小麥抗莖基腐病評價技術規(guī)范DB41-T 2392-2023

ICS65.020.20

CCSB30

41

河南省地方標準

DB41/T2392—2023

小麥抗莖基腐病評價技術規(guī)范

2023-03-07發(fā)布2023-06-06實施

河南省市場監(jiān)督管理局發(fā)布

DB41/T2392—2023

目次

前言.................................................................................II

1范圍...............................................................................1

2規(guī)范性引用文件.....................................................................1

3術語和定義.........................................................................1

4病原物接種體.......................................................................2

5鑒定方法...........................................................................2

6病害調(diào)查...........................................................................2

7抗性評價...........................................................................3

附錄A（資料性）小麥莖基腐病病原物的分離和鑒定.......................................5

I

DB41/T2392—2023

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

本文件由河南省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并歸口。

本文件起草單位：河南省農(nóng)業(yè)科學院植物保護研究所，河南省植物保護檢疫站。

本文件主要起草人：徐飛、張國彥、宋玉立、楊共強、馮超紅、王俊美、張少偉、白磊、金建猛、

李世民、林艷麗、石麗芬、劉娟娟、石瑞杰、韓自行。

II

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小麥抗莖基腐病評價技術規(guī)范

1范圍

本文件規(guī)定了小麥莖基腐病接種體制備、接種方法、病害調(diào)查及抗性評價的技術規(guī)范。

本文件適用于普通小麥、野生小麥和小麥近緣種等。

2規(guī)范性引用文件

本文件沒有規(guī)范性引用文件。

3術語和定義

下列術語和定義適用于本文件。

3.1

小麥莖基腐病

主要由假禾谷鐮孢（Fusariumpseudograminearum）、禾谷鐮孢（F.graminearum）和黃色鐮孢（F.

culmorum）引起（我國黃淮海麥區(qū)優(yōu)勢病原菌為假禾谷鐮孢）。病菌侵染后，苗期發(fā)病葉鞘變褐，分蘗

減少，植株矮弱，成株期發(fā)病莖基部1～3節(jié)變褐，嚴重時形成枯白穗。

3.2

接種體

通過人工培養(yǎng)能夠侵染寄主植物引起病害的病原培養(yǎng)物。

3.3

病情指數(shù)

衡量發(fā)病率與嚴重度的綜合指標。計算公式（1）：

nn

..................（1）

DI(XiSi)/(XiSmax)100

i0i0

式中：

DI——病情指數(shù)；

i——病級數(shù)（0～n）；

Xi——i級的單元數(shù)；

Si——i級嚴重度的代表值；

Smax——嚴重度的最高級值。

3.4

相對病情指數(shù)

鑒定品種與對照品種病情指數(shù)的比值。計算公式（2）：

RDI=DIiv/DIcv..........................（2）

式中：

RDI——相對病情指數(shù)；

1

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DIcv——對照品種（Controlvarieties）的病情指數(shù)；

DIiv——鑒定品種（Identificationvarieties）的病情指數(shù)。

4病原物接種體

4.1病原物的獲取

組織分離得到的病原物，經(jīng)形態(tài)學和分子生物學鑒定為假禾谷鐮孢，進行致病力測定后選擇強致病

力菌株。也可選擇保存于中國普通微生物菌種保藏管理中心的假禾谷鐮孢強致病力標準菌株14LY24-2

或WZ-8A（保藏編號分別為CGMCC3.20319和ACCC38068）作為接種體培養(yǎng)的病原菌。

4.2分生孢子懸浮液的制備

將接種菌株活化后，在PDA培養(yǎng)基平板上25℃培養(yǎng)7d，用直徑為0.5cm打孔器把菌塊均勻打碎后，

挑入4%綠豆湯培養(yǎng)基中，密封，轉(zhuǎn)入在25℃振蕩培養(yǎng)72h后，過濾掉殘渣，吸取菌液到血球計數(shù)板上，

測定分生孢子懸浮液濃度，然后將濃度調(diào)節(jié)成每毫升1×106個孢子的懸浮菌液。

4.3谷粒接種體的制備

將麥?；蛩诹＝?2h后，裝入到三角瓶或聚乙烯塑料袋中，放入滅菌鍋121℃滅菌60min，放置

2d后，再次滅菌30min，冷卻后使用。將PDA平板上25℃條件下培養(yǎng)3d菌絲塊均勻接入谷粒上。1周后，

在超凈工作臺中混合均勻，2個星期后待菌絲布滿整個谷粒時，在通風背光處晾干備用。

5鑒定方法

5.1苗期鑒定

苗期鑒定可采用滴注法或菌土法。滴注法：將直徑為7cm的塑料營養(yǎng)缽裝入滅菌土（沙子：蛭石：

大田土=1:1:1均勻混合并121℃滅菌1h），澆水備用。將小麥種子催芽露白后種于營養(yǎng)缽中，

覆蓋1cm滅菌土，每個品種4缽，每缽10粒。出苗約10d后，使用移液器吸取10μL濃度為每毫升1×106

個的孢子懸浮液，在距離土壤表面約0.5cm的幼苗莖基部滴上菌液。菌土法：將粟粒接種體和滅菌土按

0.5%的比例混合制成菌土，待播種后覆蓋2cm菌土。接種后將幼苗放置在溫度為25℃、濕度90%培養(yǎng)箱

中，黑暗培養(yǎng)48h后，再轉(zhuǎn)入溫度25℃、光照12h、濕度90%人工氣候箱或溫室中正常管理。

5.2田間鑒定

鑒定圃應設置在人工營造的病圃或病害常發(fā)田，具備利于發(fā)病的環(huán)境條件，地勢平坦和地力均勻的

地塊。鑒定圃不施用任何殺菌劑。病圃內(nèi)每個品種6行，行長1.5m～2.0m，行距0.20m～0.25m。每20

個品種種植一組高感對照品種。重復3次。接種方法：播種后覆2cm的土，撒上谷粒接種體（種子與谷

粒接種體質(zhì)量比1:1方式接種），最后覆土（約1cm）壓實。

6病害調(diào)查

6.1苗期調(diào)查方法

接菌30d～35d后將麥苗輕輕拔出，沖洗干凈，調(diào)查病級（表1），計算病情指數(shù)。

2

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表1小麥莖基腐病苗期嚴重度分級及癥狀描述

嚴重度分級癥狀

0植株無病變

1植株胚芽鞘或第1葉鞘明顯褐變

3植株第1葉鞘褐變且第1葉鞘下的根冠部分褐變

5植株第2葉鞘有明顯褐變且第2葉鞘下的根冠完全褐變

7植株第3葉鞘有明顯褐變且第3葉鞘下的根冠完全褐變

9整株枯死

6.2成株期調(diào)查方法

在小麥乳熟至蠟熟期充分發(fā)病后進行調(diào)查。每個重復5點取樣，每點查20莖，剝?nèi)ト~鞘調(diào)查記載病

級（表2），計算病情指數(shù)和相對病情指數(shù)。

表2小麥莖基腐病成株期嚴重度分級及癥狀描述

嚴重度分級癥狀

0莖基部無病變

1莖基部褐變至第1節(jié)

2莖基部褐變至第2節(jié)

3莖基部褐變至第3節(jié)

4莖基部褐變至第3節(jié)以上但未形成枯白穗

5枯白穗或因病未抽穗

7抗性評價

7.1鑒定有效性的判斷

當高感對照品種達到相應的感病程度：苗期病情指數(shù)>45，成株期病情指數(shù)>30，該批次鑒定視為

有效。建議使用‘矮抗58’或‘國麥301’為高感對照品種。

7.2抗性評價標準

7.2.1苗期抗性鑒定標準

小麥莖基腐病苗期抗病類型劃分為5個級別（表3）。

表3小麥苗期莖基腐病抗性評價標準

病情指數(shù)抗性評價

DI=0免疫Immune(I)

0＜DI≤25高抗HighlyResistant(HR)

3

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表3小麥苗期莖基腐病抗性評價標準（續(xù)）

病情指數(shù)抗性評價

25＜DI≤35中抗Moderatelyresistant(MR)

35＜DI≤45中感ModeratelySusceptible(MS)

DI＞45高感Highlysusceptible(HS)

7.2.2成株期抗性鑒定標準

依據(jù)相對病情指數(shù)確定其對莖基腐病的抗性水平，評價標準見表4。

表4小麥成株期莖基腐病抗性評價標準

相對病情指數(shù)抗性評價

RDI=0免疫Immune(I)

0＜RDI≤0.20高抗HighlyResistant(HR)

0.20＜RDI≤0.50中抗Moderatelyresistant(MR)

0.50＜RDI＜0.80中感ModeratelySusceptible(MS)

RDI≥0.80高感Highlysusceptible(HS)

7.3抗性評價

根據(jù)兩年抗性鑒定結(jié)果，以最高相對病情指數(shù)為準。

A

4

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附錄A

（資料性）

小麥莖基腐病病原物的分離和鑒定

從田間采集發(fā)病小麥植株樣品，將其發(fā)病莖段剪下，無菌條件下，依次用70%乙醇處理10s，3%NaClO

溶液消毒1min，無菌水沖洗3次，滅菌濾紙片吸干水分；最后將病組織置于含有抗生素（150μg/mL

硫酸鏈霉素和75μg/mL氨芐青霉素）的馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基（PDA）上，于25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2d～

3d，待病組織周圍長出菌絲，挑取至新的PDA上生長。每個病莖分離1個菌株。連續(xù)3次挑取邊緣菌絲進

行純化。

形態(tài)學鑒定：將純化菌株轉(zhuǎn)入康乃馨葉片培養(yǎng)基中進行誘導產(chǎn)孢。測定分生孢子形態(tài)和大小。無性

態(tài)為假禾谷鐮孢FusariumpseudograminearumO’DonnellandT.Aoki，屬半知菌類鐮孢屬（Fusarium）。

其大型分生孢子鐮刀形，有隔膜3～7個，頂端鈍圓，基部足細胞明顯，單個孢子無色，聚集在一起呈粉

紅色黏稠狀，大小為（29.5～49.2）μm×（3.0～4.9）μm，平均大小為40.3μm×4.1μm。有性態(tài)

為Gibberellacoronicola，屬子囊菌門（Ascomycotina）、核菌綱（Pyrenomycetes）、肉座菌目

（Hypocreales）、肉座菌科（Hypocreaceae），赤霉屬（Gibberella）。子囊殼散生或聚生于寄主組

織表面，略包于子座中，梨形，有孔口，頂部呈疣狀突起，黑褐色或墨綠色或紫色，直徑大小為（286.5～

360.7）μm×（204.95～341.5）μm，平均大小為320.0μm×281.3μm；子囊大小為（74.2～96.7）

μm×（7.1～11.8）μm，平均大小為86.2μm×8.9μm；子囊孢子鐮刀狀，3個分隔，大小為（24.1～

32.4）μm×（4.1～7.1）μm，平均大小為27.1μm×5.6μm。

分子生物學鑒定：收集菌絲并提取DNA，然后用假禾谷鐮孢特異性引物

（Fp1-1:5'-CGGGGTAGTTTCACATTTC(C/T)G-3'，F(xiàn)pl-2:5'-GAGAATGTGATGA(C/G)GACAATA-3'）進行擴增，

條帶大小為523bp～526bp;或用EF-1α（EF1:5'-ATGGGTAAGGA(A/G)GACAAGAC-3'，EF2:

5'-GGA(G/A)GTACCAGT(G/C)ATCATGTT-3'）擴增測序，序列比對參照GenBank登錄號:AF212468(假禾谷

鐮孢菌株NRRL28062)。

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河南省市場監(jiān)督管理局發(fā)布

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目次

前言.................................................................................II

1范圍...............................................................................1

2規(guī)范性引用文件.....................................................................1

3術語和定義.........................................................................1

4病原物接種體.......................................................................2

5鑒定方法...........................................................................2

6病害調(diào)查...........................................................................2

7抗性評價...........................................................................3

附錄A（資料性）小麥莖基腐病病原物的分離和鑒定.......................................5

I

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前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

本文件由河南省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并歸口。

本文件起草單位：河南省農(nóng)業(yè)科學院植物保護研究所，河南省植物保護檢疫站。

本文件主要起草人：徐飛、張國彥、宋玉立、楊共強、馮超紅、王俊美、張少偉、白磊、金建猛、

李世民、林艷麗、石麗芬、劉娟娟、石瑞杰、韓自行。

II