DB21T 1861.3-2010 水產(chǎn)生物種質(zhì)檢驗(yàn)技術(shù)規(guī)程 簡單重復(fù)序列間區(qū)擴(kuò)增法  _第1頁
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DB21DB21/T1861.3—2010水產(chǎn)生物種質(zhì)檢驗(yàn)技術(shù)規(guī)程簡單重復(fù)序列間區(qū)擴(kuò)增法ISSRproceduretodetectgermplasmforaquaculturespecies2010-12-31發(fā)布2011-02-01實(shí)施遼寧省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布I1本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了水產(chǎn)生物簡單重復(fù)序列間區(qū)擴(kuò)增法(ISSR)的原理、試劑和材料、儀器、采樣、分2簡單重復(fù)序列間區(qū)擴(kuò)增法inter-simplesequencerepeat3);4空白對照管;在每個(gè)離心管中加入15μL配制好的毛囊裂解液。毛囊裂解液用1×PCR緩沖液(50取-20℃下凍存的臟器0.2g,置于液氮中研成粉末;加DNA提取液(10mmol/LTris-HCl,pH8.取鮮樣品50~150mg,剪成小塊放入研缽中,加入液氮末狀;將研缽放入65℃水浴至樣品粉末剛開始融化,向研缽中加入DNA提取液(10mmol/L吸取1~3μL提取的DNA,用濃度1~2%5260nm波長下測定產(chǎn)物(或產(chǎn)物稀釋液)的紫外吸收值。根據(jù)公式(1)Buffer(10)1234(1)模具處理與安裝:清洗用作模具的玻璃板并晾干,并分別涂上),6(7)銀染取下凝板,拆除耳板和邊條,將其放入(9)向漂洗過的凝膠中加入2%的硝酸,氧化5分鐘。待氧化結(jié)束,同樣用超純9.1數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)選擇電泳后清晰的擴(kuò)增片斷進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)。在相同遷移位置,按每一個(gè)體擴(kuò)增片斷位基因頻率、哈代-溫伯格平衡檢驗(yàn)、遺傳雜合度、遺傳距離、香農(nóng)指數(shù)等遺

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