DB54T 0411-2024 青稞及其制品中5種黃銅類化合物的測定 高效液相色譜法

ICS67.05054CCSB0454西 藏 自 治 區(qū) 地 方 標 準DB54/T0411—20245高效液相色譜法2024-09-15發(fā)布 2024-10-15實施西藏自治區(qū)市場監(jiān)督管理局??發(fā)布DB54/T0411DB54/T0411—2024II前 言本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導(dǎo)則 第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利，本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由西藏自治區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村標準化技術(shù)委員會提出并歸口。術(shù)研究中心、拉薩海關(guān)技術(shù)中心、南陽理工學(xué)院。本文件主要起草人：代艷娜、魏娜、潘虎、蒲繼鋒、王軍、王君。DB54/T0411DB54/T0411—2024PAGEPAGE15高效液相色譜法范圍ft樣制備、分析步驟、結(jié)果計算、檢出限、定量限和精密度。本文件適用于青稞、糌粑、青稞米中蘆丁、兒茶素、楊梅素、槲皮素、ft奈酚5種黃酮類化合物含量的測定。規(guī)范性引用文件（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法方法原理試樣用75%甲醇溶液超聲提取后，經(jīng)C18色譜柱分離，紫外檢測器或二極管陣列檢測器檢測，根據(jù)保留時間定性和外標法定量。試劑與材料試劑甲醇：色譜純。甲酸：色譜純。乙腈：色譜純。75甲醇-水溶液（V/V）：750mL1000mL，混勻。0.1甲酸-水溶液（V/V）：1mL1000mL。0.1甲酸-乙腈溶液（V/V）：1mL1000mL。GB/T6682一級水的規(guī)定。標準品蘆丁標準品（C27H30O16，CAS號：153-18-4）、兒茶素標準品（C15H14O6，CAS號：154-23-4）、楊梅素標準品（C15H10O8，CAS529-44-2）、槲皮素標準品（C15H10O7，CAS117-39-5）、ft奈酚標準品（C15H10O6，CAS520-18-3）98.0%，或經(jīng)國家認證并授予標準物質(zhì)證書的標準物質(zhì)。標準溶液配制標準儲備溶液：分別準確稱取兒茶素、蘆丁、楊梅素、槲皮素、ft5.0mg500mg/L的單標儲備液，于-18℃避光保存。75%mg/L20mg/L、30mg/L、50mg/L、100mg/L、150mg/L、200mg/L；蘆丁、楊梅素、槲皮素及ft2mg/L4mg/L、10mg/L、20mg/L、50mg/L、100mg/L、200mg/L的混合標準工作溶液。儀器和設(shè)備高效液相色譜儀：配紫外檢測器或二極管陣列檢測器。分析天平：感量0.001g。渦旋振蕩器。超聲波萃取儀。低溫冰箱：溫度為-18℃以下。6000r/min50r/min。微孔濾膜：0.22μm，有機系。試樣制備用。分析步驟提取稱取試樣2.0050mL75%甲醇溶液10min，于6000r/min離心5min，取適量上清液過0.22μm濾膜，待高效液相色譜測定。液相色譜參考條件色譜柱：C18色譜柱（4.6mm×250mm，5μm），或相當者；流動相：A為水相：0.1%甲酸，B為有機相：0.1%甲酸-乙腈；流速：1.0mL/min；d) 柱溫：30℃；進樣量：10μL；檢測波長：270nm。流動相梯度洗脫程序見表表1 梯度洗脫程序時間（min）A（%）B（%）09555821892278104060時間（min）A（%）B（%）1140601395515955標準工作曲線的制作取適量標準工作溶液，按照7.2規(guī)定的色譜條件測定，以標準溶液質(zhì)量濃度為橫坐標，對應(yīng)的峰面積為縱坐標，建立標準工作曲線。5種黃酮類化合物標準溶液色譜圖見附錄A。樣品溶液測定將7.1制備的樣品溶液進行高效液相色譜儀分析，待測試樣溶液中兒茶素、蘆丁、楊梅素、槲皮素和ftft酚的濃度。結(jié)果計算試樣中各組分（兒茶素、蘆丁、楊梅素、槲皮素、ft奈酚）的含量以W分別按公式（1）計算。????=??×V??

?????????????????????????????????????????????????????????????????????????(1.)式中：W——試樣中某一黃酮類化合物的含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；c——從標準工作曲線得到的試樣溶液中各組分的質(zhì)量濃度，單位為毫克每升（mg/L）；V——提取溶液甲醇體積，單位為毫升（mL）；m——試樣的質(zhì)量，單位為克（g）。計算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的2次平行測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留小數(shù)點后兩位。檢出限、定量限和精密度檢出限和定量限青稞及制品中兒茶素、蘆丁、楊梅素、槲皮素、ft奈酚的檢出限依次為：4.00mg/kg、0.40mg/kg、0.50mg/kg、0.50mg/kg、0.20mg/kg。青稞及制品中兒茶素、蘆丁、楊梅素、槲皮素、ft奈酚的定量限依次為：12.00mg/kg、1.50mg/kg、2.00mg/kg、2.00mg/kg、0.50mg/kg。9.2 精密度在重現(xiàn)性條件下，獲得