免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用課件

標(biāo)記技術(shù)的應(yīng)用免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用一、目的和意義免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用二、標(biāo)記技術(shù)的種類酶學(xué)標(biāo)記熒光標(biāo)記同位素標(biāo)記基因標(biāo)記BrdU標(biāo)記熒光染料標(biāo)記免疫磁珠MTT比色法免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用酶學(xué)標(biāo)記的種類、原理與應(yīng)用

免疫組織化學(xué)實驗酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）酶聯(lián)免疫斑點實驗（ELISPOT）原位雜交酶學(xué)組織化學(xué)免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用免疫組化免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用組織片的免疫組化染色免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用細(xì)胞培養(yǎng)片組化免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用免疫組織化學(xué)分類細(xì)胞培養(yǎng)片:組織切片：石蠟切片冷凍切片注意事項：1、抗體

2、操作過程細(xì)胞組織切片注意事項免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用組織切片：石蠟切片冷凍切片免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用ELISA應(yīng)用及注意事項ELISA應(yīng)用1、檢測抗體2、檢測抗原注意事項1、保持反應(yīng)板地清潔2、不要在反應(yīng)板中稀釋待測樣品3、檢測樣品中不要有氣泡4、機器所取數(shù)據(jù)時應(yīng)多讀取幾次免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用原位雜交酶學(xué)組織化學(xué)免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用熒光標(biāo)記直接法間接法免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用肌肉組織直接熒光檢測AchR染色免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測實驗結(jié)果免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用間接熒光染色免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用

雙重/多重?zé)晒馊旧庖邩?biāo)記技術(shù)應(yīng)用免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用Western-Blot實驗免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用同位素標(biāo)記細(xì)胞增殖實驗同位素標(biāo)記寡核苷酸探針雜交免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用細(xì)胞增殖實驗

原理：

3H-TdR即（甲基-3H）胸腺嘧啶核苷酸（[3H-methyl]thymidine）是DNA合成的前體。其加入培養(yǎng)液中后被細(xì)胞攝取，作為DNA合成的原料。細(xì)胞合成的DNA越多，則所摻入的3H-TdR量也越多。檢測所摻入的3H-TdR，就可反映細(xì)胞增殖的程度。免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用同位素標(biāo)記寡核苷酸探針雜交

免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用細(xì)胞和組織的原位雜交免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用原位雜交和組化雙染和多染免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用基因標(biāo)記GFP（GreenFluorescentProtein綠色熒光蛋白）LacZ（β-galactosyltransferase

β-半乳糖苷酶）CAT(Chloramphenicolacetyltransferase氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶）免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用GFP的性質(zhì)1962年在水母中發(fā)現(xiàn)，1992由Prasher克隆有238個氨基酸組成，分子量為27KD

野生型GFP被紫外藍(lán)光激發(fā)后，能發(fā)出綠色熒光不需要底物或輔助因子，可對活體檢測、體積小、表達(dá)無種屬限制、熒光表達(dá)穩(wěn)定、有多種突變體、檢測方便、無放大作用免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用GFP基因

轉(zhuǎn)染方式磷酸鈣法DEAE-葡聚糖轉(zhuǎn)染法脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染電穿孔轉(zhuǎn)染法基因槍粒子轟擊法受體介導(dǎo)的基因?qū)敕庖邩?biāo)記技術(shù)應(yīng)用GFP標(biāo)記的神經(jīng)元免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用GFP應(yīng)用細(xì)胞發(fā)育分化研究標(biāo)記基因篩選陽性胚胎熒光動物模型細(xì)胞移植示蹤免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用LacZ（β-半乳糖苷酶）免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用原理LacZ（β-半乳糖苷酶）可將X-gal（5-溴-4-氫-3-吲哚-β-D-半乳糖苷）轉(zhuǎn)變?yōu)椴蝗苄缘纳钏{(lán)色沉淀免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用PITX2-LACZStainingofmouseembryoday11免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用溴脫氧尿嘧啶核苷(Bromodeoxyuridine,BrdU)免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用溴脫氧尿嘧啶核苷

(Bromodeoxyuridine,

BrdU)

BrdU是DNA前體胸腺嘧啶核苷類似物，通過競爭參入S期細(xì)胞單鏈DNA核苷酸序列替代胸腺嘧啶免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用溴脫氧尿嘧啶核苷(BrdU)特點簡單、快速、安全、檢測的敏感性好在免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)中，可產(chǎn)生一種對比度高的標(biāo)記，適合于大塊組織的快速檢查，尤適于定量研究即可適于活體標(biāo)記，亦可以用于細(xì)胞或組織細(xì)胞增殖、分化的標(biāo)記對活體動物無任何副作用免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用BrdU標(biāo)記的組化和熒光照片免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用熒光染料標(biāo)記核標(biāo)記膜標(biāo)記免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用核標(biāo)記

4，6-聯(lián)脒-2-苯基吲哚（4‘,6-diamidino-2-phenylindole,dihydrochloride，DAPI)

DAPI熒光染料

是由Dann等人于1971年合成的，共化學(xué)名稱為的中文名稱4，6-聯(lián)脒-2-苯基吲哚，分子量為350．它是二價陽離于的熒光染料，一種黃色晶體易溶于水，最大溶解度為2．5％．它具有專一性強、靈敏度高、穩(wěn)定性好等特點。DAPI不足：1、DAPI除與DNA雙鏈結(jié)合外，還可與細(xì)胞漿中的微管蛋白結(jié)合，故胞漿也著藍(lán)色。2、DAPI標(biāo)記細(xì)胞的很大不足就是當(dāng)標(biāo)記細(xì)胞死亡后，就可以釋放出DAPI，將周圍未標(biāo)記的細(xì)胞標(biāo)記，產(chǎn)生假陽性，這是我們用這類熒光染料標(biāo)記細(xì)胞時必須考慮的問題。

免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用DAPI標(biāo)記大鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞DAPI標(biāo)記神經(jīng)細(xì)胞免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用膜標(biāo)記

PKH26/PKH67

PKH熒光細(xì)胞標(biāo)記試劑細(xì)胞膜標(biāo)記技術(shù)，在細(xì)胞膜的脂質(zhì)雙分子層中穩(wěn)定結(jié)合紅色熒光染料－PKH26/綠色熒光染料－PKH67，產(chǎn)生穩(wěn)定、清晰、精確和可重復(fù)的熒光標(biāo)記細(xì)胞，可廣泛用于動物、植物細(xì)胞和其它含顆粒胞膜的標(biāo)記。

Advantage：

1．標(biāo)記的細(xì)胞種類廣，無明顯細(xì)胞毒性；

2．既滿足染料最大溶解性和染色效率，又保存細(xì)胞活力;

3．適用于體外細(xì)胞增殖試驗；

4．適合體內(nèi)、體外細(xì)胞遷移研究免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用ABC免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用5week6week7week免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用免疫磁珠技術(shù)免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用免疫標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用MTT（噻唑藍(lán)）比色法

原理：活細(xì)胞線粒體中的琥伯酸脫氫酶能使外源性的MTT還原為難溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶物甲臜并沉積在細(xì)胞中，死亡細(xì)胞無此功能。二甲基亞楓（DMSO)能溶解細(xì)胞中的甲臜。490nm吸收峰。

應(yīng)用：