核苷酸序列()(2)DNA連接酶能將兩堿基間通過氫鍵連接起來(

)(3)E.coliDNA連接酶既可連接平末端，又可連接黏性末端(

)(4)限制酶和解旋酶的作用部位相同(

)(5)質(zhì)粒是雙鏈環(huán)狀DNA分子，是基因工程常用的載體。()××××√【基礎(chǔ)過關(guān)】2.實(shí)驗(yàn)原理：探究·實(shí)踐·DNA的粗提取與鑒定（1）DNA不溶于酒精，但某些蛋白質(zhì)溶于酒精。（2）DNA在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同，能溶于2mol/LNaCl溶液。（3）在一定溫度下，DNA遇二苯胺試劑會(huì)呈現(xiàn)藍(lán)色。00.14NaCI濃度（mol/L）DNA溶解度1.實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思路：四DNA、RNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等在物理和化學(xué)性質(zhì)方面存在差異，可以利用這些差異，選用適當(dāng)?shù)奈锢砘蚧瘜W(xué)方法去除其他成分，對(duì)DNA進(jìn)行提取。探究·實(shí)踐·DNA的粗提取與鑒定四

DNA含量相對(duì)較高的生物組織，如新鮮洋蔥、香蕉、菠菜、菜花和豬肝等。

不能選擇哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞，因?yàn)椴溉閯?dòng)物成熟的紅細(xì)胞中沒有細(xì)胞核和線粒體，幾乎不含DNA。3.選材：注意：4.試劑：①研磨液②體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精③2mol/L的NaCl溶液④二苯胺試劑⑤蒸餾水——含有NaCl、EDTA、SDS、Tris和HCl——析出DNA——溶解DNA——鑒定DNA，要現(xiàn)配現(xiàn)用5.方法步驟探究·實(shí)踐·DNA的粗提取與鑒定四析出DNADNA的鑒定研磨稱取約30g洋蔥切碎，放入研缽中，倒入10mL研磨液，充分研磨。過濾取上清液在漏斗中墊上紗布，將洋蔥研磨液過濾到燒杯中，在4℃冰箱中放置幾分鐘后，再取上清液。在上清液中加入體積相等的、預(yù)冷的酒精溶液(體積分?jǐn)?shù)為95%)，靜置2～3min，溶液中出現(xiàn)的白色絲狀物就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一個(gè)方向攪拌，卷起絲狀物，并用濾紙吸去上面的水分；取兩支試管，各加入2mol/L的NaCl溶液5mL。將絲狀物或沉淀物溶于其中一支試管的NaCl溶液中。然后，向兩支試管中各加入4mL的二苯胺試劑。混合均勻后，將試管置于沸水中加熱5min。方法步驟（視頻）探究·實(shí)踐·DNA的粗提取與鑒定四注意事項(xiàng)1．以血液為實(shí)驗(yàn)材料時(shí)，每100mL血液中需要加入3g檸檬酸鈉，防止血液凝固。2.利用動(dòng)物細(xì)胞提取DNA破碎細(xì)胞的方法：動(dòng)物細(xì)胞無細(xì)胞壁，可直接吸水漲破。3．加入研磨液后，必須充分研磨，否則細(xì)胞核不會(huì)充分破碎，釋放出的DNA量就會(huì)減少。4．加入酒精和用玻璃棒攪拌時(shí)，動(dòng)作要輕緩，以免加劇DNA分子的斷裂，導(dǎo)致DNA分子不能形成絮狀沉淀。5．預(yù)冷的酒精具有以下優(yōu)點(diǎn)：①可抑制核酸水解酶的活性，進(jìn)而抑制DNA降解；②抑制分子運(yùn)動(dòng)，使DNA易形成沉淀析出；③低溫有利于增加DNA分子的柔韌性，減少其斷裂。探究·實(shí)踐·DNA的粗提取與鑒定四1.你提取出白色絲狀物或沉淀物了嗎？用二苯胺試劑鑒定的結(jié)果如何？2.你能分析出粗提取的DNA中可能含有哪些雜質(zhì)嗎？結(jié)果分析與評(píng)價(jià)

觀察提取的DNA的顏色，如果不是白色絲狀物，說明DNA中的雜質(zhì)較多。二苯胺試劑鑒定呈現(xiàn)藍(lán)色說明實(shí)驗(yàn)基本成功；如果不呈現(xiàn)藍(lán)色，可能的原因有所提取的DNA含量低，或者在實(shí)驗(yàn)操作過程中出現(xiàn)了失誤等。

本實(shí)驗(yàn)粗提取的DNA可能仍然含有核蛋白、多糖等雜質(zhì)。探究·實(shí)踐·DNA的粗提取與鑒定四進(jìn)一步探究

實(shí)驗(yàn)室提取純度較高的DNA的方法有不少。例如，可以先添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為25%的SDS溶液，使蛋白質(zhì)變性后與DNA分開；隨后，加入氯仿—異丙醇混合液(體積比為24：1)，通過離心將蛋白質(zhì)及其他雜質(zhì)除去，取上清液；可重復(fù)上述操作幾次，直至上清液變成透明的黏稠液體。此外由于苯酚可以迅速使蛋白質(zhì)變性，抑制核酸酶的活性，因此還可以先用苯酚處理，然后離心分層，這時(shí)DNA溶于上層水相，蛋白質(zhì)變性后存在于酚層中，用吸管、微量移液器等實(shí)驗(yàn)用具就可以將兩者分開。探究·實(shí)踐·DNA的粗提取與鑒定四3.與其他同學(xué)提取的DNA進(jìn)行比較，看看實(shí)驗(yàn)結(jié)果有何不同，分析產(chǎn)生差異的原因。刑偵破案拓展：DNA提取的應(yīng)用基因組測(cè)序插入人胰島素基因的大腸桿菌基因工程親子鑒定探究·實(shí)踐·DNA的粗提取與鑒定四練習(xí)與應(yīng)用一、概念檢測(cè)1.DNA連接酶是重組DNA技術(shù)常用的一種工具酶。下列相關(guān)敘述正確的是

A.能連接DNA分子雙鏈堿基對(duì)之間的氫鍵

B.能將單個(gè)脫氧核苷酸加到DNA片段的末端，形成磷酸二酯鍵

C.能連接用同種限制酶切開的兩條DNA片段，重新形成磷酸二酯鍵

D.只能連接雙鏈DNA片段互補(bǔ)的黏性末端，不能連接雙鏈DNA片段的平末端2.在重組DNA技術(shù)中，將外源基因送入受體細(xì)胞的載體可以是

A.大腸桿菌的質(zhì)粒

B.切割DNA分子的酶

C.DNA片段的黏性末端

D.用來識(shí)別特定基因的DNA探針CA二、拓展應(yīng)用1.想一想，為什么限制酶不切割細(xì)菌本身的DNA分子?提示：細(xì)菌