DB4107T 510-2023 雞滑液囊支原體病凈化防治技術(shù)規(guī)范

4107I本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定本文件起草單位：新鄉(xiāng)市動物疫病預(yù)防控制中心，輝1雞滑液囊支原體病凈化防治技術(shù)規(guī)范NY/T4035雞滑液囊支原體感染診斷技術(shù)NY/T5030無公害農(nóng)產(chǎn)品獸藥使用準(zhǔn)則中華人民共和國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部第3號令.病死畜禽3.13.24診斷與監(jiān)測4.1.1病原特性2氏染色陰性，姬姆薩染色呈多形態(tài)的球形或球桿狀。在pH6.9以下時(shí)不穩(wěn)定，對39℃以上的溫-20℃可存活2年。在加入血清及輔酶Ⅰ的培養(yǎng)基中3d～7d后形成隆起、圓形、略似花格狀，直徑1mm~3mm的菌落。4.1.2流行特點(diǎn)病雞、隱性帶菌雞、帶菌種蛋是主要傳染源。雞滑液囊支原體主要感染4～12周齡的雞，成年雞和幼齡雞也可發(fā)生。主要以直接接觸經(jīng)呼吸道水平傳染和經(jīng)種蛋垂直本病潛伏期一般為8d～10d。自然感染的潛伏期約20d～80d，接觸感染的潛伏期約為10d～20d，4.1.3臨床癥狀4.1.4病理變化4.2實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測與判定4.2.1病原分離鑒定4.2.2血清學(xué)檢測血清學(xué)檢測方面包括平板凝集試驗(yàn)（SPA)、具體操作方法見附錄A～C。在臨床檢測中，建議使用間接ELISA試劑盒4.2.3分子生物學(xué)檢測推進(jìn)使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法，操作步驟參照NY/T4035進(jìn)行分子4.2.4結(jié)果判定3符合4.1.2流行特點(diǎn)、4.1.3臨床癥狀和4.1.4病理變化的，判符合4.1.2流行特點(diǎn)、4.1.3臨床癥狀和4.1.4病理變化，且經(jīng)4.2實(shí)驗(yàn)室檢測，4.2.1病原的分離鑒5.1.1.2養(yǎng)殖環(huán)境管理雞場環(huán)境控制應(yīng)參照標(biāo)準(zhǔn)NY/T1167中的規(guī)定執(zhí)行。實(shí)行全進(jìn)全出制，每批雞進(jìn)舍前或出欄后應(yīng)對舍內(nèi)通風(fēng)應(yīng)良好，減少雞群應(yīng)激。及時(shí)清除潮濕的墊料和糞便，應(yīng)5.1.1.3飼喂管理藥物使用應(yīng)遵守NY/T5030的規(guī)定執(zhí)行，對種雞在育雛期、青年期和產(chǎn)蛋期階段使用抗菌藥物，能5.1.4消毒5.1.4.1消毒制度5.1.4.2消毒方法人員、車輛、用具、設(shè)備、道路、環(huán)境、空舍、帶禽消毒以及發(fā)生疫病時(shí)的消毒按照NY/T3075規(guī)4藥物使用應(yīng)按照NY/T5030的規(guī)定泰妙菌素:有效物質(zhì)含量按每100g本品兌水500kg～1000kg或拌料500kg，連用3～5d。泰樂菌素:有效物質(zhì)含量按混飲500mg/L，連用5d～7d；皮下或肌肉注射，按體重計(jì)，5mg/kg～13mg/kg，每天2次，連用3～5d。恩諾沙星:有效物質(zhì)含量按皮下或肌肉注射，按體重計(jì)，2.5mg/kg～5mg/kg，每天2次，連用2d～3d；或按0.015%～0.02%濃度拌料，連用3d～5d。多西環(huán)素(強(qiáng)力霉素):有效物質(zhì)含量按每100g本品兌水500kg～1000kg或拌料200kg～500kg，連用3d～5d。鹽酸大觀-林可霉素(比率為2:1)：有效物質(zhì)含量按500mg/L～800mg/L，混飲，連用5d～7d。祖代雞場應(yīng)從育雛階段開展雞滑液囊支原體凈化。剛出殼雛雞采集咽喉拭子進(jìn)行PCR檢測或病原分或ELISA檢測，淘汰陽性雞只，陰性雞群進(jìn)行小群飼養(yǎng)，作為后備育種雞群。開產(chǎn)前按照育成期采血全凈化開始階段，全群進(jìn)行血清學(xué)監(jiān)測，每21d檢測一次，直至連續(xù)兩次無陽性個(gè)體，建成陰性種雞凈化維持階段，對符合4.1.3的雞立即采樣檢測，后備公雞采精前、后備母雞開產(chǎn)前全群采樣、其則按凈化開始階段采樣檢測，直至連續(xù)兩次無陽性個(gè)體，再次記錄、ELISA或PCR檢測記錄、各凈化階段種雞的留種與淘汰記錄等。記錄保存3年以上。5A.1樣品采集、保存與處理從雞群采集的血清樣品，如不能立即進(jìn)行試驗(yàn)，應(yīng)4℃保存，保存期不超過72h，不能凍結(jié)。血清在56℃水浴30min后進(jìn)行檢測。A.3操作方法室溫中加一滴(20μL)血清于白瓷板或玻板上，再加等量染色抗原，用加樣槍頭將其混合，輕輕搖動使之充分反應(yīng)。室溫條件下，雞血清2min內(nèi)判定結(jié)果。A.4結(jié)果判定——如僅在液滴邊緣部分出現(xiàn)凝集，或超過2min在邊緣出現(xiàn)凝集6試驗(yàn)使用的紅細(xì)胞為新鮮的0.8%雞紅細(xì)胞懸液。常規(guī)倍比稀釋法測定MS抗原的血凝價(jià)。以100%凝集(紅細(xì)胞呈顆粒性傘狀凝集于孔底)的MS抗原最大稀胞為新鮮的0.8%雞紅細(xì)胞懸液。去除待檢血清中非特異性血凝因子：按照1mL稀釋待檢血清(1:5)加6~8滴洗滌的雞紅細(xì)胞比例，37℃作用10min后，除去紅細(xì)胞，取上清液進(jìn)行檢測。于第1孔中加入PBS50μL，再取4個(gè)血凝單位MS抗原依次加入3雞紅細(xì)胞懸液于各孔中，振蕩混合后，室溫下靜置30～40min，判定結(jié)果。判為MS抗體陽性，1:40≤血凝抑制價(jià)＜1:80時(shí)為結(jié)果可疑，21d后再采血檢測。7雞滑液囊支原體感染酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(EL含490nm波長酶標(biāo)儀，37℃恒溫設(shè)備，可調(diào)微量移液器。培養(yǎng)液按8000r/min離心20min，沉淀用PBS在相同條件下洗3次。包被液(0.05mol/LpH9.6)的配制：稱取碳酸鈉1.59g和碳酸氫鈉2.93g溶于蒸餾水中并定容至1000mL。洗滌液：取入Tween-200.5mL加入到1000mLPBS(0.01mol/LpH7.4)中，充分混勻。稀釋液：含10%g溶于蒸餾水，并定容至700mL。底物溶液：取鄰苯二胺(OPD)4mg和30%過氧化氫2μL加入10mL磷酸鹽-檸檬酸緩沖液中溶解混勻。終止液(2mol/L硫酸)：硫酸58mL加入到442mL蒸餾水中混勻。C.2酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA將最適工作濃度的抗原用包被液稀釋。每孔100μL，置37℃1h后，再4℃過夜。用洗滌液洗5次，每次3min，拍干。8在酶標(biāo)儀上，于490nm下測量和記錄吸光值A(chǔ)(490)。在陰性和陽性血清對照成立的條件下，進(jìn)行結(jié)果判定。同時(shí)符合下列2個(gè)條件者，判為陽性；均不b)待檢血清的A值/陰性對照血清的A值≧2.19——種雞群抽檢，曾祖代、祖代雞滑液囊支原體血清學(xué)抗體檢測陽性率為0，父母代雞滑液囊支原種雞群(含所有群)隨機(jī)按3%～5%比例取棉拭子樣品，進(jìn)行PCR或病原學(xué)檢測抽檢，如果病原檢測均）：-20℃可存活2年。在加入血清及輔酶Ⅰ的培養(yǎng)基中3d～7d后形成隆起、圓形、略似花格狀，直徑1mm~3mm的菌落。雞滑液囊支原體主要感染4～12周齡的雞。病雞、隱性帶菌雞、帶菌種蛋是主要傳染源。主要以直接接觸經(jīng)呼吸道水平傳染和經(jīng)種蛋垂直感染為主。潛伏期為8d～10d。本病的急性感染期持續(xù)時(shí)間短，現(xiàn)眼瞼腫脹，出現(xiàn)呼吸道癥狀。產(chǎn)蛋雞產(chǎn)蛋量可下降20%～30%，部分蛋殼尖端畸形異常。主要有病原分離鑒定、血清學(xué)檢測和分子生物學(xué)檢測。其中血清學(xué)檢測方面包括平板凝集試驗(yàn)應(yīng)對雞舍、籠具及用具進(jìn)行清洗、消毒，清理完畢后空舍至少2周。保證雞舍的適宜溫度，飼養(yǎng)密度要器具要定時(shí)清洗、消毒，防止被雞糞污染。采用自由飲水。泰妙菌素:有效物質(zhì)含量按每100g本品兌水500kg～1000kg或拌料500kg，連用3d～5d。泰樂菌素:有效物質(zhì)含量按混飲500mg/L，連用5d～7d；皮下或肌肉注射，按體重計(jì)，5mg/kg～13mg/kg，每天2次，連用3d～5d。恩諾沙星:有效物質(zhì)含量按皮下或肌肉注射，按體重計(jì)，2.5mg/kg～5mg/kg，每天2次，連用2d～3d；或按0.015%～0.02%濃度拌料，連用3d～5d。多西環(huán)素(強(qiáng)力霉素):有效物質(zhì)含量按每100g本品兌水500kg～1000kg或拌料200kg～500kg，連用3d～5d。鹽酸大觀-林可霉素(比率為2:1)：有效物質(zhì)含量按500mg/L～800mg/L，混飲，連用5d～7d。祖代禽