免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)-沉淀反應(yīng)

知識(shí)目標(biāo)1.掌握：沉淀反應(yīng)的概念及特點(diǎn)；免疫電泳技術(shù)的種類(lèi)和原理（重點(diǎn)）。2.熟悉：凝膠內(nèi)沉淀試驗(yàn)的種類(lèi)及原理，免疫電泳的應(yīng)用（重難點(diǎn)）。3.了解：液相沉淀試驗(yàn)的原理；各種沉淀試驗(yàn)的技術(shù)要點(diǎn)和影響因素；沉淀反應(yīng)的臨床應(yīng)用。能力目標(biāo)掌握：凝膠內(nèi)沉淀試驗(yàn)和免疫電泳技術(shù)的操作方法熟悉：雙擴(kuò)和免疫電泳技術(shù)的結(jié)果判讀和臨床應(yīng)用思政-素質(zhì)目標(biāo)愛(ài)崗敬業(yè)、責(zé)任心、細(xì)心、耐心、質(zhì)控和生物安全意識(shí)、免疫學(xué)思維教學(xué)目標(biāo)沉淀反應(yīng)的概念及特點(diǎn)。液相內(nèi)沉淀試驗(yàn)的原理及種類(lèi)。凝膠內(nèi)沉淀試驗(yàn)的原理及種類(lèi)。雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)的應(yīng)用。凝膠免疫電泳技術(shù)的種類(lèi)及原理。沉淀反應(yīng)方法的技術(shù)要點(diǎn)、影響因素及臨床應(yīng)用。本章要點(diǎn)沉淀反應(yīng)概述一液相內(nèi)沉淀反應(yīng)二凝膠內(nèi)沉淀反應(yīng)三凝膠免疫電泳技術(shù)四沉淀反應(yīng)的臨床應(yīng)用五目錄沉淀反應(yīng)（precipitation)

（重點(diǎn)）

可溶性抗原與相應(yīng)抗體發(fā)生特異性結(jié)合，在適當(dāng)條件下而出現(xiàn)的肉眼可見(jiàn)的沉淀現(xiàn)象。

蛋白質(zhì)、多糖、血清、類(lèi)脂等可溶性物質(zhì)沉淀線或沉淀環(huán)沉淀反應(yīng)概述一2.免疫沉淀試驗(yàn)的特點(diǎn)1.階段性第一階段：抗原抗體特異性結(jié)合，形成不可見(jiàn)的可溶性免疫復(fù)合物。第二階段：形成可見(jiàn)的免疫復(fù)合物。2.特異性抗原與相應(yīng)抗體發(fā)生特異性結(jié)合3.抗原性質(zhì)參與免疫沉淀試驗(yàn)的抗原必須為可溶性抗原4.抗體的選擇多克隆抗體與抗原多個(gè)表位結(jié)合，易形成沉淀，故非常適用于免疫沉淀試驗(yàn)；單克隆抗體只與抗原一個(gè)表位結(jié)合，不易形成交聯(lián)。若抗原表面有兩個(gè)以上相同的表位，單克隆抗體也可用于免疫沉淀試驗(yàn)。3.沉淀反應(yīng)分類(lèi)液相內(nèi)沉淀試驗(yàn)?zāi)z內(nèi)沉淀試驗(yàn)

凝膠免疫電泳技術(shù)

單向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)環(huán)狀沉淀反應(yīng)絮狀沉淀反應(yīng)免疫比濁度分析對(duì)流電泳技術(shù)免疫電泳技術(shù)火箭電泳技術(shù)免疫固定電泳技術(shù)環(huán)狀沉淀試驗(yàn)：抗原溶液疊加在細(xì)玻璃管內(nèi)的抗體液面上，二者在兩液面交界處形成白色沉淀環(huán)。絮狀沉淀試驗(yàn)：可溶性抗原、抗體在液相中特異性結(jié)合，形成絮狀沉淀物。免疫比濁度分析：透射、散射和免疫膠乳比濁法，應(yīng)用于自動(dòng)化。液相內(nèi)沉淀反應(yīng)二指可溶性抗原、抗體在含有電解質(zhì)的凝膠內(nèi)自由擴(kuò)散形成濃度梯度，二者在比例合適的位置形成肉眼可見(jiàn)的沉淀線或沉淀環(huán)。根據(jù)抗原與抗體反應(yīng)的方式和特性，可分為單向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)和雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)。凝膠內(nèi)沉淀反應(yīng)三

抗體與待測(cè)的抗原,在兩者比例合適的部位結(jié)合形成沉淀環(huán)。環(huán)的大小與抗原的濃度成正相關(guān)。本法穩(wěn)定、簡(jiǎn)便、無(wú)需儀器設(shè)備。重復(fù)性和線性均可信，但靈敏度稍差、耗時(shí)長(zhǎng)、影響因素多。一、單向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)（平板法）單向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)將抗原抗體分別加在瓊脂糖凝膠不同的對(duì)應(yīng)孔中，兩者在凝膠中自由擴(kuò)散，在比例合適處形成白色沉淀線。沉淀線的位置、形狀以及對(duì)比關(guān)系，可進(jìn)行定性分析，如抗原或抗體的存在與否、相對(duì)含量估計(jì)、相對(duì)分子量分析和性質(zhì)分析。本法操作簡(jiǎn)單、特異性高、結(jié)果可靠、成本低廉，但靈敏度低，耗時(shí)長(zhǎng)，不能精確定量。二、雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)（平板法）1.抗原或抗體的定性分析。2.抗原、抗體的相對(duì)分子量和相對(duì)濃度的估計(jì)。

雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)應(yīng)用A：Ag、Ab濃度及分子量近似；B：Ag、Ab濃度近似，分子量Ag＜Ab；C：Ag、Ab濃度近似，分子量Ag＞Ab；D：濃度Ag＞Ab，分子量近似；E：濃度Ag＞Ab，分子量Ag＜Ab；F：濃度Ag＜Ab，分子量Ag＞Ab抗原完全相同抗原部分相同抗原完全不同3.抗原性質(zhì)的分析4.抗體效價(jià)的測(cè)定5.抗原或抗體純度的鑒定電泳分析與沉淀反應(yīng)的結(jié)合產(chǎn)物，即可溶性抗原和抗體在直流電場(chǎng)的作用下，在凝膠內(nèi)加速定向泳動(dòng)，彼此相遇而特異性結(jié)合，在比例合適處形成可見(jiàn)的沉淀物。該技術(shù)提高了沉淀反應(yīng)的速度和敏感度，廣泛用于臨床實(shí)驗(yàn)診斷和科學(xué)研究。凝膠免疫電泳技術(shù)四無(wú)沉淀線出現(xiàn)表明無(wú)相應(yīng)的抗原。沉淀線位于抗原抗體孔中間，說(shuō)明兩者比例較適合。沉淀線偏向抗原孔一方，表示抗體濃度＞抗原，反之，則是抗體濃度＜抗原濃度。一、對(duì)流免疫電泳技術(shù)單向免疫擴(kuò)散和電泳的定量檢測(cè)技術(shù)。固定抗體不移動(dòng)，抗原向正極泳動(dòng)，隨著抗原量減少，基底區(qū)越來(lái)越窄，形成的沉淀線逐漸變窄，形成一個(gè)如火箭的沉淀峰，峰的高度與抗原量呈正相關(guān)?；鸺庖唠娪緢D①②③④為標(biāo)準(zhǔn)抗原；⑤⑥為標(biāo)本-+二、火箭免疫電泳技術(shù)三、免疫電泳技術(shù)SPGAMκ

λSPGAMκ

λSPGAMκ

λ四、免疫固定電泳技術(shù)沉淀反應(yīng)的臨床應(yīng)用五沉淀試驗(yàn)的臨床應(yīng)用1.經(jīng)典的沉淀反應(yīng)均可用于抗原抗體性質(zhì)、效價(jià)、純度及相對(duì)分子質(zhì)量和濃度的分析。2.免疫濁度法目前主要用于蛋白質(zhì)的測(cè)定，如血液中的免疫球蛋白IgG、IgA、IgM、κ輕鏈、λ輕鏈，補(bǔ)體C3、C4，血漿蛋白，C-反應(yīng)蛋白，類(lèi)風(fēng)濕因子等；尿及腦脊液微量蛋白和半抗原（激素、毒物、治療性藥物等）；還可用于血漿藥物濃度的測(cè)定。

3.對(duì)流免疫電泳與火箭免疫電泳因存在電滲作用，目前已不推薦使用。4.免疫電泳擴(kuò)散時(shí)間長(zhǎng)，影響因素多，結(jié)果較難分析。5.免疫固定電泳分辨力強(qiáng)，敏感度高，結(jié)果易于分析，現(xiàn)常用于鑒定遷移率相近的蛋白和M蛋白，免疫球蛋白輕鏈，尿液、腦脊液等微量蛋白，游離輕鏈，補(bǔ)體裂解產(chǎn)物等，臨床最常用于M蛋白的鑒定與分型，并已列入臨床實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)檢測(cè)工作。1.主要用于血液、體液中蛋白質(zhì)的測(cè)定。2.優(yōu)點(diǎn)：穩(wěn)定性好，敏感度高，精確度高，簡(jiǎn)便快速，易于自動(dòng)化，無(wú)放射性核素污染，適合大批量標(biāo)本檢測(cè)。

3.對(duì)流免疫電泳與火箭免疫電泳技術(shù)由于電滲的緣故已不推薦使用。4.免疫電泳擴(kuò)散時(shí)間長(zhǎng)，影響因素多，結(jié)果不易分析。5.免疫固定電泳分辨力強(qiáng)，敏感度高，結(jié)果易于分析，常用于M蛋白的鑒定與分型。沉淀反應(yīng)在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用小結(jié)沉淀反應(yīng)是指可溶性抗原與相應(yīng)抗體在適當(dāng)條件下發(fā)生特異性結(jié)合而出現(xiàn)可見(jiàn)的沉淀現(xiàn)象。根據(jù)反應(yīng)介質(zhì)和檢測(cè)方法的不同，沉淀反應(yīng)可分為液相內(nèi)沉淀試驗(yàn)、凝膠內(nèi)沉淀試驗(yàn)和凝膠免疫電泳技術(shù)。凝集反應(yīng)與沉淀反應(yīng)的比較比較點(diǎn)凝集反應(yīng)沉淀反應(yīng)抗原性質(zhì)顆粒性/可溶性抗原可溶性抗原反應(yīng)用載體RBC、膠乳、活性炭瓊脂、醋酸纖維膜反應(yīng)時(shí)間幾分鐘到十幾分鐘數(shù)小時(shí)到數(shù)天稀釋對(duì)象多稀釋抗體多稀釋抗原陽(yáng)性結(jié)果凝集沉淀線/沉淀峰敏感性高低知識(shí)目標(biāo)1.掌握：沉淀反應(yīng)的概念及特點(diǎn)；免疫電泳技術(shù)的種類(lèi)和原理（重點(diǎn)）。2.熟悉：凝膠內(nèi)沉淀試驗(yàn)的種類(lèi)及原理，免疫電泳的應(yīng)用（重難點(diǎn)）。3.了解：液相沉淀試驗(yàn)的原理；各種沉淀試驗(yàn)的技術(shù)要點(diǎn)和影響因素；沉淀反應(yīng)的臨床應(yīng)用。能力目標(biāo)掌握：凝膠內(nèi)沉淀試驗(yàn)和免疫電泳技術(shù)的操作方法熟悉：雙擴(kuò)和免疫電泳技術(shù)的結(jié)果判讀和臨床應(yīng)用思政-素質(zhì)目標(biāo)愛(ài)崗敬業(yè)、責(zé)任心、細(xì)心、耐心、質(zhì)控和生物安全意識(shí)、免疫學(xué)思維教學(xué)目標(biāo)沉淀反應(yīng)的概念及特點(diǎn)。液相內(nèi)沉淀試驗(yàn)的原理及種類(lèi)。凝膠內(nèi)沉淀試驗(yàn)的原理及種類(lèi)。雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)的應(yīng)用。凝膠免疫電泳技術(shù)的種類(lèi)及原理。沉淀反應(yīng)方法的技術(shù)要點(diǎn)、影響因素及臨床應(yīng)用。本章要點(diǎn)沉淀反應(yīng)概述一液相內(nèi)沉淀反應(yīng)二凝膠內(nèi)沉淀反應(yīng)三凝膠免疫電泳技術(shù)四沉淀反應(yīng)的臨床應(yīng)用五目錄環(huán)狀沉淀試驗(yàn)：抗原溶液疊加在細(xì)玻璃管內(nèi)的抗體液面上，二者在兩液面交界處形成白色沉淀環(huán)。絮狀沉淀試驗(yàn)：可溶性抗原、抗體在液相中特異性結(jié)合，形成絮狀沉淀物。免疫比濁度分析：透射、散射和免疫膠乳比濁法，應(yīng)用于自動(dòng)化。液相內(nèi)沉淀反應(yīng)二第一節(jié)液相內(nèi)沉淀試驗(yàn)環(huán)狀沉淀試驗(yàn)絮狀沉淀試驗(yàn)免疫比濁度分析抗原溶液疊加在細(xì)玻璃管內(nèi)的抗體液面上，二者在兩液面交界處形成白色沉淀環(huán)?？扇苄钥乖⒖贵w在液相中特異性結(jié)合，形成絮狀沉淀物。透射、散射和免疫膠乳比濁法該法受抗原抗體比例影響非常顯著，常用于測(cè)定抗原抗體反應(yīng)最適比例。標(biāo)本需要量大、靈敏度低、分辨力差、只能定性，臨床幾乎不用。該法最大優(yōu)點(diǎn)穩(wěn)定性好、敏感度高、精確度高、簡(jiǎn)便快速、易于自動(dòng)化。絮狀沉淀試驗(yàn)是將抗原與相應(yīng)抗體混合，在電解質(zhì)存在的條件下，抗原抗體結(jié)合形成肉眼可見(jiàn)的絮狀沉淀物。方法受抗原抗體比例的影響非常明顯應(yīng)用于測(cè)定抗原抗體反應(yīng)的最適比例三種類(lèi)型：①抗原稀釋法：抗原最適比例②抗體稀釋法：抗體最適比例③方陣滴定法：抗原抗體最適比例絮狀沉淀試驗(yàn)1:21:41:81:161:321:641:128各管抗原倍比稀釋加入抗血清各管抗體量相同振搖混勻、37℃孵育沉淀量不同出現(xiàn)沉淀量最多的管為最適比例管。輕搖沉示意圖淀AgAbAg知識(shí)目標(biāo)1.掌握：沉淀反應(yīng)的概念及特點(diǎn)；免疫電泳技術(shù)的種類(lèi)和原理（重點(diǎn)）。2.熟悉：凝膠內(nèi)沉淀試驗(yàn)的種類(lèi)及原理，免疫電泳的應(yīng)用（重難點(diǎn)）。3.了解：液相沉淀試驗(yàn)的原理；各種沉淀試驗(yàn)的技術(shù)要點(diǎn)和影響因素；沉淀反應(yīng)的臨床應(yīng)用。能力目標(biāo)掌握：凝膠內(nèi)沉淀試驗(yàn)和免疫電泳技術(shù)的操作方法熟悉：雙擴(kuò)和免疫電泳技術(shù)的結(jié)果判讀和臨床應(yīng)用思政-素質(zhì)目標(biāo)愛(ài)崗敬業(yè)、責(zé)任心、細(xì)心、耐心、質(zhì)控和生物安全意識(shí)、免疫學(xué)思維教學(xué)目標(biāo)沉淀反應(yīng)的概念及特點(diǎn)。液相內(nèi)沉淀試驗(yàn)的原理及種類(lèi)。凝膠內(nèi)沉淀試驗(yàn)的原理及種類(lèi)。雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)的應(yīng)用。凝膠免疫電泳技術(shù)的種類(lèi)及原理。沉淀反應(yīng)方法的技術(shù)要點(diǎn)、影響因素及臨床應(yīng)用。本章要點(diǎn)沉淀反應(yīng)概述一液相內(nèi)沉淀反應(yīng)二凝膠內(nèi)沉淀反應(yīng)三凝膠免疫電泳技術(shù)四沉淀反應(yīng)的臨床應(yīng)用五目錄環(huán)狀沉淀試驗(yàn)：抗原溶液疊加在細(xì)玻璃管內(nèi)的抗體液面上，二者在兩液面交界處形成白色沉淀環(huán)。絮狀沉淀試驗(yàn)：可溶性抗原、抗體在液相中特異性結(jié)合，形成絮狀沉淀物。免疫比濁度分析：透射、散射和免疫膠乳比濁法，應(yīng)用于自動(dòng)化。液相內(nèi)沉淀反應(yīng)二第一節(jié)液相內(nèi)沉淀試驗(yàn)環(huán)狀沉淀試驗(yàn)絮狀沉淀試驗(yàn)免疫比濁度分析抗原溶液疊加在細(xì)玻璃管內(nèi)的抗體液面上，二者在兩液面交界處形成白色沉淀環(huán)?？扇苄钥乖⒖贵w在液相中特異性結(jié)合，形成絮狀沉淀物。透射、散射和免疫膠乳比濁法該法受抗原抗體比例影響非常顯著，常用于測(cè)定抗原抗體反應(yīng)最適比例。標(biāo)本需要量大、靈敏度低、分辨力差、只能定性，臨床幾乎不用。該法最大優(yōu)點(diǎn)穩(wěn)定性好、敏感度高、精確度高、簡(jiǎn)便快速、易于自動(dòng)化。絮狀沉淀試驗(yàn)是將抗原與相應(yīng)抗體混合，在電解質(zhì)存在的條件下，抗原抗體結(jié)合形成肉眼可見(jiàn)的絮狀沉淀物。方法受抗原抗體比例的影響非常明顯應(yīng)用于測(cè)定抗原抗體反應(yīng)的最適比例三種類(lèi)型：①抗原稀釋法：抗原最適比例②抗體稀釋法：抗體最適比例③方陣滴定法：抗原抗體最適比例絮狀沉淀試驗(yàn)1:21:41:81:161:321:641:128各管抗原倍比稀釋加入抗血清各管抗體量相同振搖混勻、37℃孵育沉淀量不同出現(xiàn)沉淀量最多的管為最適比例管。輕搖沉示意圖淀AgAbAg知識(shí)目標(biāo)1.掌握：沉淀反應(yīng)的概念及特點(diǎn)；免疫電泳技術(shù)的種類(lèi)和原理（重點(diǎn)）。2.熟悉：凝膠內(nèi)沉淀試驗(yàn)的種類(lèi)及原理，免疫電泳的應(yīng)用（重難點(diǎn)）。3.了解：液相沉淀試驗(yàn)的原理；各種沉淀試驗(yàn)的技術(shù)要點(diǎn)和影響因素；沉淀反應(yīng)的臨床應(yīng)用。能力目標(biāo)掌握：凝膠內(nèi)沉淀試驗(yàn)和免疫電泳技術(shù)的操作方法熟悉：雙擴(kuò)和免疫電泳技術(shù)的結(jié)果判讀和臨床應(yīng)用思政-素質(zhì)目標(biāo)愛(ài)崗敬業(yè)、責(zé)任心、細(xì)心、耐心、質(zhì)控和生物安全意識(shí)、免疫學(xué)思維教學(xué)目標(biāo)沉淀反應(yīng)的概念及特點(diǎn)。液相內(nèi)沉淀試驗(yàn)的原理及種類(lèi)。凝膠內(nèi)沉淀試驗(yàn)的原理及種類(lèi)。雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)的應(yīng)用。凝膠免疫電泳技術(shù)的種類(lèi)及原理。沉淀反應(yīng)方法的技術(shù)要點(diǎn)、影響因素及臨床應(yīng)用。本章要點(diǎn)沉淀反應(yīng)概述一液相內(nèi)沉淀反應(yīng)二凝膠內(nèi)沉淀反應(yīng)三凝膠免疫電泳技術(shù)四沉淀反應(yīng)的臨床應(yīng)用五目錄指可溶性抗原、抗體在含有電解質(zhì)的凝膠內(nèi)自由擴(kuò)散形成濃度梯度，二者在比例合適的位置形成肉眼可見(jiàn)的沉淀線或沉淀環(huán)。根據(jù)抗原與抗體反應(yīng)的方式和特性，可分為單向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)和雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)。凝膠內(nèi)沉淀反應(yīng)三根據(jù)試驗(yàn)形式可分為試管法和平板法兩種，試管法因沉淀環(huán)不易觀察及定量，目前較少應(yīng)用。

抗體與待測(cè)的抗原,在兩者比例合適的部位結(jié)合形成沉淀環(huán)。環(huán)的大小與抗原的濃度成正相關(guān)。本法穩(wěn)定、簡(jiǎn)便、無(wú)需儀器設(shè)備。重復(fù)性和線性均可信，但靈敏度稍差、耗時(shí)長(zhǎng)、影響因素多。一、單向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)（平板法）沉淀環(huán)抗原抗體+瓊脂傾注平板

打孔

加樣

放置37℃，24～48h觀察沉淀環(huán)2.單向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)（平板法）單向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)結(jié)果：上排為5個(gè)不同濃度的參考品；下排為患者血清，下排右2為異常病理血清3.方法評(píng)價(jià)：穩(wěn)定、簡(jiǎn)便、無(wú)需儀器設(shè)備。重復(fù)性和線性均可信，但靈敏度稍差、耗時(shí)長(zhǎng)、影響因素多。4.臨床應(yīng)用：用于檢測(cè)血清中Ig含量；單個(gè)補(bǔ)體成分含量

影響因素：－抗體質(zhì)量－標(biāo)準(zhǔn)曲線，質(zhì)控血清－結(jié)果與真實(shí)含量不符－雙環(huán)現(xiàn)象（不同擴(kuò)散率抗原性相同的兩個(gè)組分）

上排為5個(gè)不同濃度的參考品；下排為患者血清，下排右2為異常病理血清將抗原抗體分別加在瓊脂糖凝膠不同的對(duì)應(yīng)孔中，兩者在凝膠中自由擴(kuò)散，在比例合適處形成白色沉淀線。沉淀線的位置、形狀以及對(duì)比關(guān)系，可進(jìn)行定性分析，如抗原或抗體的存在與否、相對(duì)含量估計(jì)、相對(duì)分子量分析和性質(zhì)分析。本法操作簡(jiǎn)單、特異性高、結(jié)果可靠、成本低廉，但靈敏度低，耗時(shí)長(zhǎng)，不能精確定量。二、雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)（平板法）1.抗原或抗體的定性分析。2.抗原、抗體的相對(duì)分子量和相對(duì)濃度的估計(jì)。

雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)應(yīng)用A：Ag、Ab濃度及分子量近似；B：Ag、Ab濃度近似，分子量Ag＜Ab；C：Ag、Ab濃度近似，分子量Ag＞Ab；D：濃度Ag＞Ab，分子量近似；E：濃度Ag＞Ab，分子量Ag＜Ab；F：濃度Ag＜Ab，分子量Ag＞Ab抗原完全相同抗原部分相同抗原完全不同3.抗原性質(zhì)的分析4.抗體效價(jià)的測(cè)定5.抗原或抗體純度的鑒定知識(shí)目標(biāo)1.掌握：沉淀反應(yīng)的概念及特點(diǎn)；免疫電泳技術(shù)的種類(lèi)和原理（重點(diǎn)）。2.熟悉：凝膠內(nèi)沉淀試驗(yàn)的種類(lèi)及原理，免疫電泳的應(yīng)用（重難點(diǎn)）。3.了解：液相沉淀試驗(yàn)的原理；各種沉淀試驗(yàn)的技術(shù)要點(diǎn)和影響因素；沉淀反應(yīng)的臨床應(yīng)用。能力目標(biāo)掌握：凝膠內(nèi)沉淀試驗(yàn)和免疫電泳技術(shù)的操作方法熟悉：雙擴(kuò)和免疫電泳技術(shù)的結(jié)果判讀和臨床應(yīng)用思政-素質(zhì)目標(biāo)愛(ài)崗敬業(yè)、責(zé)任心、細(xì)心、耐心、質(zhì)控和生物安全意識(shí)、免疫學(xué)思維教學(xué)目標(biāo)沉淀反應(yīng)的概念及特點(diǎn)。液相內(nèi)沉淀試驗(yàn)的原理及種類(lèi)。凝膠內(nèi)沉淀試驗(yàn)的原理及種類(lèi)。雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)的應(yīng)用。凝膠免疫電泳技術(shù)的種類(lèi)及原理。沉淀反應(yīng)方法的技術(shù)要點(diǎn)、影響因素及臨床應(yīng)用。本章要點(diǎn)沉淀反應(yīng)概述一液相內(nèi)沉淀反應(yīng)二凝膠內(nèi)沉淀反應(yīng)三凝膠免疫電泳技術(shù)四沉淀反應(yīng)的臨床應(yīng)用五目錄電泳分析與沉淀反應(yīng)的結(jié)合產(chǎn)物，即可溶性抗原和抗體在直流電場(chǎng)的作用下，在凝膠內(nèi)加速定向泳動(dòng)，彼此相遇而特異性結(jié)合，在比例合適處形成可見(jiàn)的沉淀物。該技術(shù)提高了沉淀反應(yīng)的速度和敏感度，廣泛用于臨床實(shí)驗(yàn)診斷和科學(xué)研究。凝膠免疫電泳技術(shù)四無(wú)沉淀線出現(xiàn)表明無(wú)相應(yīng)的抗原。沉淀線位于抗原抗體孔中間，說(shuō)明兩者比例較適合。沉淀線偏向抗原孔一方，表示抗體濃度＞抗原，反之，則是抗體濃度＜抗原濃度。一、對(duì)流免疫電泳技術(shù)單向免疫擴(kuò)散和電泳的定量檢測(cè)技術(shù)。固定抗體不移動(dòng)，抗原向正極泳動(dòng)，隨著抗原量減少，基底區(qū)越來(lái)越窄，形成的沉淀線逐漸變窄，形成一個(gè)如火箭的沉淀峰，峰的高度與抗原量呈正相關(guān)。火箭免疫電泳圖①②③④為標(biāo)準(zhǔn)抗原；⑤⑥為標(biāo)本-+二、火箭免疫電泳技術(shù)技術(shù)要點(diǎn)：

1.2%巴比妥瓊脂糖約55℃，加入適量抗血清，混勻后制板，打孔，孔內(nèi)加待測(cè)樣品，樣品孔放負(fù)極側(cè)，6h后觀察瓊脂板上沉淀峰，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出待測(cè)樣品濃度。影響因素：

瓊脂（無(wú)電滲或電滲很小的）影響火箭形狀不規(guī)則;

電泳終點(diǎn)時(shí)間的確定;

標(biāo)本數(shù)量多時(shí)應(yīng)先通電后加樣,防止寬底峰形;

IgG定量時(shí)，可用甲醛與IgG上的氨基結(jié)合（甲?；?，抵消了電滲作用。三、免疫電泳技術(shù)技術(shù)要點(diǎn)：制備瓊脂板，打孔，加樣于孔內(nèi)，電泳2～3mA/cm，0.5～1h后，槽內(nèi)加入相應(yīng)抗血清作雙向擴(kuò)散。影響因素抗原抗體比例不當(dāng),需測(cè)抗原抗體最適比;抗血清的抗體譜，混合抗血清的使用;電泳條件直接影響分辨率。應(yīng)用

純化抗原和抗體成分的分析及正常和異常免疫球蛋的識(shí)別與鑒定SPGAMκ

λSPGAMκ

λSPGAMκ

λ四、免疫固定電泳技術(shù)分辨率強(qiáng)，敏感度高，操作周期短，僅需數(shù)小時(shí)，結(jié)果易于分析。應(yīng)用最常用于M蛋白的鑒定與分型，也用于尿中本周氏蛋白質(zhì)的檢測(cè)與κ、λ分型，腦脊液中寡克隆蛋白的檢測(cè)與分型。優(yōu)點(diǎn)免疫固定電泳知識(shí)目標(biāo)1.掌握：沉淀反應(yīng)的概念及特點(diǎn)；免疫電泳技術(shù)的種類(lèi)和原理（重點(diǎn)）。2.熟悉：凝膠內(nèi)沉淀試驗(yàn)的種類(lèi)及原理，免疫電泳的應(yīng)用（重難點(diǎn)）。3.了解：液相沉淀試驗(yàn)的原理；各種沉淀試驗(yàn)的技術(shù)要點(diǎn)和影響因素；沉淀反應(yīng)的臨床應(yīng)用。能力目標(biāo)掌握：凝膠內(nèi)沉淀試驗(yàn)和免疫電泳技術(shù)的操作方法熟悉：雙擴(kuò)和免疫電泳技術(shù)的結(jié)果判讀和臨床應(yīng)用思政-素質(zhì)目標(biāo)愛(ài)崗敬業(yè)、責(zé)任心、細(xì)心、耐心、質(zhì)控和生物安全意識(shí)、免疫學(xué)思維教學(xué)目標(biāo)沉淀反應(yīng)的概念及特點(diǎn)。液相內(nèi)沉淀試驗(yàn)的原理及種類(lèi)。凝膠內(nèi)沉淀試驗(yàn)的原理及種類(lèi)。雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)的應(yīng)用。凝膠免疫電泳技術(shù)的種類(lèi)及原理。沉淀反應(yīng)方法的技術(shù)要點(diǎn)、影響因素及臨床應(yīng)用。本章要點(diǎn)沉淀反應(yīng)概述一