生乳及巴氏殺菌乳中嗜冷菌的測定快速培養(yǎng)法編制說明

《生乳及巴氏殺菌乳中嗜冷菌的測定快速培養(yǎng)法》一、工作簡況2022年10月，XXXX完成了《生乳及巴氏殺菌乳中嗜冷菌的測定快速培養(yǎng)法》標(biāo)準草案和項目建議書等書面材料，向全國畜牧業(yè)標(biāo)準化技術(shù)委員會提出申報。2023年3月，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部以《農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)管司關(guān)于下達2023年農(nóng)業(yè)國家標(biāo)準和行業(yè)標(biāo)準制修訂項目計劃的通知》（農(nóng)質(zhì)標(biāo)函〔2023〕51號）批準項目立項，項目計劃編號：農(nóng)質(zhì)標(biāo)函〔2023〕51號NYB-23049，標(biāo)準起牛奶被稱為“白色血液”，含有乳鐵蛋白、維生素、氨基酸、脂肪酸、鈣等多種易被人體吸收的物質(zhì)，具有良好的營養(yǎng)價值，同時也成為適宜微生物生長的優(yōu)良培養(yǎng)基。為了控制微生物污染，熱加工處理和低溫儲存技術(shù)被廣泛應(yīng)用。但隨著低溫儲存和冷鏈技術(shù)在嗜冷微生物通常被定義為最適生長溫度在15℃左右，最高生長溫度低于20℃,最低生長溫度為0℃左右的微生物，廣泛分布于土壤、水、空氣中等。大量研究表明，生乳中最常見的嗜冷微生物是（Stenotrophomonas）、不動桿菌屬（Acinetobacter）和乳球菌屬（Lactococcus）等。在低溫環(huán)境下，嗜冷菌通過調(diào)節(jié)細胞膜的流動性、產(chǎn)生抗凍蛋白、冷休克蛋白、冷活性酶等4種途徑，保持自身在低溫下的活性，引起乳及乳制品在低溫下的腐敗現(xiàn)象。嗜冷芽孢桿菌（Bacillus）還有可能在生乳中形成孢子，在巴氏殺菌或超高溫等熱處理后存活，在萌發(fā)后形成營養(yǎng)細胞，且可能產(chǎn)生對人體有害的毒素。研究發(fā)現(xiàn)，乳中存在由嗜冷菌產(chǎn)生的低溫下具有活性的蛋白酶和脂肪酶，并且這種酶即使經(jīng)過熱處理后仍保持部分活性，在乳及乳制品貯藏過程中分解蛋白質(zhì)和脂肪，導(dǎo)致產(chǎn)生沉淀、異味、平板培養(yǎng)法是確定微生物計數(shù)的“金標(biāo)準”方法。國際標(biāo)準化組織（InternationalOrganizationforStandardization，ISO）頒布修訂標(biāo)準ISO17410《食品鏈微生物學(xué)嗜冷微生物計數(shù)的平行方法》，其2019版將之前使用的6.5℃需氧培養(yǎng)10d（平板傾注）修改為快速方法，用于預(yù)估生乳和巴氏殺菌乳中嗜冷微生物數(shù)量。與我國農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準NY/T1331—2007《乳與乳制品中嗜冷菌、需氧芽孢相比，快速方法僅需要25h，極大的縮短了培養(yǎng)時間。為對ISO17410:2019進行引用，本標(biāo)準對ISO17410:2019中提出的嗜冷微生物培養(yǎng)方法進行了驗證，為降低由嗜冷微生物造成的乳及乳制品腐（三）起草過程在接到標(biāo)準制定任務(wù)后，2023年3月成立了標(biāo)準起草組，包括表1標(biāo)準起草組成員及分工序號姓名單位分工1XXXXXXX整體方案設(shè)計，組織協(xié)調(diào)2XXXXXXX標(biāo)準征求意見、方法驗證3XXXXXXX方法優(yōu)化、材料完善4XXXXXXX方法優(yōu)化、標(biāo)準文本撰寫5XXXXXXX方法驗證、材料完善6XXXXXXX方法驗證、材料完善7XXXXXXX材料檢查修改8XXXXXXX材料檢查修改9XXXXXXX材料檢查修改ISO17410:2019Microbiologyofthefoodchain—HorizontalmethodfortheenumerationofpsychrotrophicmicroorganismsNY/T1331—2007乳與乳制品中嗜冷菌、需氧芽孢及嗜熱需氧SN/T2552.4—2010乳及乳制品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗方法第4部PsychrotrophicBacteriainRawandPasteurizedMilk.JMilkFood王克新,房玉國,張麗宏.液體乳中嗜冷菌數(shù)的測定.中國乳品工吉玲.生鮮乳中嗜冷菌檢驗的兩種培養(yǎng)條件比較.中國乳品工業(yè),2020,48:55-57.由于本文件涉及的內(nèi)容在國際組織已經(jīng)具有成熟的研究基礎(chǔ)，考慮到我國奶業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀以及與國際組織有效接軌，標(biāo)準起草組首先查閱了以上相關(guān)參考文獻，認為ISO17410:2019Microbiologyofthefoodchain—Horizontalmethodfortheenumerationofpsychrotrophicmicroorganisms中附錄B內(nèi)容對起草本標(biāo)準具有引用價值。thefoodchain—Horizontalmethodfortheenumerationofpsychrotrophicmicroorganisms2023年7月—2024年5月，標(biāo)準起草組依據(jù)《食品安全國家標(biāo)2024年6月，委托新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準與檢測技術(shù)研究所、唐山市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗檢測中心、農(nóng)業(yè)農(nóng)村部乳品質(zhì)量檢驗測試中心（北京）等三家檢測機構(gòu)對方法的檢測準確度進行復(fù)s）形成標(biāo)準征求意見稿在以上收集和分析相關(guān)參考文獻，調(diào)研、試驗驗證工作的基礎(chǔ)上，起草組按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準化工化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》和GB/T1.2—2020《標(biāo)準化工作導(dǎo)則第定起草編寫標(biāo)準文本內(nèi)容和編制說明內(nèi)容，并組織開展5次專家討2024年5月25日，XXXX召開討論會，會議邀請了中國綠色食品發(fā)展中心、河南省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳、中國農(nóng)業(yè)大學(xué)、北京市農(nóng)林科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所、山西農(nóng)業(yè)大學(xué)、河北省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體2024年8月17日，XXXX組織內(nèi)部討論會，XXX、XXX、2024年8月24日，XXXX組織召開線下會議，中國綠色食品發(fā)展中心、蘭州大學(xué)、中國農(nóng)業(yè)大學(xué)、北京農(nóng)學(xué)院動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院、農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全中心、中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院、中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所等單位相關(guān)專家對文本和編制說明進行2024年7月，在全國范圍內(nèi)遴選了20個科研院校、技術(shù)推廣檢測技術(shù)等領(lǐng)域單位及專家、有針對性地進行標(biāo)準定向征求意見。征表2征求意見單位名單序號單位名稱備注1/2/3/4/5/6/7/8/9////////////表3不同領(lǐng)域單位類型情況序號單位類型單位數(shù)量1教學(xué)機構(gòu)32科研機構(gòu)43技術(shù)推廣機構(gòu)4生產(chǎn)企業(yè)3收到20家單位及專家回函，回函20家，共有64條意見。經(jīng)過研究和甄別，采納37條意見，不采納20條意見，部分采納7條意見，并經(jīng)過對征求意見稿進行修改完善，形成標(biāo)準2024年11月21日，標(biāo)準起草組組織召開了標(biāo)準預(yù)鄭小平、鄭百芹、李俊玲、許文濤、單吉浩、牟玉蓮、許曉敏7位專家，對標(biāo)準預(yù)審稿進行了認真審查。在聽取標(biāo)準起草組匯報的基一是建議將標(biāo)準名稱修改為“生乳及巴氏殺菌乳中嗜冷菌的測定快速培養(yǎng)法”；二是刪除術(shù)語和定義；三是編制說明中補充6.5℃和范標(biāo)準文本。專家組一致同意審查通過，建議標(biāo)準起草組按照上述意見進一步修改后形成《生乳及巴氏殺菌乳中嗜冷菌的測定快速培養(yǎng)法》（公開征求意見稿），報全國畜牧業(yè)標(biāo)準化技術(shù)委員會秘書二、標(biāo)準編制原則、主要內(nèi)容及其確定依據(jù)（一）標(biāo)準編制原則益。因此，在制定過程中嚴格貫徹國家有關(guān)方針、政策、法規(guī)和規(guī)（2）先進性：對本文件中有關(guān)內(nèi)容的確定，力求反映本研究領(lǐng)域的國內(nèi)外先進技術(shù)和經(jīng)驗，使標(biāo)準中所規(guī)定的技術(shù)內(nèi)容有利于乳（3）規(guī)范性：在本文件征求意見稿的編制過程中力求做到技術(shù)內(nèi)容的敘述正確無誤，文字表達準確和簡明易懂，標(biāo)準的構(gòu)成嚴謹（4）可操作性：可操作性是制定標(biāo)準的必備因素，因此，在制定標(biāo)準的過程中，始終把經(jīng)濟實用和可操作性作為重要的依據(jù)，以2023年6月至2024年8月，標(biāo)準起草組采集了我國北京、浙江、寧夏、福建、新疆等地乳品加工廠的奶罐車采集生牛乳共85份，陜西乳品加工廠的奶罐車采集生山羊乳樣品14個，甘肅采集生綿羊乳樣品30個，新疆采集生驢乳和生駱駝乳各11個，西藏采集生牦牛乳8個，冷藏條件下帶回實驗室，于12h內(nèi)完成試驗。巴氏殺菌乳共16份，10份購自北京的超市，6份為本實驗室儲藏樣品，于12h內(nèi)完成試驗。用于制備人工污染樣品的UHT乳購自北京的超市，在保質(zhì)期乳平板計數(shù)瓊脂（milkplatecountagar，MPC北京陸橋；相對正確度是參考方法的結(jié)果與待確認方法的結(jié)果之間的比較對所采集的生牛乳樣品用兩種條件進行培養(yǎng)后分別計數(shù)，計算嗜冷微生物濃度，以對數(shù)值表示，其中兩種方法的差值用d表示。結(jié)果顯示，21℃培養(yǎng)與6.5℃培養(yǎng)結(jié)果不完全一致，但Bland-Altman方法分析表明21℃培養(yǎng)結(jié)果可用于預(yù)估生乳和巴氏殺菌乳中嗜冷菌數(shù)表4生乳樣品嗜冷微生物計數(shù)樣品6.5℃21℃d樣品6.5℃21℃d樣品6.5℃21℃d13.463.180.28303.643.150.50594.843.7723.153.04310.00605.083.9134.043.260.78324.082.85614.813.830.9943.913.320.59336.930.82625.003.6554.083.300.78345.043.81633.9363.933.180.75353.902.21645.043.8374.003.430.57365.153.68654.863.7384.043.940.10374.773.76665.083.7393.963.460.50385.183.97675.003.774.083.04395.043.76684.084.040.043.923.360.56405.043.85693.263.34-0.093.322.970.35415.403.62703.853.340.504.283.450.83425.203.67713.803.450.354.153.590.56435.233.66724.784.300.484.364.230.13445.043.81733.482.660.814.523.32455.183.91745.584.483.823.91-0.09465.843.712.13753.342.360.983.703.450.25475.263.60763.280.843.633.150.48485.083.74774.003.780.22203.283.180.10495.203.82785.084.300.78213.653.430.22505.153.74794.303.30223.873.080.79513.764.003.600.40233.343.150.19525.283.525.004.180.82244.003.150.85534.893.824.814.200.60253.673.230.44545.003.672.892.850.05263.182.600.58555.083.843.283.34-0.06274.304.230.07565.043.934.593.49283.703.080.62575.153.70平均值4.443.580.85293.410.30585.043.85////結(jié)果顯示，6.5℃計數(shù)法結(jié)果的平均值為4.44log10，最大值為6.93log10，為樣品33；最小值為2.89log10，為樣品83；結(jié)果中位數(shù)為4.36log10，為樣品15。21℃計數(shù)法結(jié)果的平均值為3.58log10，最大值為6.11log10，為樣品33；最小值為2.36log10，為樣品75；結(jié)果最大值為2.21log10，為樣品35；最小值為-0.09log10，為樣品17和樣通過SAS9.4對數(shù)據(jù)進行分析，差值d的分布服從正態(tài)分布，P=即差值d分布服從正態(tài)分布可以使用Bland-Altman方法分析兩種方法的一致性。Bland-Altman分析結(jié)果顯示（圖1兩種方法的偏僅2個（2/85，2.35%）數(shù)據(jù)位于95%置信區(qū)間范圍外，絕大多數(shù)差值都位于偏倚的95%置信區(qū)間內(nèi)，因此可以認為兩種培養(yǎng)方法的結(jié)果具有較好的一致性，兩種方法在實際生產(chǎn)中檢測生乳中嗜冷微生圖1生乳樣品6.5℃計數(shù)法和21℃計數(shù)法的Bland-Altman分析注：low表示6.5℃計數(shù)法，hig對所采集的生山羊乳樣品用兩種條件進行培養(yǎng)后分別計數(shù)，計表5生山羊乳樣品嗜冷微生物計數(shù)樣品6.5℃21℃d17.786.810.9727.307.150.1537.705.572.1347.006.480.5257.006.430.5767.706.870.8376.266.000.2687.707.040.6696.906.890.017.006.590.417.306.920.387.006.720.287.487.040.447.186.280.90平均值7.236.630.61結(jié)果顯示，6.5℃計數(shù)法結(jié)果的平均值為7.23log10，最大值為7.78log10，為樣品1；最小值為6.26log10，為樣品7；結(jié)果中位數(shù)為最大值為7.15log10，為樣品2；最小值為5.57log10，為樣品3；結(jié)果中位數(shù)為6.77log10，為樣品1和樣品12。兩種方法差值d的平均值為0.61log10，最大值為2.13log10，為樣品3；最小值為0.01log10，為樣通過SAS9.4對數(shù)據(jù)進行分析，差值d的分布不服從正態(tài)分布，P即差值d分布服從正態(tài)分布可以使用Bland-Altman比值法分析兩種方法的一致性。Bland-Altman分析結(jié)果顯示（圖2兩種方法的偏倚為1.09log10，其95%置信區(qū)間上限為1.27，下限為0.94，僅1個 （1/14，7.14%）數(shù)據(jù)位于95%置信區(qū)間于偏倚的95%置信區(qū)間內(nèi)，因此可以認為兩種培養(yǎng)方法的結(jié)果具有較好的一致性，兩種方法在實際生產(chǎn)中檢測生山羊乳中嗜冷微生物數(shù)量時可以互相替代使用。圖2生山羊乳樣品6.5℃計數(shù)法和21℃計數(shù)法的Bland-Altman分析對所采集的生綿羊乳樣品用兩種條件進行培養(yǎng)后分別計數(shù)，計表6生綿羊乳樣品嗜冷微生物計數(shù)樣品6.5℃21℃d16.346.2327.30-0.1936.916.670.2447.637.590.0455.996.04-0.0566.626.600.0275.895.540.3486.085.870.2196.155.950.207.327.080.246.946.320.624.704.566.986.430.555.785.320.467.047.040.007.287.200.075.365.79-0.427.157.23-0.086.966.830.13206.826.88-0.06216.906.860.05225.986.08-0.10236.456.79-0.35246.656.570.09255.865.95-0.09265.605.96-0.36276.676.200.47286.796.640.15296.936.590.34305.465.78-0.32平均值6.486.400.08結(jié)果顯示，6.5℃計數(shù)法結(jié)果的平均值為6.48log10，最大值為7.63log10，為樣品4；最小值為4.70log10，為樣品12；結(jié)果中位數(shù)為6.66log10，為樣品24和樣品27。21℃計數(shù)法結(jié)果的平均值為6.40結(jié)果中位數(shù)為6.50log10，為樣品13和樣品24。兩種方法差值d的平均通過SAS9.4對數(shù)據(jù)進行分析，差值d的分布服從正態(tài)分布，P=即差值d分布服從正態(tài)分布可以使用Bland-Altman方法分析兩種方法的一致性。Bland-Altman分析結(jié)果顯示（圖3兩種方法的偏僅1個（1/30，3.33%）數(shù)據(jù)位于95%置信區(qū)間范圍外，絕大多數(shù)差值都位于偏倚的95%置信區(qū)間內(nèi)，因此可以認為兩種培養(yǎng)方法的結(jié)果具有較好的一致性，兩種方法在實際生產(chǎn)中檢測生綿羊乳中嗜冷圖3生綿羊乳樣品6.5℃計數(shù)法和21℃計數(shù)法的Bland-Altman分析對所采集的生驢乳樣品用兩種條件進行培養(yǎng)后分別計數(shù)，計算嗜冷微生物濃度，以對數(shù)值表示，其中兩種方法的差值用d表示。結(jié)表7生驢乳樣品嗜冷微生物計數(shù)樣品6.5℃21℃d17.287.280.0027.157.18-0.0336.386.280.1046.906.570.3356.656.620.0366.976.8676.936.8387.267.080.1894.564.040.514.304.34-0.047.677.570.10平均值6.556.420.13結(jié)果顯示，6.5℃計數(shù)法結(jié)果的平均值為6.55log10，最大值為7.67log10，為樣品11；最小值為4.30log10，為樣品10；結(jié)果中位數(shù)為6.93log10，為樣品7。21℃計數(shù)法結(jié)果的平均值為6.42log10，最大值為7.57log10，為樣品11；最小值為4.04log10，為樣品9；結(jié)果中位數(shù)為6.83log10，為樣品7。兩種方法差值d的平均值為0.13log10，最通過SAS9.4對數(shù)據(jù)進行分析，差值d的分布服從正態(tài)分布，P=即差值d分布服從正態(tài)分布可以使用Bland-Altman方法分析兩種方法的一致性。Bland-Altman分析結(jié)果顯示（圖4兩種方法的偏都位于偏倚的95%置信區(qū)間內(nèi)，因此可以認為兩種培養(yǎng)方法的結(jié)果具有較好的一致性，兩種方法在實際生產(chǎn)中檢測生驢乳中嗜冷微生圖4生驢乳樣品6.5℃計數(shù)法和21℃計數(shù)法的Bland-Altman分析對所采集的生駱駝乳樣品用兩種條件進行培養(yǎng)后分別計數(shù)，計表8生駱駝乳樣品嗜冷微生物計數(shù)樣品6.5℃21℃d16.715.990.7224.414.76-0.3436.155.860.2845.760.3655.625.560.0766.045.830.2177.087.15-0.0784.584.490.0996.300.816.810.695.465.260.21平均值6.015.730.28結(jié)果顯示，6.5℃計數(shù)法結(jié)果的平均值為6.01log10，最大值為7.11log10，為樣品4；最小值為4.41log10，為樣品2；結(jié)果中位數(shù)為6.11log10，為樣品4。21℃計數(shù)法結(jié)果的平均值為5.73log10，最大值為7.15log10，為樣品7；最小值為4.49log10，為樣品8；結(jié)果中位數(shù)為5.83log10，為樣品6。兩種方法差值d的平均值為0.28log10，最大值為0.81log10，為樣品9；最小值為-0.34log10，為樣品2；中位數(shù)為通過SAS9.4對數(shù)據(jù)進行分析，差值d的分布服從正態(tài)分布，P=即差值d分布服從正態(tài)分布可以使用Bland-Altman方法分析兩種方法的一致性。Bland-Altman分析結(jié)果顯示（圖5兩種方法的偏所有數(shù)據(jù)差值都位于偏倚的95%置信區(qū)間內(nèi)，因此可以認為兩種培養(yǎng)方法的結(jié)果具有較好的一致性，兩種方法在實際生產(chǎn)中檢測生駱圖5生駱駝乳樣品6.5℃計數(shù)法和21℃計數(shù)法的Bland-Altman分析對所采集的生牦牛乳樣品用兩種條件進行培養(yǎng)后分別計數(shù)，計表9生牦牛乳樣品嗜冷微生物計數(shù)樣品6.5℃21℃d17.747.730.0127.437.48-0.0537.667.410.2547.947.760.1857.157.150.0065.905.660.2378.048.18-0.1386.285.980.30平均值7.277.170.10結(jié)果顯示，6.5℃計數(shù)法結(jié)果的平均值為7.27log10，最大值為8.04log10，為樣品7；最小值為5.90log10，為樣品6；結(jié)果中位數(shù)為最大值為8.18log10，為樣品7；最小值為5.66log10，為樣品6；結(jié)果中位數(shù)為7.45log10，為樣品2和樣品3。兩種方法差值d的平均值為0.10log10，最大值為0.30log10，為樣品8；最通過SAS9.4對數(shù)據(jù)進行分析，差值d的分布服從正態(tài)分布，P=即差值d分布服從正態(tài)分布可以使用Bland-Altman方法分析兩種方法的一致性。Bland-Altman分析結(jié)果顯示（圖6兩種方法的偏所有數(shù)據(jù)差值都位于偏倚的95%置信區(qū)間內(nèi)，因此可以認為兩種培養(yǎng)方法的結(jié)果具有較好的一致性，兩種方法在實際生產(chǎn)中檢測生牦圖6生牦牛乳樣品6.5℃計數(shù)法和21℃計數(shù)法的Bland-Altman分析ISO17410:2019中指出，21℃計數(shù)法除適用于生乳外，對于巴氏殺菌乳產(chǎn)品也同樣適用，因此開展了巴氏殺菌乳的驗證，結(jié)果見表表10巴氏殺菌乳樣品嗜冷微生物計數(shù)樣品6.5℃21℃d12.6722.610.9632.6142.6052.4562.4872.280.9482.5392.402.542.040.502.602.200.792.682.340.912.230.652.49平均值2.48結(jié)果顯示，對于巴氏殺菌乳樣品，6.5℃計數(shù)法結(jié)果的平均值為2.48log10，最大值為2.68log10，為樣品13；最小值為2.20log10，為樣品12；結(jié)果中位數(shù)為2.51log10，為樣品8和樣品16。21℃計數(shù)法結(jié)果的平均值為1.43log10，最大值為2.04log10，為樣品10；最小值為1.04log10，為樣品6；結(jié)果中位數(shù)為1.42log10，為樣品12和樣品14。最小值為0.50log10，為樣品10；中位數(shù)為1.07log10，為樣品3和樣品通過SAS9.4對數(shù)據(jù)進行分析，差值d的分布服從正態(tài)分布，P=0.8225>0.05，可以使用Bland-Altman方法分析兩種方法的一致性。95%置信區(qū)間上限為1.56log10，下限為0.54log10，僅1個（1/16，6.25%）數(shù)據(jù)位于95%置信區(qū)間范圍外，絕大多數(shù)差值都位于偏倚的95%置信區(qū)間內(nèi)，因此可以認為兩種培養(yǎng)方法的結(jié)果具有較好的一致性，兩種方法在實際生產(chǎn)中檢測巴氏殺菌乳中嗜冷微生物數(shù)量時圖7巴氏殺菌乳樣品6.5℃計數(shù)法和21℃計數(shù)法的Bland-Altman分析準確度通過參考方法的結(jié)果與待確認方法的結(jié)果之間的比較研究，使用人工污染樣品進行。選擇6個測試樣品，其中2個樣品為低濃度污染水平，2個為中間濃度污染水平，2個為高濃度污染水平，每個樣品重復(fù)測試5次，結(jié)果見表11，計算β-期望容差區(qū)間(β-expectationtoleranceinterval，β-ETI表12并繪制準確度分布圖表11人工污染樣品嗜冷微生物計數(shù)樣品編號6.5℃計數(shù)法21℃計數(shù)法x1x2x3x4x5y1y2y3y4y51（低水平）4.184.084.184.083.853.853.913.953.812（低水平）4.204.154.264.154.183.683.953.933.893.753（中水平）5.785.855.895.835.935.465.515.415.455.494（中水平）5.615.435.535.545.485.845.905.815.885.795（高水平）8.738.648.748.568.638.368.268.288.308.416（高水平）8.798.748.638.648.548.408.368.348.238.28表12β-期望容差區(qū)間樣品編號XSrefALsYSvalBULAL1（低水平）0.050.203.850.06-0.26-0.16-0.360.50-0.502（低水平）4.180.050.183.89-0.29-0.19-0.390.50-0.503（中水平）5.850.060.235.460.04-0.39-0.29-0.490.50-0.504（中水平）5.530.070.285.840.050.310.410.210.50-0.505（高水平）8.640.080.318.300.07-0.34-0.24-0.440.50-0.506（高水平）8.640.100.388.340.07-0.30-0.20-0.400.50-0.50注：X表示6.5℃計數(shù)法結(jié)果的中位值，Sref表示6.5℃計數(shù)法結(jié)果的合成標(biāo)準差，ALs表示6.5℃計數(shù)法新的接受限（ALs=±4×SrefY表示21℃計數(shù)法結(jié)果的中位值，Sval表示21℃計數(shù)法結(jié)果的合成標(biāo)準差，B圖8準確度分布圖由圖3可知，對于所有樣本，其β-ETI的上限值≤AL，上限值≥-AL，可認為21℃計數(shù)法與6.5℃計數(shù)法三、試驗驗證的分析、綜述報告，技術(shù)經(jīng)濟論證，預(yù)期的經(jīng)濟效益、社會效益和生態(tài)效益。三家實驗室分別為新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準與檢測技術(shù)研究所加4株假單胞桿菌，制備出4log10、5log10、8log10高中低三個濃度水平，每個濃度水平檢測2個平行考察方法的準確度，結(jié)果見表13~表15。根據(jù)《食品安全國家標(biāo)準微生物檢驗方法驗證通則》（GB/T4789.45—2023）要求，計算三家實驗室結(jié)果的準確度（表16~表表13方法再現(xiàn)性考察驗證試驗結(jié)果（Lab1）樣品6.5℃計數(shù)法21℃計數(shù)法計算值Log10值計算值Log10值計算值Log10值計算值Log10值低水平1.2×1044.084.064.6×1033.664.9×1033.694.2×1055.623.3×1055.522.6×1055.412.9×1055.46高水平4.5×1088.654.4×1088.642.4×1088.382.1×1088.32表14方法再現(xiàn)性考察驗證試驗結(jié)果（Lab2）樣品6.5℃計數(shù)法21℃計數(shù)法計算值Log10值計算值Log10值計算值Log10值計算值Log10值低水平1.5×1044.181.3×1043.715.0×1033.706.2×1055.797.2×1055.862.7×1055.432.6×1055.41高水平3.8×1088.583.6×1088.562.3×1088.362.1×1088.32表15方法再現(xiàn)性考察驗證試驗結(jié)果（Lab3）樣品6.5℃計數(shù)法21℃計數(shù)法計算值Log10值計算值Log10值計算值Log10值計算值Log10值低水平1.5×1044.181.3×1045.4×1033.736.5×1033.813.8×1055.583.7×1055.572.6×1055.412.5×1055.40高水平3.5×1088.543.7×1088.573.0×1088.482.7×1088.43表16實驗室間驗證樣品6.5℃計數(shù)法準確度污染水平低中高X5.668.590.0320.0390.0120.0210.10.0330.0380.1070.035r0.090.03R0.30.1ALs0.130.35注：X表示6.5℃計數(shù)法結(jié)果的平均值，Sr表示表17實驗室間驗證樣品21℃計數(shù)法準確度污染水平低中高Y3.715.428.380.0270.0170.0280.02900.0410.040.0170.049r0.080.050.08R0.05STI0.0420.0180.053df6.388.895.5B-0.41-0.24-0.21U-0.35-0.22-0.13L-0.47-0.27-0.290.50.50.5AL-0.5-0.5-0.5注：Y表示21℃計數(shù)法結(jié)果的平均值，ST圖9準確度分布圖AL，可認為21℃計數(shù)法與6.5℃計數(shù)法目前，乳中嗜冷微生物檢測主要根據(jù)NY/T1331—2007進行，需要在6.5℃需氧培養(yǎng)10天。該方法耗時較長，對牧場來說，得到的是10d之前的嗜冷微生物污染數(shù)據(jù)，無法實現(xiàn)根據(jù)污染情況實時調(diào)整牧場管理；而乳企在得到培養(yǎng)計數(shù)結(jié)果時，該批次生乳已加工為產(chǎn)品，甚至有可能已經(jīng)被售賣給消費者，嗜冷微生物產(chǎn)生的耐熱在本標(biāo)準中，采用ISO17410-2019附錄B提出的建立乳中嗜冷微生物快速檢測方法，對指導(dǎo)牧場開展嗜冷微生物污染防控和乳企明確嗜冷微生物污染，降低由此導(dǎo)致的乳及乳制品腐敗浪費具有重要意義。從本次調(diào)查的結(jié)果來看，嗜冷微生物污染在生乳中普遍存在，可能會對后續(xù)加工而成的乳品造成影響。通過本標(biāo)準的應(yīng)用，在乳品加工前探明嗜冷微生物污染程度，對保障四、與國際、國外同類標(biāo)準技術(shù)內(nèi)容的對比情況，或者與測試的國外樣品、樣機的有關(guān)數(shù)