手足口病病原采集技術(shù)

手足口病病原采集技術(shù)演講人：日期：手足口病概述病原學(xué)基礎(chǔ)知識病原采集前準(zhǔn)備工作手足口病病原采集方法標(biāo)本處理與運輸要求質(zhì)量控制與安全保障措施目錄CONTENTS01手足口病概述定義手足口病是一種由腸道病毒引起的急性傳染病，主要通過消化道、呼吸道和密切接觸傳播。發(fā)病機制病毒通過口腔、鼻腔等部位進入人體，在腸道內(nèi)繁殖，然后進入血液，引起病毒血癥。病毒可侵犯多個器官，但以手、足、口腔等部位為主，引起相應(yīng)部位的皰疹和潰瘍。定義與發(fā)病機制手足口病潛伏期多為2-10天，平均3-5天。臨床表現(xiàn)主要為發(fā)熱、手、足、口腔等部位的斑丘疹、皰疹，可伴有咳嗽、流涕、食欲不振等癥狀。部分病例僅表現(xiàn)為皮疹或皰疹性咽峽炎，個別病例可無皮疹。臨床表現(xiàn)根據(jù)臨床表現(xiàn)和病情嚴(yán)重程度，手足口病可分為普通型和重型。普通型表現(xiàn)為發(fā)熱、皮疹，病程較短，預(yù)后良好；重型可出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)受累、呼吸及循環(huán)功能障礙等表現(xiàn)，病情兇險，病死率高。分型臨床表現(xiàn)及分型傳染源01手足口病患者和隱性感染者均為傳染源，主要通過糞-口途徑傳播，也可經(jīng)接觸患者呼吸道分泌物、皰疹液及污染的物品而感染。易感人群02人群對手足口病普遍易感，但以5歲以下兒童為主，3歲以下兒童發(fā)病率最高。流行特征03手足口病是全球性傳染病，世界大部分地區(qū)均有此病流行的報道。我國于20世紀(jì)80年代在上海和福建就有手足口病的報道，此后全國各地均有此病的發(fā)生和流行。流行病學(xué)特點根據(jù)流行病學(xué)史、臨床表現(xiàn)和病原學(xué)檢查作出診斷。臨床表現(xiàn)為急性起病，發(fā)熱，手掌或腳掌部出現(xiàn)斑丘疹和皰疹，臀部或膝蓋也可出現(xiàn)皮疹。皮疹周圍有炎性紅暈，皰內(nèi)液體較少；口腔粘膜出現(xiàn)散在的皰疹，疼痛明顯。部分患兒可伴有咳嗽、流涕、食欲不振、惡心、嘔吐和頭疼等癥狀。診斷標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)與皰疹性咽峽炎、風(fēng)疹、水痘等疾病相鑒別。皰疹性咽峽炎的皰疹僅限于口腔后部，如扁桃體、軟腭、懸雍垂等處；風(fēng)疹的皮疹一般出現(xiàn)在面部和軀干，很少出現(xiàn)在手心和腳心；水痘的皮疹以軀干為主，呈向心性分布，且皮疹分批出現(xiàn)，在同一時間、同一部位可見斑疹、丘疹、皰疹和結(jié)痂同時存在。鑒別診斷診斷標(biāo)準(zhǔn)與鑒別診斷02病原學(xué)基礎(chǔ)知識腸道病毒種類腸道病毒包括脊髓灰質(zhì)炎病毒、柯薩奇病毒、埃可病毒及新型腸道病毒等，共有71個血清型。特點腸道病毒屬于小RNA病毒科，為二十面體立體對稱的無包膜球形顆粒，直徑24～30nm，含單股正鏈RNA。耐酸，對一般抗生素及抗病毒藥物具有抗性，對熱、干燥和紫外線等均敏感。腸道病毒種類及特點柯薩奇病毒A16型柯薩奇病毒A組16型是手足口病的主要病原體之一，屬于小RNA病毒科，腸道病毒屬。該病毒可引起手、足、口腔等部位的皰疹，少數(shù)患者可引起心肌炎、肺水腫、無菌性腦膜腦炎等并發(fā)癥。腸道病毒71型腸道病毒71型也是手足口病的病原體之一，屬于小RNA病毒科，腸道病毒屬。該病毒除了引起手足口病的臨床表現(xiàn)外，還可能導(dǎo)致嚴(yán)重的神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥，如無菌性腦膜炎、腦干腦炎和脊髓灰質(zhì)炎樣的麻痹等。柯薩奇病毒A16型和腸道病毒71型介紹VS腸道病毒主要通過消化道傳播，也可經(jīng)呼吸道飛沫、咳嗽、打噴嚏等方式傳播。病毒進入人體后，在咽部、腸道上皮細胞內(nèi)增殖，然后侵入血液，形成病毒血癥。致病機制腸道病毒的致病機制主要包括病毒對靶器官的直接損害和病毒血癥導(dǎo)致的全身性損害。病毒在靶器官內(nèi)大量增殖，導(dǎo)致細胞破壞和組織損傷；同時，病毒血癥可引起全身性炎癥反應(yīng)和免疫應(yīng)答，導(dǎo)致發(fā)熱、乏力等全身癥狀。病毒感染過程病毒感染過程與致病機制

實驗室檢查方法病毒分離采集患者的咽拭子、糞便或皰疹液等標(biāo)本，接種于敏感細胞進行病毒分離培養(yǎng)，是診斷腸道病毒感染的金標(biāo)準(zhǔn)。血清學(xué)檢測采用ELISA等方法檢測患者血清中的特異性抗體，若恢復(fù)期血清抗體滴度比急性期有4倍或4倍以上增高，則有診斷意義。分子生物學(xué)檢測采用RT-PCR等方法檢測標(biāo)本中的腸道病毒RNA，具有快速、靈敏和特異的優(yōu)點，已廣泛應(yīng)用于臨床診斷。03病原采集前準(zhǔn)備工作確定手足口病的病原體，為臨床診斷和治療提供依據(jù)。采集目的遵循無菌操作原則，避免交叉污染和感染。采集原則明確采集目的和原則了解患者發(fā)病前是否有接觸史、旅行史等。注意觀察患者手、足、口腔等部位的皰疹和潰瘍情況。了解患者病史和臨床表現(xiàn)臨床表現(xiàn)觀察病史詢問采樣工具防護用品消毒用品標(biāo)本保存設(shè)備準(zhǔn)備所需物品和設(shè)備01020304包括無菌棉簽、試管、病毒采樣管等。如口罩、手套、隔離衣等，確保采集過程中醫(yī)患雙方的安全。如碘伏、酒精等，用于采集前后的消毒工作。如冰箱、冷藏箱等，用于保存采集的標(biāo)本。告知患者及家屬注意事項采集前告知向患者及家屬解釋采集的目的、方法和注意事項。采集后指導(dǎo)指導(dǎo)患者及家屬如何正確保存和處理采集后的標(biāo)本，避免污染和感染。同時，告知患者及家屬可能出現(xiàn)的不適癥狀和應(yīng)對措施。04手足口病病原采集方法手足口病患兒在發(fā)病初期和急性期，咽拭子采集法可有效獲取病原。采集時機用專用咽拭子在患兒咽后壁或扁桃體隱窩處輕輕擦拭，避免觸及舌根、口腔黏膜等部位。采集部位采集前需清潔患兒口腔，避免食物殘渣等污染樣本。采集過程中需避免用力過猛，以免損傷患兒口腔黏膜。注意事項咽拭子采集法手足口病患兒在發(fā)病后的一周內(nèi)，糞便中可檢測到腸道病毒。采集時機采集方法注意事項用專用糞便采集器或無菌棉簽蘸取患兒糞便，置于病毒保存液中。采集過程中需避免糞便受到外界污染，確保樣本的純凈度。采集后需及時送檢，避免病毒失活。030201糞便采集法采集方法用無菌注射器抽取皰疹液，或用無菌棉簽蘸取皰疹液，置于病毒保存液中。采集時機手足口病患兒在皰疹出現(xiàn)后的3天內(nèi)，皰疹液中病毒含量較高。注意事項采集前需對患兒皮膚進行消毒處理，避免皮膚表面的細菌污染樣本。采集過程中需避免觸碰其他非皰疹區(qū)域，以免交叉污染。皰疹液采集法血清學(xué)檢測采集患兒血液樣本，檢測手足口病相關(guān)抗體水平，輔助診斷手足口病。分子生物學(xué)檢測采用PCR等分子生物學(xué)技術(shù)，檢測患兒體內(nèi)腸道病毒核酸，提高病原檢測的敏感性和特異性。病原分離培養(yǎng)將采集的樣本接種于敏感細胞或動物模型中，進行病原分離培養(yǎng)，為手足口病的研究和治療提供有力支持。但該方法操作復(fù)雜、耗時較長，一般僅用于科研或特殊情況下。其他輔助檢查方法05標(biāo)本處理與運輸要求03標(biāo)記在采樣管上做好標(biāo)記，包括患者姓名、采樣時間、標(biāo)本類型等信息。01采樣使用專用采樣拭子，采集患者發(fā)病初期（1-3天）的咽拭子、糞便或皰疹液等。02標(biāo)本處理將采樣拭子放入含有病毒保存液的采樣管中，充分洗脫后，將保存液分裝至螺口塑料管中。標(biāo)本處理流程標(biāo)本應(yīng)保存在4℃條件下，長時間運輸可置于-20℃或-70℃以下。咽拭子和糞便標(biāo)本應(yīng)在采集后盡快送檢，一般不超過24小時；皰疹液標(biāo)本可延長至48小時內(nèi)送檢。保存條件時間限制標(biāo)本保存條件及時間限制密封性避光冷藏安全性運輸過程中注意事項確保采樣管密封嚴(yán)實，防止病毒保存液泄漏。在運輸過程中，應(yīng)使用冷藏箱或冰袋保持低溫環(huán)境。避免陽光直射，以防病毒失活。運輸過程中應(yīng)遵守生物安全規(guī)定，防止標(biāo)本污染和擴散。檢查采樣管是否完整，無破損、無泄漏。完整性標(biāo)記清晰送檢時間實驗室檢測前處理核對采樣管上的標(biāo)記信息是否清晰、準(zhǔn)確。確認標(biāo)本是否在規(guī)定的送檢時間內(nèi)送達。實驗室在接收標(biāo)本后，應(yīng)按照相關(guān)規(guī)定進行標(biāo)本前處理，如離心、分裝等操作，以備后續(xù)檢測使用。實驗室接收標(biāo)準(zhǔn)06質(zhì)量控制與安全保障措施123確保采集工具無菌、無污染，避免交叉感染。樣本采集前準(zhǔn)備按照標(biāo)準(zhǔn)操作流程進行采集，確保樣本質(zhì)量。采集過程規(guī)范及時將樣本送至實驗室進行檢測，確保結(jié)果的準(zhǔn)確性。采集后處理質(zhì)量控制環(huán)節(jié)設(shè)置包括手足口病病原學(xué)知識、采集技術(shù)、安全防護措施等。培訓(xùn)內(nèi)容定期對操作人員進行培訓(xùn)，確保其掌握最新知識和技能。培訓(xùn)周期對操作人員進行考核，確保其具備獨立操作的能力。培訓(xùn)評估操作人員培訓(xùn)要求實驗室安全級別確保實驗室符合相關(guān)安全標(biāo)準(zhǔn)，具備處理病原體的能力。個人防護措施操作人員需穿戴防護服、手套、口罩等，確保