DB21T 3767-2023 大豆來源蛋白質(zhì)飼料原料預(yù)消化酶解工藝技術(shù)規(guī)范

ICS65.120CCSB46212023-06-30發(fā)布IDB21/T3767—2023本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導(dǎo)則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔(dān)識別這些專利的責(zé)任。本文件由遼寧省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并歸口。本文件起草單位:遼寧省農(nóng)業(yè)發(fā)展服務(wù)中心、遼寧康普利德生物科技有限公司、沈陽市康普利德生物科技有限公司、彰武縣畜牧業(yè)發(fā)展服務(wù)中心。本文件主要起草人:韓業(yè)東、李延山、權(quán)志中、魏萊、董延江、楊寧、王虎、梁麗萍、吳倩、卞大偉、宣麗、肖愛波、張巖彬、劉志良、劉勝男、李春雨、佟玉紅、章沙沙、呂鳳祿、黃雪嬌、趙紅秋。本文件發(fā)布實施后，任何單位和個人如有問題和意見建議，均可以通過來電和來函等方式進行反饋，我們將及時答復(fù)并認真處理，根據(jù)實際情況依法進行評估及復(fù)審。歸口管理部門通訊地址：遼寧省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳（沈陽市和平區(qū)太原北街2號聯(lián)系電話標準起草單位通訊地址：遼寧省農(nóng)業(yè)發(fā)展服務(wù)中心（沈陽市和平區(qū)南四經(jīng)街143號），聯(lián)系電話1DB21/T3767—2023大豆來源蛋白質(zhì)飼料原料預(yù)消化酶解工藝技術(shù)規(guī)范本文件規(guī)定了大豆來源蛋白質(zhì)飼料原料預(yù)消化酶解工藝的設(shè)備、原料、工藝以及質(zhì)量等方面技術(shù)要本文件適用于以大豆或大豆加工產(chǎn)品等蛋白質(zhì)飼料為原料的預(yù)消化酶解工藝控制。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6432飼料中粗蛋白的測定凱氏定氮法GB/T6434飼料中粗纖維的含量測定過濾法GB/T6435飼料中水分的測定GB/T6436飼料中鈣的測定GB/T6437飼料中總磷的測定分光光度法GB/T6438飼料中粗灰分的測定GB13078飼料衛(wèi)生標準GB/T14699.1飼料采樣GB/T22491大豆低聚糖GB/T22492大豆肽粉3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1飼料預(yù)消化技術(shù)Feedpre-digestiontechnology飼料預(yù)消化技術(shù)是模擬動物消化過程，對飼料原料進行加工處理，降解原料中的部分大分子營養(yǎng)物質(zhì)，消除或降解大部分抗營養(yǎng)因子和有毒有害物質(zhì)，增加可消化養(yǎng)分含量，提高飼料利用率的一種新型飼料加工技術(shù)。4設(shè)備要求4.1酶解反應(yīng)釜酶解反應(yīng)釜應(yīng)具有混合、加熱、保溫功能，且具備清洗和消毒條件。4.2干燥設(shè)備2DB21/T3767—2023干燥設(shè)備應(yīng)根據(jù)原料、半成品特性和產(chǎn)品要求選擇，包括噴霧干燥設(shè)備、流化床干燥設(shè)備、滾筒干燥設(shè)備等。5原料5.1預(yù)消化原料預(yù)消化原料主要包括大豆、大豆分離蛋白、豆粕、豆餅、豆渣等。5.2酶制劑酶制劑以蛋白酶為主，纖維素酶、植酸酶、果膠酶為輔進行選擇。6酶解工藝要求6.1混合將預(yù)消化原料、酶制劑和水進行混合，水分含量50%～60%，混合均勻度變異系數(shù)≤7%。6.2酶解蛋白酶、纖維素酶、植酸酶酶解溫度應(yīng)控制在45℃~50℃之間，pH值控制在5.5～6.5，最宜酶解時間為4h～6h。6.3滅酶酶解結(jié)束后，要對酶解物料進行滅酶處理，滅酶溫度≥95℃,滅酶時間10min～15min。6.4干燥依據(jù)不同的物料特性和產(chǎn)品用途采取適當?shù)母稍镌O(shè)備及工藝參數(shù)，最終控制水分≤12%。7質(zhì)量要求7.1感官指標要求及其檢測方法外觀色澤均一，呈淡黃色、黃色至棕黃色，具有大豆特有氣味，無異味，無雜質(zhì)。采用目視、鼻嗅、手感的方法檢查樣品的色澤、氣味、質(zhì)地。取樣應(yīng)符合GB/T14699.1的要求。7.2衛(wèi)生指標要求及其檢測方法按GB13078的規(guī)定執(zhí)行。7.3營養(yǎng)指標要求及其檢測方法7.3.1常規(guī)營養(yǎng)指標及其檢測方法常規(guī)營養(yǎng)指標包括粗蛋白質(zhì)、粗纖維、粗灰分、鈣、總磷、水分等。其中粗蛋白按GB/T6432的規(guī)定執(zhí)行，粗纖維按GB/T6434的規(guī)定執(zhí)行，粗灰分按GB/T6438的規(guī)定執(zhí)行，鈣含量按GB/T6436的規(guī)定執(zhí)行，總磷按GB/T6437的規(guī)定執(zhí)行，水分按GB/T6435的規(guī)定執(zhí)行。3DB21/T3767—20237.3.2酶解指標及其檢測方法酶解指標主要包括酸溶蛋白、水蘇糖、棉籽糖、大豆球蛋白、β-伴大豆球蛋白。酸溶蛋白按GB/T22492的規(guī)定執(zhí)行；水蘇糖、棉籽糖按GB/T22491的規(guī)定執(zhí)行；大豆球蛋白、β-伴大豆球蛋白按附錄A的規(guī)定執(zhí)行。4DB21/T3767—2023大豆蛋白預(yù)消化飼料中大豆球蛋白/β-伴大豆球蛋白的測定方法酶聯(lián)免疫法A.1范圍本部分規(guī)定了大豆蛋白預(yù)消化飼料中大豆球蛋白/β-伴大豆球蛋白的酶聯(lián)免疫測定方法。本部分適用于大豆蛋白預(yù)消化飼料中大豆球蛋白/β-伴大豆球蛋白的測定。A.2原理在酶標板微孔條上預(yù)包被大豆球蛋白/β-伴大豆球蛋白抗原，樣品中的大豆球蛋白/β-伴大豆球蛋白和預(yù)包被的抗原競爭大豆球蛋白/β-伴大豆球蛋白抗體，加入酶標二抗后，用TMB底物顯色，樣品吸光度值與其所含大豆球蛋白/β-伴大豆球蛋白的含量呈負相關(guān)，與校準曲線比較再乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即可得出樣品中大豆球蛋白/β-伴大豆球蛋白的含量。A.3試劑和材料A.3.1大豆球蛋白/β-伴大豆球蛋白酶聯(lián)免疫測定試劑盒中的試劑A.3.1.1濃縮樣品提取液A.3.1.2樣品稀釋液A.3.1.3濃縮洗液A.3.1.4酶標板A.3.1.5校準品A.3.1.6大豆球蛋白/β-伴大豆球蛋白抗體工作液A.3.1.7大豆球蛋白/β-伴大豆球蛋白酶標試劑A.3.1.8底物液AA.3.1.9底物液BA.3.1.10終止液A.3.1.11蓋板膜A.3.1.12除非另有說明，在分析中僅使用確認為分析純的試劑和蒸餾水或去離子水或相當純度的水。A.3.2試劑配制A.3.2.1樣品提取工作液的配制將濃縮樣品提取液（A.3.1.1）用雙蒸水或去離子水按測定試劑盒說明書要求的體積比進行稀釋，用于樣品中大豆球蛋白/β-伴大豆球蛋白的提取。A.3.2.2洗滌工作液的配制將濃縮洗液（A.3.1.3）用雙蒸水或去離子水按測定試劑盒說明書要求的5DB21/T3767—2023體積比進行稀釋，用于酶標板的洗滌。A.4儀器和設(shè)備A.4.1小型粉碎機A.4.2分樣篩60目A.4.3分析天平感量0.1mgA.4.4具塞三角瓶100mLA.4.5電動振蕩器A.4.6微量連續(xù)可調(diào)取液器及配套吸頭：10μL～100μLA.4.7恒溫培養(yǎng)箱A.4.8酶標儀內(nèi)置450nm濾光片A.5分析步驟A.5.1試樣準備將待檢樣品粉碎成60目以上顆粒，稱取0.1g（根據(jù)所測樣品中大豆球蛋白/β-伴大豆球蛋白的預(yù)估值高低可適當調(diào)整，精確至0.1mg）樣品加入到配好的30mL樣品提取工作液中，于25℃振蕩提取12h～16h，靜置10min～20min，取上清液用樣品稀釋液稀釋到適合的工作濃度。A.5.2樣品檢測A.5.2.1平衡將測定試劑盒（A3.1）從冷藏環(huán)境中取出，置于室溫（20℃~25℃)平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。A.5.2.2取出需要數(shù)量的酶標板條。A.5.2.3編號將樣品和校準品對應(yīng)微孔按序編號，每個樣品和校準品做2孔平行，并記錄校準品孔和樣品孔所在的位置。A.5.2.4加校準品/樣品將6種校準品以及待測樣品各50μL加到對應(yīng)的微孔中，再加入抗體工作液50μL/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置37℃避光環(huán)境中反應(yīng)30min。A.5.2.5洗板小心揭開蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，用洗滌工作液300μL/孔充分洗滌5次，每次浸泡10s，用吸水紙拍干（拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭戳破）。A.5.2.6加酶標試劑加入酶標試劑100μL/孔，輕輕振蕩均勻，用蓋板膜蓋板后置37℃避光反應(yīng)30min，取出洗板，洗板操作見A.5.2.5。A.5.2.7顯色將等體積底物液A與底物液B放入干凈容器中，振蕩混勻。加入AB混合液100μL/孔，用蓋板膜蓋板后，置37℃避光反應(yīng)15min。A.5.2.8測定加入終止液50μL/孔，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標儀于450nm處（雙波長450/630nm檢測更佳），在5min內(nèi)讀取所有樣品吸光度值并記錄保存。6DB21/T3767—2023A.5.3結(jié)果計算A.5.3.1百分吸光率的計算校準品或樣品的百分吸光率等于校準品或樣品的百分吸光度值的平均值（雙孔）除以第一個標準（0標準）的吸光度值，再乘以100%，如式（A.1）所示。式中：α—百分吸光率B—校準品溶液或樣品溶