DB37T 2843-2016 鴨坦布蘇病毒雙抗體夾心ELISA檢測方法

DB37DB37/T2843—2016鴨坦布蘇病毒雙抗體夾心ELISA檢測方法山東省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布IDB37/T2843—2016本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由山東省畜牧獸醫(yī)局提出。本標(biāo)準(zhǔn)由山東省畜牧業(yè)專業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：刁有祥、陳浩、唐熠、提金鳳、馮強、歐全賓。1DB37/T2843—20162.1試劑2.1.5磷酸鹽緩沖液(PBS),見2.1.6包被液，見A.2。2.1.7洗滌液，見A.3。2.1.10終止液，見A.5。2DB37/T2843—20163.1.2樣品的保存樣品應(yīng)放在含有抗生素的pH值7.0~7.4的等滲磷酸鹽緩沖液內(nèi)(無PBS可用25%～50%甘油鹽水)。慶大霉素(50μg/mL)和制霉菌素(1000IU/mL),加入抗生素后pH值應(yīng)調(diào)至7.0~7.4。在室溫放置1h~2h內(nèi)樣品應(yīng)盡快處理。不能盡快處理的可在4℃存放24h,也可于低溫條件下保存(-70℃貯存最好)。4操作步驟4.1試驗試劑預(yù)溫到20℃~25℃。4.2將捕獲單抗用包被液稀釋成2.5ng/μL,每孔100μL加入96孔聚苯乙烯板中，4℃孵育過夜。4.3用洗滌液100μL洗3次，每次置于水平振蕩器300r/min震蕩3min,甩干板上殘余液體。4.4每孔加入200μL封閉液，恒溫培養(yǎng)箱37℃孵育1h,用4.3方法洗板。4.6將待檢樣品加入其他各孔，每孔100μL,恒溫培養(yǎng)箱37℃孵育1h,用4.3方法洗板。4.7將酶標(biāo)單抗用樣品稀釋液按1:1000倍稀釋，每孔加100μL,37℃孵育1h,用4.2方法洗板。4.8每孔加100μL底物溶液，37℃避光孵育15min。4.10置酶標(biāo)儀于450nm測定各孔吸光度(OD)值，該操作需30min內(nèi)完成。值)/2;陽性對照OD均值等于(A3孔OD值+A4孔OD值)/2。5.2陽性對照平均值減去陰性對照平均值，其差須大于0.4;陰性對照平均值須小于等于0.20。試驗5.3.3樣品樣品液0.20<0D450nm<0.40,判斷為可疑，需要重做。3DB37/T2843—2016(規(guī)范性附錄)試劑配制A.1磷酸鹽緩沖液(PBS,0.01mol/LpH7.4)NaClKC1KH?PO?Na?HPO?·12H?O蒸餾水加至A.2包被液(0.05mol/LpH9.6)Na?CO?NaHCO?蒸餾水加至A.3洗滌液PBSTween-20A.4樣品稀釋液(封閉液)脫脂