三特異性抗體在腫瘤免疫治療中的研究進(jìn)展

ChineseBulletinofLifeSciences(廈門大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院，國(guó)家傳染病診斷試抗原結(jié)合位點(diǎn)的創(chuàng)新療法。與單克隆抗體和雙特異性抗體相比，三特異性抗體可增加結(jié)合特異性，降低脫靶毒性，在腫瘤免疫治療領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。本文主要介紹了三特異性抗體的發(fā)展進(jìn)程、主要構(gòu)建形式及其作用機(jī)制，總結(jié)了不同靶點(diǎn)組合的代表性藥物的最新研究進(jìn)展，并討論了其存在的挑戰(zhàn)和未來發(fā)ResearchprogressoftrispecificantibodiXULin,NINGWen-Jing,LIUXue,LUOWen-Xin*(NationalInstituteofDiagnosticsandVaccineDevelopmentinInfectionsDiseases,SchoolofPublicHeAbstract:Trispecificantumorcellsorimmuneeffectorcellssimultaneously.Comparedwithmonoclonalantibodiesandbispecificinthefieldoftumorimmunotherapy.Inthispaper,weintroducethedevelopmentprocessandmechanismofactionofTsAbs.Furthermore,wesummarizethelatestresearchprogressonrepresentativedrugswithdifferenttargetcombinations.Finally,wediscusaimingtoprovidenewideasforthedevelopmentoftrispecificantibodydrugs.Keywords:trispecificantibodies;cancerimmunotherapy;CD3因其特異性強(qiáng)、靶向性高和毒副作用小等特點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于治療各類重大疾病，包括腫瘤、感染性疾病、自身性免疫疾病等，成為藥物研發(fā)市場(chǎng)的主力軍。在腫瘤治療領(lǐng)域，由于免疫抑制性微環(huán)境及腫瘤免疫逃逸機(jī)制的復(fù)雜性，這種針對(duì)單一靶點(diǎn)的藥物往往難以達(dá)到理想的治療效果，臨床上表現(xiàn)為響應(yīng)率不高，獲益群體比較有限。因此，雙特異性抗體(bispecificantibodies,BsAbs)藥物應(yīng)運(yùn)而生，為治療提供了新途徑。與單克隆抗體相比，雙特異性抗體具有雙重功能和高度特異性，被視為抗體工程領(lǐng)域的“二代抗體”[1]。雙特異性抗體能與兩種抗原表位特異性結(jié)合或橋接并激活免疫細(xì)胞[2]，達(dá)到兩藥聯(lián)合治療的效果。其中研究較多的是T細(xì)共有8款T細(xì)胞接合器被FDA批準(zhǔn)上市。盡管單克隆抗體和雙特異性抗體在臨床治療上都發(fā)揮了至關(guān)重要的作用，但對(duì)于惡性腫瘤的治療療效仍然有限[1]，因而開發(fā)一種新的治療策略對(duì)增強(qiáng)反應(yīng)活性基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(32070940)；博士434生命科學(xué)和緩解耐藥性都具有一定的臨床價(jià)值。隨著抗體藥物的發(fā)展，同時(shí)靶向三個(gè)特異性抗原結(jié)合位點(diǎn)的三特異性抗體(trispecificantibodies,TsAbs)在腫瘤治療領(lǐng)域展現(xiàn)了非凡的應(yīng)用前景。TsAbs是一種潛在也可通過招募免疫細(xì)胞進(jìn)行腫瘤重定向，從而增強(qiáng)抗腫瘤免疫。與雙特異性抗體相比，三特異性抗體還能夠與腫瘤細(xì)胞或免疫細(xì)胞表面的另一個(gè)靶點(diǎn)相結(jié)合，或橋接免疫細(xì)胞并阻斷雙信號(hào)通路等作用，更有利于將藥物或免疫細(xì)胞重定向至腫瘤部位，增強(qiáng)結(jié)合特異性，提高靶向性，降低脫靶毒性[3]，從而提升抗腫瘤能力(表1)。本文將介紹三特異性抗體的發(fā)展進(jìn)程，總結(jié)不同靶點(diǎn)組合的代表性藥物的最新研究進(jìn)展，以期為下一代三特異性抗體藥物的1991年，德國(guó)慕尼黑大學(xué)首次提出靶向TAA是T細(xì)胞接合器TCE的早期概念設(shè)計(jì)。1999年，RobertF.Graziano開發(fā)了一種三特異并在細(xì)胞水平上進(jìn)行了功能驗(yàn)證[5]，但此時(shí)三特異性抗體的具體生物學(xué)功能尚未得到深入研究。步入學(xué)研究所構(gòu)建了一種名為CEA(cancerembryonic活T細(xì)胞殺死癌細(xì)胞外，TsAbs還被設(shè)計(jì)用于橋接NK細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞，增強(qiáng)NK細(xì)胞的抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用(antibody-dependentcell-mediatedcytotoxicity,ADCC)功能，從而更有效地殺死腫瘤細(xì)胞。同時(shí)期，許多靶向CD16的TsAbs已經(jīng)開始被報(bào)道，如CD16/CD123/CD33、CD16/CD19/CD22[7]。越來越多的學(xué)者開始深入研究不同靶點(diǎn)組合、結(jié)構(gòu)形式、作用機(jī)制下三特異性抗體如何殺傷腫瘤細(xì)胞而發(fā)揮藥物療效，2015年后TsAbs目前，全球尚無(wú)三特異性抗體藥物獲批上市，不過已有多家生物醫(yī)藥企業(yè)布局三特異性抗體，并國(guó)內(nèi)成都恩沐生物、博銳生物、嘉和生物等企業(yè)亦走在前沿的是輝瑞公司開發(fā)的一款A(yù)nti-IL-13/IL-4/TSLP(PF-07275315)，屬于三功能融合蛋白，針對(duì)特應(yīng)性皮炎(atopicdermatitis,AD)，目前已進(jìn)入臨床2期。2020年，哈普恩治療公司(Harpoon328)的三特異性抗體，針對(duì)小細(xì)胞肺癌(SCLC)的賽諾菲公司(Sanofi)開發(fā)了一款A(yù)nti-CD3/CD38/CD28(SAR442257)的三特異性抗體，其介導(dǎo)了強(qiáng)烈的腫瘤細(xì)胞殺傷作用，與抗CD38單抗相比，SAR442257在體外對(duì)CD38高表達(dá)和CD38低表達(dá)的多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞(multiplemyeloma,MM)均表現(xiàn)出高3~4個(gè)數(shù)量級(jí)的殺傷效力[1]。該藥物針對(duì)復(fù)發(fā)難治性MM和非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkinlymphoma,NHL)的臨床研究，目前處于臨床1期(NCT04401020)。2021年，賽諾菲與Innate公司合NK細(xì)胞接合器(SAR443579)，目前處于臨床1/2期(NCT05086315)，有可能成為血液系統(tǒng)惡性腫瘤患者的新選擇。此外，賽諾菲還布局了Anti-CD3/CD28/HER2(SAR443216)和Anti-NKp46/Numab公司(NumabTherapeutics)研發(fā)的靶向PD-L1/4-1BB/HSA(PD-L1：programmedcelldeath1serumalbumin，人血清白蛋白)的三特異性抗體NM21-1480正在實(shí)體瘤中進(jìn)行臨床1/2期驗(yàn)證(NCT04442126)。普米斯生物技術(shù)公司(Biotheus)研發(fā)的靶向PD-L1/TGF-β/VEGF的三特異性抗體PM8003也在晚期實(shí)體瘤中開展臨床1/2期研究2三特異性抗體的構(gòu)建形式及作用機(jī)制三特異性抗體按照作用機(jī)制的不同主要分為：T細(xì)胞接合器、免疫檢查點(diǎn)抑制劑、NK細(xì)胞接合TAA)、延長(zhǎng)半衰期的TCE以及三功能融合蛋白等。T細(xì)胞接合器(TCE)是腫瘤免疫治療中用得比較多的構(gòu)建形式，TCE通?；诳贵w或抗體片段，能夠?qū)Ⅲw內(nèi)的T細(xì)胞與表達(dá)TAA的腫瘤細(xì)胞或表達(dá)特定標(biāo)志物的其他免疫細(xì)胞橋接起來。T細(xì)胞激活需要至少兩個(gè)信號(hào)，其中第一信號(hào)是由T細(xì)胞受的靶向CD19和CD3的Blinatum同一靶抗原上的不同結(jié)構(gòu)域等多種情況PF-07275315，臨床2期，靶向IL-13/IL注：ADCC：抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用；ADCP：抗體依賴的細(xì)胞吞噬作用；CDC：補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒性；EGFR：表皮生長(zhǎng)因子受體；BCMA：B細(xì)胞成熟抗原；第第4期許林，等：三特異性抗體在腫瘤免疫治療中的研究進(jìn)展435436生命科學(xué)presentingcell,APC)或腫瘤細(xì)胞表面上的組織相CD28分子與APC上的共刺激分子(如B7家族分子CD80和CD86)的相互作用[8-9]。共刺激分子或共抑制分子及其配體參與了T細(xì)胞的活化、增殖，的是B7/CD28家族和腫瘤壞死因子受體超家族的LAG-3等[10]，通過結(jié)合這些調(diào)節(jié)分子可調(diào)節(jié)T細(xì)胞的功能變化。三特異性T細(xì)胞接合器可以分為三成都恩沐生物科技有限公司的CMG1A46(BR110)藥物為靶向CD3/CD19/CD20的三特異性抗體，其適應(yīng)證為急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)、NHL、血液腫瘤、濾泡性淋巴瘤、彌漫性大B淋巴瘤，現(xiàn)已進(jìn)行到臨床1/2期(NCT05348889)。CD19是B細(xì)胞表達(dá)的一種CD分子，屬于從細(xì)胞性或正常B細(xì)胞上表達(dá)，促進(jìn)其增殖和激活[12]。CD20是一種多程跨膜蛋白[13]，是研究最廣泛的B細(xì)胞抗原之一，有50%左右的B前體ALL患者的B細(xì)胞表達(dá)CD20。根據(jù)博銳生物公司官網(wǎng)，CMG1A46同時(shí)靶向T細(xì)胞表面的CD3以及B細(xì)胞上的兩個(gè)抗原表位CD20和CD19，通過募集CD3+T細(xì)胞增強(qiáng)T細(xì)胞功能，介導(dǎo)B細(xì)胞耗竭并最終殺死表達(dá)CD19和(或)CD20的B細(xì)胞。選擇CD19和CD20作為靶抗原具有一定的優(yōu)勢(shì)：首先，CD19和CD20能夠在絕大多數(shù)惡性B細(xì)胞上表達(dá)[14]；其次，兩種抗原同時(shí)丟失的可能性很第4期許林，等：三特異性抗體在腫瘤免疫治療中的研究進(jìn)展437擴(kuò)大細(xì)胞識(shí)別能力的同時(shí)，不易產(chǎn)生腫瘤外毒性增加的副作用[16]。此外，CD3/CD19/CD20靶點(diǎn)聯(lián)合治療的藥物在體外腫瘤細(xì)胞系和原代血液樣品中表現(xiàn)出高度的選擇性效力，具有活化、增殖T細(xì)胞和產(chǎn)生細(xì)胞因子的能力，且有望降低細(xì)胞因子釋放綜在人外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)移植的非肥胖糖尿病(nonobesediabetes,NOD)小鼠模型中，注射CMG1A46藥物可誘導(dǎo)(CD19+/CD20+)Jeko-1淋巴瘤和(CD19+/CD20-)A20-hCD19腫瘤的快速消退并同時(shí)展示出了強(qiáng)大的抑瘤活性。在食蟹猴的藥代劑量提高到原先的10倍毒性也未明顯增加，未出現(xiàn)顯著不良反應(yīng)。因此，CMG1A46的效力高、毒性可控且在血清中具有天然IgG樣半衰期，具有良此CD28可抑制T細(xì)胞死亡從而提高T細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞的持久性[20-21]。賽諾菲公司的SAR-442257藥物為靶向CD3/CD28/CD38的三特異性抗體，其適應(yīng)證為MM、NHL，現(xiàn)已進(jìn)行到臨床1期(NCT04401020)。賽諾菲的兩種三特異性抗體藥(Anti-CD3/CD28/HER2)[6]讓科學(xué)家們重新關(guān)注到Anti-CD3/CD28/CD38能夠提供兩種信號(hào)，以充分和持久地激活T淋巴細(xì)胞，并將其聚集到腫瘤細(xì)胞周圍殺傷腫瘤[22]。合理設(shè)計(jì)出更緊密的免疫突觸，可以進(jìn)一步增強(qiáng)對(duì)腫瘤的殺傷能力。因此，相比于勢(shì)在于能更徹底、更持久地激活T細(xì)胞，瘤活性。不過激活T細(xì)胞不可避免地會(huì)導(dǎo)致CRS，小鼠模型中進(jìn)行藥物測(cè)試，結(jié)果顯示SAR-442257人靈長(zhǎng)類動(dòng)物(nonhumanprimate,NHP)的記憶/效原代CD8+T細(xì)胞重建的NSG小鼠，接種素酶報(bào)告基因的NCI-H929人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞，通過熒光成像技術(shù)監(jiān)測(cè)抗體治療后的生長(zhǎng)情況，發(fā)現(xiàn)CD38三特異性抗體的效果顯著，劑量低至1μg/kg即可明顯抑制腫瘤的生長(zhǎng)[22]。因此進(jìn)一步證明，共刺激信號(hào)可以阻止T細(xì)胞凋亡。通過給猴子靜脈注射SAR-442257，發(fā)現(xiàn)并未有明顯的CRS。導(dǎo)的T細(xì)胞活化，增加CRS的風(fēng)險(xiǎn)[25]。不過藥物對(duì)正常細(xì)胞的數(shù)量影響不大，在接受抗體治療的猴免疫檢查點(diǎn)是一類抑制人體免疫應(yīng)答的免疫抑制性分子，包括其配體和受體及之間的信號(hào)通路，正常細(xì)胞通過表達(dá)免疫檢查點(diǎn)配體，與免疫檢查點(diǎn)分子結(jié)合傳遞抑制信號(hào)，來抑制細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(cytotoxicTcell,CTL)的激活，從而避免正常細(xì)胞受到免疫攻擊，但同時(shí)癌細(xì)胞會(huì)利用該機(jī)制形成疫逃逸，從而抑制對(duì)腫瘤的免疫作用，導(dǎo)致腫瘤發(fā) 免疫檢查點(diǎn)抑制劑共抑制免疫應(yīng)答的配體和受體結(jié)合及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，從而進(jìn)一步激活免疫細(xì)胞，恢復(fù)宿主免疫系統(tǒng)的攻擊能力以抵御腫瘤細(xì)胞。在臨床上，ICB能改善患者療效，緩解化學(xué)治療、放射治療等帶來的副作用，有效延長(zhǎng)患者的生存期。若單獨(dú)使用免疫檢查點(diǎn)抑制劑，其抗腫瘤效果僅在部分患者中響應(yīng)并且易產(chǎn)生耐藥性[26]。因此，免疫檢查點(diǎn)抑制劑更多地被應(yīng)用于聯(lián)合療法或開發(fā)成雙/多特異性抗體，通過與免疫激活受體結(jié)合激活免疫細(xì)胞，或兩個(gè)免疫檢查點(diǎn)抑制劑進(jìn)行組合來常見的免疫檢查點(diǎn)包括PD-1/PD-L1及CTLA-4，均在不同類型的實(shí)體瘤臨床治療中有所成效。PD-1是免疫細(xì)胞上表達(dá)的一種跨膜蛋白，與PD-或PD-1/PD-L2信號(hào)通路使腫瘤細(xì)胞逃逸細(xì)胞毒性故PD-1可作為免疫檢查點(diǎn)阻斷療法的潛在靶點(diǎn)。另一種常見的免疫檢查點(diǎn)PD-L1，在腫瘤細(xì)胞上高表達(dá)，其表達(dá)與免疫細(xì)胞的浸潤(rùn)程度成正比[27]。通過PD-1/PD-L1及CTLA-4免疫檢查點(diǎn)抑制劑可438生命科學(xué)解除腫瘤細(xì)胞對(duì)免疫系統(tǒng)的抑制，激活免疫細(xì)胞再識(shí)別、監(jiān)視腫瘤細(xì)胞，發(fā)生免疫介導(dǎo)的腫瘤應(yīng)答，Numab公司在研的ND-021藥物是靶向4屬于腫瘤壞死因子受體超家族成員，主要表達(dá)于活化的T細(xì)胞，是T細(xì)胞協(xié)同刺激分子，其配體為公司進(jìn)行了多項(xiàng)多特異性藥物的研發(fā)。ND-021即是下一代多特異性癌癥治療藥物，可同時(shí)靶向腫瘤免疫抑制性PD-1/PD-L1通路和腫瘤免疫刺激性的協(xié)同效應(yīng)。同時(shí)，ND-021的結(jié)構(gòu)域通過結(jié)合的分子設(shè)計(jì)旨在高效，同時(shí)僅局部激活腫瘤定向的Numab公司于2018年在美國(guó)癌癥研究協(xié)會(huì)(AmericanAssociationforCancerResearch,AACR)性優(yōu)于PD-1/PD-L1阻斷劑及其與針對(duì)共刺激受體的抗體的結(jié)合。在2022AACR年會(huì)上，Numab公布了部分臨床前數(shù)據(jù)：在兩種不同異種移植模型的人源化小鼠中，ND021注射后不僅增強(qiáng)了瘤內(nèi)CD8+T細(xì)胞的增殖性，而且與αPD-L1和α4-1BBPD-L1/4-1BB/HSA三特異性抗體的耐受性更佳。而食蟹猴中的藥代動(dòng)力學(xué)/藥效學(xué)研究也進(jìn)一步證實(shí)了該抗體的穩(wěn)定性、藥理活性、耐受性和半衰高劑量ND021會(huì)維持對(duì)4-1BB的刺激，且刺激作用呈劑量依賴性持續(xù)增加，直至達(dá)到最高藥物劑量NK細(xì)胞接合器的結(jié)構(gòu)與TCE類似，一只手臂靶向癌細(xì)胞，另一只手臂靶向NK細(xì)胞，外加一個(gè)增強(qiáng)NK殺傷功能的靶點(diǎn)，如細(xì)胞因子或NK激活受體，也可以是另一個(gè)TAA。NK細(xì)胞的活性受多種激活和抑制受體的分子調(diào)控，在細(xì)胞因子方面主要是IL-15，用以激活NK細(xì)胞和記憶性CD8+T細(xì)目前設(shè)計(jì)的NK細(xì)胞激活劑主要是用于治療血液AML)中高表達(dá)而在正常造血干細(xì)胞中表達(dá)相對(duì)較高表達(dá)與高殘留病灶呈正相關(guān)，提示預(yù)后不良。CD16屬于Ig超家族成員，參與抗體依賴性的細(xì)胞毒性作用，同時(shí)是NK細(xì)胞的核心標(biāo)記之一。NK細(xì)胞可通過細(xì)胞表面抗原CD16與腫瘤特異性IgG抗體結(jié)合，識(shí)別并殺傷與IgG抗體特異性結(jié)合的腫瘤細(xì)胞。NKp46是一種在哺乳動(dòng)物中高度保守的活常在靜止和活化的NK細(xì)胞上表達(dá)，可介導(dǎo)NK細(xì)第4期許林，等：三特異性抗體在腫瘤免疫治療中的研究進(jìn)展439賽諾菲與Innate公司合作，利用Innate公司專有的多特異性抗體平臺(tái)ANKET開發(fā)了一款基于NKp46/CD16的NK細(xì)胞接合器S同時(shí)，AML患者在診斷時(shí)，NK細(xì)胞中的NKp46CD64的表達(dá)能使其對(duì)抗CD123抗體產(chǎn)生耐藥性，而SAR443579通過與CD16a和NKp46的結(jié)合協(xié)同激活NK細(xì)胞，將NK細(xì)胞重定向到癌癥靶點(diǎn)，可以規(guī)避這種耐藥性[33]，同時(shí)利用NK功能對(duì)抗癌細(xì)胞的優(yōu)勢(shì)，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞裂解，因此SAR443579的首次人體臨床試驗(yàn)結(jié)果顯示，劑量高達(dá)3mg/kg每周一次時(shí)耐受良好，并觀察到CDE官網(wǎng)顯示，注射用SAR443579已獲批臨床，(FCGR3B)兩種蛋白，CD16a是NK細(xì)胞表達(dá)的最有效的激活受體[34]，且CD16a是唯一可以自行激活NK細(xì)胞的受體，無(wú)須通過其他受體進(jìn)行額外激。NKG2D是一種Ⅱ型跨膜受體，存在于所有小鼠和人的NK細(xì)胞中。HER2是一種位于細(xì)胞膜癌患者中高表達(dá)，因此可作為乳腺癌的潛在免疫治達(dá)，因而許多HER2低表達(dá)實(shí)體瘤患者也可能受益通過CD16a/HER2/NKG2D靶點(diǎn)聯(lián)合治療的在研三特異性抗體主要有DragonflyTherapeutics公司的DF-1001藥物，借助該公司的TriNKET?平臺(tái)開發(fā)，這是目前在研TriNKET?產(chǎn)品線中最先進(jìn)的候選藥物，適應(yīng)證為實(shí)體瘤，現(xiàn)已進(jìn)行到臨床ADCC作用，NKG2D可以充當(dāng)共刺激受體，其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)能增強(qiáng)T細(xì)胞功能和TCR活化[39]。作為一種多功能受體，NKG2D可與靶細(xì)胞表面多種配體分子直接結(jié)合[40]，但NKG2D配體在正常細(xì)胞表面安全性，其次是治療療效。針對(duì)36例晚期和(或)難治性實(shí)體瘤患者進(jìn)行劑量遞增治療，有79%的患者報(bào)告了治療相關(guān)不良事件，但大多是低級(jí)別；其中22例患者病情穩(wěn)定(stabledisease,SD)，臨床在2023年舉辦的ASCO年會(huì)上首次發(fā)表了DF1001劑量升級(jí)的1期結(jié)果，在Dragonfly公司對(duì)該藥物進(jìn)行的1/2期臨床試驗(yàn)中，用單藥DF1001治療了106例患者，療效安全且耐受性良好。在患者開始顯示出腫瘤組織NK細(xì)胞和(或)CD8+T細(xì)胞浸潤(rùn)2.4.1GB263T(Anti-EGFR/以嘉和生物藥業(yè)有限公司的三特異性抗體EGFR和兩種不同的cMET表位[43]，目前處于1/2期臨床研究(CTR20221422)。GB263T可顯著增強(qiáng)其EGFR靶點(diǎn)結(jié)合兩個(gè)Fab，在EGFR的Fc片段引入了Fc效應(yīng)功能增強(qiáng)突變體，增強(qiáng)其ADCC功能；同時(shí)，兩種Fab靶向c-Met的兩個(gè)不同表位，與強(qiáng)生2021年獲FDA批準(zhǔn)的EGFR/c-Met雙特異性抗體Amivantamab(JNJ-37GB263T可顯著降低EGFR和c-Met的表達(dá)水平，抑制下游信號(hào)通路，并在多種腫瘤模型的體內(nèi)藥效實(shí)驗(yàn)中顯示出顯著的抗腫瘤活性[1]。在EGFR突變患者中進(jìn)行的首次人體1/2期研究通過藥物的初步劑量遞增，評(píng)價(jià)藥物的耐受性和安全性，并評(píng)估其初步療效、藥代動(dòng)力學(xué)和免疫原性。結(jié)果顯示，6例患者中有5例出現(xiàn)治療相關(guān)不良反應(yīng)，但均為輕血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)是一種高度特異性促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移增殖等作用。VEGF及其受440生命科學(xué)體(VEGFR)組成的VEGF/VEGFR2通路是開發(fā)抗血管生成藥物的主要靶標(biāo)，且VEGF在腫瘤微環(huán)境(tumormicroenvironment,TME)中的過表達(dá)具有抑拓維創(chuàng)新生物科技有限公司在研的TAVO-412創(chuàng)生物專有的平臺(tái)設(shè)計(jì)和改造而成，其適應(yīng)證為實(shí)TNBC)、肺癌、胰腺癌、胃癌，現(xiàn)已進(jìn)行到臨床1期(NCT05548634)。TAVO-412是一種人源化多特異性抗體，具有兩個(gè)不同的抗EGFR納米抗體結(jié)構(gòu)域、一個(gè)抗cMetFab臂和一個(gè)抗VEGFScFv結(jié)構(gòu)。VEGF具有促進(jìn)黏附分子和趨化因子表達(dá)的能力，誘導(dǎo)腫瘤血管結(jié)構(gòu)異常，可阻止免疫細(xì)胞浸潤(rùn)。因此，TAVO-412在阻斷EGFR和cMET信號(hào)通路的同時(shí)，可以阻斷腫瘤內(nèi)的血管生成，通過多靶點(diǎn)的協(xié)同效應(yīng)提高了在TME中的抗腫瘤療效。在臨床前異種移植模型中，TAVO-412顯示出對(duì)如，對(duì)不同EGFR和cMet受體密度水平的TNBCBT20)展開體內(nèi)測(cè)試研究，結(jié)果在多個(gè)TNBC細(xì)胞系成瘤動(dòng)物模型中發(fā)現(xiàn)了強(qiáng)烈的腫瘤生長(zhǎng)抑制效中的TGI達(dá)62%[47]。此外，在一項(xiàng)食蟹GLP毒理學(xué)研究中，TAVO412也顯示出良好的耐納米抗體又稱VHH抗體，是只包含一個(gè)重鏈可變區(qū)的單域抗體，分子量?jī)H為普通抗體的1/10，體會(huì)被腎小球?yàn)V過而清除出體內(nèi)，導(dǎo)致半衰期短，而與HSA結(jié)合則可以顯著增強(qiáng)抗體的血清半衰期。靶向HSA延長(zhǎng)抗體在體內(nèi)半衰期的優(yōu)勢(shì)如下：患者醫(yī)療負(fù)擔(dān)的同時(shí)，提高抗體藥物自身的療效；提高患者安全性和抗實(shí)體腫瘤活性，具有高度特異性和有效的重定向裂解，從而在HSA存在時(shí)表現(xiàn)2.5.1HPN-328(Anti-CD3/DLL3/al可與不同的Notch受體結(jié)合。根據(jù)不同的腫瘤類型和細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境，DLL3可發(fā)揮出促癌或抑癌的雙向作用。DLL3主要分布在神經(jīng)內(nèi)分泌類腫瘤的細(xì)胞膜上，因此是治療神經(jīng)內(nèi)分泌類腫瘤的有力免疫新型抗體衍生平臺(tái)開發(fā)的HPN-328為靶向CD3/蛋白三個(gè)抗體衍生的結(jié)合域，其適應(yīng)證有SCLC，現(xiàn)已進(jìn)行到臨床1/2期(NCT04471727)[53]。HPN-328在神經(jīng)內(nèi)分泌類腫瘤中的I/IIa期研究中也顯示出初步療效[54]。在1mg/kg和10mg/kg量下，在NHP中耐受性良好，無(wú)不良的生化變化經(jīng)內(nèi)分泌前列腺癌(neuroendocrineprostatecancer,NEPC)和其他神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤患者，初步證據(jù)表明HPN-328對(duì)這些腫瘤都具有抗腫瘤活性[55]。在≥13例腫瘤病灶減少，客觀緩解率為25%，疾病控制2.5.2HPN-536(Anti-CD3/MSLN/a間皮素(mesothelin,MSLN)在腺癌、卵巢癌和肺腺癌等多種人類癌癥中呈現(xiàn)高表達(dá)，而在健康細(xì)胞中低表達(dá)的特點(diǎn)使得其成為了一通過CD3/MSLN/albumin靶點(diǎn)聯(lián)合治療的在研三特異性抗體主要有Harpoon公司的HPN-536，它是經(jīng)典的TriTAC模式(VHH-VHH-scFv)，三個(gè)結(jié)構(gòu)域分別結(jié)合CD3、TAA和HSA，其中結(jié)合CD3表位的抗體為單鏈抗體(scFv)，結(jié)合HSA和TAA的抗體為納米抗體。HPN-536的適應(yīng)證有胰腺癌、卵巢癌、肺癌和間皮瘤，現(xiàn)已進(jìn)行到臨床1/2期(NCT03872206)。HPN-536在NHP、嚙齒動(dòng)物模型向靶細(xì)胞裂解依賴于TriTAC分子與腫瘤細(xì)胞表達(dá)藥代動(dòng)力學(xué)特性。其次，在活性方面，HPN-536與第4期許林，等：三特異性抗體在腫瘤免疫治療中的研究進(jìn)展441似的高生物活性。而半衰期的延長(zhǎng)依賴于HPN-536的第三個(gè)結(jié)構(gòu)域與血清白蛋白的結(jié)合，從而增加了藥物在癌癥患者免疫治療中的臨床活性，發(fā)揮更加2.5.3CB-307(Anti-4-1BB/PSMA/al4-1BB是一種跨膜蛋白，屬于腫瘤壞死因子受體超家族成員[57]，多由活化的T細(xì)胞和其他克雷桑多生物科技公司(CrescendoBiologics)在研的CB-307為靶向4-1BB/PSMA/albumin的三到臨床1期(NCT05836623)。利用其配體4-1BBL殖并分泌細(xì)胞因子，提高機(jī)體的免疫應(yīng)答水平[61]。4-1BB雖然在靜息的CD4或CD8T細(xì)胞中表達(dá)量低，但T細(xì)胞在被抗原刺激時(shí)，4-1BB表達(dá)量會(huì)隨代表了一種有吸引力的腫瘤免疫治療靶點(diǎn)[64]。PSMA的表達(dá)水平與雄性激素的轉(zhuǎn)移和前列腺癌的中表達(dá)水平較低[59]，因而成為了轉(zhuǎn)移性PC免疫治療中有希望的分子靶點(diǎn)[68]。在表達(dá)人PSMA的小鼠模型中進(jìn)行的藥理學(xué)研究顯示，CB-307能顯著抑制腫瘤生長(zhǎng)。同時(shí)，在食蟹猴中評(píng)估CB-307的非臨床毒理學(xué)和藥代動(dòng)力學(xué)，結(jié)果顯示藥物耐受性此外，使用非免疫球蛋白作為支架來構(gòu)建多特異性抗體也是一種選擇。其中，DARPins是基于自然產(chǎn)生的錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域，該重復(fù)結(jié)構(gòu)域是一個(gè)可以產(chǎn)生多特定蛋白的支架，可用于構(gòu)建多特異性2.6.1PF-07275315(Anti-IL-13/IL-4IL-7)細(xì)胞因子，主要在肺、皮膚和腸道屏障表面族的重要成員，IL-4和IL-13受體亞基在正常情況下低表達(dá)，二者皆是誘導(dǎo)和維持炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵細(xì)可通過抑制相應(yīng)的細(xì)胞因子產(chǎn)生從而改善疾病的癥狀，例如輝瑞公司的PF-07275315為靶向IL-13/已進(jìn)行到臨床2期(NCT05995964)。IL-4可以誘導(dǎo)胞的增殖，引導(dǎo)免疫球蛋白類向IgG4和IgE轉(zhuǎn)化，且在過敏性炎癥和哮喘中也起關(guān)鍵作用。IL-13是一種免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞因子，主要由活化的Th2細(xì)胞分TSLP能激活第2型先天淋巴細(xì)胞(typeⅡinnatelymphoidcells,ILC2)[75]，從而誘導(dǎo)先天輔助并誘導(dǎo)Th2細(xì)胞分化[76]，進(jìn)一步產(chǎn)生Th2細(xì)胞因時(shí)TSLP會(huì)觸發(fā)絲聚蛋白基因缺陷皮膚中的Th22因此，靶向抑制TSLP及其相關(guān)的細(xì)胞因子IL-4、2.6.2PM8003(Anti-PD-L1/TGF-VEGF在TME中的過表達(dá)可以抑制免疫效應(yīng)細(xì)胞并激活免疫抑制細(xì)胞，從而驅(qū)動(dòng)TME中的免藥物的療效。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(transforminggrowthfactor-β,TGF-β)是一種腫瘤抑制因子，通過阻斷腫瘤細(xì)胞周期進(jìn)程抑制腫瘤增殖，且TGF-相關(guān)基因上調(diào)與腫瘤治療的耐藥性有關(guān)[79]。普米斯生物技術(shù)公司在研的PM-8003藥物是靶向PD-L1/TGF-β/VEGF的三功細(xì)胞的數(shù)量，增加效應(yīng)T細(xì)胞的活性，從而恢復(fù)對(duì)制T細(xì)胞浸潤(rùn)來塑造TME以抑制抗腫瘤免疫[79]?？筎GF-β和抗PD-L1的聯(lián)合應(yīng)用可以促進(jìn)T細(xì)胞滲透到腫瘤中心并增強(qiáng)抗腫瘤免疫力，且TGF-β可442442生命科學(xué)NCTNCT05995964NCT03577028NCT05348889NKCENSCLCNCT04184050NCT04471727NCT03872206ND-021NCT04442126NCT03214666NKCENCT05086315NKCENCT05839626NCT05836623NCT05978284NCT05862012NCT05424822NCTNCT05397496、NCT03705169NCT04401020NCT05013554NCT05548634NSCLC/////NKCE/注：TCE：T細(xì)胞接合器；NKCE：NK細(xì)胞病；NSCLC：非小細(xì)胞肺癌；NHL：非霍奇金淋巴瘤；SCLC第第4期許林，等：三特異性抗體在腫瘤免疫治療中的研究進(jìn)展443444生命科學(xué)重抑制可能具有更強(qiáng)的抗血管生成作用。此外，TGF-β和VEGF信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的雙重抑制可以協(xié)同減少三特異性抗體是一種具有潛力的多靶點(diǎn)免疫干預(yù)手段。相比單克隆抗體和雙特異性抗體，三特異性抗體可以同時(shí)實(shí)現(xiàn)多種作用機(jī)制，包括在特異性靶向腫瘤細(xì)胞的同時(shí)阻斷免疫檢查點(diǎn)或激活免疫細(xì)并且通過靈活的靶標(biāo)組合可以增強(qiáng)免疫細(xì)胞活化或免疫抑制阻斷，確保精確有效地殺傷腫瘤。然而，三特異性抗體的發(fā)展仍面臨一些局限性，值得深入關(guān)注和研究。首先，三特異性抗體高度刺激免疫系抗體，由一種減毒的三特異性T細(xì)胞接合器(TCE)與抗白細(xì)胞介素6受體(IL-6R)結(jié)合部分融合而兩種抗IL6RscFv融合到TsAb上，TriTECM抗體可以抑制EGFR和IL6R信號(hào)通路，并有效觸發(fā)T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性。此外，TriTECM介瘤T細(xì)胞活性減弱，表明TriTECM具有成為細(xì)胞因子釋放調(diào)節(jié)劑的潛力[80]。其次，在某些情況下，抗體藥物可能會(huì)表現(xiàn)免疫原性，且給藥抗體經(jīng)常誘降低藥物的治療效果或引起嚴(yán)重的不良事件。通過糖基化、聚乙二醇化和序列修飾等，可以在一定程雖然在NHP中展現(xiàn)了可接受的安全性[6]，但在臨床應(yīng)用中仍需要探索降低毒性的方法。其中，一種應(yīng)對(duì)靶向性與非靶向性細(xì)胞毒性的策略是選擇性激的BsAb組成，每個(gè)BsAb靶向不同的TAA。腫瘤只有當(dāng)兩個(gè)抗體分子同時(shí)與同一個(gè)腫瘤細(xì)胞的雙靶點(diǎn)結(jié)合時(shí)，CD3結(jié)合域的兩部分才能結(jié)合并產(chǎn)生功能完備的抗CD3結(jié)合域。在上述方法中，HLE結(jié)構(gòu)域在蛋白水解激活時(shí)丟失，若TCE的活性形式從腫瘤中釋放出來，則可以降低全身副作用的風(fēng)措施還包括控制劑量、改變給藥方式、臨床預(yù)防性其中，使用皮下而非靜脈注射的給藥方式，可以減緩抗體暴露的速度，避免注射大量抗體而過度激活T細(xì)胞，或按照最低預(yù)期生物效應(yīng)水平劑量來緩解全身毒性，以上舉措有助于降低安全風(fēng)險(xiǎn)。最后，多特異性抗體的結(jié)構(gòu)具有一定復(fù)雜性，生產(chǎn)工藝難度會(huì)隨著與抗體相關(guān)的特異性靶標(biāo)數(shù)量增加而增加，純化環(huán)節(jié)相較于單抗和雙抗更復(fù)雜。在三特異性抗體生產(chǎn)和純化過程中可能會(huì)產(chǎn)生蛋白質(zhì)聚集、生產(chǎn)質(zhì)量不穩(wěn)定、雜質(zhì)較多以及生產(chǎn)收率低等問因此在純化環(huán)節(jié)一般需增加層析步驟以去除雜質(zhì)，但因分子間的相似性使層析分離度降低，若想達(dá)到目標(biāo)純度就會(huì)影響產(chǎn)量。因此，探索一種簡(jiǎn)單通用的三特異性抗體制造方法，開發(fā)有效的純化工藝尤面臨挑戰(zhàn)的同時(shí)，三特異性抗體的研究領(lǐng)域也展現(xiàn)出巨大的潛力和應(yīng)用前景。選擇更有效、更具靶向性的抗體靶點(diǎn)是關(guān)鍵。就目前而言，三特異性抗體的設(shè)計(jì)主要集中在腫瘤細(xì)胞和免疫細(xì)胞上，尋找新的靶點(diǎn)以提高三特異性抗體的選擇性及其抗腫瘤活性，在靶點(diǎn)組合、抗體形式和序列修飾方面，仍需繼續(xù)優(yōu)化。此外，還可探索能夠同時(shí)靶向四種不同靶標(biāo)的四特異性抗體。例如，Demaria等[84]報(bào)道了一種基于四特異性抗體的自然殺傷細(xì)胞接合器受體β鏈和TAA結(jié)合，該抗體藥物可以誘導(dǎo)NK細(xì)胞在體內(nèi)和體外增殖，控制局部和彌散性腫瘤，同時(shí)觸發(fā)NK細(xì)胞的細(xì)胞毒性以及細(xì)胞因子和趨化因子的產(chǎn)生。探索三特異性抗體與其他療法(如放射治療、化療、免疫療法等)的聯(lián)合應(yīng)用，以期在副作用可控的條件下，進(jìn)一步提高治療效果，也是未來可以發(fā)展的方向。相信在不久的將來，三特異[1]YaoY,HuY,WangF.Trispe[2]LuRM,HwangYC,LiuIJ,etal.Developmentoftherapeuticantibodiesforthetreatmentofdiseases.J[3]MullardA.Trispecificantibodiestaketotheclinic.Nat第4期許林，等：三特異性抗體在腫瘤免疫治療中的研究進(jìn)展445[4]LyuX,ZhaoQ,HuiJ,etal.Thegloballandscapeofapprovedantibodytherapies.AntibT[5]Trispecificsimproveimmune-cellengagement.Cancer[6]SeungE,XingZ,WuL,etal.AtrispecificantibodyviaCD4cells.Nature,2022,chimericantigenreceptorT-celltherapyforchildhoodrefractoryorrelapsedB-cellacutelymphocasingle-arm,phase2study.LancetOncol,2023,24:[8]KhanM,AroojS,WangH.SolubleB7-CD28familyinhibitoryimmunecheckpointproteinsandanti-cancer[9]WielandA,AhmedR.Immu[10]AggarwalV,WorkmanCJ,VignaliDAA.LA[11]PhillipsR.Non-depletinganti-CD19Bcellinhib[12]Tapia-GalisteoA,álvarez-VallinaL,SanzL.Bi-andtrispecificimmunecellengagersforimmunotherapyofhematologicalmalignancies.JHematolOncomplexwiththetherapeuticmonoclonalantibodyCD20,anti-CD19CARTcellsforrelapsedBcellmalignancies:aphase1doseescalationandexpansion[15]DuellJ,LeipoldAM,AppenzellerS,etal.Sequentialantigen-lossandbranchingevolutioninlymphomaafterCD19-andCD20-targetedt-cellredirectingtherapy.CD20CAR-engineeredTcellsinrefractory/relapsed[17]ZhangJ,ZhouZ.Preclinicalstudyofanoveltrianti-CD3/CD19/CD20Tcell-engagingantibodyasapotentiallybettertreatmentforNHL.Blood,2020,136:22[18]DuraiswamyJ,TurriniR,MinasyanA,etal.Myeloidantigen-presentingcellnichessustainantitumorTcellsandlicensePD-1blockadeviaCD28costimulation.TcellCD28deficiencyaresusceptibletoskinpapillomavirusesbutareotherwisehealthy.Cell,2021,184:3812-28[20]ZhouXMM,M?rchAM,Dustin[21]ZhaoY,CaronC,ChanYY,etal.cis-B7:CD28interactionsatinvaginatedsynapticmembranesprovideCD28co-stimulationandpromoteCD8+Tcellfunctionthetherapeuticefficacyof[23]CobbDA,LeeDW.Cytokinereleasesyndromebiology[24]FehervariZ.Threetargetsarebetterthantwo.Nat[25]GarfallAL,JuneCH.Trispecificantibodiesofferathirdwayforwardforanticancerimmunotherapy.Natur[26]KalbasiA,RibasA.Tumour-intrinsicresistancetoimmunecheckpointblockade.NatRevImmunol,2020,[27]SchoenfeldAJ,RizviH,BandlamudiC,etal.ClinicalandmolecularcorrelatesofPD-L1expressioninpatientswithlungadenocarcinomas.AnnOncol,2020,31:599[28]GundeT,BrockM,Warmutnovel,monovalenttri-specificantibody-basedmoleculethatsimultaneouslymodulatesPDpotentanti-tumoralactivityinvivo.C1532ofhumannaturalkillercells.Cell,2023,1[30]SenSantaraS,LeeDJ,Crespo?,etal.TheNKcellreceptorNKp46recognizesecto-calreticulinonER-stressedcells.Nature,2023,616:348-[31]BankU,DeiserK,Plaza-forIL-7/IL-15-dependentNKp46+ILCdevelopmentandprotectionfromintestinalinflammationinmice.Nat[32]KrzywinskaE,SobeckiM,NagarajanS,etal.ThetranscriptionfactorHIF-1αmediatesplasticityofNKp46+innatelymphoidcellsinthegut.JExpMed,2022,219Virone-OddosA,BefacutemyeloidleukemiabyatrifunctionalNKp46-CD16a-NKcellengagertargetingCD123.NatB[34]MengF,ZhangS,XieJ,etareceptorstoremodeltheimmuneresponseforenhaanti-tumorimmunotherapyiniPSC-derivedNKcells.J[35]MyersJA,MillerJS.ExploringtheNKcellplatformf[36]SirhanZ,ThyagarajanA,SahuRP.Theefficacyoftucatinib-basedtherapeuticapproachmetastaticHER2-positivebreastcancer.SeminOncol,[38]UzunparmakB,HaymakerC,RasoG,etal.HER2-lowexpressioninpatientswithadvancedormetastaticsolid[39]CadouxM,CarusoS,PhamS,etal.Expressionof446生命科學(xué)andassociateswithHCCaggressiveness.JHepatol,[40]Marinovi?S,Lenarti?M,Mladeni?K,etal.NKG2D-mediateddetectionofmetabolicallystressedhepatocytesbyinnate-likeTcellsisessentialforinitiationofNASHautologousNKG2D-basedCART-celltherapy,inrelapsedcohortsofthedoseescalation1/2StudyofDF1001,anoveltri-specific,NKcelltherapytargetingHER2,inpatientswithadvancedsolidtumors:phase1DF1001monotherapydose-escalationresults.JClinOncol,2023[43]ZamanM,HuangC,Gallolu-KankanamalageS,etal.AbstractLB069:DevelopmentofcMET/cMET/EGFRtrispecificantibodyas[44]YangJJ,PavlakisN,XieF,etal.Abstracte21085:phaseI/ⅡstudyofGB263T,anotrispecificantibody,inpatientswithadvancedEGFR-mutated(EGFRm)non-smallcelllungcancer(NSCLCClinOncol,2023,41[45]IlsonDH.EmergingevidenceforVEGFandimmunecheckpointinhibitioninoesophagogastriccancer.LancGastroenterolHepatol,2022,7[46]ChiuM.Abstract4494:Multi-specificcMetxEGFRxcMetxEGFRxVEGFantibodyfortriplenegativebre[48]DengZ,ZhangS,SunM,etal.NanobodiesagainstporcineCD163asPRRSVbroadinhibitor.IntJBiol[49]ChuangYM,HeL,PinnML,etal.Agranulocyte-macrophage[50]CaraceniP,O'BrienA,GinesP.Long-termalbumintreatmentinpatientswithcirrhosisandasclassofT-cell-engagingproteinconstructsdesignedforthetreatmentofsolidtumors.MolCancerTher,2021,impairmentafterTIPS:Aroadtobeexplo[53]AaronWH,AustinR,BarathM.AbstractC033:Hananti-DLL3Tcellengagerfortreatmentofsmallcell[55]JohnsonML,DyGK,MamdaniH,etal.Abstract8566:Interimresultsofanongoingphaatri-specific,half-lifeextended,DLL3-targeting,T-cellneuroendocrinecancers.JClinOncol,20[56]MolloyME,AustinRJ,LemonBD,etal.PreclinicalcharacterizationofHPN536,atrispecific,T-cell-actproteinconstructforthetreatmentofmesothelin-expressingsolidtumors.Clin62[57]CappellKM,KochenderferJN.AcomparisonofchimericantigenreceptorscontainingCD28versus4-1BBcostimulatorydomains.NatRevClinOncol,2021,18:[58]Dual-targetingapproachforCD40and4-1BB.Cancer[59]GiraudetAL,Kryzinmetastaticcastration-resistantprostatecancer:whereareweandwherearewegoing?TherAdvMedOncol,PETandWBMRIasnext-generationimagingtoolsin[61]LiL,WenQ,DingR.TheraorTGF-βtoenhanceanti-PD-(L)1therapy:theevidenfromclinicaltrials.F[62]WuQ,PanC,ZhouY,etal.Targetingneuropilin-1abolishesanti-PD-1-upregulatedregulatoryTcellsandL1/4-1BBbispecificantibody-anticalinfusionproteinPRS-344/S095012elicitsstrongT-cellstimulationinatumor-localizedmanner.ClinCancerRe[64]PichlerAC,CarriéN,CuisinierCD137(4-1BB)signalingpromotesCD8+-exhaustedTcellproliferationandterminaldiffere[65]GuptaS,HalabiS,YangQ,etal.PSMA-positivecirculatingtumorcelldetectionandoutcomeswithabirateron