DB32T 3283-2017 番茄抗南方根結(jié)線蟲鑒定技術(shù)規(guī)程　　

ICS65.020.20B31備案號(hào)：54552-2017DB32TechnicalregulationforidentificatingtomatoresistancetosouthernTechnicalregulationforidentificatingtomatoresistancetosouthern江蘇省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局IDB32/T3283—2017本標(biāo)準(zhǔn)的按GB/T1.1-2009《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫規(guī)則》的規(guī)定編寫。本標(biāo)準(zhǔn)由江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：王銀磊、趙統(tǒng)敏、余文貴、楊瑪麗、趙麗萍。1DB32/T3283—2017番茄抗南方根結(jié)線蟲鑒定技術(shù)規(guī)程本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了番茄對(duì)番茄根結(jié)線蟲病抗性鑒定及評(píng)價(jià)的育苗管理、線蟲準(zhǔn)備、病情鑒定、病情調(diào)查、抗性評(píng)價(jià)等技術(shù)要求。本標(biāo)準(zhǔn)適用于江蘇省范圍內(nèi)的番茄對(duì)南方根結(jié)線蟲病的抗性鑒定及其抗性評(píng)價(jià)工作。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的，凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件，凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改單）適用于本文件。GB/T8321農(nóng)藥合理使用準(zhǔn)則NY/T1858.7番茄抗黃瓜花葉病毒病鑒定技術(shù)規(guī)程3術(shù)語(yǔ)和定義3.1病情級(jí)別Diseaseratingscale人為定量植物個(gè)體或群體發(fā)病程度的數(shù)值化描述(注:引自NY/T1858.7)。3.2病情指數(shù)Diseaseindex是全面考慮發(fā)病率與嚴(yán)重度兩者的綜合指標(biāo)(注:引自NY/T1858.7)。病情指數(shù)按公式（1）計(jì)算：DI=──────────×100%.....................................................................................(1)式中：DI：病情指數(shù)Xi：病害分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)各級(jí)級(jí)值ni：各級(jí)嚴(yán)重度的調(diào)查單株數(shù)Ni：調(diào)查單株總數(shù)amax：最高級(jí)值4試劑與耗材2DB32/T3283—20174.1試劑10％磷酸三鈉溶液50g磷酸三鈉(Na3PO4?12H2O)溶于500mL水中即成。4.2耗材本鑒定技術(shù)規(guī)程中使用耗材包括：磷酸三鈉、培養(yǎng)皿、燒杯、剪刀、鑷子、草炭、蛭石、育苗盤、營(yíng)養(yǎng)缽等。5儀器與設(shè)備本鑒定技術(shù)規(guī)程中使用儀器設(shè)備包括：冰箱、恒溫培養(yǎng)箱、計(jì)數(shù)器、烘箱、改進(jìn)貝曼漏斗、人工氣侯室、移液器、顯微鏡、血球計(jì)數(shù)板等。6育苗及育苗管理6.1育苗方式將鑒定品種用10％磷酸三鈉溶液浸種、催芽，種子露白后進(jìn)行播種。以日光溫室或塑料大棚作為育苗場(chǎng)地，播種選用基質(zhì)配比為草炭：蛭石=2:1。播種選用128孔（16*8）的穴盤，每孔播種1粒。幼苗達(dá)到2葉1心時(shí)及時(shí)進(jìn)行移栽，移栽時(shí)選用基質(zhì)為沙壤土：河沙=2:1，基質(zhì)配好混勻后置于烘箱180℃烘烤2小時(shí)。將幼苗單株定植于直徑15cm*高15cm的營(yíng)養(yǎng)缽中。接種苗所處環(huán)境溫度白天23℃~26℃,夜間17℃~19℃。6.2播種及接種期間田間肥水管理參鑒品種播種至接種期間，水肥管理與常規(guī)生產(chǎn)一致。6.3病蟲害的防治參鑒番茄品種在接種前10d和接種后45d內(nèi)應(yīng)避免施用任何農(nóng)藥，其它期間病蟲害防治使用藥劑按照GB4285和GB8321規(guī)定執(zhí)行。6.4對(duì)照品種試驗(yàn)中設(shè)置抗病和感病對(duì)照品種，可選用Moneymaker或蘇粉9號(hào)（Solanumlycopersicum）作為感病對(duì)照品種，選用含有純合Mi-1基因的Motelle（Solanumlycopersicum）作為抗病對(duì)照材料。7接種方法7.1根結(jié)線蟲的準(zhǔn)備利用分子鑒定的方法，對(duì)根結(jié)線蟲進(jìn)行鑒定，確定所用線蟲為南方根結(jié)線蟲。用感病材料作為根結(jié)線蟲的繁殖寄主，待根結(jié)線蟲在植株根部繁殖出大量卵塊后，將植株連根拔起，挑取線蟲卵塊于改進(jìn)的貝曼漏斗上。將貝曼漏斗置于培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)皿加水至液面與卵塊層面平齊。將培養(yǎng)皿置于28℃的培養(yǎng)箱中，進(jìn)行二齡幼蟲的孵化。每24小時(shí)收集孵化液并再次加入蒸餾水進(jìn)行孵化，將收集好的線蟲接種液放置于室溫，每天對(duì)接種液進(jìn)行3~4次的人工補(bǔ)氧。收集兩次孵化液后，在顯微鏡下，用血球計(jì)數(shù)板對(duì)接種液的濃度測(cè)定，待線蟲接種液的總蟲量達(dá)到接種所需量時(shí)用于接種。7.2人工接種鑒定方法3DB32/T3283—2017待鑒定品種苗齡為4葉1心時(shí)，方可進(jìn)行人工接種。接種實(shí)驗(yàn)以人工氣候室為宜，便于對(duì)溫度進(jìn)行控制。接種前一天澆水一次。待鑒定品種和抗感病對(duì)照品種各30株。接種時(shí)，用1.5ml的移液器吸頭在距植株根莖部2cm的位置左右對(duì)稱扎兩個(gè)深約1cm~2cm的小洞。用移液器將接種液平均的接終于兩個(gè)洞內(nèi)，每個(gè)苗盆接種3000條南方根結(jié)線蟲二齡幼蟲，接種后一天方可澆水，但不可澆大水，7天后澆水恢復(fù)正常管理?？刂迫斯夂蚴噎h(huán)境，使環(huán)境溫度白天23℃~26℃,夜間17℃~19℃。鑒定室內(nèi)不施用任何殺蟲劑。8病情調(diào)查8.1調(diào)查時(shí)間接種45d后，將待鑒定材料和抗感病對(duì)照材料小心的從苗缽中取出，抖掉土壤，用水沖洗干凈。8.2調(diào)查方法對(duì)每份鑒定材料的根結(jié)數(shù)進(jìn)行人工統(tǒng)計(jì)，根據(jù)根結(jié)數(shù)對(duì)每一植株進(jìn)行鑒定分級(jí)，記載病情級(jí)別。8.3發(fā)病記載分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)記載病情，分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)見表1。表1番茄根結(jié)線蟲病病情級(jí)別及其癥狀描述病情級(jí)別癥狀描述8.4病情指數(shù)的計(jì)算和記載根據(jù)表1記載接種植株的病情級(jí)別及其相對(duì)應(yīng)的癥狀描述，調(diào)查所有接種植株的發(fā)病情況，記載各品種（系）每一單株的病情級(jí)別，按公式（1）計(jì)算病情指數(shù)。9抗性評(píng)價(jià)9.1鑒定有效性判別當(dāng)鑒定圃中的感病對(duì)照品種的病情指數(shù)達(dá)到75％以上，該批次抗番茄根結(jié)線蟲病鑒定視為有效。9.2抗性級(jí)別依據(jù)鑒定番茄品種（系）發(fā)病程度（病情指數(shù)）確定其對(duì)番茄根結(jié)線蟲病的抗性水平，劃分標(biāo)準(zhǔn)見表2。表2番茄品種(系)對(duì)番茄根結(jié)線蟲病抗性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)4DB32/T3283—2017病情指數(shù)(%)抗性評(píng)價(jià)英文縮寫0RS9.3重復(fù)鑒定初次鑒定中表現(xiàn)為高抗、抗病、中抗、感病的材料，進(jìn)行重復(fù)鑒定。9.4抗性評(píng)價(jià)一次鑒定結(jié)果僅能作為初步鑒定結(jié)果，不能作為抗性評(píng)價(jià)的依據(jù)。根據(jù)兩次及兩次以上抗性鑒定結(jié)果對(duì)鑒定材料進(jìn)行抗病性評(píng)價(jià)，抗性級(jí)別以統(tǒng)計(jì)的最高病情指數(shù)為準(zhǔn)。10接種后與鑒定材料的處理將鑒定后的田間病株及病土進(jìn)行高溫烘箱烘烤后方可丟棄。11鑒定記載表格番茄抗根結(jié)線蟲病鑒定結(jié)果記載表