44標(biāo)準(zhǔn)-辣椒抗疫病田間鑒定技術(shù)規(guī)程

Q/LB.□XXXXX-XXXX目次TOC\o"1-1"\h\t"標(biāo)準(zhǔn)文件_一級條標(biāo)題,2,標(biāo)準(zhǔn)文件_附錄一級條標(biāo)題,2,"前言 II1范圍 12 規(guī)范性引用文件 13 術(shù)語和定義 14 病原菌接種體的制備 15 抗病性鑒定圃設(shè)置 26 接種 27 病情調(diào)查 38 抗性評價 39 鑒定記載表 4附錄A（資料性）辣椒疫霉病菌（Phytophthoracapsici） 5附錄B（資料性）辣椒抗疫病田間鑒定結(jié)果記載表 6前言本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件代替DB14/T1353—2024《辣椒抗疫病田間鑒定技術(shù)規(guī)程》，與DB14/T1353—2017相比，除結(jié)構(gòu)調(diào)整和編輯性改動外，主要技術(shù)變化如下：——修訂了“抗病性田間鑒定”的定義（見3.2）——更改了“保存病原菌”中內(nèi)容（見4.3.2）——合并“5.2試驗(yàn)設(shè)計(jì)”與“5.3種植要求”，并修改相關(guān)內(nèi)容（見5.2）——更改了“接種后的管理”中內(nèi)容（見6.3）——合并“7.1調(diào)查時間”與“7.2調(diào)查方法”，并修改相關(guān)內(nèi)容（見7.1）本文件由山西省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出、組織實(shí)施和監(jiān)督檢查。本文件由山西省市場監(jiān)督管理局對標(biāo)準(zhǔn)的組織實(shí)施情況進(jìn)行監(jiān)督檢查。本文件由山西省農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會（SXS/TC19）歸口。本文件起草單位：山西農(nóng)業(yè)大學(xué)。本文件主要起草人：周建波、殷輝、趙曉軍、呂紅、秦楠、牛國飛、原宗英。本文件及其所代替文件的歷次版本發(fā)布情況為：——2017年首次發(fā)布為DB14/T1353—2017；——本次為第一次修訂。辣椒抗疫病田間鑒定技術(shù)規(guī)程范圍本文件規(guī)定了辣椒抗疫病田間鑒定的術(shù)語和定義、病原菌接種體制備、抗病性鑒定圃設(shè)置、接種、病情調(diào)查、抗病性評價及鑒定記錄表。本文件適用于各種辣椒資源對疫病抗性的田間鑒定及評價。規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。NY/T2060.1-2011辣椒抗病性鑒定技術(shù)規(guī)程第1部分：辣椒抗疫病鑒定技術(shù)規(guī)程術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1辣椒疫病由辣椒疫霉病菌（Phytophthoracapsici）所引起的一種卵菌病害，主要危害葉片、莖桿及果實(shí)，莖基部、莖節(jié)分叉處最容易發(fā)病。受危害植株根部呈褐色，后期整個辣椒植株枯死；在近地面以及莖節(jié)分叉處莖桿最容易受危害，初期呈水漬狀、暗綠色病斑，病斑擴(kuò)展繞莖一周后，病莖部縊縮、黑褐色，病部以上莖葉枯萎，最后整株死亡。3.2抗病性田間鑒定自然條件下，將病原菌孢子或者菌絲接種到田間特定生育期的植物特定部位上，一定時間后依據(jù)植株病情進(jìn)行抗病性評價。3.3菌餅從菌落邊緣用打孔器打取的帶有菌絲的菌塊。病原菌接種體的制備4.1病原菌分離4.1.1培養(yǎng)基的制備V8培養(yǎng)基：V8蔬菜汁100mL，碳酸鈣0.2g，瓊脂粉15g，用蒸餾水定容至1000mL，121℃高壓濕熱滅菌20min。燕麥培養(yǎng)基：將燕麥片30g用蒸餾水煮沸60min，加瓊脂粉15g，雙層紗布過濾，用蒸餾水定容至1000mL，121℃高壓濕熱滅菌20min。4.1.2主要儀器及設(shè)備光學(xué)顯微鏡、恒溫培養(yǎng)箱、超凈工作臺。4.1.3分離病原菌采集發(fā)病植株葉片、莖基部及病果的典型病斑。從病斑邊緣病健交界處剪取約0.5cm×0.5cm大小的病組織，用75%乙醇消毒90s，然后用無菌水沖洗3次，用滅菌濾紙將水吸干，置于V8培養(yǎng)基上，25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。4.2病原菌的純化和鑒定將辣椒疫霉（Phytophthoracapsici）培養(yǎng)2d后，從菌落邊緣挑取挑取單菌絲接種至V8培養(yǎng)基上，25℃培養(yǎng)5d。辣椒疫霉菌形態(tài)學(xué)特征鑒定方法參見附錄A。4.3病原菌的擴(kuò)繁和保存4.3.1擴(kuò)繁病原菌在接種前10d繁殖辣椒疫霉菌，選取已保存的菌種接于90mm含燕麥培養(yǎng)基的常規(guī)玻璃培養(yǎng)皿中，25℃培養(yǎng)黑暗7d。在菌落邊緣處用5mm滅菌打孔器打菌餅備用。4.3.2保存病原菌制作1.5mL離心管燕麥培養(yǎng)基小斜面，將待保存菌株接種至斜面，25℃培養(yǎng)待菌絲長滿斜面后，將離心管放置4℃~8℃保存?？共⌒澡b定圃設(shè)置鑒定圃的選擇鑒定圃一般選擇在辣椒疫病常發(fā)田塊，且具備良好的自然發(fā)病環(huán)境。種植要求鑒定材料小區(qū)隨機(jī)排列，設(shè)置1組已知抗病和感病，對照材料選取PI201234辣椒品系為抗病對照品種、茄門辣椒為感病對照品種，每份鑒定材料重復(fù)3次。鑒定材料的育苗時間和移栽時間與大田生產(chǎn)時間相同或做適當(dāng)調(diào)整，使植株接種期和發(fā)病期能夠與適宜的氣候條件相遇。鑒定小區(qū)面積15m2~20m2、行距40cm，株距35cm~40cm。土壤肥力水平和耕作管理與大田生產(chǎn)相同。接種接種時期接種時期為第6片真葉展平期。接種方法在辣椒植株的分枝處，用滅菌刀片將其頂部切掉，取4.1.6中制備的辣椒疫霉菌菌餅帶菌絲的一面貼在切口面處，用無菌濕棉球包裹接菌部位保濕，再用塑料薄膜包扎。接種后的管理接種后澆1次水并在接種24h后除去接種口處的包扎塑料薄膜。病情調(diào)查調(diào)查時間和方法在接種后7d~14d進(jìn)行鑒定辣椒植株病情調(diào)查，調(diào)查各小區(qū)中的所有植株。方法為用直尺測量每份鑒定材料接種后病斑長度并記錄。依據(jù)辣椒疫病嚴(yán)重度分級標(biāo)準(zhǔn)，記載每份鑒定材料的嚴(yán)重度級別、參見附錄B，并計(jì)算每份鑒定材料的病情指數(shù)（DI）。病情指數(shù)按式（1）計(jì)算： (SEQ標(biāo)準(zhǔn)自動公式\*ARABIC1)式中：DI——病情指數(shù)；NI——各級發(fā)病株數(shù)；I——相對應(yīng)的嚴(yán)重度級數(shù)值；M——調(diào)查總株數(shù)。病情分級辣椒疫病嚴(yán)重度分級及其相對應(yīng)的癥狀描述見表1。辣椒疫病嚴(yán)重度分級級別病斑長度（cm）0接菌部位莖部變褐，病斑長度≤1cm，未越過植株分支點(diǎn)1接菌部位變褐，1cm＜病斑長度≤3cm，植株葉片不萎蔫或可恢復(fù)性萎蔫3接菌部位變褐，3cm＜病斑長度≤5cm，葉片不可恢復(fù)性萎蔫5接部位變褐或變黑，5cm＜病斑長度≤7cm，葉片不可恢復(fù)性萎蔫，上部葉片壞死7接菌部位變黑，7cm＜病斑長度≤10cm，整株萎蔫9接菌部位變黑，10cm＜病斑長度，整株枯死抗性評價鑒定有效性判別當(dāng)感病對照材料達(dá)到其相應(yīng)感病程度（DI>50），該批次抗疫病鑒定視為有效。抗病性分級方法依據(jù)鑒定材料3次重復(fù)的病情指數(shù)（DI）平均值確定其抗性水平，劃分標(biāo)準(zhǔn)見表2。辣椒對疫病抗性的評價標(biāo)準(zhǔn)病情指數(shù)（DI）抗性類型0＜DI≤10高抗（HR）10＜DI≤30抗病（R）30＜DI≤50中抗（MR）50＜DI≤70感?。⊿）70＜DI高感（HS）8.3重復(fù)鑒定鑒定材料抗性初次鑒定為高抗、抗病、中抗，次年進(jìn)行重復(fù)鑒定?？剐栽u價結(jié)果分析依據(jù)重復(fù)抗性鑒定結(jié)果對鑒定材料進(jìn)行抗病性評價，抗性以記載的最高病情指數(shù)為準(zhǔn)。鑒定記載表辣椒抗病性田間鑒定結(jié)果記載表參見附錄B。

（資料性）

辣椒疫霉病菌（Phytophthoracapsici）在V8培養(yǎng)基上，典型菌株呈放射狀生長，菌絲絲狀、無隔膜，寬3.75μm~6.25μm；孢囊梗無色，絲狀；孢子囊頂生，近球形，單孢，卵圓形，大小28.01μm~59.00μm×24.80μm~43.50μm，有1~3個乳突，可脫落，每個孢子囊可以釋放7~40個游動孢子；游動孢子腎形或近梨形，大小15μm~20μm×9μm~16μm，鞭毛長17μm~30μm；藏卵器，球形，直徑29μm~35μm；雄器，球形，圍生，無色，15μm~20μm×9μm~16μm，平均17μm×15μ