DB41T 873-2013 櫻桃無病毒苗木繁育技術(shù)規(guī)范

DB41Technicalspecificationforpropagatiomofvirus-freeseedingofcherry河南省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布I本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：趙改榮、李明、劉聰利、黃貞光、1櫻桃無病毒苗木繁育技術(shù)規(guī)范NY/T328蘋果無病毒苗木繁育不攜帶李矮縮病毒(Prunedwarfvirus,PDV)、李屬壞死環(huán)斑病毒(Prunusnecroticringspotvirus,CGRMV）、櫻桃病毒A(CherryvirusA,CVA)、櫻桃壞死銹斑病毒(CCNRMV)、蘋果褪綠葉斑病毒(Applechloroticleafspotviru2應(yīng)經(jīng)有資質(zhì)的檢測機(jī)構(gòu)檢測認(rèn)證，確定不帶上每株編號、掛牌標(biāo)識，繪制定植圖。加強(qiáng)肥水管理，保證樹勢無病毒原種圃常用工具要專用，剪枝剪等修剪工具每株使用前用70%酒精溶液消毒。工作人員進(jìn)4無病毒母本圃建立4.1無病毒母本圃圃地選擇4.2無病毒母本圃設(shè)計規(guī)劃4.3無病毒母本圃苗木來源4.4無病毒母本圃定植無病毒品種采穗圃和砧木采種圃株行距為1m～2m×2m～4m；無性系砧木圃株行距為0.5m~4.5無病毒母本圃管理4.5.1加強(qiáng)母本圃肥水管理和病蟲害防治，保證4.5.2無病毒無性系砧木圃的樹體，應(yīng)每年短截更新，其方法與普通無性系砧木母株相同。不允許在4.5.3無病毒母本圃常用工具要專用，剪枝剪等修剪工具每35.1苗圃建立各級道路、排灌系統(tǒng)，并統(tǒng)籌安排。平整土地，改良土壤，土壤消毒及增施5.2實(shí)生砧木苗培育5.3無性系砧木苗培育株編號分別繁殖。繪制各品種及株系分布圖，田間插牌標(biāo)記，不得壓條、分株繁殖法組織培養(yǎng)法扦插繁殖法5.4嫁接在陰涼處立即剪去葉片。按品種扎成捆，掛牌標(biāo)記母株編號。接穗存放同普通櫻桃接穗。5.4.2嫁接應(yīng)分品種及不同母株分別嫁接。采用帶木質(zhì)部芽接法嫁接，嫁接位置距地面10cm～20cm處。嫁4接后應(yīng)按品種及母株編號分別記載。補(bǔ)接時，應(yīng)與原來嫁接的接穗來源相5.5苗圃管理綠葉斑病毒可以采用木本指示植物檢測法進(jìn)能獲得抗血清的櫻桃病毒可以采用A蛋白酶聯(lián)免檢測。每2年對每株母本樹進(jìn)行一次病毒檢測。7.4.1每年在生長季節(jié)對無病毒苗木進(jìn)行兩次全面觀察，發(fā)現(xiàn)有病毒癥狀（參見56A.3解剖鏡放置在超凈臺上，用棉球蘸消毒酒精擦拭手及臺A.4將外植體接種于接種培養(yǎng)基（表A.1、表A.2）上，2527NAA----8定32℃,白晝溫度每天增加1℃,達(dá)到37℃時，保持在白晝37℃16h/d、黑暗32℃8h/d、濕9于溫室內(nèi)，溫室溫度白天20℃~28℃,夜間9℃~15℃。Na2CO30.159gNaHCO30.294gNaClNaH2PO4·12H2OK2HPO4NaN3pH7.4gggggPBST+2%聚乙烯吡咯烷酮+0.2%卵蛋白(或牛血清蛋白BSA)NaH2PO4·12H2O8.689gD.1.7終止液（2mol/LH2SO4100mL）D.2.3加抗原樣品，取櫻桃嫩葉或一年生休眠枝條內(nèi)皮白對照。4℃冰箱過夜，沖洗方法同D.2.1D.2.7終止反應(yīng)：每孔加25μL2moD.2.8目測比色后，用酶標(biāo)光度計測定讀數(shù)，波長492nm，OD值大于2倍陰性對照值（即P/N>2）E.1十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)溶液配制2帶毒性；與陰性對照ddH2O一樣，未觀察到目的條帶的樣品為陰性，無病毒；與陰性對照無病毒PNRSVACGCGCAAAAGTGTCGAAATPNRSV-RPDV-RATGGATGGGATGGATAAAATAAGTCTACAGGCTATTTATTATAARPII-RF.1李矮縮病毒（Prunedwarfvirus,PDV）F.2李屬壞死環(huán)斑病毒（PrunusnecroticringspotvirF.3櫻桃小果病毒（Littlecherryvirus,影響的果實(shí)呈現(xiàn)暗紅色，三角狀，口味下降，果實(shí)成熟過晚等F.4櫻桃綠環(huán)斑駁病毒（CherrygreenringmottleF5