DB21T 3256-2020 非洲豬瘟病毒等溫擴(kuò)增快速檢測方法　_第1頁
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DB21Loop-mediatedIsothermalAmplification（LAMP）forRapidDetectionfo遼寧省市場監(jiān)督管理局發(fā)布I劉洋、劉近、吳洪濤、任雪建、趙培、李蓉、章春燕、呂園園、標(biāo)準(zhǔn)起草單位通訊地址：遼寧省動物及產(chǎn)品檢疫中心（沈陽市沈河區(qū)萬柳塘路105號甲），1非洲豬瘟病毒等溫擴(kuò)增快速檢測方法本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了非洲豬瘟病毒等溫擴(kuò)增快速檢測方法的技非洲豬瘟病毒是一種DNA病毒，該檢測方法利用6條特異性引物和具有鏈置換能力的DNA聚合酶，在等溫環(huán)境下1h內(nèi)完成擴(kuò)增，用于非洲豬瘟病4儀器和器材4.1高速臺式冷凍離心機(jī)（離心范圍0～205.1樣品處理劑5.2ASFV-R-Mix215ml離心管和1.5ml離心管經(jīng)121±1℃高壓滅菌20min；滅活后，將懸液轉(zhuǎn)入無菌Eppendorf管中，4℃條件下5000r/min離心10min，編號使用含有抗凝血劑（EDTA-紫色蓋）的無菌管（真空采血管）從耳靜脈或前腔靜脈采集血液3ml～5采集或處理的樣品在2～8℃條件下保存應(yīng)不超過24h；若需長期保存，應(yīng)放置-70到實(shí)驗(yàn)室檢測。按照《獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室生物安全技術(shù)管理34A.1樣品處理劑的制備A.2ASFV-R-Mix的制備物（F3與B3）和1對環(huán)引物（LF與LB均由FIP：5'-TAACGCCACTATGCAGCCCACGGAAGAGCTGBIP：5'-CAACATGTGCGAACTTGTGCCACATACCTGGAACGTCTCC-F3：5'-ATAGGTAATGCGATCGGATACA-LB：5'-AGCCTCGGTGTTGATGCGGAT取3對引物（FIP、BIP、F3、B3、LF和LB）干粉，按引物說明書分別加入適量無A.2.3ASFV-R-Mix的配制稱取2.4gTris，0.37g氯化鉀，0.12g硫酸鎂，100μl吐溫-20，7.029g甜菜堿，溶于80ml用于制備本試劑盒的Bstenzyme為商品化DNA聚合酶，按使用說明書用純化水稀釋至4×106/L，分A.4D-I礦物油

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