紫外可見分光光度計維生素B12含量測定教學講義

實驗一工作曲線繪制

及維生素B12含量的測定一、實驗目的1、了解紫外吸收光譜在有機結構分析的應用。2、學習有機物的定量分析方法。比耳定律當入射光的波長、液層厚度和溶液的溫度固定時,溶液的吸光度與溶液的濃度成正比。朗伯特定律當入射光的波長、溶液的濃度及溫度一定時,溶液的吸光度與液層的厚度成正比。二、實驗原理

許多有機化合物在紫外具有特征的吸收光譜，從而可以用來進行有機物的鑒定及結構分析（鑒定有機化合物的官能團）；此外，還可對同分異構體進行鑒別。對具有π健電子及共軛雙鍵的化合物特別靈敏，且在紫外光區(qū)具有強烈吸收。該法在有機物分析中可進行：

（1）純度檢查；（2）未知樣品的鑒定；（3）分子結構的推測；（4）互變異構的判別；（5）定量測定。三、儀器組成

紫外-可見光度計儀器由光源、單色器、吸收池和檢測器四部分組成。

1、光源

對光源基本要求：足夠光強、穩(wěn)定、連續(xù)輻射且強度隨波長變化小。

（1）鎢及碘鎢燈：340～2500nm，多用在可見光區(qū)；

（2）氫燈和氘燈：160～375nm，多用在紫外區(qū)。2、單色器(Mnochromator)

與原子吸收光度儀不同，在紫外可見分光光度計中，單色器通常置于吸收池的前面！(可防止強光照射引起吸收池中一些物質的分解)單色器：是分光光度計的關鍵部件，主要任務是將光源發(fā)來的混合光分解為單色光，并提供所需波長的光。3、吸收池(Cell，Container)：

用于盛放樣品?？捎檬⒒虿Ａ煞N材料制作，前者適于紫外區(qū)和可見光區(qū)；后者只適于可見光區(qū)。有些透明有機玻璃亦可用作吸收池。4、檢測器：

硒光電池

光電二極管

光電倍增管四、實驗儀器與試劑1、儀器：UV-2501型紫外-可見分光光度計（Simazu公司）；1cm石英比色皿2、試劑：維生素B12注射液：100mg/ml五、試劑配制與測定1、配制標準系列：取維生素B12標準溶液100mg/mL

0.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00mL分別置于50.00mL容量瓶中，用水稀釋至刻度；2、繪制標準曲線：用1cm石英比色皿，以空白為參比，在波長200～600nm內測定標準溶液316nm處的吸光度A，繪制標準曲線。3、測定未知液：取未知液5.00mL置于50.00mL容量瓶中，用水稀釋至刻度；用1cm石英比色皿，測定316nm處吸光度A，以空白為參比。4、計算未知液的含量（mg·mL-1）。六、儀器安裝環(huán)境七、儀器使用注意事項：儀器操作過程出現(xiàn)異常情況，不得私自關閉電源，需由教師指導完成。實驗室內不準來回跑動。不準隨意搬動儀器。在測量狀態(tài)下，不得將手伸入測量室內，以防紫外線灼傷！不準私自調整實驗室空調的設定溫度及風速。同學操作時請注