生物化學(xué)檢驗技術(shù) 課件全套 歐陵斌 第1-16章 緒論、生物化學(xué)檢驗基本知識-內(nèi)分泌疾病的生物化學(xué)檢驗

職業(yè)教育醫(yī)學(xué)檢驗技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫生物化學(xué)檢驗技術(shù)第一章緒論BASICCLINICALLABORATORYMEDICINE2目錄生物化學(xué)檢驗技術(shù)的研究范疇和工作任務(wù)1生物化學(xué)檢驗技術(shù)的發(fā)展簡史2生物化學(xué)檢驗實驗室管理與自動化3本書的主要內(nèi)容與學(xué)習(xí)方法4一、生物化學(xué)檢驗技術(shù)的研究范疇和工作任務(wù)（一）定義生物化學(xué)檢驗：研究健康和疾病狀況下人體內(nèi)的生物化學(xué)過程，通過檢測出體內(nèi)化學(xué)物質(zhì)的變化，來幫助醫(yī)生診斷和治療疾病。人體內(nèi)的生物化學(xué)過程區(qū)分終極目標(biāo)：幫助和疾病。生物化學(xué)檢驗？一、生物化學(xué)檢驗技術(shù)的研究范疇和工作任務(wù)闡明疾病發(fā)生發(fā)展過程中的生物化學(xué)變化特點生物化學(xué)標(biāo)志物-臨床應(yīng)用檢驗項目（二）研究范疇一、生物化學(xué)檢驗技術(shù)的研究范疇和工作任務(wù)例如：血糖和糖化血紅蛋白的測定對于糖尿病的監(jiān)測一、生物化學(xué)檢驗技術(shù)的研究范疇和工作任務(wù)研究和開發(fā)特異性生化標(biāo)志物的檢測技術(shù)和方法：包括方法的選擇、建立、評價、參考區(qū)間的建立、檢測效能評估、檢測質(zhì)控與管理（二）研究范疇二、生物化學(xué)檢驗技術(shù)的發(fā)展簡史生物化學(xué)檢驗技術(shù)的初級發(fā)展階段以自動化技術(shù)為代表的快速發(fā)展階段分子生物學(xué)技術(shù)階段二、生物化學(xué)檢驗技術(shù)的發(fā)展簡史20世紀(jì)30年代前，采用目視比色結(jié)果的可靠性差標(biāo)本用量大20世紀(jì)30年代后，光電比色計的問世結(jié)果的精確度大大提高標(biāo)本用量趨向微量20世紀(jì)50年代后新技術(shù)層出不窮出現(xiàn)離心技術(shù)、層析（色譜分析）技術(shù)、電泳技術(shù)、免疫分析技術(shù)、光譜分析技術(shù)、電化學(xué)分析技術(shù)等初級發(fā)展階段二、生物化學(xué)檢驗技術(shù)的發(fā)展簡史快速發(fā)展階段1957年美國科學(xué)家Skeggs等首先引用了連續(xù)流動式分析裝置，將手工操作技術(shù)實現(xiàn)了半自動化20世紀(jì)70年代以后，放射免疫分析技術(shù)、化學(xué)發(fā)光技術(shù)和電化學(xué)發(fā)光技術(shù)飛速發(fā)展1959年，美國生理學(xué)家HansBaruch發(fā)明了第一臺商業(yè)化的分立式生化分析儀RobotChemist全自動生化分析儀與計算機處理系統(tǒng)的聯(lián)合應(yīng)用，使生物化學(xué)檢驗實現(xiàn)了全部自動化，生物化學(xué)檢驗進(jìn)入了自動化、微量化和信息化時代。二、生物化學(xué)檢驗技術(shù)的發(fā)展簡史分子生物學(xué)技術(shù)階段70年代的基因重組技術(shù)80年代發(fā)明的聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)90年代的生物芯片技術(shù)實現(xiàn)對代謝物準(zhǔn)確、快速檢測三、生物化學(xué)檢驗實驗室管理與自動化實驗室信息管理系統(tǒng)LIS系統(tǒng)實驗室信息系統(tǒng)（LIS）是對實驗室日常工作、科室管理、學(xué)科建設(shè)和實驗室發(fā)展等方面所產(chǎn)生及所需求的信息，通過計算機收集、處理、存儲、輸送和應(yīng)用的系統(tǒng)。HIS系統(tǒng)實驗室信息系統(tǒng)是醫(yī)院信息管理系統(tǒng)（HIS）的一個子系統(tǒng)，將實驗室的分析儀通過計算機網(wǎng)絡(luò)連接起來，采用科學(xué)的管理思想和先進(jìn)的數(shù)據(jù)庫技術(shù)，提供科學(xué)規(guī)范的作業(yè)流程，使臨床實驗室能與門診部、住院部、財務(wù)科和臨床科室等全院各部門之間實現(xiàn)高效協(xié)同工作。LIS一般由臨床檢驗信息和實驗室管理信息兩部分組成。三、生物化學(xué)檢驗實驗室管理與自動化（一）實驗室管理體系的過程

過程定義有關(guān)實驗室認(rèn)可的ISO標(biāo)準(zhǔn)或?qū)t都是建立在“所有工作是通過過程來完成的”這樣認(rèn)識基礎(chǔ)之上的檢測過程檢驗科所進(jìn)行的每一項標(biāo)本的檢查或分析過程就是一組相互關(guān)聯(lián)的與實施檢測有關(guān)的資源、活動和影響量輸入輸出報告被測樣品測量結(jié)果檢驗報告我們用測量結(jié)果和其不確定度是否符合預(yù)先規(guī)定的要求來衡量測量過程的質(zhì)量。三、生物化學(xué)檢驗實驗室管理與自動化臨床實驗室日常工作全過程報告醫(yī)師申請檢查項目標(biāo)本采集與運送標(biāo)本編號檢測記錄發(fā)出報告實驗數(shù)據(jù)準(zhǔn)確運用分析前質(zhì)量控制分析中質(zhì)量控制分析后質(zhì)量控制三、生物化學(xué)檢驗實驗室管理與自動化認(rèn)可認(rèn)證由一個第三方對（一個組織的）產(chǎn)品、過程或服務(wù)符合規(guī)定的要求給予書面保證的程序由權(quán)威機構(gòu)對一個機構(gòu)（實驗室）或人員（授權(quán)簽字人）從事特定工作的能力給予正式承認(rèn)的程序?qū)嶒炇艺J(rèn)可和質(zhì)量管理體系認(rèn)證ISO/IEC指南2（二）ISO15189標(biāo)準(zhǔn)與認(rèn)可三、生物化學(xué)檢驗實驗室管理與自動化對象不同機構(gòu)不同性質(zhì)不同結(jié)果不同認(rèn)可對象是檢測實驗室或(和)校準(zhǔn)實驗室。認(rèn)證對象是產(chǎn)品、過程或服務(wù)認(rèn)可由政府機構(gòu)進(jìn)行的。認(rèn)證則由第三方進(jìn)行，權(quán)威性不如政府機構(gòu)認(rèn)可是權(quán)威機構(gòu)正式承認(rèn)，校準(zhǔn)的結(jié)果常得到國家的承認(rèn)。認(rèn)證是書面保證。通過由第三方認(rèn)證機構(gòu)頒發(fā)的認(rèn)證證書認(rèn)可是證明具備能力，是對能力的評審。認(rèn)證是證明符合性。是對符合性的審核認(rèn)可和認(rèn)證在四個方面的區(qū)別（二）ISO15189標(biāo)準(zhǔn)與認(rèn)可三、生物化學(xué)檢驗實驗室管理與自動化（三）增強與臨床的溝通，參與臨床診斷和治療國際標(biāo)準(zhǔn)化組織頒布的《醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則》（GB/T22586:2008/ISO15189:2012）中明確規(guī)定：“醫(yī)學(xué)實驗室服務(wù)，包括適當(dāng)?shù)慕忉尯妥稍兎?wù)，應(yīng)能滿足患者及所有負(fù)責(zé)患者醫(yī)護的臨床人員的需要”。這些服務(wù)包括檢驗者幫助或指導(dǎo)臨床人員正確采集檢驗標(biāo)本；與臨床共同制訂疾病診斷指標(biāo)的組合，正確解釋和應(yīng)用檢驗結(jié)果，提出診斷和治療的建設(shè)性意見；與臨床共同制定危急值、急診檢驗的范圍、出報告時間以及各種項目的過篩標(biāo)準(zhǔn)；根據(jù)患者病情需要提出實驗室的檢查建議，使檢驗資源得到充分利用，減少患者經(jīng)濟負(fù)擔(dān)。醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則!四、本書的主要內(nèi)容與學(xué)習(xí)方法四、本書的主要內(nèi)容與學(xué)習(xí)方法載體學(xué)習(xí)領(lǐng)域檢測項目體液蛋白質(zhì)檢測項目血脂代謝異常檢測項目

糖代謝紊亂檢測項目鈉、鉀、氯和鈣、鎂、磷檢測項目酸堿平衡檢測項目臨床生物化學(xué)檢驗技術(shù)基礎(chǔ)物質(zhì)代謝檢測疾病代謝異常檢測器官生理、病理檢測肝膽生化及檢測項目

腎臟生化及檢測項目心肌損傷標(biāo)志物的檢測項目胰腺疾病檢驗項目內(nèi)分泌功能及其檢測項目骨疾病檢驗器官疾病物質(zhì)載體情境子情境職業(yè)教育醫(yī)學(xué)檢驗技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫生物化學(xué)檢驗技術(shù)第二章生物化學(xué)檢驗基本知識BASICCLINICALLABORATORYMEDICINE21目錄

生物化學(xué)檢驗項目申請及檢驗報告單發(fā)放1

臨床生物化學(xué)檢驗標(biāo)本的采集和處理2

標(biāo)本因素對檢驗結(jié)果的影響3第一節(jié)生物化學(xué)檢驗項目申請及檢驗報告單發(fā)放

從醫(yī)生填寫生物化學(xué)檢驗申請單開始就啟動了生物化學(xué)檢驗的工作流程。目前我國生物化學(xué)檢驗開展的項目可達(dá)到11大類300余項。檢驗前檢驗中檢驗后第一節(jié)生物化學(xué)檢驗項目申請及檢驗報告單發(fā)放

生物化學(xué)檢驗項目可以根據(jù)報告單的發(fā)放時間選擇常規(guī)生化檢驗、急診生化檢驗、特殊生化檢驗、床旁生化檢驗等。常規(guī)生化檢驗特殊生化檢驗急診生化檢驗床旁生化檢驗第一節(jié)生物化學(xué)檢驗項目申請及檢驗報告單發(fā)放常規(guī)生化檢驗項目

實驗室日常工作的主要任務(wù)，是臨床生化實驗室開展的普通生化檢測項目，其可滿足臨床多種疾病的診治需要。常規(guī)生化檢驗項目幾乎占整個生物化學(xué)檢驗項目的60%，若按標(biāo)本數(shù)量統(tǒng)計，其可占全部生化檢驗項目的80%以上。第一節(jié)生物化學(xué)檢驗項目申請及檢驗報告單發(fā)放常規(guī)生化檢驗項目的特點覆蓋面廣應(yīng)用廣經(jīng)濟、快速檢驗技術(shù)和檢測方法成熟，易于自動化。第一節(jié)生物化學(xué)檢驗項目申請及檢驗報告單發(fā)放特殊生化檢驗項目

一般是指相對于常規(guī)生化檢驗項目而言，技術(shù)條件要求較高、需要特殊的儀器設(shè)備、臨床使用率低、檢測成本高、標(biāo)本難以獲得、并非每個實驗室都能開展的生化檢驗項目。第一節(jié)生物化學(xué)檢驗項目申請及檢驗報告單發(fā)放急診生化檢驗項目

急診生化檢驗是生化實驗室為了配合臨床危、急、重癥患者的診斷和搶救而實施的一種特殊檢驗。生化實驗室必須做到急診優(yōu)先原則，保證急診標(biāo)本即采、即做、即報。急診生化檢驗項目包括血氣分析、電解質(zhì)分析、心肌標(biāo)志物、血糖、淀粉酶等檢驗。第一節(jié)生物化學(xué)檢驗項目申請及檢驗報告單發(fā)放床旁生化檢驗項目

床旁生化檢驗（pointofcaretesting，POCT），也稱即時檢驗，是指在傳統(tǒng)實驗室以外進(jìn)行的一切檢驗，可以由臨床醫(yī)生、護士、患者本人及家屬進(jìn)行檢測。POCT的優(yōu)點是儀器體積小、攜帶方便、使用簡單、即時檢測、結(jié)果快速，大大縮短了檢驗結(jié)果回報時間。常用的POCT項目主要有血糖、血氣分析、心肌損傷指標(biāo)的檢測。第一節(jié)生物化學(xué)檢驗項目申請及檢驗報告單發(fā)放生物化學(xué)檢驗項目可根據(jù)臨床需要選擇單項檢驗或組合檢驗。單項檢驗針對性強、經(jīng)濟、快速用于疾病的診斷、療效觀察、器官功能評估。組合檢驗一般分為隨機組合、固定組合。提高診斷疾病敏感度、提高診斷效率、快速了解某器官功能狀態(tài)、快速掌握初診患者及重癥患者信息、健康檢測和評價。第一節(jié)生物化學(xué)檢驗項目申請及檢驗報告單發(fā)放檢測項目標(biāo)本要求保存條件臨床意義血脂四項TC、TG、HDL-C、LDL-C空腹血清2ml2～8℃用于動脈粥樣硬化、高血壓、冠心病等疾病診斷、預(yù)防和治療。血脂六項TC、TG、HDL-C、LDL-C、APO-A1、APO-B、APO-A1/APO-B空腹血清2ml2～8℃用于心肌梗塞、心肌炎、肌肉損傷等輔助診斷。總膽固醇（TC）空腹血清2ml2～8℃增高：家族性高膽固醇血癥，動脈粥樣硬化、冠心病。降低：嚴(yán)重肝臟損害、腫瘤、結(jié)核、甲亢。甘油三酯測定（TG）空腹血清2ml2～8℃增高：動脈粥樣硬化、糖尿病、腎病綜合征、家族性高脂血癥。高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）空腹血清2ml2～8℃降低：冠心病、高甘油三酯血癥、肝功能損害、肝硬化、急性膽囊炎。低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）空腹血清2ml2～8℃增高：是動脈粥樣硬化、冠心病的危險信號、甲低。減低：甲亢、急、慢性肝炎、肝硬化等。載脂蛋白A1（apoA1）空腹血清2ml2～8℃降低：動脈粥樣硬化、冠心病的危險信號。載脂蛋白B（apoB）空腹血清2ml2～8℃增高：動脈粥樣硬化、冠心病的危險信號。檢驗項目手冊第一節(jié)生物化學(xué)檢驗項目申請及檢驗報告單發(fā)放

生物化學(xué)檢驗報告單的發(fā)放屬于“全面質(zhì)量控制”中的“分析中質(zhì)量管理”階段。是由醫(yī)院管理層授權(quán)實驗室負(fù)責(zé)人，制定檢驗報告單發(fā)放的相關(guān)制度，以對檢驗報告單發(fā)放過程進(jìn)行質(zhì)量控制。報告單的發(fā)放應(yīng)由受過培訓(xùn)的專人負(fù)責(zé)。報告單應(yīng)以中文紙質(zhì)或電子版形式發(fā)出，報告單發(fā)放的格式應(yīng)規(guī)范、整齊、自己清晰、內(nèi)容全面。第一節(jié)生物化學(xué)檢驗項目申請及檢驗報告單發(fā)放生物化學(xué)檢驗報告單的發(fā)放和注意事項檢驗報告單的發(fā)放時間檢驗報告單的發(fā)放要求常規(guī)生化檢驗急診生化檢驗危急值報告

制定《檢驗報告單審核、發(fā)放、登記制度》、《檢驗結(jié)果復(fù)查制度》、《檢驗數(shù)據(jù)管理制度》、《患者信息保密制度》、《危急值報告制度》，并嚴(yán)格按規(guī)定執(zhí)行。一般為2～4小時，不超過2天優(yōu)先，最長不得超過2小時立即通過電話報告，通話記錄第一節(jié)生物化學(xué)檢驗項目申請及檢驗報告單發(fā)放生物化學(xué)檢驗報告單的發(fā)放和注意事項檢驗報告單的發(fā)放注意事項

在完成實驗后，首先確認(rèn)室內(nèi)質(zhì)控：如果質(zhì)控數(shù)據(jù)在控制允許范圍內(nèi)，就審核確認(rèn)標(biāo)本的檢測結(jié)果，對符合復(fù)查條件的標(biāo)本進(jìn)行復(fù)查，然后執(zhí)行雙簽名發(fā)放報告單。如果室內(nèi)質(zhì)控數(shù)據(jù)不在控制范圍內(nèi)，需要查找失控的原因，及時糾正失控后，再對失控項目的所有標(biāo)本重新檢測，然后才能確認(rèn)、審核、簽發(fā)報告單。第二節(jié)臨床生物化學(xué)檢驗標(biāo)本的采集和處理

生物化學(xué)檢驗最常用的標(biāo)本是血液，其次是尿液，此外還有腦脊液、漿膜腔積液、羊水等各種體液。血液標(biāo)本全血血漿血清靜脈全血、動脈全血和末梢全血血液離體后自然凝固析出的液體，采集時不加抗凝劑全血標(biāo)本經(jīng)抗凝、離心后的液體，采集時必須加抗凝劑第二節(jié)臨床生物化學(xué)檢驗標(biāo)本的采集和處理血液標(biāo)本的采集毛細(xì)血管采血法靜脈穿刺采集法動脈穿刺采集法血液標(biāo)本的采集第二節(jié)臨床生物化學(xué)檢驗標(biāo)本的采集和處理血液標(biāo)本的采集第二節(jié)臨床生物化學(xué)檢驗標(biāo)本的采集和處理血液標(biāo)本的采集˙毛細(xì)血管采血注意事項

①采血時必須注意嚴(yán)格消毒和生物安全防范，采血針為一次性使用，一人一針

②如有局部水腫、炎癥、發(fā)紺或凍瘡等病變的均不可作為穿刺部位，嚴(yán)重?zé)齻颊呖蛇x擇皮膚完整處

③取血時可從指根往指尖方向順著血管走向稍加擠壓，但切忌用力過大，以免過多組織液混入血液中，對結(jié)果造成影響

④采血要迅速，防止流出的血液發(fā)生凝固。第二節(jié)臨床生物化學(xué)檢驗標(biāo)本的采集和處理血液標(biāo)本的采集應(yīng)盡可能避免一切干擾因素選擇最佳的采集時間減少飲食和藥物影響盡可能減少晝夜節(jié)律帶來的干擾操作前應(yīng)與患者溝通建立互信消除患者的恐懼和緊張情緒規(guī)范操作，嚴(yán)格無菌操作˙靜脈穿刺采血注意事項第二節(jié)臨床生物化學(xué)檢驗標(biāo)本的采集和處理血液標(biāo)本的采集˙動脈穿刺采血注意事項

主要用于血氣分析時。常選用的動脈為股動脈、肱動脈、橈動脈和臍動脈，以橈動脈最常用。采血時必須注意嚴(yán)格消毒，防止血腫。采血后立即用軟木塞或橡皮塞封閉針頭隔絕空氣，再將血液與肝素充分混合，并立即送檢，否則將標(biāo)本置于2～6℃冰箱保存，但不應(yīng)超過2小時。第二節(jié)臨床生物化學(xué)檢驗標(biāo)本的采集和處理體液標(biāo)本的采集

生物化學(xué)檢驗項目中常用的標(biāo)本還包括尿液、腦脊液、漿膜腔積液、羊水等各種體液。尿液標(biāo)本一般由患者或者患者家屬在醫(yī)生的指導(dǎo)下采集，排尿困難的患者可由醫(yī)生采集。而腦脊液、漿膜腔積液、羊水等標(biāo)本則由臨床醫(yī)師穿刺采集。第二節(jié)臨床生物化學(xué)檢驗標(biāo)本的采集和處理體液標(biāo)本的采集˙尿液標(biāo)本的采集尿液標(biāo)本的采集晨尿隨機尿計時尿晨尿清晨起床后未進(jìn)食和運動之前第一次尿液臨床最常用的尿液標(biāo)本常用于尿常規(guī)檢測、腎濃縮功能檢測、HCG檢測等隨機尿不受時間限制方便、快速，但干擾因素多適合門診、急診患者尿液篩檢實驗計時尿規(guī)定時間內(nèi)的尿液標(biāo)本餐后尿、3小時尿、12小時尿、24小時尿等第二節(jié)臨床生物化學(xué)檢驗標(biāo)本的采集和處理體液標(biāo)本的采集˙尿液標(biāo)本的采集

尿標(biāo)本的檢驗最好采用新鮮的尿液，應(yīng)在采集后2h內(nèi)分析完畢，如需12h或24h尿標(biāo)本時，必須用冷藏或防腐等適當(dāng)?shù)姆绞奖４?，可降低尿液理化性狀的變化。防腐劑防腐原理用量?yīng)用鹽酸保持尿液酸性，防止細(xì)菌繁殖，防止化學(xué)成分分解0.5～1.0ml濃鹽酸/100ml尿液適合：測定17-羥皮質(zhì)類固醇、17-酮類固醇、兒茶酚胺、草酸鹽、鈣、磷等測定的尿標(biāo)本防腐甲苯在尿液表面形成薄膜，防止細(xì)菌繁殖0.5～1.0ml甲苯/100ml尿液適合：尿糖、尿蛋白等化學(xué)成分的定性或定量分析甲醛對尿液細(xì)胞、管型等有形成分有固定作用400g/L甲醛0.5ml/100ml尿液不適于尿糖等化學(xué)成分檢查麝香草酚抑制細(xì)菌生長小于0.1g/100ml尿液適合：尿液顯微鏡檢查，尤其是尿濃縮結(jié)核桿菌檢查，以及化學(xué)成分檢驗的標(biāo)本保存第二節(jié)臨床生物化學(xué)檢驗標(biāo)本的采集和處理體液標(biāo)本的采集˙腦脊液標(biāo)本的采集腦脊液（cerebrospinalfluid，CSF）是存在于腦室、蛛網(wǎng)膜下腔和脊髓中央管中的無色透明液體，健康成人腦脊液總量約為120～180ml。第二節(jié)臨床生物化學(xué)檢驗標(biāo)本的采集和處理體液標(biāo)本的采集˙腦脊液標(biāo)本的采集采集部位：腰椎、小腦延髓、側(cè)腦室。第二節(jié)臨床生物化學(xué)檢驗標(biāo)本的采集和處理體液標(biāo)本的采集˙腦脊液標(biāo)本的采集

根據(jù)檢查目的將腦脊液分別收集于三個無菌試管中，每支試管采集腦脊液1～2ml。第一管用于細(xì)菌學(xué)檢查，第二管用于臨床化學(xué)和免疫學(xué)檢查，第三管用于常規(guī)檢查。如疑為惡性腫瘤，再采集一管進(jìn)行脫落細(xì)胞學(xué)檢查，采集過程必須要個無菌操作。第二節(jié)臨床生物化學(xué)檢驗標(biāo)本的采集和處理體液標(biāo)本的采集˙漿膜腔積液標(biāo)本的采集

人體胸膜腔、腹膜腔和心包膜腔統(tǒng)稱為漿膜腔。正常情況下，漿膜腔內(nèi)僅含有少量液體起潤滑作用。漿膜發(fā)生病變時，漿膜腔內(nèi)有大量的液體潴留而形成漿膜腔積液。漿膜腔積液標(biāo)本由臨床醫(yī)師行漿膜腔穿刺術(shù)采集，采集中段液體于消毒試管內(nèi)，且根據(jù)需要采用適當(dāng)?shù)目鼓齽┯枰钥鼓?。另外，還應(yīng)采集一不加抗凝劑的標(biāo)本管，用于觀察積液有無凝固現(xiàn)象。第二節(jié)臨床生物化學(xué)檢驗標(biāo)本的采集和處理體液標(biāo)本的采集˙漿膜腔積液標(biāo)本的采集

按產(chǎn)生的部位分為：胸膜腔積液（胸水）、腹膜腔積液（腹水）、心包膜積液。第二節(jié)臨床生物化學(xué)檢驗標(biāo)本的采集和處理體液標(biāo)本的采集˙羊水標(biāo)本的采集

羊水（amnioticfluid）是妊娠期母體血漿通過胎膜進(jìn)入羊膜腔的液體。羊水是產(chǎn)前診斷的良好材料，通過羊水成分的變化可以了解胎兒的成熟度，是否有先天性缺陷或?qū)m內(nèi)感染。第二節(jié)臨床生物化學(xué)檢驗標(biāo)本的采集和處理標(biāo)本的處理˙標(biāo)本的收檢血液標(biāo)本收檢尿液標(biāo)本收檢特殊標(biāo)本收檢

實驗室要建立嚴(yán)格的標(biāo)本驗收制度和不合格標(biāo)本的拒收制度。

標(biāo)本運送和收檢人員應(yīng)具備相應(yīng)的專業(yè)能力和生物安全知識，上崗前應(yīng)對其進(jìn)行系統(tǒng)培訓(xùn)。在標(biāo)本接收時標(biāo)本運送人員需和實驗室人員進(jìn)行簽字交接，登記內(nèi)容至少應(yīng)包括：患者姓名信息、申請項目、標(biāo)本種類、標(biāo)本外觀、標(biāo)本數(shù)量、標(biāo)本收取時間等。第二節(jié)臨床生物化學(xué)檢驗標(biāo)本的采集和處理標(biāo)本的處理˙檢驗標(biāo)本的分離、儲存與轉(zhuǎn)運標(biāo)本分離血液標(biāo)本及時分離血清或血漿尿液、腦脊液和胸腹水等標(biāo)本常需離心，取上清液進(jìn)行分析標(biāo)本的儲存低溫：通常冷藏溫度為4℃，冷凍溫度為-20℃防腐：12h或24h尿液收集時應(yīng)添加防腐劑標(biāo)本的轉(zhuǎn)運及時防污染注意生物安全第二節(jié)臨床生物化學(xué)檢驗標(biāo)本的采集和處理標(biāo)本的處理˙廢棄標(biāo)本的處理要求

生物化學(xué)檢測后廢棄的標(biāo)本、器具應(yīng)由專人負(fù)責(zé)處理。

《醫(yī)療廢物管理條例》將醫(yī)療廢物分為五類：感染性廢物病理性廢物損傷性廢物藥物性廢物化學(xué)型廢物第二節(jié)臨床生物化學(xué)檢驗標(biāo)本的采集和處理標(biāo)本的處理˙廢棄標(biāo)本的處理要求醫(yī)療廢物處理原則分類收集、集中轉(zhuǎn)運、集中處置清除污染、避免傷害必須與生活垃圾嚴(yán)格分開、嚴(yán)禁混淆焚燒處理要嚴(yán)防二次污染，必須達(dá)標(biāo)排放焚燒過程中的飛灰必須視同危險廢物，要妥善處理第二節(jié)臨床生物化學(xué)檢驗標(biāo)本的采集和處理標(biāo)本的處理˙廢棄標(biāo)本的處理要求

實驗室應(yīng)設(shè)立常規(guī)收集程序，嚴(yán)格分類收集和處理，每日收集各室廢物，密封運送。

所有容器和袋子應(yīng)采用有顯著的警示標(biāo)識和警示說明的醫(yī)療廢物專用包裝物包裝，盛3/4滿的容器應(yīng)立即更換。

設(shè)置三種顏色的污物袋（黑色袋裝生活垃圾，黃色袋裝醫(yī)用垃圾，紅色待裝放射垃圾），要求垃圾袋堅韌耐用，不漏水。第三節(jié)標(biāo)本因素對檢驗結(jié)果的影響

檢驗結(jié)果的影響因素很多、很復(fù)雜，其中標(biāo)本的影響因素較為突出。標(biāo)本影響因素屬于分析前質(zhì)量管理范疇，也是“全面質(zhì)量控制”中的重要控制對象。標(biāo)本因素對檢驗結(jié)果的影響主要體現(xiàn)在三個方面：生理因素的影響、飲食嗜好的影響、藥物的影響。第三節(jié)標(biāo)本因素對檢驗結(jié)果的影響生理因素的影響不同年齡階段，由于人體內(nèi)的代謝水平不同，會導(dǎo)致多種生化指標(biāo)出現(xiàn)差異，在臨床檢驗工作中應(yīng)針對這些項目在不同的年齡段制定相應(yīng)的參考范圍。男女性別不同，其體內(nèi)的多種生化指標(biāo)也會出現(xiàn)差異。沒有填寫性別、年齡信息的標(biāo)本屬于不合格標(biāo)本，應(yīng)按照《標(biāo)本拒收原則》處理。劇烈的肌肉運動可以暫時性或持續(xù)性使血液中許多生化物質(zhì)的含量發(fā)生變化而影響測定結(jié)果。一般需在患者安靜狀態(tài)下采集標(biāo)本。采血前患者情緒應(yīng)保持穩(wěn)定，同時護理人員應(yīng)向患者溝通作適當(dāng)解釋，以消除患者不必要的疑慮和恐懼。體位改變時導(dǎo)致血液內(nèi)細(xì)胞成份和大分子物質(zhì)濃度發(fā)生改變。生化血液標(biāo)本的抽采體位應(yīng)以坐姿為宜，病情較重的患者可取臥位。生化檢驗血液標(biāo)本的采集原則上必須是在清晨（7～9點）空腹時或進(jìn)食12小時后采集。特殊標(biāo)本，要嚴(yán)格按照標(biāo)本采集要求的時間段進(jìn)行采集。第三節(jié)標(biāo)本因素對檢驗結(jié)果的影響飲食、嗜好的影響

飲食結(jié)構(gòu)、飲酒、吸煙、節(jié)食、不規(guī)律的作息時間都會影響體內(nèi)各種物質(zhì)的檢測。不同的飲食結(jié)構(gòu)，可導(dǎo)致體內(nèi)的物質(zhì)代謝存在很大的差異。

如非素食者的飲食特點是高蛋白或高嘌呤，其尿素（Urea）、尿酸（UA）的水平比素食者高；飲酒可使Glu降低，UA、TG、γ-谷氨酰氨基轉(zhuǎn)肽酶（γ-GT）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）升高；患者空腹時間超過16小時，也可過使葡萄糖和蛋白質(zhì)結(jié)果偏低而膽紅素則增高。第三節(jié)標(biāo)本因素對檢驗結(jié)果的影響飲食、嗜好的影響避免影響因素的方法：標(biāo)本采集時必須堅持空腹采血，同時采血前禁食、煙、酒和各種飲料，并保持規(guī)律的作息時間。第三節(jié)標(biāo)本因素對檢驗結(jié)果的影響藥物的影響

藥物對檢驗的影響非常復(fù)雜，在采樣檢查之前，以暫停各種藥物為宜，如某種藥物不可停用，則應(yīng)了解可能對檢驗結(jié)果產(chǎn)生的影響。影響被測物的濃度影響檢驗方法輸液的直接影響第三節(jié)標(biāo)本因素對檢驗結(jié)果的影響藥物的影響避免影響因素的方法：

在采樣檢查之前，以暫停各種藥物為宜，如某種藥物不可停用，則應(yīng)了解可能對檢驗結(jié)果產(chǎn)生的影響。如必須在輸液時采血，應(yīng)盡量在對側(cè)手臂采血。ThankYou61職業(yè)教育醫(yī)學(xué)檢驗技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫生物化學(xué)檢驗技術(shù)第三章生物化學(xué)檢驗常用分析技術(shù)與儀器自動化BASICCLINICALLABORATORYMEDICINE63目錄12常用分析技術(shù)實驗室信息管理系統(tǒng)與儀器自動化第一節(jié)常用分析技術(shù)光譜分析技術(shù)離心技術(shù)電化學(xué)分析技術(shù)電泳分析技術(shù)干化學(xué)分析技術(shù)自動生化分析技術(shù)一二三四五六一、光譜分析技術(shù)光譜分析技術(shù)利用物質(zhì)具有吸收、發(fā)射或散射光譜譜系的特點，對物質(zhì)進(jìn)行定性或定量的分析技術(shù)。靈敏、準(zhǔn)確快速、簡便選擇性強應(yīng)用范圍廣生物化學(xué)檢驗中最基本和最常用的分析技術(shù)一、光譜分析技術(shù)

光譜分析技術(shù)吸收光譜分析可見光及紫外分光光度法原子吸收分光光度法紅外分光光度法發(fā)射光譜分析火焰光度法原子發(fā)射分光光度法熒光光譜法散射光譜分析散射比濁法透射比濁法一、光譜分析技術(shù)（一）吸收光譜分析1.光的基本性質(zhì)

光是一種電磁波，具有波動性和粒子性。波動性的特征是波長和頻率。光的波長（λ）單位常用納米（nm）表示?；诹Ｗ痈拍畹墓饬孔幽芰颗c基于波動概念的頻率或波長的關(guān)系可用以下公式表示，即E=hv=hC/λ式中：C為速度；v為頻率；λ為波長；E為每個光子的能量；h為普蘭克常數(shù)，其數(shù)值為6.626×10-34J·s。一、光譜分析技術(shù)2.紫外-可見分光光度法技術(shù)紫外-可見分光光度法（ultraviolet-visiblespectrophotometry）是根據(jù)物質(zhì)對紫外光（200～400nm）及可見光（400～780nm）的特征吸收而建立起來的分析方法，其定量分析的依據(jù)是光的吸收定律，即郎伯-比爾定律。一、光譜分析技術(shù)郎伯比爾定律：

根據(jù)Lambert-Beer定律，當(dāng)一束平行單色光通過均勻的非散射樣品時，吸光度與溶液層厚度和溶液濃度成正比。入射光I0透射光I一、光譜分析技術(shù)

式中A為吸光度；K為比例常數(shù)，稱為吸光系數(shù)；L為溶液層厚度，稱為光徑；C為溶液濃度根據(jù)Lambert－Beer定律，當(dāng)溶液層厚度單位為1cm，濃度單位為1mol/L時，吸光系數(shù)K稱為摩爾吸光系數(shù)（ε）ε是物質(zhì)的特征性常數(shù)。在固定條件（入射光波長、溫度等）下，特定物質(zhì)的ε不變，這是分光光度法對物質(zhì)進(jìn)行定性的基礎(chǔ)一、光譜分析技術(shù)3.分光光度法在生化檢驗中的應(yīng)用

（1）對未知化合物進(jìn)行定性分析（2）對待測物質(zhì)進(jìn)行定量測定1）標(biāo)準(zhǔn)曲線法2）比較法3）其它分析方法一、光譜分析技術(shù)1）標(biāo)準(zhǔn)曲線法根據(jù)Lambert-Beer定律，液體的濃度在一定范圍內(nèi)與吸光度成正比關(guān)系待測溶液測定吸光度后，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上可查出其相應(yīng)的濃度一、光譜分析技術(shù)制作和應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)曲線時應(yīng)注意下面幾點：①當(dāng)測定條件發(fā)生變化時（如更換標(biāo)準(zhǔn)品、更換光電池或光源以及試劑批號不同時），標(biāo)準(zhǔn)曲線應(yīng)重新繪制②標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)有高的純度，標(biāo)準(zhǔn)液的配制必須準(zhǔn)確③當(dāng)待測液吸光度超過線性范圍時，應(yīng)將標(biāo)本稀釋后再測定④標(biāo)本測定的條件應(yīng)和標(biāo)準(zhǔn)曲線制作時的條件完全一致⑤標(biāo)準(zhǔn)溶液設(shè)置的濃度范圍須足夠大，應(yīng)達(dá)到觀察拐點

一、光譜分析技術(shù)2）比較法己知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本作同樣處理，使用相同的空白，同時測定標(biāo)準(zhǔn)管和標(biāo)本的吸光度，根據(jù)測定的吸光度及標(biāo)準(zhǔn)品濃度，可直接計算出標(biāo)本的濃度，計算公式為：其中Cx和Ax為標(biāo)本管濃度和吸光度，Cs和As分別為標(biāo)準(zhǔn)管濃度和吸光度。用標(biāo)準(zhǔn)品法定量時，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度應(yīng)盡量和標(biāo)本管濃度相近。3）其他分析方法包括差示法、多組分混合物分析和利用摩爾吸光系數(shù)分析等方法。

Cx=(Ax×Cs)/As分子、原子或離子在輻射能的作用下，由基態(tài)或低能態(tài)躍遷到激發(fā)態(tài)，當(dāng)它們返回基態(tài)或低能態(tài)時，以輻射的形式釋放出能量，由此而產(chǎn)生的光譜一、光譜分析技術(shù)（二）發(fā)射光譜分析法

發(fā)射光譜火焰光度法熒光分光光度法一、光譜分析技術(shù)

火焰光度法基本原理：指在一定條件下，以火焰作為激發(fā)源提供熱能，使樣品中待測元素原子化，由于原子能級的變化，產(chǎn)生特征的發(fā)射譜線

火焰光度法臨床應(yīng)用：主要用于血清及尿液樣品中鈉、鉀的測定基態(tài)元素M激發(fā)態(tài)M*

E熱能（火焰）特征輻射固定熒光的發(fā)射波長而不斷改變激發(fā)光（即入射光）的波長，并記錄相應(yīng)的熒光強度，所得到的熒光強度對激發(fā)波長的譜圖稱為熒光的激發(fā)光譜使激發(fā)光的波長和強度保持不變，不斷改變熒光的發(fā)射波長并記錄相應(yīng)的熒光強度，所得到的熒光強度對發(fā)射波長的譜圖稱為熒光的發(fā)射光譜熒光的激發(fā)光譜熒光的發(fā)射光譜熒光光譜基本原理：熒光是分子吸收光能量被激發(fā)后，從激發(fā)態(tài)的最低振動能級躍遷返回基態(tài)時所發(fā)射出的光熒光光譜臨床應(yīng)用：大量具有生物意義的物質(zhì)，都可采用熒光分光光度法進(jìn)行分析測定，如氨基酸、蛋白質(zhì)、核酸、酶和輔酶、嘌呤、嘧啶、卟啉、維生素等一、光譜分析技術(shù)

79（三）散射光譜分析法利用懸浮顆?；鞚嵋旱纳⑸涔鈴姸然?qū)θ肷涔鉁p弱的原理進(jìn)行定量分析的方法散射光譜分析法

散射比濁法

透射比濁法一、光譜分析技術(shù)一、光譜分析技術(shù)散射比濁法基本原理：一定波長的光沿水平軸照射，通過溶液時，遇到抗原抗體復(fù)合物粒子，光線被粒子顆粒折射，發(fā)生偏轉(zhuǎn)，光線偏轉(zhuǎn)的角度與發(fā)射光的波長和抗原抗體復(fù)合物顆粒大小和多少密切相關(guān)，光強度與復(fù)合物的含量成正比透射比濁法基本原理：當(dāng)光線通過一定體積的溶液時，由于溶液中存在顆粒（抗原－抗體復(fù)合物）對光線的反射和吸收，引起透射光的減少，透射光的透光率和粒子的量成反比。通過測定透射光的透光率來反映粒子的量的方法即透射比濁法（一）離心技術(shù)的原理二、離心技術(shù)

離心現(xiàn)象是指物體在離心力場中表現(xiàn)的沉降運動現(xiàn)象。應(yīng)用離心沉降進(jìn)行物質(zhì)的分析和分離的技術(shù)稱為離心技術(shù)（centrifugaltechnique）。實現(xiàn)離心技術(shù)的儀器是離心機（centrifuge）。

離心是利用離心機產(chǎn)生的強大離心力來分離具有不同沉降系數(shù)的物質(zhì)。微粒在重力場下移動的速度與微粒的大小、形態(tài)、密度、重力場的強度及液體的黏度有關(guān)。二、離心技術(shù)1.離心力當(dāng)物體所受外力小于運動所需要的向心力時，物體將向遠(yuǎn)離圓心的方向運動。物體遠(yuǎn)離圓心運動的現(xiàn)象稱為離心現(xiàn)象。也叫離心運動。離心運動是由于向心力消失或不足而造成的。二、離心技術(shù)2.相對離心力相對離心力是指在離心力場中，作用于顆粒的離心力相對于地球重力的倍數(shù)，單位是重力加速度“g”。RCF=1.118×10-5n2r

式中r為離心轉(zhuǎn)子的半徑距離，以cm為單位；n為轉(zhuǎn)子每分鐘的轉(zhuǎn)數(shù)（rpm）。

二、離心技術(shù)3.沉降速度

指在強大離心力作用下，單位時間內(nèi)物質(zhì)運動的距離。4.沉降時間

在離心機的某一轉(zhuǎn)速下把溶液中某一種溶質(zhì)全部沉降分離出來所需的時間即沉降時間。

5.沉降系數(shù)顆粒在單位離心力場作用下的沉降速度，其單位為秒。沉降系數(shù)與樣品顆粒的分子量、分子密度、組成、形狀等有關(guān)，樣品顆粒的質(zhì)量或密度越大，它所表現(xiàn)出的沉降系數(shù)也越大。二、離心技術(shù)（二）離心技術(shù)的方法1.差速離心法

差速離心法是利用不同的粒子在離心力場中沉降系數(shù)的差別，在同一離心條件下，通過不斷增加相對離心力，使一個非均勻混合液內(nèi)的大小、形狀不同的粒子分步沉淀的離心方法。主要用于一般及特殊樣品的分離，例如分離細(xì)胞器和病毒。二、離心技術(shù)

操作過程一般是在離心后用傾倒的辦法把上清液與沉淀分開，然后將上清液加高轉(zhuǎn)速離心，分離出第二部分沉淀，如此反復(fù)加高轉(zhuǎn)速，逐級分離出所需要的物質(zhì)（如左圖所示）。87

返回目錄二、離心技術(shù)二、離心技術(shù)

優(yōu)點1.操作簡單，離心后用傾倒法即可將上清液與沉淀分開;2.可使用容量較大的角式轉(zhuǎn)子；分離時間短、重復(fù)性高；3.樣品處理量大。缺點1.分辨率有限、分離效果差，不能一次得到純顆粒；2.壁效應(yīng)嚴(yán)重，容易使顆粒變形、聚集而失活。差速離心法2.密度梯度離心法樣品在一定惰性梯度介質(zhì)中進(jìn)行離心沉淀或沉降平衡，在一定離心力作用下把顆粒分配到梯度液中某些特定位置上，形成不同區(qū)帶的分離方法。

二、離心技術(shù)（1）速率區(qū)帶離心法速率區(qū)帶離心法是根據(jù)被分離的粒子在梯度液中沉降速度的不同，離心后分別處于不同的密度梯度層內(nèi)形成幾條分開的樣品區(qū)帶，達(dá)到彼此分離的方法。二、離心技術(shù)（2）等密度區(qū)帶離心法

當(dāng)不同顆粒存在浮力密度差時，在離心力場中，顆?；蛳蛳鲁两?，或向上浮起，一直沿梯度移動到它們密度恰好相等的位置上（即等密度點）形成區(qū)帶，故稱為等密度區(qū)帶離心法。

二、離心技術(shù)

操作中，一般是將被分離樣品均勻分布于梯度液中，離心后，粒子會移至與它本身密度相同的地方形成區(qū)帶，收集好所需區(qū)帶即為純化的組份。主要用于科研及實驗室特殊方面的樣品組份的分離和純化。92返回目錄

二、離心技術(shù)二、離心技術(shù)優(yōu)點缺點密度梯度離心法1.分辨率高，分離效果好，可一次獲得較純顆粒2.適用范圍廣3.顆粒不會積壓變形1.離心時間較長；需要制備成梯度液2.操作嚴(yán)格，不宜掌握利用物質(zhì)的電化學(xué)性質(zhì)，測定化學(xué)電池的電流、電位、電導(dǎo)、電量等物理量的變化，從而測定物質(zhì)組成及含量的分析方法電化學(xué)分析技術(shù)靈敏、準(zhǔn)確儀器簡單快速、簡便價格低廉它是電化學(xué)和分析化學(xué)學(xué)科的重要組成部分三、電化學(xué)分析技術(shù)（一）離子選擇電極分析法的基本原理離子選擇電極是一類用特殊敏感膜制成，對溶液中某種特定離子具有選擇性響應(yīng)的電化學(xué)傳感器。一般由敏感膜、內(nèi)參比電極、內(nèi)參比溶液和電極管組成，既可測定pH，也可測定Na+、K+、Cl-、Ca2+、Mg2+等離子活度或濃度。通常以離子選擇性電極作為指示電極，飽和甘汞電極作為參比電極，插入被測溶液中構(gòu)成原電池，通過測量原電池的電動勢來求得被測離子活度或濃度。三、電化學(xué)分析技術(shù)ISE與參比電極共同浸入樣品試液中構(gòu)成一個原電池，通過測量原電池的電動勢E，便可求得被測離子的活度或濃度。三、電化學(xué)分析技術(shù)K：常數(shù)（測量條件恒定時）+：陽離子選擇電極；-：陰離子選擇電極；R：氣體常數(shù)；T：熱力學(xué)溫度；n：離子電荷數(shù)；F：法拉第常數(shù)；αx：離子活度。（二）常用的離子選擇電極三、電化學(xué)分析技術(shù)常用的離子選擇性電極（ISE）

玻璃膜電極敏感膜由玻璃材料制成，最常見為pH玻璃電極氣敏電極氣敏電極是基于界面化學(xué)反應(yīng)對氣體敏感而設(shè)計的一類敏化電極。如氨氣敏電極酶電極酶電極是另一種敏化電極，其原理是將含酶的凝膠涂布于離子選擇性電極的敏感膜上組成酶電極（三）離子選擇性電極分析法測定的影響因素離子選擇性電極對任何標(biāo)本的測量，都可能存在離子強度、絡(luò)合劑及干擾物質(zhì)的影響，不同的分析方法其影響的大小不同通常在標(biāo)準(zhǔn)溶液及標(biāo)本溶液中加入與待測離子無干擾的濃度較大的電解質(zhì)溶液，作為總離子強度調(diào)節(jié)緩沖液（totalionicstrengthadjustmentbuffer，TISAB）TISAB可保持較大且相對穩(wěn)定的離子強度，使活度系數(shù)恒定；維持溶液在適宜的pH范圍內(nèi)，滿足離子電極的要求；還能掩蔽干擾離子三、電化學(xué)分析技術(shù)溶液中帶電粒子在電場中定向移動的現(xiàn)象稱為電泳電泳利用電泳現(xiàn)象對物質(zhì)進(jìn)行分離的技術(shù)叫電泳技術(shù)電泳技術(shù)四、電泳分析技術(shù)（一）電泳技術(shù)的基本原理

物質(zhì)分子在正常情況下一般不帶電，即所帶正負(fù)電荷量相等，故不顯示帶電性。但是在一定的物理作用或化學(xué)反應(yīng)條件下，某些物質(zhì)分子會成為帶電的離子（或粒子），不同的物質(zhì)，由于其帶電性質(zhì)、顆粒形狀和大小不同，因而在一定的電場中它們的移動方向和移動速度也不同，因此可使它們分離。四、電泳分析技術(shù)電泳遷移率電泳遷移率是指在單位電場強度時帶電粒子的遷移速度帶電粒子由于各自的電荷和形狀大小不同，因而在電泳過程中具有不同的遷移速度，形成了依次排列的不同區(qū)帶而被分開。即使兩個粒子具有相似的電荷，如果它們的分子大小不同，所受的阻力不同，因此遷移速度也不同，在電泳過程中就可以被分離遷移率與帶電粒子所帶凈電荷成正比，與粒子的大小和緩沖液的黏度成反比四、電泳分析技術(shù)影響因素分子的形狀與性質(zhì)

球形移動速度快纖維狀移動速度慢電場強度高電場強度,電泳速度加快，電流強度也增大，產(chǎn)熱增多低電場強度,電泳速度減慢。電泳時間增長，增加了標(biāo)本的擴散電泳緩沖液pH值:一般設(shè)在4.5～9.0為宜緩沖溶質(zhì):化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定、緩沖容量大、電導(dǎo)率低、離子移動性好離子強度:緩沖液的導(dǎo)電能力,以0.05～0.1mol/L為宜支持介質(zhì)吸附作用：吸附作用可阻滯標(biāo)本的移動，出現(xiàn)區(qū)帶拖尾現(xiàn)象電滲作用：電場中液相對固相的相對移動稱為電滲蒸發(fā)影響電泳的因素四、電泳分析技術(shù)（二）常用電泳技術(shù)的分類四、電泳分析技術(shù)按電泳方式分類移動界面電泳區(qū)帶電泳穩(wěn)態(tài)電泳四、電泳分析技術(shù)按有無固體載體介質(zhì)分自由電泳支持介質(zhì)電泳（三）電泳技術(shù)在臨床檢驗中的應(yīng)用四、電泳分析技術(shù)血清蛋白電泳1尿蛋白電泳2血紅蛋白電泳3糖化血紅蛋白電泳4免疫固定電泳5同工酶電泳6指將液態(tài)樣品如血漿、血清、尿液等置于含有試劑的固相載體上發(fā)生反應(yīng)，依照反應(yīng)結(jié)果定量測定樣品中特定成分的濃度或活度的一項技術(shù)干化學(xué)分析是一種專門使用固相載體試劑進(jìn)行臨床化學(xué)檢驗的分析儀，它通過反射光度法、差示電位法等方法定量測出樣品中特定成分的濃度或活度干化學(xué)分析儀五、干化學(xué)分析技術(shù)（一）干化學(xué)分析技術(shù)的基本原理干化學(xué)技術(shù)普遍采用多層膜固相試劑技術(shù)，即干式化學(xué)的多層膜試劑載體，它集中現(xiàn)代化學(xué)、光學(xué)、酶工程學(xué)、化學(xué)計量學(xué)和計算機技術(shù)于一體，已使其作為定量方法五、干化學(xué)分析技術(shù)干式化學(xué)的多層膜試劑載體基于發(fā)射光度法的多層膜基于熒光技術(shù)和競爭免疫技術(shù)的熒光反射光度法多層膜基于差示電位法的離子選擇電極的多層膜108理論基礎(chǔ)：遵從Kubelka-Munk理論光反射率與固相層的厚度、單位厚度的光吸收系數(shù)以及固相反應(yīng)層的散射系數(shù)有關(guān)系，當(dāng)固相層厚度和固相反應(yīng)層的散射系數(shù)固定時，光吸收系數(shù)同待測物的濃度成正比

1.反射光度法五、干化學(xué)分析技術(shù)109多層膜干片結(jié)構(gòu)（1）樣本擴散層（2）反射層（3）輔助試劑層（4）試劑層（5）透明支持層基于反射光度法的多層膜干片結(jié)構(gòu)示意圖五、干化學(xué)分析技術(shù)基于傳統(tǒng)濕化學(xué)分析的離子選擇電極原理，用于測定無機離子

2.差示電位法多層膜結(jié)構(gòu)（1）離子選擇性敏感膜（2）參比層（3）氯化銀層（4）銀層（5）支持層五、干化學(xué)分析技術(shù)五、干化學(xué)分析技術(shù)（二）干化學(xué)分析技術(shù)的影響因素1.儀器監(jiān)測2.校準(zhǔn)頻度3.質(zhì)控物4.干片試劑的儲存與使用5.工作環(huán)境溫度和濕度五、干化學(xué)分析技術(shù)（三）干化學(xué)分析技術(shù)在臨床檢驗中的應(yīng)用干化學(xué)自動分析儀已廣泛應(yīng)用于檢驗醫(yī)學(xué)的各個方面，檢測的項目已多達(dá)70余項，包括常規(guī)生化、內(nèi)分泌激素、毒素、藥物濃度分析以及特種蛋白等免疫學(xué)檢驗干化學(xué)分析儀的分類反射光度法系統(tǒng)膠片涂層技術(shù)分析系統(tǒng)袋式分析儀113干化學(xué)分析法的特點：速度快，靈敏度和準(zhǔn)確度與典型的分離式儀器相近應(yīng)用Lambert－Beer定律時必須符合3個條件：超微量，操作簡單，占用空間小，使用過程中靈活機動性強脫離了傳統(tǒng)的分析方法，所有的測定參數(shù)均存儲于儀器的信息磁場塊中五、干化學(xué)分析技術(shù)114區(qū)別點干化學(xué)濕化學(xué)試劑固相，大多無需定標(biāo)，穩(wěn)定周期長（數(shù)月），全血可直接上機檢測液體，需要定標(biāo)，穩(wěn)定周期短，全血不可直接上機檢測儀器磁卡校正，無需排水系統(tǒng)，分析前后無需清洗每次測試原則上需要校正，需要排水系統(tǒng)，測試前后需清潔反應(yīng)載體固相介質(zhì)反應(yīng)杯檢測方法反射光度法透射光度法電解質(zhì)測定差示電位法離子選擇性電極法理論基礎(chǔ)Kubelka-Munk理論和Williams-Clapper公式Lambert-Beer定律干化學(xué)和濕化學(xué)生化檢測的主要區(qū)別五、干化學(xué)分析技術(shù)六、自動生化分析技術(shù)自動生化分析技術(shù)的定義：

機械化的儀器設(shè)備模仿代替手工操作，即把生化分析中的加樣、加試劑、混合、保溫反應(yīng)、檢測、結(jié)果計算、顯示、打印和清洗等步驟自動化的分析檢測技術(shù)六、自動生化分析技術(shù)

自動生化分析儀器(automaticbiochemicalanalyzer)，是將生物化學(xué)分析過程中的取樣、加試劑、去干擾、混合、保溫反應(yīng)、自動檢測、結(jié)果計算、數(shù)據(jù)處理和打印報告，以及實驗后的清洗等步驟自動化的儀器。

連續(xù)流動式離心式全自動半自動單通道多通道按反應(yīng)裝置的結(jié)構(gòu)分按自動化程度分按同時可測定項目分分立式干片式六、自動生化分析技術(shù)（一）自動生化分析儀的類型1.分立式自動生化分析儀六、自動生化分析技術(shù)分立式生化分析儀工作流程示意圖所謂分立式，是指按手工操作的方式編排程序，并以有節(jié)奏的機械操作代替手工，各環(huán)節(jié)用轉(zhuǎn)送帶連接起來，按順序依次操作。即“順序分析”樣本針試劑針試劑盤反應(yīng)杯沖洗站攪拌棒功能鍵反應(yīng)盤基本結(jié)構(gòu)包括樣本處理系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)、清洗系統(tǒng)和計算機軟件系統(tǒng)。六、自動生化分析技術(shù)（1）樣本和試劑處理系統(tǒng)1）樣本盤或樣本架六、自動生化分析技術(shù)2）試劑盤和試劑瓶六、自動生化分析技術(shù)3）取液裝置六、自動生化分析技術(shù)（2）反應(yīng)系統(tǒng)1）反應(yīng)盤和反應(yīng)杯六、自動生化分析技術(shù)1242）混勻裝置壓電型攪拌六、自動生化分析技術(shù)3）恒溫裝置六、自動生化分析技術(shù)恒溫裝置示意圖（3）測定系統(tǒng)1）光路系統(tǒng)2）信號檢測器六、自動生化分析技術(shù)（4）清洗系統(tǒng)六、自動生化分析技術(shù)

（5）計算機控制系統(tǒng)六、自動生化分析技術(shù)控制樣品測定程序計算測定結(jié)果判斷結(jié)果準(zhǔn)確性顯示和輸出測定結(jié)果數(shù)據(jù)儲存等

六、自動生化分析技術(shù)(二）干化學(xué)式生化分析儀

干片式分析儀是80年代問世的。分析儀是采用干化學(xué)(drychemistry)方法，將發(fā)生在液相反應(yīng)物中的反應(yīng)，轉(zhuǎn)移到一個固相載體上，利用反射光度計檢測即可進(jìn)行定量檢測的一類新型儀器。這類方法完全革除了液體試劑，故稱干化學(xué)法。

其主要結(jié)構(gòu)包括取樣裝置、干片試劑、恒溫裝置、檢測系統(tǒng)、計算機控制系統(tǒng)。儀器的檢測原理多為反射光度法、熒光反射光度法和差示電位法，靈敏度和準(zhǔn)確度達(dá)到甚至優(yōu)于分立式自動生化分析儀，在使用時不需配制試劑，而是使用廠家已經(jīng)配備好的干片試劑，操作簡便，速度快。六、自動生化分析技術(shù)（1）干化學(xué)生化分析儀的主要結(jié)構(gòu)干片結(jié)構(gòu)示意圖散布層試劑層顯色層支持層（2）干片試劑的基本結(jié)構(gòu)六、自動生化分析技術(shù)

六、自動生化分析技術(shù)（3）干化學(xué)式生化分析儀的獨特性能1.運行速度快，操作簡單，檢測范圍廣，主觀誤差和系統(tǒng)誤差小2.檢測程序可隨機設(shè)置，既可單一項目成批分析，也可各種項目隨機組合3.急診優(yōu)先功能4.儀器完全由微機控制，可對多種數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理5.有的分析儀采用了化學(xué)惰性“液囊式技術(shù)”，能將每個標(biāo)本嚴(yán)格分開互不摻雜，降低了攜帶污染率，提高了檢驗結(jié)果的精密度分析方法

固定時間法終點法（一點終點法、兩點終點法）

比濁法

兩點速率法連續(xù)監(jiān)測法（速率法、動力學(xué)法）（三）自動生化分析儀的分析方法六、自動生化分析技術(shù)

六、自動生化分析技術(shù)1.終點法A單試劑兩點終點法B雙試劑兩點終點法

A單試劑固定時間法B雙試劑固定時間法六、自動生化分析技術(shù)2.固定時間法

A單試劑連續(xù)監(jiān)測法B雙試劑連續(xù)監(jiān)測法六、自動生化分析技術(shù)3.連續(xù)監(jiān)測法

比濁法是一種通過檢測物質(zhì)對光的散射或透射強度來測定物質(zhì)的方法。自動生化分析儀一般只做透射比濁分析。透射比濁法是在光源的光路方向測量透光強度，它常用于終點法測定。主要用于血清特種蛋白的測定，如載脂蛋白、微量蛋白、急性時相反應(yīng)蛋白、免疫球蛋白以及某些藥物監(jiān)測等。

六、自動生化分析技術(shù)4.比濁法基本分析參數(shù)線性范圍參考值范圍分析時間波長分析方法標(biāo)本量、試劑量、稀釋量試驗名稱與編號試劑選擇小數(shù)點位數(shù)反應(yīng)溫度反應(yīng)類型校準(zhǔn)參數(shù)（四）自動生化分析儀的參數(shù)設(shè)置六、自動生化分析技術(shù)

六、自動生化分析技術(shù)1.試驗代碼以數(shù)字、按順序編號。2.試驗名稱試驗名稱也稱通道名稱，常以項目的英文縮寫或數(shù)字來表示。3.分析方法有終點法、兩點速率法、連續(xù)監(jiān)測法等，根據(jù)試劑盒說明書選擇其中一種。4.反應(yīng)溫度自動生化分析儀通常設(shè)有25℃、30℃、37℃三種溫度，為了使酶反應(yīng)的溫度與體內(nèi)溫度一致，一般固定在37℃，此項一般在系統(tǒng)參數(shù)中設(shè)置。

5.波長單波長：適用于測定體系中只有一種組分或混合溶液中待測組分的吸收峰與其他共存物質(zhì)的吸收峰無重疊時。雙波長或多波長：可消除溶血、濁度等干擾物的影響，提高測定結(jié)果的準(zhǔn)確性血紅蛋白、膽紅素、乳糜的光譜吸收曲線

六、自動生化分析技術(shù)6.反應(yīng)類型有正向和負(fù)向兩種，正向反應(yīng)吸光度增加，負(fù)向反應(yīng)吸光度下降。7.樣品量與試劑量

一般按照試劑說明書上的比例，并結(jié)合儀器的特性，即樣品和試劑最小加樣量及加樣范圍、最小反應(yīng)體積等，進(jìn)行設(shè)置。

六、自動生化分析技術(shù)8.試劑選擇

單試劑法：在反應(yīng)過程中只加一次試劑的方法雙試劑法：在反應(yīng)過程中試劑分開配制和加入反應(yīng)系統(tǒng)，可消除干擾和非特異性反應(yīng)，穩(wěn)定試劑，使檢測結(jié)果更準(zhǔn)確。雙試劑

六、自動生化分析技術(shù)對于終點分析，測定時間的選擇應(yīng)充分考慮到干擾的問題。一點終點法的分析時間應(yīng)設(shè)在待測物質(zhì)反應(yīng)將完成時，過早會由于反應(yīng)未達(dá)到終點而影響結(jié)果的準(zhǔn)確性，過遲則易受其他反應(yīng)物質(zhì)的干擾。兩點終點法應(yīng)選擇合適的第一試劑和第二試劑加入時間，以消除樣本空白和內(nèi)源性物質(zhì)的干擾。連續(xù)監(jiān)測法應(yīng)先仔細(xì)觀察時間-反應(yīng)進(jìn)程曲線，從曲線上選擇最佳的測定時間。9.分析時間六、自動生化分析技術(shù)

反應(yīng)吸光度處于線性范圍內(nèi)時，檢測結(jié)果與吸光度變化成正比，準(zhǔn)確反映待測物濃度。六、自動生化分析技術(shù)10.線性范圍1.儀器運行前操作程序（1）試驗項目設(shè)置對試驗組合(profile)、試驗輪次(round)等的設(shè)置（2）試驗參數(shù)設(shè)置除各測定項目外，還有試驗項目間比值、結(jié)果核對等參數(shù)的設(shè)置（3）試劑設(shè)置根據(jù)有關(guān)試驗參數(shù)，設(shè)置各試劑的試劑位、試劑瓶規(guī)格，必要時設(shè)定試劑批號、失效期等（4）校準(zhǔn)品設(shè)置對校準(zhǔn)品的濃度、數(shù)量和位置等進(jìn)行設(shè)置（5）質(zhì)控設(shè)置根據(jù)質(zhì)控要求，設(shè)置質(zhì)控物個數(shù)、質(zhì)控規(guī)則、質(zhì)控項目及相應(yīng)質(zhì)控參數(shù)等（6）樣品管設(shè)置包括樣品管類型、殘留液高度（死體積）、識別方式等（7）其他設(shè)置如數(shù)據(jù)傳輸方式、結(jié)果報告格式、復(fù)查方式與復(fù)查標(biāo)準(zhǔn)等（五）自動生化分析儀的操作流程六、自動生化分析技術(shù)2.常規(guī)操作程序開機（自檢、預(yù)熱）設(shè)置開始條件（日期時間索引、輪次、樣品起始號等）根據(jù)需要申請校準(zhǔn)、質(zhì)控和病人測定項目（包括架號、杯號或順序號）裝載校準(zhǔn)品、質(zhì)控物和病人標(biāo)本核對儀器起始狀態(tài)（未應(yīng)用條碼系統(tǒng)，采用順序識別樣品時，尤其要核對測定起始編號是否與樣品架號和申請?zhí)栂喾┒?biāo)和質(zhì)控測定檢查定標(biāo)和質(zhì)控結(jié)果病人標(biāo)本測定測定過程監(jiān)控（試劑檢查、結(jié)果觀察分析）數(shù)據(jù)傳遞（打印報告，向檢驗管理系統(tǒng)傳輸，包括工作量統(tǒng)計、財務(wù)統(tǒng)計、病人情況追蹤、質(zhì)控分析等）測定后保養(yǎng)

六、自動生化分析技術(shù)

儀器操作者要非常熟悉儀器各種警示符號的含義與作用，根據(jù)警示符號來發(fā)現(xiàn)問題和解決問題；能熟練運用儀器的相關(guān)操作界面，并按報告單審核要求，對每一張檢驗報告單進(jìn)行認(rèn)真、仔細(xì)、嚴(yán)格的審查，確保結(jié)果準(zhǔn)確無誤后才能簽發(fā)。六、自動生化分析技術(shù)3.測定結(jié)果檢查分析和報告單審核第二節(jié)實驗室信息管理系統(tǒng)與儀器自動化實驗室信息管理系統(tǒng)和管理流程實驗室自動化系統(tǒng)一二

實驗室信息系統(tǒng)（LIS）是對實驗室日常工作、科室管理、學(xué)科建設(shè)和實驗室發(fā)展等方面所產(chǎn)生及所需求的信息，通過計算機收集、處理、存儲、輸送和應(yīng)用的系統(tǒng)一、實驗室信息管理系統(tǒng)和管理流程（一）實驗室信息管理系統(tǒng)

實驗室信息系統(tǒng)是醫(yī)院信息管理系統(tǒng)（HIS）的一個子系統(tǒng)，將實驗室的分析儀通過計算機網(wǎng)絡(luò)連接起來，采用科學(xué)的管理思想和先進(jìn)的數(shù)據(jù)庫技術(shù)，提供科學(xué)規(guī)范的作業(yè)流程，使臨床實驗室能與門診部、住院部、財務(wù)科和臨床科室等全院各部門之間實現(xiàn)高效協(xié)同工作LIS一般由臨床檢驗信息和實驗室管理信息兩部分組成

一、實驗室信息管理系統(tǒng)和管理流程（二）實驗室信息管理系統(tǒng)管理流程LIS系統(tǒng)的工作模式：通過計算機網(wǎng)絡(luò)使所有檢驗儀器相連接，數(shù)據(jù)集中存儲，集中處理，使檢驗有關(guān)各部門分散的業(yè)務(wù)聯(lián)成一個共同整體，并將檢驗工作的整個流程置于計算機的實時監(jiān)控之下，加強檢驗科室的內(nèi)部管理。LIS的基本功能：檢驗申請輸入、檢驗結(jié)果數(shù)據(jù)自動采集或手工錄入、檢驗結(jié)果審核、檢驗報告單生成、檢驗費用、質(zhì)量控制、試劑出入庫、臨床實驗室管理的各種文件、統(tǒng)計報表和工作登記表等環(huán)節(jié)的信息化管理1.患者信息工作站

由醫(yī)院掛號處或住院登記處完成2.醫(yī)生工作站LIS允許在醫(yī)院范圍內(nèi)的任何地點生成電子檢驗報告單，包括病區(qū)、門診醫(yī)生工作站、護士工作站、患者服務(wù)工作站、檢驗標(biāo)本收檢工作站等3.護士工作站

護士工作站即原始標(biāo)本采集工作站，一般由臨床護士、醫(yī)生、專門設(shè)立的采血窗口或檢驗科標(biāo)本收檢處完成，患者自留的標(biāo)本也在相應(yīng)的站點完成收集4.計費工作站LIS支持多種形式的計費：生成醫(yī)囑時、實驗室收到檢驗申請后、標(biāo)本檢驗完畢、檢驗完成后、HIS系統(tǒng)計費等一、實驗室信息管理系統(tǒng)和管理流程實驗室工作站管理站和系統(tǒng)站檢驗報告發(fā)送站庫房管理工作站標(biāo)本接收站標(biāo)本處理站檢測工作站5.實驗室工作站

一、實驗室信息管理系統(tǒng)和管理流程

實驗室自動化系統(tǒng)（laboratoryautomationsystem,LAS）是將多個檢測系統(tǒng)與分析前、分析后處理系統(tǒng)進(jìn)行系統(tǒng)化的整合，通過檢測系統(tǒng)和信息網(wǎng)絡(luò)連接來完成檢驗及信息自動化處理過程的系統(tǒng)組合。系統(tǒng)中的樣本通過自動化運送軌道在不同的子系統(tǒng)中流轉(zhuǎn)，形成覆蓋整個檢驗過程的流水作業(yè)，達(dá)到全檢驗過程自動化的目的，有時也稱為檢驗流水線。二、實驗室自動化系統(tǒng)

（一）實驗室自動化系統(tǒng)的基本概念

二、實驗室自動化系統(tǒng)（二）實驗室自動化系統(tǒng)的分類系統(tǒng)自動化01模塊自動化02全實驗室自動化03二、實驗室自動化系統(tǒng)（三）實驗室自動化系統(tǒng)的臨床應(yīng)用優(yōu)勢2簡化樣本的檢驗步驟3降低實驗室生物安全風(fēng)險4完善了檢驗流程與管理5良好的樣本管理體系1提高臨床實驗室管理水平6節(jié)約人力資源ThankYou156職業(yè)教育醫(yī)學(xué)檢驗技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫生物化學(xué)檢驗技術(shù)第四章實驗方法的選擇與檢測系統(tǒng)BASICCLINICALLABORATORYMEDICINE158目錄

實驗方法的選擇1臨床實驗方法的評價和檢驗項目臨床應(yīng)用性能評價2檢測系統(tǒng)及量值溯源3第一節(jié)實驗方法的選擇

實驗方法的選擇要結(jié)合其目的、要求等，選擇適當(dāng)?shù)膶嶒灧椒?，這是得到準(zhǔn)確可靠信息的前提，是檢驗質(zhì)量的重要保障。實驗方法是否適合于臨床，必須進(jìn)行嚴(yán)格的選擇和評價。第一節(jié)實驗方法的選擇實驗方法的分級1.決定性方法3.常規(guī)方法2.參考方法準(zhǔn)確度最高，系統(tǒng)誤差最小，經(jīng)過詳細(xì)研究，沒有發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生誤差的原因的方法。準(zhǔn)確度與精密度已經(jīng)被充分證實，且經(jīng)公認(rèn)的權(quán)威機構(gòu)(包括國家主管部門、相關(guān)學(xué)術(shù)團體和國際性組織等)頒布的方法。具有足夠的精密度、準(zhǔn)確度、特異性和適當(dāng)?shù)姆治龇秶?，性能指?biāo)符合臨床或其它目的需要的實驗方法，由于其經(jīng)濟實用性，是目前臨床實驗室應(yīng)用最為廣泛的常規(guī)分析方法。第一節(jié)實驗方法的選擇參考物質(zhì)的分級1.一級參考物質(zhì)（原級參考物、一級校準(zhǔn)品、一級標(biāo)準(zhǔn)品）

是一種已經(jīng)確定的穩(wěn)定而均一的雜質(zhì)含量定量的物質(zhì)，其計量學(xué)特性位居最高，測量不確定度最小，由決定性方法確定或由高度準(zhǔn)確的若干方法確定其數(shù)值。

2.二級參考物質(zhì)（次級參考物、二級校準(zhǔn)品或二級標(biāo)準(zhǔn)品）

這類標(biāo)準(zhǔn)品可以是純?nèi)芤?水或有機溶劑的溶液)，也可以是與臨床樣本相似的基質(zhì)中，由參考方法定值或用一級標(biāo)準(zhǔn)品校正而確定其值。3.控制物

控制物也被稱為工作參考物，臨床上常用的控制物有凍干的，還有溶液的，其值以參考方法用適當(dāng)?shù)男?zhǔn)物來定值。第一節(jié)實驗方法的選擇實驗方法選擇的原則1.實用性（1）微量快速：檢測所需的樣本量少，適合批量成套分析。（2）方法簡便：操作容易開展，試劑種類少，易于自動化分析。（3）費用低廉：無需昂貴試劑和儀器，可行性較強。（4）應(yīng)用安全：試劑無毒，腐蝕性小，操作人員無需特殊防護措施。2.可靠性

所選方法應(yīng)具有較高的精密度、準(zhǔn)確度、特異性和穩(wěn)定性，有較

大的檢測能力及有較寬的測量范圍，保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性能符合方法允許誤差限度的要求。第一節(jié)實驗方法的選擇實驗方法選擇的步驟1.廣泛搜集資料：根據(jù)方法選擇的要求，廣泛、仔細(xì)查閱國內(nèi)外已發(fā)表的相關(guān)文獻(xiàn)，翻閱相關(guān)文件條例：條件允許時還可以通過實驗室之間的交流、現(xiàn)場考察、專業(yè)會議信息，也可參照國外或國內(nèi)室間質(zhì)評和能力驗證的反饋信息。2.選定候選方法：根據(jù)實驗室的設(shè)備條件、技術(shù)人員業(yè)務(wù)素質(zhì)、工作量等具體情況，選擇適合于本實驗室具體條件的方法作為候選方法。3.初步評價試驗：對候選方法應(yīng)作初步評價試驗。第二節(jié)臨床實驗方法的評價和檢驗項目臨床應(yīng)用性能評價臨床實驗方法的評價

精密度(precision)是指在規(guī)定檢驗條件和同一測量程序下，對同一樣本進(jìn)行重復(fù)多次測量，所得測量值之間隨機誤差的大小，觀察各數(shù)值之間的接近程度。通常用標(biāo)準(zhǔn)差(standarddeviation,S)(或)變異系數(shù)(cefficientofvariation,CV)的大小即不精密度來描述。

基本方法：批內(nèi)重復(fù)實驗、批間重復(fù)試驗、日內(nèi)重復(fù)試驗一、精密度評價第二節(jié)臨床實驗方法的評價和檢驗項目臨床應(yīng)用性能評價臨床實驗方法的評價判斷標(biāo)準(zhǔn)

將計算得到的標(biāo)準(zhǔn)差參比國家行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(WS/T403-2012(臨床生物化學(xué)檢驗常規(guī)項目分析質(zhì)量標(biāo)》)或與美國CLIA'88規(guī)定的總允許誤差進(jìn)行比較，批內(nèi)不精密度CV應(yīng)小于CLIA'88允許誤差的1/4,批間不精密CV應(yīng)小于CLIA'88允許誤差的1/3作為評價標(biāo)準(zhǔn)。第二節(jié)臨床實驗方法的評價和檢驗項目臨床應(yīng)用性能評價臨床實驗方法的評價

正確度（trueness）是大批檢測結(jié)果的均值與真值的一致程度；準(zhǔn)確度（accuracy）是一次檢測結(jié)果與真值的一致程度。正確度通常用偏倚(bias)表示，已經(jīng)消除了不精密度的影響，偏倚又可用系統(tǒng)誤差表示。

基本方法：回收試驗、干擾試驗和方法比對試驗。

判斷標(biāo)準(zhǔn)：比例系統(tǒng)誤差小于國家行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（WST403-2012）或CLIA`88規(guī)定的總允許誤差標(biāo)準(zhǔn)，則該檢測方法或檢測系統(tǒng)正確度性能可接受；否則為不可接受。二、正確度評價第二節(jié)臨床實驗方法的評價和檢驗項目臨床應(yīng)用性能評價臨床實驗方法的評價

是指樣本在不經(jīng)過任何稀釋，濃縮和其他預(yù)處理的情況下，直接應(yīng)用檢測系統(tǒng)，測定出樣本的范圍，也稱為線性范圍，在此范圍內(nèi)，測量值與預(yù)測值（真值）呈直線關(guān)系。

注意事項：線性范圍評價最理想的樣本是患者低值和高值的新鮮血清標(biāo)本，實際上這種標(biāo)本往往不容易收集到,因此,多采用人工方法制備。為使人工制備的樣本與實際工作中患者樣本的基質(zhì)一致，多以混合血清作基質(zhì)。樣本濃度應(yīng)覆蓋待評價線性范圍，上下限還應(yīng)包含醫(yī)學(xué)決定水平和常見疾病的檢測值。三、可報告范圍評價第二節(jié)臨床實驗方法的評價和檢驗項目臨床應(yīng)用性能評價臨床實驗方法的評價

檢出限也叫檢測限、檢測低限。是指在給定的顯著性水平內(nèi)，能夠檢出被測物的最低濃度。注意事項：1）檢出限是定性檢出，不能進(jìn)行準(zhǔn)確定量。2）有些因子，無法準(zhǔn)確的單獨進(jìn)行檢測，比如PT和APTT的檢測。3）理想的空白樣品或低值樣本要與患者具有相同或相似的基質(zhì).4）實驗過程中，如果LOB和LOD的未知，應(yīng)建立自己的數(shù)值。四、檢出限的驗證第二節(jié)臨床實驗方法的評價和檢驗項目臨床應(yīng)用性能評價臨床實驗方法的評價

是指某項檢查結(jié)果在正常人群中的分布范圍，是解釋檢驗結(jié)果、分析檢驗信息的一個基本尺度和依據(jù)。五、參考區(qū)間驗證第二節(jié)臨床實驗方法的評價和檢驗項目臨床應(yīng)用性能評價檢驗項目臨床應(yīng)用性能評價

通過方法學(xué)評價可以得知候選方法的誤差，解決了樣本與檢驗方法的問題。但是一個實驗在臨床上的應(yīng)用價值，還要與臨床診斷相結(jié)合，解決候選方法和臨床受試者的關(guān)系，主要包括試驗的診斷敏感度、診斷特異度、預(yù)測值、似然比和ROC曲線等指標(biāo)。

診斷試驗指用于某種疾病診斷的臨床試驗檢查方法。金標(biāo)準(zhǔn)是指當(dāng)前臨床醫(yī)學(xué)界公認(rèn)的診斷疾病最可靠的方法。第二節(jié)臨床實驗方法的評價和檢驗項目臨床應(yīng)用性能評價檢驗項目臨床應(yīng)用性能評價

又稱靈敏度、真陽性率（truepositiverate，TPR），指在用“金標(biāo)準(zhǔn)”確診的患者中，應(yīng)用診斷試驗檢查得到同為某病患者的百分比。靈敏度反映診斷試驗正確識別患病者的能力，靈敏度的理想值是100％。

通常用于：①擬診為嚴(yán)重但療效好的疾病，以防漏診；②擬診為有一定治療效果的惡性腫瘤，以便早期確診及時治療；③存在多種可能疾病的診斷，可排除某一診斷；④普查或定期健康體檢，能篩選某一疾病，以防漏診。一、敏感度第二節(jié)臨床實驗方法的評價和檢驗項目臨床應(yīng)用性能評價檢驗項目臨床應(yīng)用性能評價

又稱特異性、真陰性率（truenegativerate，TNR），指用“金標(biāo)準(zhǔn)”診斷的非某病者中，應(yīng)用診斷試驗檢查得到同為非某病患者的百分比。特異度反映診斷試驗正確鑒別非患病者的能力，理想值為100％。

常用于：①擬診患有某病的概率較大時，以便確診；②擬診疾病嚴(yán)重但療效與預(yù)后均不好的疾病，以防誤診，盡早解除患者的壓力；③擬診疾病嚴(yán)重且根治方法具有較大損害時，需確診，以免造成患者不必要的損害。二、特異度第二節(jié)臨床實驗方法的評價和檢驗項目臨床應(yīng)用性能評價檢驗項目臨床應(yīng)用性能評價

也稱預(yù)告值或診斷價值，包括陽性預(yù)測值和陰性預(yù)測值，分別表示診斷試驗結(jié)果確定或排除某種疾病存在與否的診斷概率。預(yù)測值受流行率的影響，不同流行率的人群中疾病的預(yù)測值不同。三、預(yù)測值第二節(jié)臨床實驗方法的評價和檢驗項目臨床應(yīng)用性能評價檢驗項目臨床應(yīng)用性能評價

似然比是某一特定水平的診斷試驗結(jié)果在患病者中出現(xiàn)的概率與在未患病者中出現(xiàn)的概率之比，性質(zhì)穩(wěn)定，不因流行率的改變而改變。似然比包括陽性似然比和陰性似然比。

似然比可直接判斷一個診斷試驗的好壞。四、似然比第二節(jié)臨床實驗方法的評價和檢驗項目臨床應(yīng)用性能評價檢驗項目臨床應(yīng)用性能評價

受試者工作特征曲線（ROC曲線）又稱為感受性曲線，是以真陽性率（敏感度）為縱坐標(biāo)，假陽性率（1-特異度）為橫坐標(biāo)，并將相對的點連接起來所形成的曲線。

作用：ROC曲線能很容易地查出任意界限值時對疾病的識別能力；選擇最適的診斷閾值（界限值）；比較兩種或兩種以上不同診斷試驗對診斷同種疾病的可靠性，ROC曲線圍成的面積越大，診斷性能越好。五、ROC曲線第二節(jié)臨床實驗方法的評價和檢驗項目臨床應(yīng)用性能評價檢驗項目臨床應(yīng)用性能評價

又稱正確指數(shù)，為靈敏度加上特異度減去1?？梢杂糜趦煞N診斷方法的比較，理想的診斷指數(shù)為100%。

公式為：診斷指數(shù)=（靈敏度＋特異度－1）×100%

診斷指數(shù)表示診斷實驗發(fā)現(xiàn)真正某患病和非患某病的總能力，其值在0-1之間波動，其值愈大表明診斷試驗的真實性越好。六、診斷指數(shù)第三節(jié)檢測系統(tǒng)及量值溯源檢測系統(tǒng)性的定義

檢測系統(tǒng)是指完成一個檢驗項目的測定所涉及的儀器、試劑、校準(zhǔn)品、操作程序、設(shè)備維護程序等的組合。如果是手工操作，還應(yīng)包括具體的操作人員。第三節(jié)檢測系統(tǒng)及量值溯源檢測系統(tǒng)性能的驗證與確認(rèn)（一）檢測系統(tǒng)的性能驗證

如果實驗室采用的分析系統(tǒng)具有溯源性。實驗室需對該檢測系統(tǒng)進(jìn)行驗證，用驗證實驗的結(jié)果來驗證該系統(tǒng)能夠達(dá)到預(yù)期的水平和取得應(yīng)有的結(jié)果。驗證內(nèi)容至少應(yīng)包括正確度、精密度和可報告范圍。（二）檢測系統(tǒng)的性能確認(rèn)

實驗室如果要自建檢測系統(tǒng)或?qū)S商完整的檢測系統(tǒng)中的任何一個組分作出改變,都必須對該系統(tǒng)的性能進(jìn)行全面確認(rèn),用確認(rèn)實驗的結(jié)果來確認(rèn)該系統(tǒng)的預(yù)期用途和應(yīng)用要求。確認(rèn)內(nèi)容主要包括正確度、精密度、檢出限、可報告范圍、生物參考區(qū)間等。第三節(jié)檢測系統(tǒng)及量值溯源量值溯源的定義

通過一條具有規(guī)定不確定度的不間斷的傳遞鏈(或?qū)嶒炇议g的比對等),使測定結(jié)果或標(biāo)準(zhǔn)值能夠與規(guī)定的參考標(biāo)準(zhǔn)(通常是國家或國際標(biāo)準(zhǔn))聯(lián)系起來的特性，使得測定結(jié)果的準(zhǔn)確性得到保證和驗證，稱為量值的溯源性。第三節(jié)檢測系統(tǒng)及量值溯源量值溯源的意義

測量結(jié)果和參考標(biāo)準(zhǔn)的聯(lián)系可以是直接的，也可以通過中間測量程序和校準(zhǔn)物間接進(jìn)行，即溯源鏈可長可短。通過校準(zhǔn),為檢測系統(tǒng)確定標(biāo)準(zhǔn)值，以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和一致性，也可通過實驗室間的比對,實現(xiàn)一定程度的可溯源性。ThankYou182職業(yè)教育醫(yī)學(xué)檢驗技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫生物化學(xué)檢驗技術(shù)第五章酶學(xué)分析技術(shù)BASICCLINICALLABORATORYMEDICINE184目錄酶學(xué)分析技術(shù)基本知識1酶活性測定方法2代謝物酶學(xué)分析技術(shù)酶活性測定的影響因素診斷酶學(xué)在臨床的應(yīng)用同工酶分析3333酶(enzyme)是由活細(xì)胞產(chǎn)生的對特異底物具有高效催化作用的蛋白質(zhì)，屬于生物催化劑，是臨床酶學(xué)分析技術(shù)的主體。酶的概念第一節(jié)酶學(xué)分析技術(shù)基本知識酶學(xué)分析的重要內(nèi)容之一是對酶進(jìn)行測定，包括酶絕對質(zhì)量測定和相對質(zhì)量（酶活性）測定兩種方式。酶絕對質(zhì)量測定是將酶作為一種蛋白質(zhì)，對其酶蛋白質(zhì)量進(jìn)行定量測定的方法酶活性測定（相對質(zhì)量）是將酶作為一種催化劑，對其催化反應(yīng)速率進(jìn)行定量，以間接代表酶含量的測定方法。臨床上廣泛采用酶活性測定用于間接表示酶的含量一、酶測定的基礎(chǔ)知識（一）酶活性的概念指在規(guī)定條件下，單位時間內(nèi)底物的減少量或產(chǎn)物的生成量即酶促反應(yīng)的速度。

V=Δ[P]/t或-Δ[S]/t第一節(jié)酶學(xué)分析技術(shù)基本知識底物濃度為〔S〕,產(chǎn)物濃度為〔P〕,時間為t，反應(yīng)速度為v注：在實際測定酶促反應(yīng)速度時，以測定單位時間內(nèi)產(chǎn)物的生成量為好。

第一節(jié)酶學(xué)分析技術(shù)基本知識（二）酶活性單位定義：指在一定條件下使酶促反應(yīng)達(dá)到某一速度時所需要的酶量。酶活性單位是一個人為規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)。慣用單位：酶活性測定方法的建立者所規(guī)定的單位。（極少用）國際單位：1IU指在規(guī)定條件（25℃，最適pH，最適底物濃度）下，每分鐘轉(zhuǎn)化1

mol底物的酶量。單位為IU/L。目前臨床測定時為接近人體環(huán)境，反應(yīng)溫度常選擇37℃，故將IU簡寫為U。催量（Katal單位）：1Katal指在規(guī)定條件下，每秒鐘轉(zhuǎn)化1mol底物的酶量，1U＝1μmol/min＝1×10-6/60s＝16.67nkatal第一節(jié)酶學(xué)分析技術(shù)基本知識(三)酶活性濃度及其計算

明確測定方法的酶單位定義，按照酶單位定義確定物質(zhì)量、體積和時間的單位。步驟：運用公式進(jìn)行計算。第一節(jié)