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生物化學第十二章基因工程與常用的分子生物學技術目錄第一節(jié)基因工程第二節(jié)常用的分子生物學技術學習目標1．掌握基因工程的概念。2．熟悉基因工程的基本原理和臨床應用；核酸雜交、印跡和PCR技術的原理和臨床應用。3．了解基因診斷、基因治療等新醫(yī)療方法；基因測序和基因芯片技術。第一節(jié)基因工程一、基因工程的概念基因工程（geneticengineering）又稱基因拼接技術或DNA重組技術，即將不同來源的基因按預先設計的藍圖，在體外通過人工“剪切”和“拼接”等方法進行改造和重新組合，構建雜種DNA分子，然后導入微生物或真核細胞內，使重組基因在細胞內克隆、表達，產生出人類需要的基因產物，或者改造、創(chuàng)造新特性的生物類型。核心內容：DNA片段的重組和細胞內克隆特點跨物種性基因工程將外源DNA分子進行重新組合且引入到新的寄主生物中進行繁殖，使之具有了跨越天然物種屏障的能力，克服了固有的生物種間限制，擴大和帶來了定向改造生物的可能性，這是基因工程的最大特點。無性擴增少量的外源目的基因在寄主細胞中可大量擴增和高水平表達。二、基因工程的原理和過程（一）基因工程的基本工具限制性核酸內切酶簡稱限制酶，是進行DNA分子剪切的“手術刀”，能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開，使較大的DNA分子成為一定大小的DNA片段。二、基因工程的原理和過程（一）基因工程的基本工具DNA連接酶是DNA分子進行拼接的“針線”，恢復被限制酶切開了的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵，將DNA片段進行連接、重組。二、基因工程的原理和過程（一）基因工程的基本工具載體載體是重組DNA分子的“運輸車”，需具備下列條件：①能在受體細胞中復制并穩(wěn)定保存；②具有一至多個限制酶切割位點，供外源DNA片段插入；③具有標記基因，供重組DNA的鑒定和選擇?；蚬こ坛Ｓ玫妮d體有：質粒、噬菌體和動、植物病毒等。（二）基因工程的基本過程完整DNA克隆過程包括五大步驟：①目的DNA的分離獲?。ǚ郑?；②載體的選擇與準備（選）；③目的DNA與載體的連接（連）；④重組DNA轉入受體細胞（轉）；⑤重組體的篩選及鑒定(篩）。圖12-1以質粒為

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