DB32T 1737-2011 嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌檢驗(yàn)

備案號(hào)：DB32ExaminationofStenotro江蘇省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布DB32/T1737-2011嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌是水產(chǎn)養(yǎng)殖中危害較嚴(yán)重的病原菌之一，目前沒(méi)有該菌的檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)，特制定本地方標(biāo)準(zhǔn)。本標(biāo)準(zhǔn)按GB/T1.1–2009《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫(xiě)》編制。本標(biāo)準(zhǔn)由江蘇省海洋與漁業(yè)局提出。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草單位：江蘇省水生動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：江蘇省水生動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：陳輝、黃春貴、鄒勇、方蘋(píng)、段翠蘭、郭闖、王習(xí)達(dá)、陳靜、郭立新、劉訓(xùn)猛。1DB32/T1737-2011嗜麥芽寡養(yǎng)單細(xì)胞檢驗(yàn)本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌檢驗(yàn)的設(shè)備和材料、培養(yǎng)基和試劑、檢驗(yàn)程序、操作步驟。本標(biāo)準(zhǔn)適用于魚(yú)類中嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌的檢驗(yàn)。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T4789.28—2003食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)、染色法、培養(yǎng)基和試劑GB/T6682—2008分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T18088—2000出入境動(dòng)物檢疫采樣3儀器和材料3.1冰箱：0℃~4℃。3.2恒溫培養(yǎng)箱：37℃±1℃。3.3顯微鏡：10×~100×。3.4均質(zhì)器或滅菌乳缽。3.5電子天平：0.0g～500.0g,精度0.1g。3.6試管：16mm×160mm、15mm×100mm及相應(yīng)的試管架。3.7刻度吸管：1mL（具0.01mL刻度）、5mL、10mL（具0.1mL刻度）。3.8錐形瓶：500mL、250mL。3.9培養(yǎng)皿：直徑90mm。3.10接種燈和接種環(huán)。3.11手術(shù)剪、鑷子等。4培養(yǎng)基和試劑4.1營(yíng)養(yǎng)肉湯：按GB/T4789.28-2003中4.8規(guī)定。4.2營(yíng)養(yǎng)瓊脂：按GB/T4789.28-2003中4.7規(guī)定。4.3血瓊脂：按GB/T4789.28-2003中4.6規(guī)定。4.4革蘭氏染色液：按GB/T4789.28-2003中2.2規(guī)定。4.5鞭毛染色法：按GB/T4789.28-2003中2.7規(guī)定。4.6實(shí)驗(yàn)室用水要求：按GB/T6682—2008中三級(jí)水的規(guī)格。5樣品的采集與處理2DB32/T1737-20115.1采樣數(shù)量對(duì)有癥狀的水生動(dòng)物，挑選3～5條，至少不低于2條瀕死的個(gè)體；對(duì)無(wú)癥狀的水生動(dòng)物，按GB/T18088—2000的規(guī)定，隨機(jī)取一定數(shù)量的個(gè)體。5.2采樣要求活體或剛死不久的水生動(dòng)物。5.3采集部位已知或懷疑有病原存在的組織或器官。對(duì)于特殊樣品如較大個(gè)體，無(wú)法采集水生動(dòng)物整體時(shí)，在有條件的地方可作一定處理，但必須由具有資質(zhì)的上崗人員根據(jù)檢測(cè)項(xiàng)目的不同要求而對(duì)水生動(dòng)物作適當(dāng)?shù)奶幚恚凑諜z測(cè)項(xiàng)目的檢測(cè)依據(jù)采取合適的水生動(dòng)物組織。并作好樣品的封存。6檢驗(yàn)程序嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌檢驗(yàn)程序見(jiàn)圖1。待檢樣品25g（mL225mL滅菌營(yíng)養(yǎng)肉湯營(yíng)養(yǎng)瓊脂挑取典型菌落挑取典型菌落涂片鞭毛染色檢驗(yàn)涂片革蘭氏染色涂片鞭毛染色檢驗(yàn)涂片革蘭氏染色檢驗(yàn)血瓊脂血瓊脂生化試驗(yàn)生化試驗(yàn)報(bào)告圖1嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌檢驗(yàn)程序7操作步驟3DB32/T1737-20117.1增菌以無(wú)菌操作取檢樣25g（mL加225mL滅菌營(yíng)養(yǎng)肉湯，用均質(zhì)器打碎或用乳缽磨碎，于37℃培養(yǎng)18h～24h后取出觀察。7.2分離取增菌液1環(huán)，劃線接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板一個(gè)，于37℃培養(yǎng)18h～24h，嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌在營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上容易生長(zhǎng)，菌落呈針尖狀，淡黃或淺黃色菌落。7.3涂片鏡檢將營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上典型的菌落進(jìn)行革蘭氏染色和鞭毛染色，鏡檢細(xì)菌形態(tài)和鞭毛著生情況。嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌是革蘭氏陰性菌，鞭毛染色為極生多鞭毛。7.4純培養(yǎng)挑取平板上的典型菌落，接種血瓊脂平板，經(jīng)37℃培養(yǎng)18h～24h，觀察結(jié)果，嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌在血瓊脂平板上呈淡紫綠色溶血。7.5生化試驗(yàn)分別接種各類生化培養(yǎng)基，置37℃培養(yǎng)24h后觀察（具體內(nèi)容見(jiàn)表1）。表1嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌的生化性狀+++-+++++---8結(jié)果判定嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌的檢出，可依據(jù)以下性狀報(bào)告：在營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上37℃培養(yǎng)18h～24h后，菌落呈針尖狀，淡黃或