DB21T 3429-2021 蒙古櫟SSR分析技術(shù)規(guī)程　　

DB21TechnicalRegulationsofSSRanalysisinQuercusmon遼寧省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布I I高旭、李昀峰、扈延伍、曹穎、劉金義、龐家舉、許家銘、翟金鳳、），I1蒙古櫟SSR分析技術(shù)規(guī)程4儀器設(shè)備及試劑2-20℃預(yù)冷，用自來(lái)水、蒸餾水先后沖洗葉面，再用濾紙吸干水分。），看不清沉淀，10000g離心10min，再收集沉淀。g)加入1mL~1.5mL70%無(wú)水乙醇浸泡洗滌沉淀，輕搖幾分鐘，糖凝膠上電泳15min~20min，穩(wěn)壓90V，電泳緩沖液為1×TBE，325nm紫外燈下觀察，照相，檢測(cè)提取DNA的質(zhì)量。按照GB/T28663），將長(zhǎng)板玻璃板平鋪于通風(fēng)櫥內(nèi)，邊條擦拭干凈后置于長(zhǎng)板玻璃板兩側(cè)，隨后用短板玻璃板整齊地壓蓋住，確認(rèn)邊條與兩玻璃板均對(duì)齊后，將其配制1%的瓊脂糖凝膠，煮沸后用膠頭滴管吸取，沿底邊從左至右緩緩灌注入封膠框中，避免出現(xiàn)氣泡，待瓊脂糖凝膠完全漫過(guò)玻璃板底部，停止灌注，放置于待凝膠完全凝固后，將裝有凝膠的玻璃板輕輕從制膠板上取下，灌膠口向內(nèi)用夾子固定在電泳槽上，使用1×TBE緩沖溶液灌注電泳儀的上下兩槽，使下槽溶液漫過(guò)封膠框，上槽溶液漫過(guò)灌膠孔。垂照，電泳在200V穩(wěn)壓，電流100mA條件下進(jìn)行，電泳時(shí)間約為1.54電泳結(jié)束，關(guān)閉電源，將上槽中1×TBE緩沖液放出，取下固定的夾子，去掉下部瓊脂糖，取下玻璃板。將玻璃板水平放置，用起膠鏟沿灌膠口一側(cè)邊緣將玻璃板緩慢撬起，將緊貼有凝膠的玻璃板放入裝有雙蒸水的洗膠盤(pán)中輕輕搖晃，待凝膠與玻璃板完全分離后，取出玻璃板，放凈雙蒸水。計(jì)算檢測(cè)樣品間的遺傳相似性水平。采用非加權(quán)組平均法（unweightedpair-groupmethodwitharithmeticmeans,UPGMA）進(jìn)行聚類(lèi)分析；繪制聚Nij——第i個(gè)樣品和第j個(gè)樣品共有的擴(kuò)增條帶數(shù)。對(duì)6-FAM和HEX熒光標(biāo)記的PCR產(chǎn)物用超純水稀釋30倍（注：不同熒光標(biāo)記的擴(kuò)增產(chǎn)物他的最適稀釋度通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)確定）。分別取等體積的上述2種稀釋液混合，從中吸取1μL加入到基因分析儀專(zhuān)用965SSR廣泛分布于蒙古櫟基因組中，不同蒙古櫟種源或家系間每個(gè)SSR位點(diǎn)重復(fù)單位的數(shù)量可能不6PCR儀、基因分析儀、凝膠成像系統(tǒng)、水平電泳槽及配套的制膠配件、垂直電泳槽及配套的制件、臺(tái)式低溫高速冷凍離心機(jī)、超微量紫外/可見(jiàn)分光光度計(jì)、高壓滅菌鍋、液氮罐、超低溫冰箱、高M(jìn)arker、丙烯酰胺、過(guò)硫酸銨（APS）、四甲基乙二胺（括FAX、HEX熒光標(biāo)記DNA片段）、D7退火溫度(℃)N1010265N1014482N1105306N1110207N1345390N12361N1247890N1457047N4544558N45298408D.1.10.5mol/LEDTA-二鈉（p將24.22g三羥甲基氨基甲烷溶解于160mL水中，用濃鹽酸（HCl）調(diào)節(jié)pH至8.0，用超純水定容至將58.44g氯化鈉（NaCl）溶于160mL水中，定容至200mL，高壓滅mmol/LEDTA（0.5mol/L，pH8.0）和1.稱(chēng)取80g氫氧化鈉（NaOH先用1606×DNALordingBuffer，其中含0.05%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）溴酚藍(lán)、液的比例，混勻DN