DB22T 2915-2018 供血犬血液檢測技術(shù)要求　　

DB22DB22/T2915—2018供血犬血液檢測技術(shù)要求Technicalrequestforcanineblooddetection吉林省市場監(jiān)督管理廳發(fā)布I14.1.1供血犬血液應(yīng)為210mOsmol/kg?4023A.2.1儀器A.3.1樣品測定前，取校正用緩沖液對儀器進(jìn)行校正,溫度(℃)0545取基準(zhǔn)氯化鈉試劑，于500℃~650℃干燥40min～50min，置干燥器（硅膠）中放冷至室溫。6靈敏度0.125EU/支，2℃~8℃保存，有效期為12個(gè)月。待檢樣品檢測，選用鱟試劑靈敏度λ0.125EU，稀釋80倍檢測。取原液先10倍稀釋7膠不能保持完整，并從管壁滑脫者為陰性（-），樣品管均為陰性判定為符合規(guī)定，如兩管均為陽性判8D.3.2分別精密量取供試品溶液與標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液各0.5mL置玻璃試管中，分別加雙縮脲試劑4.0D.3.3按照紫外-可見分光光度法，在波長540nm處檢測吸光度。另精密量取水0.5mL，自“加雙B...........................9外源病毒檢驗(yàn)E.2.2.4將凍存管用75%酒精棉擦拭2遍，用吸管在無菌下取出細(xì)胞，緩慢加入含細(xì)胞培養(yǎng)基心管內(nèi)，在1000r/min速度下離心5培養(yǎng)瓶中，置37℃二氧化碳培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)，觀察生長情況。培養(yǎng)3d～5d，細(xì)胞長成致密單層去PBS，加入適量消化液（一般情況下，T25培養(yǎng)瓶不超過0.5mL～0.8mL；T75培養(yǎng)瓶1.0mL～同時(shí)同步接種F81細(xì)胞T25細(xì)胞瓶1瓶，每瓶接種1mL,另分別設(shè)1瓶E.2.3.2最后一次繼代（至少為第3代）時(shí)，每種培養(yǎng)物傳出3組培養(yǎng)物：3組T25培養(yǎng)瓶E.2.3.3如果樣品傳代培養(yǎng)期間，任何一代培養(yǎng)細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞病變，而正常細(xì)胞未出現(xiàn)病變E.2.4致細(xì)胞病變檢查和紅細(xì)胞吸附檢查取樣品進(jìn)行最后一次繼代時(shí)，取上一代經(jīng)2次凍融的培養(yǎng)物吸附接種已長成70%-80%細(xì)胞單層MDCK、Vero和NA細(xì)胞各3瓶，同步接種F81細(xì)胞3瓶，每瓶接種1mL，吸附接種的細(xì)胞于37℃吸附1種F81細(xì)胞板（檢測CPV）1塊，每塊板接種對照毒株、RABV陽性對照毒株，CPV陽性對照毒株稀釋為100TCID50～30細(xì)胞板、MDCK細(xì)胞板、NA細(xì)胞培養(yǎng)板，同步接種F81細(xì)胞板，每塊板接種2孔，每孔200μL，并設(shè)正常將E.2.4接種的一組細(xì)胞培養(yǎng)瓶棄去培養(yǎng)液，用PBS洗滌3遍，加入2mL姬姆薩染色液，室溫下染色15min～30min，然后用PBS洗滌3次，置顯微鏡檢查單層細(xì)胞，觀察包涵體、巨細(xì)胞他由病毒引起的細(xì)胞病變（CPE）是否存在，當(dāng)正常對照細(xì)胞未出現(xiàn)CPE，而被檢樣品出現(xiàn)CPE，則判為將E.2.4接種的另二組細(xì)胞培養(yǎng)瓶棄去培養(yǎng)液，用無鈣鎂離子的PBS洗滌3遍，向每一細(xì)胞培養(yǎng)瓶中加入2mL0.2%的豚鼠紅細(xì)胞和0.5%豬紅細(xì)胞的等量混合物，將培養(yǎng)瓶同時(shí)在2℃~8℃和20℃~25℃放置30min，然后用無鈣鎂離子的PBS洗滌3次，用30倍～60倍顯微鏡檢將E.2.5接種的細(xì)胞培養(yǎng)板棄去培養(yǎng)液，用無鈣鎂離子PBS洗滌2次～3次。每次洗滌時(shí)，每孔加每孔加入2mL冰預(yù)冷的80%丙酮溶液，2℃~8℃冰箱固定30mi