CART細(xì)胞非臨床概述

資料項(xiàng)目編號(hào)：模塊2.4.申請分類：新藥申請（申請事項(xiàng)：臨床試驗(yàn)）注冊分類：治療用生物制品I類****CAR-T細(xì)胞（規(guī)格：）資料項(xiàng)目名稱：非臨床概述研究機(jī)構(gòu)名稱：研究地址：主要研究者姓名：實(shí)驗(yàn)者姓名：試驗(yàn)起止日期：原始資料保存地點(diǎn)：聯(lián)系人姓名：聯(lián)系電話：聯(lián)系地址： 申請機(jī)構(gòu)名稱： 第2頁/共2頁目錄TOC\o"1-8"\h\z\u表索引 2圖索引 22.4.1.非臨床試驗(yàn)策略概述 32.4.1.1非臨床研究項(xiàng)目選擇的依據(jù) 32.4.1.1.1****CAR-T細(xì)胞制品的基本信息 32.4.1.1.2****CAR-T細(xì)胞的作用機(jī)制 32.4.1.1.3****CAR-T細(xì)胞的臨床擬用適應(yīng)癥 32.4.1.1.4****CAR-T細(xì)胞臨床擬用適應(yīng)癥的流行病學(xué)和目前治療概述 42.4.1.1.5立題依據(jù) 42.4.1.1.6****CAR-T細(xì)胞制品的注冊分類及非臨床研究設(shè)計(jì) 52.4.2.藥理學(xué) 62.4.2.1****CAR-T細(xì)胞的非臨床主要藥效學(xué)研究 62.4.2.1.1體外活性研究 62.4.2.1.2體內(nèi)抗腫瘤活性研究 102.4.3.藥代動(dòng)力學(xué) 132.4.4.毒理學(xué) 162.4.5.綜合評估和結(jié)論 252.4.5.1****CAR-T細(xì)胞的有效性 252.4.5.1.1****CAR-T細(xì)胞的藥效學(xué)試驗(yàn)設(shè)計(jì)和方法評價(jià) 252.4.5.1.2****CAR-T細(xì)胞藥效學(xué)研究結(jié)果分析和評價(jià) 262.4.5.2****CAR-T細(xì)胞的安全性 262.4.5.2.1****CAR-T細(xì)胞毒理學(xué)試驗(yàn)設(shè)計(jì)和方法評價(jià) 262.4.5.2.2****CAR-T細(xì)胞毒理學(xué)試驗(yàn)結(jié)果分析和評價(jià) 282.4.5.3****CAR-T細(xì)胞的藥代動(dòng)力學(xué) 292.4.5.3.1****CAR-T細(xì)胞藥代動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)設(shè)計(jì)和方法評價(jià) 292.4.5.3.2****CAR-T細(xì)胞藥代動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)結(jié)果分析和評價(jià) 292.4.5.4****CAR-T細(xì)胞的非臨床藥理毒理研究結(jié)果對臨床研究方案的意義 302.4.6.參考文獻(xiàn) 30

表索引TOC\h\z\t"表"\c表1.****CAR-T細(xì)胞的非臨床研究項(xiàng)目 8圖索引圖1.****CAR-T細(xì)胞亞群分析 10圖2.****CAR-T細(xì)胞感染效率檢測結(jié)果 11圖3.在靶細(xì)胞刺激后****CAR-T細(xì)胞的細(xì)胞因子釋放 12圖4不同效靶比條件下CAR-T細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的殺傷效率 12圖5CFSE標(biāo)記的****CAR-T細(xì)胞在靶細(xì)胞刺激下的增殖能力檢測 13

資料項(xiàng)目編號(hào)：模塊2.4.2.4.1.非臨床試驗(yàn)策略概述2.4.1.1非臨床研究項(xiàng)目選擇的依據(jù)2.4.1.1.1****CAR-T細(xì)胞制品的基本信息根據(jù)《藥品注冊管理辦法》附件3《生物制品注冊分類及申報(bào)資料要求（試行）》中治療用生物制品的注冊分類要求，****CAR-T細(xì)胞屬于1類治療用生物制品，是利用基因工程方法對患者自體或者供體的T細(xì)胞進(jìn)行體外基因修飾后制備的注射用細(xì)胞懸液。****CAR-T細(xì)胞具有可以特異性識(shí)別CD19抗原陽性腫瘤細(xì)胞的嵌合抗原受體（CAR），能夠靶向識(shí)別并殺滅患者體內(nèi)的腫瘤細(xì)胞，從而達(dá)到治療腫瘤的目的。CAR重組基因片段是其識(shí)別腫瘤細(xì)胞表面的特異性抗原CD19、進(jìn)而殺傷腫瘤細(xì)胞并實(shí)現(xiàn)自身擴(kuò)增的關(guān)鍵序列。****CAR-T細(xì)胞制品的基本信息如下：外觀：Ph值：成分：性狀：規(guī)格：臨床用藥劑型：用法用量：藥品包裝：藥品貯藏：有效期：2.4.1.1.2****CAR-T細(xì)胞的作用機(jī)制將CAR基因轉(zhuǎn)到入供試者的T細(xì)胞中……激活CAR-T的生存、擴(kuò)增、體內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)及效應(yīng)細(xì)胞功能，發(fā)揮特異性殺傷CD19抗原表達(dá)陽性細(xì)胞作用。2.4.1.1.3****CAR-T細(xì)胞的臨床擬用適應(yīng)癥****CAR-T細(xì)胞的臨床擬用適應(yīng)癥為難治或復(fù)發(fā)的B細(xì)胞急性淋巴細(xì)胞白血病（r/rB-ALL）和難治或復(fù)發(fā)的B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤（r/rB-NHL）。2.4.1.1.4****CAR-T細(xì)胞臨床擬用適應(yīng)癥的流行病學(xué)和目前治療概述急性淋巴細(xì)胞白血?。╝cutelymphoblasticleukemia，ALL）是最常見的兒童和成人急性白血病之一，是一種生物學(xué)特征和臨床異質(zhì)性很大的惡性血液腫瘤。目前ALL的治療方法包括化療、放療、異基因造血干細(xì)胞移植等。但由于淋巴細(xì)胞白血病易廣泛浸潤及復(fù)發(fā)，預(yù)后均不理想。對于r/rB-ALL可以使用挽救化療、再次異基因造血干細(xì)胞移植或支持治療，但是療效均不理想，5年總生存率約為7%。惡性淋巴瘤（也稱為淋巴瘤）是起源于淋巴造血系統(tǒng)的惡性腫瘤，可分為非霍奇金淋巴瘤（NHL）和霍奇金淋巴瘤（HL）兩類。非霍奇金淋巴瘤是一種異質(zhì)性較大的疾病，在我國淋巴瘤患者中的占比達(dá)87.69%。目前淋巴瘤的治療方法主要有化療、放療、手術(shù)和骨髓移植。但由于高度異質(zhì)性，淋巴瘤的治療效果與預(yù)后并不理想，r/rB-NHL患者往往預(yù)后不良。2.4.1.1.5立題依據(jù)CAR-T（ChimericantigenreceptorT，嵌合抗原受體T）細(xì)胞治療是利用基因工程方法，對患者自體或者供體的T細(xì)胞進(jìn)行體外基因修飾，使其表達(dá)出可特異性識(shí)別腫瘤細(xì)胞的嵌合抗原受體（CAR），從而能夠靶向識(shí)別患者體內(nèi)的腫瘤細(xì)胞并進(jìn)行攻擊，達(dá)到治療腫瘤的目的。CD19分子是特異性表達(dá)于不同分化階段的B淋巴細(xì)胞表面的抗原，將可識(shí)別CD19的單鏈抗體可變區(qū)基因序列與淋巴細(xì)胞免疫受體的胞內(nèi)區(qū)序列拼接后，轉(zhuǎn)染至T細(xì)胞中，即可制備出特異性攻擊CD19陽性的B細(xì)胞惡性腫瘤的CD19CAR-T細(xì)胞。美國FDA已于2017年8月10日和2017年10月18日批準(zhǔn)上市了兩款CD19CAR-T細(xì)胞藥物，即諾華公司的Kymriah和凱特公司的Yescarta，分別用于治療r/rB-ALL（難治或復(fù)發(fā)的B細(xì)胞急性淋巴細(xì)胞白血?。┖蛂/rB-NHL（難治或復(fù)發(fā)的B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤）。目前，國內(nèi)尚無可以特異性攻擊CD19陽性的B細(xì)胞惡性腫瘤的藥物上市。為了給國內(nèi)的CD19陽性的B細(xì)胞惡性腫瘤患者提供具有更佳的治療效果和可接受的安全性以及更高的可及性的治療選擇，XXX自主開發(fā)了針對CD19靶點(diǎn)的第二代CAR-T細(xì)胞制品****CAR-T細(xì)胞。藥學(xué)研究證實(shí)，****CAR-T細(xì)胞的生產(chǎn)工藝穩(wěn)定、可靠，制劑合理，質(zhì)量可控，符合開展臨床試驗(yàn)的研究藥物質(zhì)量要求。2.4.1.1.6****CAR-T細(xì)胞制品的注冊分類及非臨床研究設(shè)計(jì)根據(jù)《藥品注冊管理辦法》附件3《生物制品注冊分類及申報(bào)資料要求（試行）》中治療用生物制品的注冊分類要求，開發(fā)的****CAR-T細(xì)胞為全新的細(xì)胞治療類生物制品，符合治療用生物制品第1類（新型生物制品）的分類要求，應(yīng)當(dāng)按照注冊分類1類申報(bào)。因此，我們依據(jù)生物制品第1類（新型生物制品）的注冊要求，參考《當(dāng)前對CAR-T類產(chǎn)品非臨床研究與評價(jià)的一些考慮》（CFDA藥品審評中心電子刊物20180315）、《細(xì)胞治療產(chǎn)品研究與評價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》（2017年第216號(hào)）、《人體細(xì)胞治療研究和制劑質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則》、人用藥品注冊技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)會(huì)（ICH）頒布的《生物技術(shù)藥品的非臨床安全性評價(jià)指南》（S6）和《ONCLINICALEVALUATIONFORANTICANCERPHARMACEUTICALS》（CurrentStep4versiondated29October2009）等相關(guān)技術(shù)指導(dǎo)文件的要求，設(shè)計(jì)并開展了****CAR-T細(xì)胞的藥理毒理研究，對其非臨床藥效學(xué)、藥代動(dòng)力學(xué)和毒理學(xué)進(jìn)行了全面的評估研究。設(shè)計(jì)和開展的****CAR-T細(xì)胞非臨床研究項(xiàng)目見表1.表1.****CAR-T細(xì)胞的非臨床研究項(xiàng)目研究項(xiàng)目研究機(jī)構(gòu)體系認(rèn)證試驗(yàn)名稱藥效學(xué)研究藥代動(dòng)力學(xué)研究急性毒性試驗(yàn)溶血性試驗(yàn)局部刺激性試驗(yàn)成瘤性試驗(yàn)2.4.2.藥理學(xué)2.4.2.1****CAR-T細(xì)胞的非臨床主要藥效學(xué)研究非臨床主要藥效學(xué)開展了****CAR-T細(xì)胞的體外活性以及體內(nèi)抗腫瘤活性研究。2.4.2.1.1體外活性研究****CAR-T細(xì)胞體外研究評價(jià)了細(xì)胞的亞群、感染效率，以及抗原依賴性的細(xì)胞增殖、細(xì)胞因子分泌和靶細(xì)胞殺傷。結(jié)果顯示，****CAR-T細(xì)胞中CD3+細(xì)胞比例超過98%，且含有一定比例的CD4+、CD8+細(xì)胞，中央型記憶T細(xì)胞、效應(yīng)T細(xì)胞、效應(yīng)型記憶T細(xì)胞；CAR+T細(xì)胞比例超過70%，而且能夠被CD19抗原特異性激活，表現(xiàn)為促進(jìn)了細(xì)胞擴(kuò)增、增加了IL-2、TNFα和IFNγ等細(xì)胞因子的釋放以及增強(qiáng)了對CD19抗原陽性細(xì)胞的體外殺傷作用。1、****CAR-T細(xì)胞亞群分析（略）2、****CAR-T細(xì)胞感染效率檢測（略）3、細(xì)胞因子釋放（略）4、****CAR-T細(xì)胞體外殺傷試驗(yàn)（略）5、****CAR-T細(xì)胞抗原刺激增殖試驗(yàn)：（略）2.4.2.1.2體內(nèi)抗腫瘤活性研究（略）2.4.2.2一般藥理學(xué)（略）2.4.3.藥代動(dòng)力學(xué)非臨床藥代動(dòng)力學(xué)研究開展了****CAR-T細(xì)胞的組織分布及其存續(xù)和消亡特性研究。2.4.3.1伴隨****CAR-T細(xì)胞單次給藥毒性試驗(yàn)開展的組織分布試驗(yàn)（略）2.4.3.2伴隨NCG小鼠靜脈注射給予****CAR-T細(xì)胞藥效學(xué)伴隨毒理學(xué)研究開展的組織分布試驗(yàn)（略）2.4.3.2藥代動(dòng)力學(xué)研究結(jié)論（略）2.4.4.毒理學(xué)2.4.4.1一般藥理學(xué)研究（略）2.4.4.2單次給藥急毒試驗(yàn)為了評價(jià)****CAR-T細(xì)胞單次靜脈輸注可能產(chǎn)生的急性毒性反應(yīng)，為臨床研究的設(shè)計(jì)與注冊申報(bào)提供動(dòng)物試驗(yàn)資料，我們設(shè)計(jì)并開展了****CAR-T細(xì)胞單次給藥毒性試驗(yàn)和NCG小鼠靜脈注射給予****CAR-T細(xì)胞藥效學(xué)伴隨毒理學(xué)研究。1、****CAR-T細(xì)胞單次給藥毒性試驗(yàn)（略）2、NCG小鼠靜脈注射給予****CAR-T細(xì)胞藥效學(xué)伴隨毒理學(xué)研究（略）2.4.4.3特殊安全性試驗(yàn)1、溶血性試驗(yàn)為了考察****CAR-T能否引起新西蘭兔紅細(xì)胞發(fā)生溶血或凝聚以及為臨床研究提供動(dòng)物試驗(yàn)資料，委托昭衍（蘇州）新藥研究中心有限公司開展了****CAR-T體外溶血性試驗(yàn)。該試驗(yàn)的開展嚴(yán)格遵從《藥物非臨床試驗(yàn)質(zhì)量管理規(guī)范》（GLP），所以可以保證試驗(yàn)結(jié)果的可靠性、完整性。（略）2、家兔血管刺激性試驗(yàn)為了評價(jià)****CAR-T對靜脈輸注局部組織是否產(chǎn)生刺激性以及為臨床研究提供動(dòng)物試驗(yàn)資料，委托昭衍（蘇州）新藥研究中心有限公司開展了****CAR-T輸注給予家兔的血管刺激性試驗(yàn)。該試驗(yàn)的開展嚴(yán)格遵從《藥物非臨床試驗(yàn)質(zhì)量管理規(guī)范》（GLP），所以可以保證試驗(yàn)結(jié)果的可靠性、完整性。（略）2.4.4.4其他試驗(yàn)1、****CAR-T體外成瘤性試驗(yàn)（略）2、****CAR-T體內(nèi)成瘤性試驗(yàn)（略）3、慢病毒自我復(fù)制能力檢測為了評價(jià)****CAR-T細(xì)胞基因改造后的慢病毒自我復(fù)制能力，我們伴隨****CAR-T細(xì)胞單次給藥毒性試驗(yàn)開展了小鼠血液樣品中的慢病毒自我復(fù)制能力檢測。檢測結(jié)果顯示，小鼠血液樣品對PCR沒有抑制作用，表明****CAR-T細(xì)胞不具有慢病毒自我復(fù)制能力。2.4.4.5毒理學(xué)研究結(jié)論****CAR-T細(xì)胞非臨床毒理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)：（1）急性毒性試驗(yàn)結(jié)果顯示，未見****CAR-T細(xì)胞單次靜脈輸注對NCG小鼠產(chǎn)生明顯毒性反應(yīng)，也未對心血管系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)以及中樞神經(jīng)系統(tǒng)等重要臟器系統(tǒng)產(chǎn)生明顯的功能性影響和器質(zhì)性改變，但不同劑量的****CAR-T細(xì)胞對小鼠的部分血液學(xué)級(jí)血液生化指標(biāo)都可能產(chǎn)生毒性影響（WBC、Neut、Neut(%)、Lymph、Lymph(%)、EOS、BASO、BASO(%)、ALT、AST、CK水平均升高，Mono、Mono(%)、EOS(%)、ALP、TB、CHO、TG水平均下降）。（2）****CAR-T細(xì)胞輸注后，NCG小鼠體內(nèi)未檢測到具有自我復(fù)制能力的慢病毒。（3）****CAR-T在體外無成瘤性。（4）其他毒理試驗(yàn)尚在進(jìn)展中。2.4.5.綜合評估和結(jié)論2.4.5.1****CAR-T細(xì)胞的有效性2.4.5.1.1****CAR-T細(xì)胞的藥效學(xué)試驗(yàn)設(shè)計(jì)和方法評價(jià)根據(jù)****CAR-T細(xì)胞的作用機(jī)制和特點(diǎn)，參考《抗腫瘤藥物藥效學(xué)指導(dǎo)原則》等分別建立體外、體內(nèi)藥效學(xué)模型，研究了****CAR-T細(xì)胞的體外和體內(nèi)藥效學(xué)作用。作用機(jī)制方面，采用流式細(xì)胞儀檢測****CAR-T細(xì)胞的亞群，采用特異性針對****CAR結(jié)構(gòu)中的ScFv抗體染色檢測****CAR的感染效率。體外活性方面，利用CBA試劑盒和流式細(xì)胞儀研究****CAR-T細(xì)胞的激活對CD19抗原的依賴性以及發(fā)揮體外殺傷作用時(shí)IL-2、TNFα和IFNγ水平的變化，通過乳酸脫氫酶（LDH）檢測評價(jià)了****CAR-T細(xì)胞對CD19抗原陽性腫瘤細(xì)胞的體外特異性殺傷作用，還通過流式細(xì)胞儀檢測評價(jià)了經(jīng)CD19抗原陽性的腫瘤細(xì)胞刺激后****CAR-T細(xì)胞的體外增殖活性。體內(nèi)抗腫瘤方面，采用CD19抗原陽性的人淋巴瘤細(xì)胞Raji-luc原位異種的高度免疫缺陷模型NCG小鼠移植腫瘤模型，制定合理的給藥方案（給藥途徑、給藥劑量等），評價(jià)了****CAR-T細(xì)胞在人淋巴瘤細(xì)胞Raji-luc原位異種移植腫瘤模型中的體內(nèi)抗腫瘤作用。上述藥效學(xué)研究，試驗(yàn)設(shè)計(jì)嚴(yán)謹(jǐn)、科學(xué)、合理，試驗(yàn)方法可靠，試驗(yàn)結(jié)果真實(shí)、可信。2.4.5.1.2****CAR-T細(xì)胞藥效學(xué)研究結(jié)果分析和評價(jià)非臨床主要藥效學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，****CAR-T細(xì)胞亞群和****CAR的轉(zhuǎn)染效率正常，****CAR-T細(xì)胞可以特異性靶向CD19抗原陽性細(xì)胞并通過釋放IL-2、TNFα和IFNγ等細(xì)胞因子對CD19抗原陽性細(xì)胞發(fā)揮殺傷作用，攜帶CD19抗原的腫瘤細(xì)胞可以刺激****CAR-T細(xì)胞體外特異性擴(kuò)增，****CAR-T細(xì)胞對CD19抗原陽性的人淋巴瘤細(xì)胞Raji-luc原位異種移植腫瘤具有良好的體內(nèi)抑制和殺傷作用。綜上所述，****CAR-T細(xì)胞作用機(jī)制明確，體外和體內(nèi)的抗CD19抗原陽性腫瘤的療效確切。2.4.5.2****CAR-T細(xì)胞的安全性2.4.5.2.1****CAR-T細(xì)胞毒理學(xué)試驗(yàn)設(shè)計(jì)和方法評價(jià)****CAR-T細(xì)胞為第1類治療用生物制品，制劑類型為注射劑，臨床給藥途徑為靜脈輸注。按照《藥物非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)范》和《細(xì)胞治療產(chǎn)品研究與評價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》的要求以及****CAR-T細(xì)胞治療藥物的特點(diǎn)（來自于惡性腫瘤患者的個(gè)體化細(xì)胞治療產(chǎn)品），參考同類藥物諾華公司的Kymriah和凱特公司的Yescarta兩種CD19CAR-T細(xì)胞，設(shè)計(jì)了****CAR-T細(xì)胞的毒理學(xué)研究試驗(yàn)。研究選擇NCG小鼠和利用NCG小鼠建立的人淋巴瘤細(xì)胞Raji-luc原位異種移植腫瘤模型作為受試動(dòng)物，更能揭示****CAR-T細(xì)胞的臨床用藥情況，對臨床更具有指導(dǎo)意義。試驗(yàn)設(shè)計(jì)嚴(yán)謹(jǐn)、科學(xué)、合理，試驗(yàn)方法可靠，試驗(yàn)結(jié)果真實(shí)、可信。毒理學(xué)研究內(nèi)容為：急性毒性試驗(yàn)，包括單次靜脈輸注****CAR-T細(xì)胞對NCG小鼠的急性毒性試驗(yàn)和NCG小鼠靜脈注射給予****CAR-T細(xì)胞藥效學(xué)伴隨毒理學(xué)研究；伴隨單次靜脈輸注****CAR-T細(xì)胞對NCG小鼠的急性毒性試驗(yàn)開展的一般藥理學(xué)研究指標(biāo)的觀察；特殊安全性試驗(yàn)，包括溶血性試驗(yàn)和家兔血管刺激性試驗(yàn)；以及其他毒性試驗(yàn)，包括****CAR-T體外成瘤性試驗(yàn)、****CAR-T體內(nèi)成瘤性試驗(yàn)、伴隨單次靜脈輸注****CAR-T細(xì)胞對NCG小鼠的急性毒性試驗(yàn)開展的慢病毒自我復(fù)制能力檢測。上述各試驗(yàn)，對給藥劑量、給藥途徑均進(jìn)行了合理、科學(xué)的設(shè)計(jì)，急毒試驗(yàn)中還設(shè)置了溶媒對照組、荷瘤動(dòng)物給予未進(jìn)行CAR基因改造的T細(xì)胞對照組、非荷瘤動(dòng)物給予****CAR-T的非荷瘤對照組、模型對照組、非荷瘤動(dòng)物給予0.9%氯化鈉注射液的陰性對照組等作為參照，以全面反映、評價(jià)****CAR-T細(xì)胞制品的安全性。由于****CAR-T細(xì)胞制品是來自于惡性腫瘤患者并經(jīng)過基因改造的個(gè)體化治療細(xì)胞產(chǎn)品，臨床擬用給藥途徑為單次靜脈輸注給藥，不需要長期重復(fù)給藥，因此我們未設(shè)計(jì)重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)。由于****CAR-T細(xì)胞制品不適于在正常實(shí)驗(yàn)動(dòng)物也不易于在免疫缺陷動(dòng)物按照傳統(tǒng)方法開展一般藥理學(xué)研究，而且伴隨****CAR-T細(xì)胞單次給藥毒性試驗(yàn)以及NCG小鼠靜脈注射給予****CAR-T細(xì)胞藥效學(xué)伴隨毒理學(xué)研究開展的****CAR-T細(xì)胞輸注對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物重要臟器系統(tǒng)的功能和組織學(xué)觀察未發(fā)現(xiàn)****CAR-T細(xì)胞對中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)的功能等產(chǎn)生影響，因此，我們未獨(dú)立設(shè)計(jì)和開展****CAR-T細(xì)胞的一般藥理學(xué)研究（安全藥理學(xué)試驗(yàn)）。由于****CAR-T細(xì)胞制品不適于在正常實(shí)驗(yàn)動(dòng)物而是在免疫缺陷動(dòng)物開展的毒理試驗(yàn)，因此無法研究其免疫毒性和免疫原性，我們未設(shè)計(jì)****CAR-T細(xì)胞的免疫原性和免疫毒性試驗(yàn)。由于****CAR-T細(xì)胞制品為取自于惡性腫瘤患者并經(jīng)過基因改造表達(dá)嵌合抗原受體（CAR）的自體體細(xì)胞治療產(chǎn)品，其基因改造以及制備工藝不存在誘導(dǎo)或增強(qiáng)宿主體內(nèi)形成腫瘤的風(fēng)險(xiǎn)，而且目標(biāo)患者人群為復(fù)發(fā)/難治的B細(xì)胞急性淋巴細(xì)胞白血病和復(fù)發(fā)/難治的B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤患者，因此，我們未設(shè)計(jì)****CAR-T細(xì)胞的致瘤性/致癌性試驗(yàn)。由于****CAR-T細(xì)胞制品的臨床試驗(yàn)和臨床應(yīng)用的擬用人群需要排除妊娠和哺乳期女性，因此，我們未設(shè)計(jì)****CAR-T細(xì)胞的生殖毒性試驗(yàn)。由于****CAR-T細(xì)胞制品不會(huì)直接與DNA或其他染色體物質(zhì)發(fā)生相互作用，而且有復(fù)制能力的慢病毒檢測未檢測到慢病毒，因而我們未設(shè)計(jì)****CAR-T細(xì)胞的遺傳毒性試驗(yàn)。2.4.5.2.2****CAR-T細(xì)胞毒理學(xué)試驗(yàn)結(jié)果分析和評價(jià)伴隨****CAR-T細(xì)胞單次給藥毒性試驗(yàn)以及NCG小鼠靜脈注射給予****CAR-T細(xì)胞藥效學(xué)伴隨毒理學(xué)研究開展的****CAR-T細(xì)胞輸注對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物重要臟器系統(tǒng)的功能和組織學(xué)觀察結(jié)果顯示，****CAR-T細(xì)胞輸注未對NCG小鼠的呼吸系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)以及心血管系統(tǒng)等重要臟器系統(tǒng)產(chǎn)生明顯的功能性影響和器質(zhì)性改變。****CAR-T細(xì)胞單次給藥毒性試驗(yàn)結(jié)果表明，除了對NCG小鼠的部分血液學(xué)及血液生化指標(biāo)可能產(chǎn)生影響（WBC、Neut、Neut(%)、Lymph、Lymph(%)、EOS、BASO、BASO(%)、ALT、AST、CK水平均升高，Mono、Mono(%)、EOS(%)、ALP、TB、CHO、TG水平均下降）產(chǎn)生影響外，****CAR-T細(xì)胞對小鼠的體重和耗食量不產(chǎn)生毒性影響，對重要組織器官也不產(chǎn)生明顯器質(zhì)性毒性損害。NCG小鼠靜脈注射給予****CAR-T細(xì)胞藥效學(xué)伴隨毒理學(xué)研究中，也未發(fā)現(xiàn)明顯與****CAR-T輸注相關(guān)的毒性反應(yīng)。另外，****CAR-T體外成瘤性試驗(yàn)可以初步判定****CAR-T在體外無成瘤性，伴隨****CAR-T細(xì)胞單次給藥毒性試驗(yàn)開展的小鼠血液樣品中的慢病毒自我復(fù)制能力檢測結(jié)果表明****CAR-T細(xì)胞不具有慢病毒自我復(fù)制能力。其他試驗(yàn)尚在進(jìn)展中，尚未觀察到明顯毒性反應(yīng)發(fā)生。綜上所述，非臨床安全性研究表明，****CAR-T輸注后可以對部分血液學(xué)指標(biāo)和血液生化指標(biāo)產(chǎn)生影響，尚未發(fā)現(xiàn)其他明顯毒性反應(yīng)。因此，****CAR-T細(xì)胞制品可能具有較好的安全性，但在臨床試驗(yàn)或臨床應(yīng)用時(shí)，應(yīng)關(guān)注****CAR-T細(xì)胞制品對患者的血液系統(tǒng)可能存在的影響。2.4.5.3****CAR-T細(xì)胞的藥代動(dòng)力學(xué)2.4.5.3.1****CAR-T細(xì)胞藥代動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)設(shè)計(jì)和方法評價(jià)根據(jù)《細(xì)胞治療產(chǎn)品研究與評價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》的要求以及****CAR-T細(xì)胞治療藥物的特點(diǎn)（來自于惡性腫瘤患者的個(gè)體化細(xì)胞治療產(chǎn)品），我們在荷瘤NCG小鼠和非荷瘤NCG小鼠體內(nèi)開展了****CAR-T細(xì)胞的藥代動(dòng)力學(xué)研究，利用驗(yàn)證后的細(xì)胞追蹤方法動(dòng)態(tài)研究了****CAR-T細(xì)胞產(chǎn)品的分布、遷移及其存續(xù)和消亡特性。試驗(yàn)設(shè)計(jì)嚴(yán)謹(jǐn)、科學(xué)、合理，試驗(yàn)方法可靠，試驗(yàn)結(jié)果真實(shí)、可信。2.4.5.3.2****CAR-T細(xì)胞藥代動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)結(jié)果分析和評價(jià)非臨床藥代動(dòng)力學(xué)研究結(jié)果顯示，在非荷瘤小鼠體內(nèi)，****CAR-T細(xì)胞輸注后可以快速分布于腸系膜淋巴結(jié)和肺臟，還可以穿過血腦屏障進(jìn)入腦組織中；****CAR-T細(xì)胞會(huì)被快速清除。在荷瘤小鼠體內(nèi)，未進(jìn)行CAR基因改造的T細(xì)胞可以快速分布到全血、心臟、腦、肺臟、子宮、卵巢等廣泛組織中，但7天內(nèi)基本被完全清除；****CAR-T細(xì)胞單次靜脈輸注后，可以快速分布到肺組織，然后隨著時(shí)間的推移，****CAR-T細(xì)胞可能被激活并擴(kuò)增，廣泛遷移到腸系膜淋巴結(jié)、骨髓、肝臟、子宮、心臟、全血、脾臟等等臟器組