天然藥物化學分離精制方法（天然藥物化學課件）

天然藥物化學天然藥物化學成分的提取分離和鑒定方法色譜法2六、色譜法廣泛應用的一種分離方法一般分離方法無效時待分離物性質(zhì)相似分不開時儀器化、自動化、高速化3概念色譜分離法、層析法Chromatography物理化學分析方法45基本原理不同成分在固定相和流動相（移動相）中吸附、分配、親和力存在差異而達到分離6分類依據(jù)----固定相不同氧化鋁色譜硅膠色譜聚酰胺色譜凝膠色譜7分類移動相氣相色譜液相色譜8分類色譜原理不同吸附色譜分配色譜離子交換色譜分子排阻色譜（凝膠色譜）9分類操作方式柱色譜紙色譜薄層色譜10(一)吸附色譜成分和固定相---吸附作用流動相和固定相---爭奪被成分吸附的固定相11吸附能力化學吸附---盡量避免硅膠與生物堿，氧化鋁與黃酮半化學吸附---可以用聚酰胺與生物堿物理吸附---應用最廣無選擇性，相似者易于吸附12常用的吸附劑硅膠微酸性多孔性物質(zhì)硅氧烷交聯(lián)結(jié)構(gòu)，硅醇基氫鍵13水的影響硅膠的活化、去活化100~110℃加熱30分鐘不可超過500℃14氧化鋁吸附能力很強的親水性吸附劑主要用于堿性、中性物質(zhì)的分離15聚酰胺商品名綿綸尼龍酚類、醌類物質(zhì)如黃酮、蒽醌、鞣質(zhì)16酰胺基和酚類的羥基、酸類的羧基以及醌類的醌基形成氫鍵產(chǎn)生吸附17活性炭非極性吸附劑吸附能力受溶劑影響，水、有機溶劑

分離水溶性物質(zhì)（氨基酸、糖、某些苷）18提示硅膠：吸附、分配、離子交換作用活性炭：吸附力不易控制聚酰胺：水裝柱，小極性的裝柱，三氯甲烷19(二)凝膠色譜凝膠滲透柱色譜法、分子篩濾過柱色譜法、排阻柱色譜法分子量大小不同而分離20基本原理凝膠顆粒內(nèi)部凝膠顆粒之間2122凝膠種類葡聚糖凝膠G-25型含義羥丙基葡聚糖凝膠(SephadexLH-20)23（三）離子交換色譜離子交換樹脂的功能基與溶液中的其他離子進行可逆交換分離混合物中離子成分和非離子成分24基本原理離子交換樹脂：含有解離型功能基團的高分子物質(zhì)，球狀或無定形粒狀陽離子交換樹脂、陰離子交換樹脂25陽離子交換樹脂RSO3-H+

+Na+Cl-<——>RSO3-Na++H+

Cl-陰離子交換樹脂RN+OH-+Na+Cl-<——>RN+Cl-+Na+OH-26離子交換樹脂的選擇綜合考慮被分離物質(zhì)帶正電，選擇陽離子交換樹脂被分離物質(zhì)帶負電，選擇陰離子交換樹脂27被分離物質(zhì)解離能力被分離物質(zhì)解離能力強，易交換，選擇弱酸型或弱堿型樹脂被分離物質(zhì)解離能力弱，不易交換，選擇強酸型或強堿型樹脂28被分離物質(zhì)分子量分子量大，選擇低交聯(lián)度的樹脂分子量小，選擇交聯(lián)度大的樹脂29交換容量盡量選擇大的粒度通常選200~400目提取離子性成分，100目制備去離子水，16~60目30（四）大孔吸附樹脂色譜白色球形顆粒20~60目非極性中極性極性31基本原理與離子交換樹脂類似而不含交換基團范德華引力、氫鍵等吸附作用大孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)篩選分離特點32（五）分配色譜基本原理一種溶劑被惰性固體（支持劑）吸附，另一種溶劑作為流動相，待分離物質(zhì)在固定相上待分離成分在兩溶劑間分配固定相33正相分配色譜：極性大（水、緩沖液）的溶劑為固定相，極性小（乙酸乙酯、氯仿、丁醇）的溶劑為流動相34反相分配色譜：極性小（氯仿、石油醚）的溶劑為固定相，極性大（水、甲醇）的溶劑為流動相35支持劑本身無吸附作用，不溶于兩種溶劑，不與被分離物質(zhì)發(fā)生反應，但能吸附一定量的固定相，流動相通過時不改變其組成。36分離規(guī)律正相分配色譜中：被分離組分極性越小，越容易隨流動相遷移反相分配色譜中：被分離組分極性越大，越容易隨流動相遷移37操作技術(shù)流動相的預飽和直接鍵合在硅膠上代替液體固定相RP-18>RP-8>RP-238（一）高效液相色譜法原理柱色譜的發(fā)展聯(lián)用七、分離新技術(shù)和新方法39高效、高速、自動操作技術(shù)40廣闊的用途分離鑒定定性識別定量分析制備高純度樣品41實例分析高效液相色譜法固定相ODS（十八烷基硅烷鍵合硅膠）反相色譜柱流動相甲醇-水42羥喜樹堿R1=R2=OH喜樹堿R1=OHR2=H10-甲氧基喜樹堿R1=OHR2=OCH3脫氧喜樹堿R1=R2=H43極性順序羥喜樹堿>10-甲氧基喜樹堿>喜樹堿>脫氧喜樹堿洗脫順序羥喜樹堿>10-甲氧基喜樹堿>喜樹堿>脫氧喜樹堿（二）液滴逆流色譜，DCCC逆流分配法的升級版流動相以液滴形式通過適用于強極性成分的分離不乳化、防止氧化4445（三）高速逆流色譜高速逆流色譜（High-SpeedCountercurrentChromatography,HSCCC）

是一種連續(xù)高效的

液-液分配色譜分離技術(shù)。4647螺旋分離柱48特點該技術(shù)不需要固體支撐體，主要依據(jù)物質(zhì)在兩相中分配系數(shù)的不同對物質(zhì)進行分離，相對其他常用色譜來說，具有無不可逆吸附和回收率高的特點，特別適合于天然活性成分的分離。（四）高效毛細管電泳色譜HPCE經(jīng)典電泳+現(xiàn)代微柱分析4950（五）親和色譜分子間高親和力與高專一性可逆結(jié)合能與目標化合物結(jié)合的配基用于蛋白質(zhì)的分離純化天然藥物化學天然藥物化學成分的分離精制方法溶劑法沉淀法透析法分餾法結(jié)晶法52溶劑法色譜沉淀法結(jié)晶法透析法分餾法分離（一）酸堿溶劑法酸堿性差異生物堿和非堿性難溶于水物質(zhì)含內(nèi)脂或內(nèi)酰胺的物質(zhì)一、溶劑法兩種不相混溶的兩相溶劑成分分配系數(shù)不同54(二)溶劑萃取法55醇提取液提取物濃縮水溶液（混懸液）適量水石油醚層水層石油醚萃取乙酸乙酯層水層乙酸乙酯萃取正丁醇層水層正丁醇萃取提取液中加入試劑，使產(chǎn)生沉淀或溶質(zhì)的溶解度降低，從而獲得有效成分去除雜質(zhì)的方法。56二、沉淀法水提醇沉——去蛋白、糖皂苷乙醇液加乙醚——逐級沉淀皂苷57（一）溶劑沉淀法某些成分與特定試劑產(chǎn)生沉淀，與其他物質(zhì)分離1.操作技術(shù)提取液沉淀(溶解度降低)濾過特定試劑分離58（二）專屬試劑沉淀法2.適用范圍與某些試劑能生產(chǎn)沉淀的提取物成分3.特點沉淀反應可逆或不可逆59生物堿+生物堿沉淀試劑水溶性季銨堿+雷氏銨鹽膽固醇+甾體皂苷鞣質(zhì)+蛋白質(zhì)、明膠604.舉例（三）鹽析法水提液加無機鹽黃藤中提取防己堿三顆針中提取小檗堿61透析膜可選擇性透過物質(zhì)分子量的差異使之分離62三、透析法631.操作技術(shù)提取液置于透析膜中，放入水中，不斷更換水保持濃度差?？杉与姌O使速度加快642.適用范圍大分子物質(zhì)皂苷、蛋白質(zhì)、多肽、多糖3.特點操作簡單、分離完全654.提示透析膜的膜孔選擇要依據(jù)待分離物質(zhì)動物性膜、火棉膠膜、玻璃紙膜、蛋白膠膜利用沸點不同進行分離1.操作技術(shù)分餾裝置66四、分餾法672.適用范圍沸點相差較小的液體混合物揮發(fā)油、液體生物堿683.特點操作簡單，加熱可能破壞某些成分4.提示保持適當?shù)臏囟?，嚴格控制熱源溫?9成分溶解度的差別KNO3NaCl70五、結(jié)晶與重結(jié)晶71A量大，溶解度隨溫度上升而增大B量少，易溶C量少，不易溶某固體混合成分A有效成分B雜質(zhì)C雜質(zhì)72操作技術(shù)（1）制備結(jié)晶溶液加熱狀態(tài)下制成近飽和溶液73操作技術(shù)（