抗原抗體反應的類型之金免疫技術（免疫學檢驗技術課件）

膠體金和免疫金的制備金免疫技術金免疫技術：是固相膜免疫分析技術的一種，是以膠體金作為標記物，標記已知抗原或抗體，用于檢測未知抗體或抗原的一種檢測方法。特點：簡便、快速、安全、應用廣泛、適合急診；本法靈敏度不及酶標法，不能準確定量，只能作為定性或半定量試驗。膠體金和免疫金的制備膠體金和免疫金的制備膠體金1、又稱金溶膠，為金鹽還原后的金顆粒懸液。2、膠體金結構：一個基礎金核（原子金Au）及包圍在外的雙離子層構成，內層負電荷（AuCL2-），外層正電荷（H+）。膠體金和免疫金的制備膠體金3、膠體金顆粒大小為1-100nm，大小不同呈色不同。（2-5nm為橙黃色、10-20nm為酒紅色、30-80nm為紫紅色）4、對電解質敏感，某些蛋白質等大分子物質有保護膠體金、加強其穩(wěn)定性的作用。5、引起膠體聚沉的主要因素包括電解質、溫度和濃度等。提問生活中的金子有哪些顏色？下圖中的膠體金是紫紅色的，你知道它是多少nm大小的顆粒嗎？1）2-5nm膠體金顆粒→橙黃色2）10-20nm膠體金顆?！萍t色3）30-80nm膠體金顆?！霞t色膠體金和免疫金的制備提問為什么蛋白質分子能增加膠體金的穩(wěn)定性？蛋白質分子是膠體，帶電，可抵抗一定的電解質作用。膠體金和免疫金的制備膠體金和免疫金的制備膠體金

制備1、制備原理：膠體金是氯金酸在還原劑（如檸檬酸鈉、鞣酸等）作用下聚合成的一定大小的金屬顆粒，進而形成帶負電荷的疏水膠溶液。依據還原劑的類型和作用的強弱，可制備0.8-150nm大小不等的膠體金。2、制備方法：目前最常用的方法是使用檸檬酸三鈉做還原劑的制備方法。膠體金和免疫金的制備膠體金

制備1、注意事項：氯金酸干燥避光保存；使用氯金酸時避免接觸金屬器具；制備膠體金時使用高質量去離子水；玻璃容器使用硅化玻璃；膠體金制備20天內進行標記。2、鑒定：指標包括粒徑大小、均一程度、有無顆粒凝集等。良好的膠體金清亮透明。金顆粒優(yōu)質金顆粒劣質金顆粒膠體金和免疫金的制備膠體金和免疫金的制備免疫金

制備1、制備原理：免疫金是抗原或抗體與膠體金的結合物質。目前認為，這種結合是蛋白質表面攜帶的正電荷與膠體金顆粒表面的負電荷借靜電吸附而形成的牢固結合。2、制備過程：蛋白溶液逐滴加入膠體金溶液中，同時用磁力攪拌，數分鐘后加入穩(wěn)定劑。3、保存：免疫金溶液使用稀釋液調制成工作濃度后保存。金標抗體的制備1、堿性溶液中金顆粒帶負電。2、金顆粒上的負電與抗體上的正電荷結合（靜電結合）形成金標抗體。膠體金和免疫金的制備膠體金免疫層析技術提問膠體金免疫層析技術ELISA中用于檢測抗原的雙抗體夾心法和競爭法的原理模式圖怎樣繪制？左圖：雙抗體夾心法右圖：競爭法膠體金免疫層析技術金免疫層析試驗（以雙抗體夾心法檢測尿液中的HCG為例）1、標本：待測尿液2、試劑盒組成：試紙條帶微視頻：尿HCG檢測膠體金免疫層析技術金免疫層析試驗（以雙抗體夾心法檢測尿液中的HCG為例）3、操作步驟：將試紙條插入尿液中2～5s。（不超過“最大線”）4、結果觀察：上方出現一條紅色線條為陰性；出現兩條紅色線條為陽性；上方不出現線條，不論下方是否出現線條為失效。（在試劑盒規(guī)定時間內）膠體金免疫層析技術金免疫層析試驗結果分析膠體金免疫層析技術金免疫層析試驗原理將各種反應試劑分點固定在試紙條上，檢測標本滴加在試紙條的一端，通過層析作用使樣品在層析材料上泳動，樣品中的待測物與試紙條上的試劑發(fā)生特異性結合反應，形成的復合物被富集或固定在層析條上的特定區(qū)域（檢測線），無關物則越過該區(qū)域而被分離，通過膠體金的呈色條帶判讀實驗結果。膠體金免疫層析技術金免疫層析試驗原理AGTCBA、B兩端：吸水材料；G處：膠體金結合物；T處：已知的抗體；C處：抗免疫金抗體，T、C點物質常以直線的形式包被在膜上。動畫：免疫層析試驗雙抗體夾心法測尿HCG的原理膠體金免疫層析技術金免疫層析試驗原理微視頻：丙型肝炎病毒抗體檢測（膠體金法）膠體金免疫層析技術金免疫層析試驗類型（1）雙抗體夾心法測抗原（2）競爭法測抗原膠體金免疫滲濾技術提問膠體金免疫滲濾技術ELISA中最常用于檢測抗原和抗體的類型分別是哪一種？如果將標記物換成膠體金，原理模式圖該怎樣繪制呢？左圖：雙抗體夾心法右圖：間接法膠體金免疫滲濾技術金免疫滲濾試驗（以間接法檢測血清中抗核抗體（ANA）為例）1、標本：待測血清2、試劑盒組成：膠體金反應板、膠體金標記抗體、洗滌液微視頻：抗核抗體（ANA）IgG檢測（膠體金法）膠體金免疫滲濾技術金免疫滲濾試驗（以間接法檢測血清中抗核抗體（ANA）為例）3、操作步驟：1）小孔內滴加待測血清1-2d，待完全滲入；2）小孔內滴加金標抗體1-2d，待完全滲入；3）小孔內滴加洗滌液2-3d，待完全滲入。4、結果觀察：出現紅色斑點為陽性（+），不出現為陰性（-）。膠體金免疫滲濾技術金免疫滲濾試驗（以間接法檢測血清中抗核抗體（ANA）為例）待測抗核抗體（ANA）：陰性膠體金免疫滲濾技術金免疫滲濾試驗原理將Ag或Ab點加在NC上，依次滴加標本、金標記物和洗滌液，液體很快被吸水墊料吸收，在液體下滲的過程中，抗原、抗體被膜上的抗體或抗原捕獲，起到親和濃縮的作用，操作簡單、快速。膠體金