高中生物選修1-生物技術(shù)實(shí)踐知識(shí)點(diǎn)填空

選修1生物技術(shù)實(shí)踐

生殖，在有氧條件下，酵母菌實(shí)行有氧呼吸，大量繁殖。呼吸的反應(yīng)式為:

在無(wú)氧條件下，酵母菌能實(shí)行酒精發(fā)酵。呼吸的反應(yīng)式為：

_______________________________________________O

2.條件：繁殖最適溫度,酒精發(fā)酵一般控制在0

丑砧十怕但然發(fā)酵：附著于葡萄皮上的野件型酵母菌。

菌種來(lái)源：!

3.［人工培養(yǎng)：分離獲得得純凈的酵母菌菌種。

挑選葡萄T?沖洗-TT

果酒果醋

5.實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析與評(píng)價(jià)：可通過(guò)嗅覺(jué)和品嘗初步鑒定，并用檢驗(yàn)酒精存有?？?/p>

觀察到的現(xiàn)象為_(kāi)____________________________________

6.葡萄酒呈紅色：______________________

(二)果醋的制作：

1.原理：菌種：,屬于核生物，新陳代謝類(lèi)型為

______________生殖，

當(dāng)、都充足時(shí)，醋酸菌將分解成醋酸；當(dāng)缺少

—時(shí)，醋酸菌將變?yōu)?，再將變?yōu)榇姿帷?/p>

反應(yīng)式：0

2.條件：最適合溫度為,需要充足的o

3.菌種來(lái)源：能夠從食醋中分離醋酸菌，也能夠購(gòu)買(mǎi)。

4.設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)流程及操作步驟：

果酒制成以后，在發(fā)酵液中加入或醋曲，然后將裝置轉(zhuǎn)移至

°C條件下發(fā)酵，適時(shí)向發(fā)酵液中o如果沒(méi)有充氣裝置，能夠?qū)?/p>

瓶蓋打開(kāi)，在瓶蓋上紗布，以減少空氣中塵土污染。

8.利用微生物發(fā)酵制作果酒，該過(guò)程利用的微生物是,其代謝類(lèi)型是，

與生產(chǎn)實(shí)際相關(guān)的反應(yīng)式是,在不滅菌的情況下，如何使

酵母菌成為優(yōu)勢(shì)菌種？_

9.酵母菌是自然界中常見(jiàn)的一類(lèi)真菌.

(1)從細(xì)胞核的結(jié)構(gòu)看，酵母菌屬于.

(2)酵母菌常實(shí)行______________生殖，在基因工程中，也常用酵母菌作為轉(zhuǎn)入基因的受體細(xì)胞，

是因?yàn)榻湍妇敝晨?，遺傳物質(zhì)相對(duì)少。

(3)在自然環(huán)境中，酵母菌屬于生態(tài)系統(tǒng)中的成分.

(4)酵母菌體內(nèi)遺傳物質(zhì)主要在_____________上，而醋酸菌的遺傳物質(zhì)主要在______________

上.

(5)傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)所使用的酵母菌的來(lái)源是：_

10.選擇新鮮葡萄先沖洗后去枝梗防止雜菌感染，注意不要反復(fù)沖洗，否則酵母菌數(shù)量減少，影響發(fā)酵。

發(fā)酵液裝瓶后保留1/3的空間。裝置各部件作用①出料口：；②：醋酸發(fā)酵

時(shí)連接充氣泵；③：排出酒精發(fā)酵時(shí)產(chǎn)生的C02。④排氣口連接一個(gè)長(zhǎng)而彎曲的膠管作用

o使用該裝置制酒時(shí)，應(yīng)該充氣口；制醋時(shí)，應(yīng)該充氣口連接o

11.控制發(fā)酵條件的作用①醋酸菌對(duì)的含量特別敏感，當(dāng)實(shí)行深層發(fā)酵時(shí)，即使僅僅短時(shí)間中斷

通入氧氣，也會(huì)引起醋酸菌死亡。②醋酸菌最適生長(zhǎng)溫度為℃,控制好發(fā)酵溫度，使發(fā)酵時(shí)間

縮短，又減少雜菌污染的機(jī)會(huì)。③有兩條途徑生成醋酸：直接氧化和以酒精為底物的氧化。

（1）你認(rèn)為應(yīng)該先沖洗葡萄還是先除去枝梗？為什么？

（2）你認(rèn)為應(yīng)該從哪些方面防止發(fā)酵液被污染？

（3）制葡萄酒時(shí)，為什么要將溫度控制在18?25℃?制葡萄醋時(shí)，為什么要將溫度控制在30?35℃?

微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)

1、培養(yǎng)基：人們按照微生物對(duì)的不同需求，配制出供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng),是實(shí)行微生物培

養(yǎng)的物質(zhì)基礎(chǔ)。

2、培養(yǎng)基按照物理性質(zhì)可分為培養(yǎng)基、培養(yǎng)基和培養(yǎng)基。在液體培養(yǎng)基中加入凝

固劑后，制成瓊脂固體培養(yǎng)基。微生物在固體培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)，能夠形成肉眼可見(jiàn)的。

液體培養(yǎng)基應(yīng)用于工業(yè)或生活生產(chǎn)，固體培養(yǎng)基應(yīng)用于微生物的分離和鑒定，半固體培養(yǎng)基則常用于

觀察微生物的運(yùn)動(dòng)及菌種保藏等。

3、按照成分培養(yǎng)基可分為合成培養(yǎng)基和天然培養(yǎng)基。

4、按照培養(yǎng)基的用途，可將培養(yǎng)基分為和。選擇培養(yǎng)基是指在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物

質(zhì)，以抑制不需要的微生物生長(zhǎng)，促進(jìn)所需要的微生物的生長(zhǎng)。鑒別培養(yǎng)基是根據(jù)微生物的特點(diǎn)，在

培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品配制而成的，用以鑒別不同類(lèi)別的微生物。

5、培養(yǎng)基的化學(xué)成分包括、、、等。

碳源：能為微生物的代謝提供碳元素的物質(zhì)。如CO?、NaHCQ,等無(wú)機(jī)碳源；糖類(lèi)、石油、花生粉餅等有

機(jī)碳源。異養(yǎng)微生物只能利用o單質(zhì)碳不能作為碳源。

氮源：能為微生物的代謝提供氮元素的物質(zhì)。如N?、NL、N03\NHj（無(wú)機(jī)氮源）蛋白質(zhì)、氨基酸、尿

素、牛肉膏、蛋白膝（有機(jī)氮源）等。只有微生物才能利用沖。

培養(yǎng)基還要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)PH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。例如，培養(yǎng)乳酸桿菌時(shí)需要在培養(yǎng)

基中添加，培養(yǎng)時(shí)須將培養(yǎng)基的pH調(diào)至酸性，培養(yǎng)是需要將pH調(diào)至中性或微

堿性，培養(yǎng)厭氧型微生物是則需要提供的條件

6、無(wú)菌技術(shù)：獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來(lái)雜菌的入侵，要注意以下幾個(gè)方面：

①對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手，進(jìn)行清潔和。

②將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行o

③為避免周?chē)h(huán)境中微生物的污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在_______附近進(jìn)行。

④實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周?chē)奈锲废嘟佑|。

7、消毒與滅菌的區(qū)別

消毒指使用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對(duì)人體有害的微生物（不包括芽

抱和抱子）。消毒方法常用煮沸消毒法，巴氏消毒法（對(duì)于一些不耐高溫的液體）還有化學(xué)藥劑（如酒

精、氯氣、石炭酸等）消毒、紫外線消毒。

滅菌則是指使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽泡和抱子。滅菌方法有灼燒滅菌、

干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌。

滅菌方法：①接種環(huán)、接種針、試管口等使用法；②玻璃器皿、金屬用具等使用法，

所用器械是;③培養(yǎng)基、無(wú)菌水等使用法，所用器械是0④表

面滅菌和空氣滅菌等使用紫外線滅菌法，所用器械是紫外燈。

8、培養(yǎng)基分裝前要,培養(yǎng)基_______后，需要冷卻到50℃左右時(shí)（用手觸摸剛剛不燙手時(shí)），才能

用來(lái)倒平板。

9、平板冷凝后，要將平板______置，目的是

10、微生物接種的方法最常用的是法和法。用平板劃線法和稀釋涂布平板

法接種的目的是：使聚集在一起的微生物分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落，以

便于純化菌種。

11、灼燒接種環(huán)的目的是：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了;每次劃線前

灼燒接種環(huán)是為了,使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來(lái)源于

o劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，

12、在灼燒接種環(huán)之后，要等其冷卻后再進(jìn)行劃線，=

13、菌種的保存對(duì)于頻繁使用的菌種，可以采用的方法。將菌種接種到試管的培養(yǎng)

基上，在合適的溫度下培養(yǎng)。當(dāng)菌落長(zhǎng)成后，將試管放入4℃的冰箱中保藏。以后每3?6個(gè)月，都要

重新將菌種從舊的培養(yǎng)基上轉(zhuǎn)移到新鮮的培養(yǎng)基上。缺點(diǎn)：這種方法保存的時(shí)間不長(zhǎng)，菌種容易被

—或產(chǎn)生__________o對(duì)于需要長(zhǎng)期保存的菌種，可以采用的方法。放在一20℃

的冷凍箱中保存。

14、確定培養(yǎng)基制作是否合格的方法

將的培養(yǎng)基在__________中保溫1?2天，無(wú),說(shuō)明培養(yǎng)基的制備是成功的，否

則需要重新制備。

☆課題2土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)

一、理論基礎(chǔ)

1、實(shí)驗(yàn)室中微生物的篩選應(yīng)用的原理

人為提供有利于目的菌株生長(zhǎng)的條件(包括營(yíng)養(yǎng)、溫度、pH),同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng)。

2、選擇培養(yǎng)基

在微生物學(xué)中，將允許特定種類(lèi)的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻止其他種類(lèi)微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，稱(chēng)作

選擇培養(yǎng)基。

4、統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目

(1)測(cè)定微生物數(shù)量的常用方法有法和_________直接計(jì)數(shù)。

(2)稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目的原理

一般設(shè)置3?5個(gè)平板，選擇菌落數(shù)在_________的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，并取o統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往

往比活菌的實(shí)際數(shù)目,因此，統(tǒng)計(jì)結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是活菌數(shù)來(lái)表示。

5、從平板上的菌落數(shù)推測(cè)出每克樣品中的菌落數(shù)

統(tǒng)計(jì)某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)，最好能統(tǒng)計(jì)3個(gè)平板，計(jì)算出平板菌落數(shù)的平均值

每克樣品中的菌落數(shù)=(C/V)*M其中，C代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)，V代表涂布平

板時(shí)所用的稀釋液的體積(ml),M代表稀釋倍數(shù)

6.篩選菌株

(1)實(shí)驗(yàn)室中微生物篩選的原理：人為提供有利于生長(zhǎng)的條件(包括營(yíng)養(yǎng)、溫度、pH等)，同時(shí)

或其他微生物生長(zhǎng)。

(2)選擇培養(yǎng)基：在微生物學(xué)中，將允許一種類(lèi)的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)—和—其他種類(lèi)微生物生

長(zhǎng)的培養(yǎng)基，稱(chēng)作選擇培養(yǎng)基。

(3)配制選擇培養(yǎng)基的依據(jù)

根據(jù)選擇培養(yǎng)的菌種的生理代謝特點(diǎn)加入某種物質(zhì)以達(dá)到選擇的目的。例如，培養(yǎng)基中不加入有機(jī)物

可以選擇培養(yǎng)微生物；培養(yǎng)基中不加入氮元素，可以選擇培養(yǎng);的微生物.力口

入高濃度的食鹽可選擇培養(yǎng)金黃色葡萄球菌等。

當(dāng)樣品的足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)—

;。通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選

擇菌落數(shù)在的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。止匕外，測(cè)定微生物數(shù)量的常用方法還有直接計(jì)數(shù)。

二、研究思路

(一)篩選菌株

1.實(shí)驗(yàn)室中微生物的篩選主要是指人為提供有利于目的菌株生長(zhǎng)的,同時(shí)抑

制或阻止其他微生物的生長(zhǎng)。

2.分解尿素的細(xì)菌主要有，,-

3.選擇培養(yǎng)基是指_________________________________________________「

加入可以分離出，o加入可以分

禺出O

（二）統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目

4.統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法主要有,，。

5.統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的理論依據(jù)是當(dāng)樣品度足夠高時(shí)，

6.為保證統(tǒng)計(jì)結(jié)果準(zhǔn)確，通常將涂布在平板上，培養(yǎng)后再選擇的

平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。

7.在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)時(shí)，一定要涂布至少個(gè)平板作為重復(fù)組，才能增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力和準(zhǔn)確

性。

（三）設(shè)置對(duì)照

8.設(shè)置對(duì)照的主要目的是,提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的0

9.土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)的研究思路是，。

三、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

關(guān)于土壤中某樣品細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)操作步驟如下：

1.取樣：從肥沃、濕潤(rùn)的土壤中取樣。應(yīng)先3cm左右，再取樣，將樣品

裝入事先準(zhǔn)備好的—中。

2.制備：準(zhǔn)備牛肉膏蛋白膝培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基

將菌液稀釋相同的倍數(shù)，在牛肉膏蛋白豚培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落數(shù)目應(yīng)明顯選擇培養(yǎng)基上的

數(shù)目，因此，牛肉膏蛋白腺培養(yǎng)基可以作為,用來(lái)判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用。

3.微生物的與觀察

將10g土樣加入盛有90mL無(wú)菌生理鹽水的錐形瓶中（體積為250mL）,充分搖勻，吸取上清液,

轉(zhuǎn)移至盛有—的生理鹽水的無(wú)菌大試管中，將土樣以1、10、……依次等比稀釋至稀釋度，并

按照由1（/?稀釋度的順序分別吸取進(jìn)行平板涂布操作。每個(gè)稀釋度下需要3個(gè)選擇培養(yǎng)基、1個(gè)

牛肉膏蛋白腺培養(yǎng)基。將涂布好的培養(yǎng)皿放在30℃溫度下培養(yǎng)，及時(shí)觀察和記錄。挑選選擇培養(yǎng)基中不

同形態(tài)的菌落接入含培養(yǎng)基的斜面中，觀察能否產(chǎn)生如教材中圖2-10的顏色反應(yīng)。

4.細(xì)菌的計(jì)數(shù)

當(dāng)菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)，選取菌落數(shù)在的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。在同一稀釋度下，至少對(duì)3個(gè)平板進(jìn)行

重復(fù)計(jì)數(shù)，然后求出,并根據(jù)平板所對(duì)應(yīng)的稀釋度計(jì)算出樣品中細(xì)菌的數(shù)目。

四：思考與討論

（1）如何從平板上的菌落數(shù)推測(cè)出每克樣品中的菌落數(shù)？

（2）為什么分離不同的微生物要采用不同的稀釋度？測(cè)定土壤中細(xì)菌的總量和測(cè)定土壤中能分解尿

素的細(xì)菌的數(shù)量，選用的稀釋范圍相同嗎？

果膠酶在果汁生產(chǎn)中的作用

（一）基礎(chǔ)知識(shí)

1、酶的概念：酶是所產(chǎn)生的具有作用的一類(lèi)特殊的;

2、酶的本質(zhì)：（大多數(shù)）或；基本組成單位：或

3、酶的功能：在各種化學(xué)反應(yīng)中起作用。原因：酶能降低化學(xué)反應(yīng)的,從而使反應(yīng)

能夠迅速的進(jìn)行。

4、酶的特性（1）：酶的催化效率是無(wú)要催化劑的107?1013倍。（2）：一種酶只

能催化一種化合物或一類(lèi)化合物的化學(xué)反應(yīng)。（3）需要適宜的條件：適宜的、適宜的。

（二）果膠酶的作用

（1）細(xì)胞壁的組成成分？___________________________

（2）果膠的單體是什么？___________________________

（3）果膠酶的作用？___________________________

1、果膠是植物以及的主要組成成分之一，它是由聚合而成的一種高

分子化合物，不溶于水。

2、果膠對(duì)果汁制作的影響：影響果汁的，還會(huì)使果汁o

3、果膠酶它是分解的一類(lèi)酶的總稱(chēng)，包括、、等。

4、果膠酶在果汁制作中的作用①分解,瓦解植物的及；使

水解為o②提高水果的,并使果汁變得=

（三）酶的活性與影響酶活性的因素

1、酶的活性：指酶催化一定化學(xué)反應(yīng)的能力。

2、酶催化能力高低的衡量標(biāo)準(zhǔn)在一定的條件下，酶所催化的某一化學(xué)反應(yīng)的反應(yīng)速度。酶反應(yīng)速度

用單位時(shí)間內(nèi)、單位體積中或來(lái)表示。

3、影響酶活性的因素：①溫度：畫(huà)出溫度對(duì)酶活性的影響曲線并標(biāo)出最適溫度：

B、果膠酶的最適溫度果膠酶的最適溫度為。

C、討論：高溫使酶的活性喪失后，酶的活性可否恢復(fù)？為什么？不能恢復(fù)，因高溫破壞了酶的分子結(jié)

構(gòu)，高溫對(duì)酶造成不可逆的破壞。但低溫使酶的活性喪失后，緩慢恢復(fù)其溫度活性仍可恢復(fù)。

②pH：A、畫(huà)出PH對(duì)酶活性的影響曲線并標(biāo)出最適PH：

B、果膠酶的最適pH果膠酶的最適pH范圍為。③酶的抑制劑：Fe3+、Ca2+、Zn2+等

金屬離子對(duì)果膠酶有抑制作用。

（一）探究溫度對(duì)果膠酶活性的影響

1、實(shí)驗(yàn)原理果膠酶的活性受溫度影響。處于時(shí)，活性最高。果肉的、果汁的與

果膠酶的活性大小成正比。

2、實(shí)驗(yàn)操作流程

討論：為什么在混合蘋(píng)果泥和果膠酶之前，要將果泥和果膠酶分裝在不同的試管中恒溫處理？將果泥

和果膠酶分裝在不同的試管中恒溫處理，可以保證，避免了果泥

和果膠酶混合時(shí)影響混合物的溫度，從而影響果膠酶活性的問(wèn)題。

（二）探究pH對(duì)果膠酶活性的影響

1、實(shí)驗(yàn)原理果膠酶的活性受pH影響，處于,酶的活性最高，高于或低于此值活性均下降果肉

的、果汁的與果膠酶的活性大小成正比。

2、實(shí)驗(yàn)操作流程

想一想，為什么能夠通過(guò)測(cè)定濾出的蘋(píng)果汁的體積大小來(lái)判斷果膠酶活性的高低？果膠酶將果膠分解為

小分子物質(zhì)，小分子物質(zhì)可以通過(guò)濾紙，因此蘋(píng)果汁的體積大小反應(yīng)了果膠酶的催化分解果膠的能力。

在不同的溫度和pH下，果膠酶的活性越大，蘋(píng)果汁的體積就o

在探究溫度或pH的影響時(shí)，是否需要設(shè)置對(duì)照？如果需要，又應(yīng)該如何設(shè)置？為什么？需要設(shè)置對(duì)照

實(shí)驗(yàn)，不同的溫度梯度之間或不同的pH梯度之間就可以作為對(duì)照，這種對(duì)照稱(chēng)為相互對(duì)照。

（三）探究果膠酶的用量1、實(shí)驗(yàn)原理在一定的條件下，隨著酶濃度的增加，果汁的體積增加；當(dāng)酶

濃度達(dá)到某一數(shù)值后，再增加酶的用量，果汁的體積不再改變，此值即是酶的最適用量。

2.畫(huà)出果膠酶的用量對(duì)酶活性的影響曲線并標(biāo)出酶的最適用量：

《血紅蛋白的提取和分離》

基礎(chǔ)知識(shí)

1.凝膠色譜法

凝膠色譜法也稱(chēng)做,是根據(jù)分離蛋白質(zhì)的有效方法。凝膠實(shí)際上

是一些由構(gòu)成的多孔球體，在小球體內(nèi)部有許多貫穿的通道，相對(duì)分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)

分子通過(guò)凝膠時(shí)速度不同，相對(duì)分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路程,移動(dòng)

速度；而相對(duì)分子質(zhì)量的蛋白質(zhì)無(wú)法進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，只能在移動(dòng)，路

程,移動(dòng)速度。相對(duì)分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)分子因此得以分離。

2.緩沖溶液

緩沖溶液的作用是o緩沖溶液通常由—

溶解于水中配制而成的。生物體內(nèi)進(jìn)行的各種生物化學(xué)反應(yīng)都是在一定的pH下進(jìn)行的，例如：血漿的pH

是,要在實(shí)驗(yàn)條件下準(zhǔn)確模擬生物體內(nèi)的過(guò)程，必須保持體外的pH與體內(nèi)的基本一致。

3.電泳

電泳是指o許多重要的生物大分子，如多肽、核酸

等都具有可解離的基團(tuán)，在一定的pH下，這些基團(tuán)會(huì)帶上o在電場(chǎng)的作用下，這些帶電分子

會(huì)向著與其所帶電荷的電極移動(dòng)。電泳利用了待分離樣品中各分子以及分子本

身的、的不同，使帶電分子產(chǎn)生不同的,從而實(shí)現(xiàn)樣品中各種分子的分離。

兩種常用的電泳方法是和，在測(cè)定蛋白質(zhì)分子量時(shí)通常使

用o蛋白質(zhì)在聚丙烯酰胺凝膠中的遷移率取決于

以及等因素。

4.蛋白質(zhì)的提取和分離

蛋白質(zhì)的提取和分離一般分為四步：、、和O

5.樣品處理

血液由和組成，其中紅細(xì)胞最多。紅細(xì)胞具有

的特點(diǎn)。紅細(xì)胞中有一種非常重要的蛋白質(zhì),其作用是,血紅蛋白有—

個(gè)肽鏈組成，包括，其中每條肽鏈環(huán)繞一個(gè),磁基團(tuán)可攜帶。血

紅蛋白因含有呈現(xiàn)紅色。

紅細(xì)胞的洗滌洗滌紅細(xì)胞的目的是,采集的血樣要及

時(shí)采用分離紅細(xì)胞，然后用膠頭吸管吸出上層透明的,將下層暗紅色的倒

入燒杯，再加入，緩慢攪拌,低速短時(shí)間離心，如此重復(fù)洗滌三次，直

至，表明紅細(xì)胞已洗滌干凈。

血紅蛋白的釋放在和作用下，紅細(xì)胞破裂釋放出血紅蛋白。加入蒸儲(chǔ)水的目的

是o加入甲苯的目的是o

分離血紅蛋白溶液將攪拌好的混合溶液離心后，試管中的溶液分為4層。第一層為無(wú)色透明

的,第2層為白色薄層固體，是,第3層是紅色透明液體，這是,

第4層是其他雜質(zhì)的暗紅色沉淀物。將試管中的液體用濾紙過(guò)濾，除去之溶性沉淀層，于分液漏斗中靜置

片刻后，分出下層的紅色透明液體。

透析即為：1mL的血紅蛋白溶液裝入中，將透析袋放入盛有300mL的物質(zhì)的量的濃度為

20mmol/L的中，透析12h。透析可以去除樣品中的雜質(zhì)，或用于更換樣品

的。透析的原理是-透析的目的

是。

6.凝膠色譜操作

第一步要制作,第二步要,因?yàn)樗匝b柱前需要根據(jù)

色譜柱的內(nèi)體積計(jì)算所需要的凝膠量。在裝填凝膠柱時(shí)，不得有存在。因?yàn)闅馀?/p>

會(huì)，降低分離效果。第三步是o

7純化即為_(kāi)_________

調(diào)節(jié)緩沖液面：打開(kāi)色譜柱下端的流出口，使柱內(nèi)凝膠面上的緩沖液緩慢下降到與凝

3膠面平齊，關(guān)閉出口。

加入蛋白質(zhì)樣品：用吸管將透析后的樣品沿管壁環(huán)繞移動(dòng)加到色譜柱的頂端。加樣后，

I打開(kāi)下端出口，使樣品滲入凝膠床內(nèi)，等樣品完全滲入凝膠層后，

J關(guān)閉出口。

調(diào)節(jié)緩沖液面：加入20mmol/L的磷酸緩沖液到適當(dāng)高度

洗脫：連接緩沖液洗脫瓶，打開(kāi)下端出口，進(jìn)行洗脫。洗脫瓶的作用：洗脫

I洗脫瓶的緩沖液流速要保持

收集分裝蛋白質(zhì)：待接近色譜柱底端時(shí)，用試管收集。

8純度鑒定-----------------------

三、注意事項(xiàng)

1.電泳技術(shù)

電泳技術(shù)就是在的作用下，利用待分離樣品中各種分子以及分子、

等性質(zhì)的差異，使帶電分子產(chǎn)生不同的,從而達(dá)到對(duì)樣品進(jìn)行分離、鑒定或提純的目的。

2.紅細(xì)胞的洗滌

如果分層不明顯，可能是洗滌次數(shù)少、未能除去的原因。此外，離心速度過(guò)高和時(shí)間過(guò)

長(zhǎng)，會(huì)使和一同沉淀，也得不到純凈的紅細(xì)胞，影響后續(xù)血紅蛋白的提取純度。

3.如何檢測(cè)凝膠色譜柱的裝填是否成功

由于凝膠是一種半透明的介質(zhì)，因此可以在凝膠柱旁放一支與凝膠柱垂直的日光燈，檢查凝膠是否

裝填得均勻。

止匕外，還可以加入大分子的有色物質(zhì)，觀察色帶移動(dòng)的情況。如果，說(shuō)明凝膠色譜柱制

作成功，凝膠色譜柱出現(xiàn)紋路或是氣泡，輕輕敲打柱體以消除氣泡，消除不了時(shí)要重新裝柱。

4.為什么凝膠的裝填要緊密、均勻？

如果凝膠裝填得不夠緊密、均勻，就會(huì)在色譜柱內(nèi)形成無(wú)效的空隙，使本該進(jìn)入凝膠內(nèi)部的樣品分

子從這些空隙中通過(guò)，攪亂洗脫液的流動(dòng)次序，影響分離的效果。

5.沸水浴處理加入洗脫液的濕凝膠的目的不但節(jié)約,還能除去凝膠中可能帶有的

和排除凝膠內(nèi)的o

6.6-75代”代表,75表示,即每克凝膠膨脹時(shí)吸水go

7.裝填完后，立即用洗脫液洗脫的目的：使凝膠裝填

8.加入檸檬酸鈉有何目的？

為什么要低速、短時(shí)離心？___________________________________

紅細(xì)胞的洗滌時(shí)什么要緩慢攪拌？o

9.與其他真核細(xì)胞相比，紅細(xì)胞的特點(diǎn)及這一特點(diǎn)對(duì)進(jìn)行蛋白質(zhì)的分離的意義

哺乳動(dòng)物及人的成熟的紅細(xì)胞是雙面凹圓餅狀，沒(méi)有和o其含有

的血紅蛋白是_______________色的，因此在凝膠色譜分離時(shí)可以通過(guò)觀察顏色來(lái)判斷什么時(shí)候應(yīng)該收集

脫液。這使血紅蛋白的分離過(guò)程非常直觀，大大簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)操作。

10.如何檢測(cè)血紅蛋白的分離是否成功

如果凝膠色譜柱裝填得很成功、分離操作也正確的話，能清楚地看到血紅蛋白的紅色區(qū)帶均勻、狹窄、平

整，隨著洗脫液緩慢流出；如果紅色區(qū)帶歪曲、散亂、變寬，說(shuō)明分離的效果不好，這與有關(guān)。

11、能從凝膠色譜的分離原理分析為什么凝膠的裝填要緊密、均勻嗎？

答凝膠色譜法也稱(chēng)為分配色譜法，它是根據(jù)分離蛋白質(zhì)的方法之一。所用的凝膠實(shí)際上

是一些微小的,這些小球體大多數(shù)是由構(gòu)成，小球體內(nèi)部有許多貫穿的

通道，當(dāng)一個(gè)含有各種分子的樣品溶液緩慢流經(jīng)時(shí)，各分子在色譜柱內(nèi)進(jìn)行兩種不同的運(yùn)動(dòng)，即垂直向下

的運(yùn)動(dòng)和無(wú)規(guī)則的擴(kuò)散運(yùn)動(dòng)，的蛋白質(zhì)分子不能進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)部，只能分布在顆粒之

間，通過(guò)的路程,移動(dòng)速度；的蛋白質(zhì)分子比較容易

進(jìn)入凝膠內(nèi)的通道，通過(guò)的路程，移動(dòng)速度o因此，樣品中相對(duì)分子質(zhì)

量較大的蛋白質(zhì)流出，相對(duì)分子質(zhì)量中等的分子后流出，相對(duì)分子質(zhì)量最小的分子最后

流出，，從而使各種相對(duì)分子質(zhì)量不同的分子得以分離。如果凝膠裝填得不夠緊密、均勻，就會(huì)在色譜柱

內(nèi)形成無(wú)效的空隙，使本該進(jìn)入凝膠內(nèi)部的樣品分子從這些空隙中通過(guò)，攪亂洗脫液的流動(dòng)次序，影響分

離的效果。

菊花組織培養(yǎng)

要點(diǎn)1植物組織培養(yǎng)的理論基礎(chǔ)

當(dāng)植物細(xì)胞脫離了原來(lái)所在植物體的器官或組織而處于離體狀態(tài)時(shí)，在一定的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、激素和其他

外界條件的作用下，就可能表現(xiàn)出全能性，發(fā)育成完整的植株（即細(xì)胞全能性）。

要點(diǎn)2植物組織培養(yǎng)的基本過(guò)程

（1）基本過(guò)程

人為使用植物激素控制

（2）基本概念

細(xì)胞分化：植物的個(gè)體發(fā)育過(guò)程中，細(xì)胞在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和生理功能上都會(huì)出現(xiàn)穩(wěn)定性的差異，形成這

些差異的過(guò)程叫做細(xì)胞分化。

愈傷組織：離體的植物組織或細(xì)胞，培養(yǎng)一段時(shí)間后，會(huì)通過(guò)細(xì)胞有絲分裂，形成愈傷組織。愈傷組

織o

（去分化）：由高度分化的植物組織或細(xì)胞產(chǎn)生愈傷組織的過(guò)程，稱(chēng)為植物細(xì)胞的脫分化，

或者叫做去分化。

：脫分化產(chǎn)生的愈傷組織繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)，又可以重新分化成根或芽等器官，這個(gè)過(guò)程叫做再

分化。

（3）植物體細(xì)胞發(fā)育成完整植株（表現(xiàn)出全能性）的條件。

脫離原來(lái)所在植物體（離體）、營(yíng)養(yǎng)供給、激素控制、無(wú)菌條件、適宜的溫度、PH和光照等。

要點(diǎn)3影響植物組織培養(yǎng)的因素

（1）材料因素的影響

不同的植物組織，培養(yǎng)的難易程度差別很大，容易進(jìn)行無(wú)性繁殖的植物也容易進(jìn)行組織培養(yǎng)。同一種

植物材料，材料的年齡、保存時(shí)間的長(zhǎng)短也有影響。幼齡、保存時(shí)間短的植物材料容易培養(yǎng)成功。菊花的

組織培養(yǎng)，0

（2）營(yíng)養(yǎng)因素的影響

需要配置適宜的培養(yǎng)基，常用的一種培養(yǎng)基是其主要成分包

括：,如N、P、K、Ca、Mg、S；,如B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、

Co；,如甘氨酸、煙酸、肌醇、維生素，以及蔗糖等。

在菊花組織培養(yǎng)中，可以不添加，原因是菊花莖段組織培養(yǎng)比較容易。

注意：

人及動(dòng)物的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：水、無(wú)機(jī)鹽、糖類(lèi)、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、維生素六類(lèi)。

植物的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：礦質(zhì)元素、水、二氧化碳等三類(lèi)。

微生物的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：水、無(wú)機(jī)鹽、碳源、氮源及特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)五類(lèi)。

滅菌：采取的滅菌方法是滅菌。MS培養(yǎng)基中各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的作用是什么？MS培養(yǎng)基有哪些

特點(diǎn)？大量元素和微量元素提供植物細(xì)胞所必需的;提供碳源，維持細(xì)胞滲透壓；甘氨

酸、維生素等物質(zhì)主要是為了滿足離體植物細(xì)胞在正常代謝途徑受到一定影響后所產(chǎn)生的需求。

微生物培養(yǎng)基以營(yíng)養(yǎng)為主，MS培養(yǎng)基則需提供大量_____營(yíng)養(yǎng)。

（3）激素的影響

在配置好的MS培養(yǎng)基中，常常需要添加。植物激素中和

啟動(dòng)、脫分化和再分化的關(guān)鍵性激素。植物激素的濃度、使用的先后順序以及用量的比例等，都

會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

①按照不同的順序使用這兩類(lèi)激素，會(huì)得到不同的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

使用順序?qū)嶒?yàn)結(jié)果

先使用生長(zhǎng)素，后使用細(xì)胞分裂素

細(xì)胞既分裂又分化

同時(shí)使用___________________________________________________

②當(dāng)同時(shí)使用這兩類(lèi)激素時(shí)，兩者用量的比例影響植物細(xì)胞的發(fā)育方向。

生長(zhǎng)素用量比細(xì)胞分裂素用量植物細(xì)胞的發(fā)育方向

比值高時(shí)有利于——分化、抑制——的形成

有利于的分化、抑制的形

比值低時(shí)

成

比值適中時(shí)促進(jìn)—_的生長(zhǎng)

（4）pH、溫度、光照等條件的影響

不同的植物對(duì)各種條件的要求往往不同。進(jìn)行菊花的組織培養(yǎng)，一般將pH控制在左右，溫度

控制在，并且每日用日光燈照射12h。

要點(diǎn)4植物組織培養(yǎng)技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)

植物組織培養(yǎng)技術(shù)可以實(shí)現(xiàn)優(yōu)良品種的繁殖，保持遺傳的一致；可以實(shí)現(xiàn)花卉的連續(xù)生

產(chǎn),不受開(kāi)花季節(jié)的限制。屬于繁殖（方式）

5、植物細(xì)胞：具有某種生物全套遺傳信息的任何一個(gè)活細(xì)胞，都具有發(fā)育成完整個(gè)體的能力，即

每個(gè)生物細(xì)胞都具有全能性。但在生物體的生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中并不表現(xiàn)出來(lái)，這是因?yàn)樵谔囟ǖ臅r(shí)間和空間

條件下，通過(guò)基因的選擇性表達(dá)，構(gòu)成不同組織和器官。

8、對(duì)外植體進(jìn)行表面時(shí)，就要考慮藥劑的效果，又要考慮植物的能力。

9、接種過(guò)程中插入外植體時(shí)形態(tài)學(xué)上端朝上，每個(gè)錐形瓶接種7?8個(gè)外植體，要求操作。

10、移栽：栽前應(yīng)先打開(kāi)培養(yǎng)瓶的封口膜，讓其在培養(yǎng)間生長(zhǎng)幾日，然后用流水清洗根部培養(yǎng)基。然后將

幼苗移植到消過(guò)毒的或等環(huán)境中生活一段時(shí)間，進(jìn)行。最后進(jìn)行露天栽培。

胡蘿卜素的提取

1、胡蘿卜素性質(zhì)：結(jié)晶，化學(xué)性質(zhì)比較穩(wěn)定，不溶于微溶于，易溶于等有機(jī)溶劑。

B—胡蘿卜素在人體內(nèi)可以被氧化成,因而胡蘿卜素具有預(yù)防夜盲癥等疾病。另外還可以用作食品、

飲料、飼料的添加劑。

2、提取B—胡蘿卜素實(shí)驗(yàn)方法：提取B—胡蘿卜素的方法主要有三種：①?gòu)闹刑崛、趶拇?/p>

面積養(yǎng)殖的中獲得③利用微生物的生產(chǎn)

步驟①粉碎