高二 人教版 生物學(xué)選擇性必修3 第1章《微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用（第2課時）》課件

高二—人教版—生物學(xué)選擇性必修3—第1章

微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用（第2課時）微生物的純培養(yǎng)一、相關(guān)概念1.培養(yǎng)物：2.純培養(yǎng)物：3.純培養(yǎng)：包括配制培養(yǎng)基、滅菌、接種、分離和培養(yǎng)等步驟。接種于培養(yǎng)基內(nèi)，在合適條件下形成的含特定種類微生物的群體。由單一個體繁殖所獲得的微生物群體。獲得純培養(yǎng)物的過程。微生物的純培養(yǎng)二、微生物純培養(yǎng)的原理

采用平板劃線法和稀釋涂布平板法能將單個微生物分散在固體培養(yǎng)基上，之后經(jīng)培養(yǎng)得到的單菌落一般是由單個微生物繁殖形成的純培養(yǎng)物。菌落：

分散的微生物在適宜的培養(yǎng)基表面或內(nèi)部可以繁殖形成肉眼可見的、有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體。平板劃線法稀釋涂布平板法酵母菌的純培養(yǎng)一、制備培養(yǎng)基（馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基）配制培養(yǎng)基滅菌切成小塊的去皮馬鈴薯200g→加水1000mL加熱煮沸至馬鈴薯軟爛→紗布過濾→濾液加入葡萄糖/蔗糖20g及瓊脂15~20g→蒸餾水定容至1000mL培養(yǎng)基：培養(yǎng)皿：干熱滅菌高壓蒸汽滅菌培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到錐形瓶中→加棉塞，包牛皮紙，用皮筋勒緊→放入高壓蒸汽滅菌鍋→100kPa、121℃滅菌15~30min5~8套培養(yǎng)皿包成一包→牛皮紙包緊→放入干熱滅菌箱→160~170℃滅菌2h酵母菌的純培養(yǎng)一、制備培養(yǎng)基（馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基）配制培養(yǎng)基滅菌倒平板切成小塊的去皮馬鈴薯200g→加水1000mL加熱煮沸至馬鈴薯軟爛→紗布過濾→濾液加入葡萄糖/蔗糖20g及瓊脂15~20g→蒸餾水定容至1000mL培養(yǎng)基：培養(yǎng)皿：干熱滅菌高壓蒸汽滅菌待培養(yǎng)基冷卻至50℃左右，在酒精燈火焰附近倒平板溫度過高，形成的水蒸氣很多；溫度過低(＜44℃)，培養(yǎng)基會凝固。酒精燈火焰周圍溫度高，微生物很少甚至沒有，避免外來微生物污染。酵母菌的純培養(yǎng)一、制備培養(yǎng)基（馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基）倒平板酵母菌的純培養(yǎng)一、制備培養(yǎng)基（馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基）倒平板待培養(yǎng)基冷卻至50℃左右，在酒精燈火焰附近倒平板拔出錐形瓶的棉塞將瓶口迅速通過火焰

灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。酵母菌的純培養(yǎng)一、制備培養(yǎng)基（馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基）倒平板待培養(yǎng)基冷卻至50℃左右，在酒精燈火焰附近倒平板拔出錐形瓶的棉塞將瓶口迅速通過火焰用拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，將培養(yǎng)基(10~20mL)倒入培養(yǎng)皿，立即蓋上皿蓋

切勿完全打開皿蓋，避免雜菌污染培養(yǎng)基。酵母菌的純培養(yǎng)一、制備培養(yǎng)基（馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基）倒平板待培養(yǎng)基冷卻至50℃左右，在酒精燈火焰附近倒平板拔出錐形瓶的棉塞將瓶口迅速通過火焰用拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，將培養(yǎng)基(10~20mL)倒入培養(yǎng)皿，立即蓋上皿蓋等待培養(yǎng)基冷卻凝固后，將培養(yǎng)皿倒過來放置

防止皿蓋的水珠落入培養(yǎng)基造成污染，且使

培養(yǎng)基中

的水分更

好地蒸發(fā)。酵母菌的純培養(yǎng)二、接種和分離酵母菌平板劃線法

通過接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。經(jīng)數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離得到單菌落。接種環(huán)酵母菌的純培養(yǎng)二、接種和分離酵母菌平板劃線法酵母菌的純培養(yǎng)二、接種和分離酵母菌12345①接種環(huán)只蘸取一次菌液，在培養(yǎng)基不同區(qū)域連續(xù)多次

劃線。②第二次及其后的劃線操作都從上一次劃線的末端開始

劃線。

劃線后末端含有的細(xì)菌數(shù)目較少，每次從上一次劃線的末端開始劃線能夠使細(xì)菌的數(shù)目隨劃線次數(shù)的增加而逐漸減少，最終分散成單個細(xì)胞。平板劃線法③不要將最后一次的劃線與第一次的劃線相連。

最后一次劃線已經(jīng)將細(xì)菌稀釋成單個的細(xì)胞，如果與第一次劃線相連則增加了細(xì)菌的數(shù)目，達(dá)不到純化的效果。酵母菌的純培養(yǎng)二、接種和分離酵母菌平板劃線法將接種環(huán)放在火焰上灼燒，直到接種環(huán)的金屬絲燒紅。

避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物。酵母菌的純培養(yǎng)二、接種和分離酵母菌將接種環(huán)放在火焰上灼燒，直到接種環(huán)的金屬絲燒紅。在火焰旁冷卻接種環(huán)。同時，拔出裝有酵母菌培養(yǎng)液的試管的棉塞。

避免因接種環(huán)溫度太高而殺死菌種。平板劃線法酵母菌的純培養(yǎng)二、接種和分離酵母菌將接種環(huán)放在火焰上灼燒，直到接種環(huán)的金屬絲燒紅。在火焰旁冷卻接種環(huán)。同時，拔出裝有酵母菌培養(yǎng)液的試管的棉塞。

灼燒滅菌，防止試管口的微生物污染培養(yǎng)物。將試管口通過火焰。平板劃線法酵母菌的純培養(yǎng)二、接種和分離酵母菌將接種環(huán)放在火焰上灼燒，直到接種環(huán)的金屬絲燒紅。在火焰旁冷卻接種環(huán)。同時，拔出裝有酵母菌培養(yǎng)液的試管的棉塞。將試管口通過火焰。在火焰附近用接種環(huán)蘸取一環(huán)菌液。平板劃線法酵母菌的純培養(yǎng)二、接種和分離酵母菌將試管口通過火焰，并塞上棉塞。

灼燒滅菌，防止試管口的微生物污染試管中的培養(yǎng)物。平板劃線法酵母菌的純培養(yǎng)二、接種和分離酵母菌將試管口通過火焰，并塞上棉塞。

切勿完全打開皿蓋，避免雜菌污染培養(yǎng)基。在火焰附近將皿蓋打開一條縫隙，用接種環(huán)在培養(yǎng)基表面迅速劃三至五條平行線，蓋上皿蓋。平板劃線法酵母菌的純培養(yǎng)二、接種和分離酵母菌

灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一次劃線的末端開始作第二次劃線。重復(fù)以上操作，作第三、四、五次劃線。注意不要將最后一次的劃線與第一次的劃線相連。劃線操作結(jié)束后，灼燒接種環(huán)。

劃線前灼燒接種環(huán)的目的是殺死上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端。

劃線操作后灼燒接種環(huán)的目的是及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，平板劃線法避免污染環(huán)境和感染操作者。酵母菌的純培養(yǎng)三、培養(yǎng)酵母菌

待菌液被培養(yǎng)基吸收，將接種后的平板倒置，放入28℃左右的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24~48h。酵母菌最適生長溫度避免因培養(yǎng)時間不足無法形成菌落；Q1.為什么要將平板倒置培養(yǎng)？

防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基造成污染。避免因培養(yǎng)時間過長導(dǎo)致菌落相連。酵母菌的純培養(yǎng)三、培養(yǎng)酵母菌

待菌液被培養(yǎng)基吸收，將接種后的平板倒置，放入28℃左右的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24~48h。Q2.如何判斷培養(yǎng)基是否受雜菌污染？

設(shè)置空白對照，取一個未接種的培養(yǎng)基置于相同的培養(yǎng)條件下同時培養(yǎng)。Q3.如果未接種的培養(yǎng)基表面有菌落生長說明什么？應(yīng)如何處理？

如果有菌落生長，說明培養(yǎng)基被污染或滅菌不徹底，或培養(yǎng)過程中受雜菌污染。需要重新制備培養(yǎng)基。酵母菌的純培養(yǎng)三、培養(yǎng)酵母菌

待菌液被培養(yǎng)基吸收，將接種后的平板倒置，放入28℃左右的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24~48h。Q4.培養(yǎng)結(jié)束后，應(yīng)如何處理培養(yǎng)基及培養(yǎng)物？

一般用高壓蒸汽滅菌后倒掉，以免污染環(huán)境。酵母菌的純培養(yǎng)四、結(jié)果分析與評價

在接種酵母菌的培養(yǎng)基上，你是否觀察到了單菌落？這些菌落的顏色、形狀和大小是否一致？如果你觀察到了不同形態(tài)的菌落，你能分析出可能是由哪些原因引起的嗎？

如果實(shí)驗(yàn)成功，可在接種酵母菌的培養(yǎng)基上觀察到單菌落。

如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合酵母菌菌落的特點(diǎn)，則說明純化酵母菌的操作成功。

如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他形態(tài)的菌落，可能是接種的菌種不純，或者無菌操作不規(guī)范導(dǎo)致被雜菌污染等原因引起的。微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)基的配制種類無菌技術(shù)消毒滅菌煮沸消毒巴氏消毒化學(xué)藥物消毒紫外線消毒生物消毒濕熱滅菌干熱滅菌灼燒滅菌營養(yǎng)物質(zhì)液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基水、碳源、氮源、無機(jī)鹽、特殊營養(yǎng)物質(zhì)等微生物的純化培養(yǎng)步驟配制培養(yǎng)基滅菌接種分離培養(yǎng)方法平板劃線法稀釋涂布平板法拓展應(yīng)用2.某生物興趣小組將葡萄皮上成功分離的野生酵母菌分別接種于3個盛有等量同種液體培養(yǎng)基的錐形瓶中，并放置在搖床上培養(yǎng)，搖床轉(zhuǎn)速分別為210r/min、230r/min和250r/min。培養(yǎng)時間與酵母菌種群密度的關(guān)系如圖所示。請分析回答下列問題。

（1）搖床轉(zhuǎn)速不同，意味著培養(yǎng)條件有什么不同？

（2）從圖中數(shù)據(jù)你可以得出什么結(jié)論？其原因是什么？

（3）為什么培養(yǎng)8h后，其中2個錐形瓶中酵母菌的種群密度基本達(dá)到穩(wěn)定？拓展應(yīng)用2.某生物興趣小組將葡萄皮上成功分離的野生酵母菌分別接種于3個盛有等量同種液體培養(yǎng)基的錐形瓶中，并放置在搖床上培養(yǎng)，搖床轉(zhuǎn)速分別為210r/min、230r/min和250r/min。培養(yǎng)時間與酵母菌種群密度的關(guān)系如圖所示。請分析回答下列問題。

（1）搖床轉(zhuǎn)速不同，意味著培養(yǎng)條件有什么不同？

搖床轉(zhuǎn)速越高，培養(yǎng)液中的溶氧量越多。拓展應(yīng)用2.某生物興趣小組將葡萄皮上成功分離的野生酵母菌分別接種于3個盛有等量同種液體培養(yǎng)基的錐形瓶中，并放置在搖床上培養(yǎng)，搖床轉(zhuǎn)速分別為210r/min、230r/min和250r/min。培養(yǎng)時間與酵母菌種群密度的關(guān)系如圖所示。請分析回答下列問題。

（2）從圖中數(shù)據(jù)你可以得出什么結(jié)論？其原因是什么？

在一定范圍內(nèi)，搖床的轉(zhuǎn)速越高，培養(yǎng)液中的溶氧量越多，酵母菌的種群密度越大。

其原因是搖床轉(zhuǎn)速越高，培養(yǎng)液中的溶氧量越多，能促進(jìn)酵母菌的有氧呼吸，還能增加酵母菌獲得營養(yǎng)物質(zhì)的機(jī)會，有利于酵母菌生長繁殖，故其繁殖速度和總量越高。拓展應(yīng)用2.某生物興趣小組將葡萄皮上成功分離的野生酵母菌分別接種于3個盛有等量同種液體培養(yǎng)基的錐形瓶中，并放置在搖床上培養(yǎng)，搖床轉(zhuǎn)速分別為210r/min、230r/min和250r/min。培養(yǎng)時間與酵母菌種群密度的關(guān)系如圖所示。請分析回答下列問題。

（3）為什么培養(yǎng)8h后，其中2個錐形瓶中酵母菌的種群密度基本達(dá)到穩(wěn)定？

培養(yǎng)8h后，由于營養(yǎng)物質(zhì)逐漸被消耗，酵母菌種群密度達(dá)到環(huán)境容納量（K值），培養(yǎng)液中的溶氧量和營養(yǎng)物質(zhì)都有限，使種群密度基本達(dá)到穩(wěn)定。謝謝觀看！高二—人教版—生物學(xué)選擇性必修3—第1章

微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用(答疑）制備培養(yǎng)基的注意事項1.若制備的培養(yǎng)基需要特殊的pH，則調(diào)節(jié)pH的操作應(yīng)該何時進(jìn)行？

調(diào)節(jié)pH應(yīng)該在定容后，滅菌前進(jìn)行。2.培養(yǎng)基滅菌后，需冷卻到50℃才能倒平板，用什么方法來估算培養(yǎng)基的溫度呢？

可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降至剛不燙手時，就可以倒平板了。3.倒平板的過程中，若不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還

能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？

不能用來培養(yǎng)微生物。

因?yàn)榭諝庵械奈⑸锟赡茉诿笊w與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生。平板劃線的注意事項1.為什么劃線時不能劃破培養(yǎng)基表面