DB S63-0011-2021食品安全地方標準 黑果枸杞中花青素含量的測定

DBS63青海省地方標準2021年3月22日發(fā)布青海省衛(wèi)生健康委員會發(fā)布-2-本文件遵循《中華人民共和國標準化法》、《中華人民共和國食品安全法》、《青海省食品安全地方標準管理辦法》等法律法規(guī)規(guī)定，按照GB/T1.1-2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由青海省食品檢驗檢測院提出。本文件由青海省衛(wèi)生健康委員會歸口。本文件起草單位：青海省食品檢驗檢測院、青海大學、中國科學院西北高原生物研究所。本文件主要起草人：王茜、王樹林、董琦、束彤、馬明芳、王平平、楊麗婧、譚亮、肖遠燦、本文件于2021年3月22日首次發(fā)布。-3-食品安全地方標準黑果枸杞中花青素含量的測定本文件規(guī)定了黑果枸杞花青素中矮牽牛素、錦葵素和飛燕草素的高效液相色譜測定方法。本文件適用于黑果枸杞花青素中矮牽牛素、錦葵素和飛燕草素的含量測定。本方法錦葵素、飛燕草素檢出限和定量限均為0.5mg/kg和1.5mg/kg，矮牽牛素檢出限和定量限分別為1.5mg/kg和4.0mg/kg。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4原理黑果枸杞花青素主要以花色苷的形式存在。試樣經(jīng)乙醇-水-鹽酸溶液超聲提取花色素苷后，經(jīng)沸水浴將花色素苷水解成花青素，用高效液相色譜法測定，以保留時間定性，外標法定量。5試劑與材料除非另有規(guī)定，在分析中僅使用分析純的試劑和GB/T6682中規(guī)定的一級水。5.1.1無水乙醇（C2H5OH）:色譜純。5.1.2甲酸（CH2O2）：色譜純。5.1.3甲醇（CH3OH）：色譜純。5.1.4乙腈（C2H3N）：色譜純。5.1.5鹽酸（HCl）：優(yōu)級純。5.2試劑配制5.2.1提取液：無水乙醇+水+鹽酸=5+2+3（V+V+V），量取250mL無水乙醇，100mL水和150mL鹽酸，混5.2.210%鹽酸甲醇溶液：按濃鹽酸+甲醇=1+9（V+V），分別量取10mL濃鹽酸和90mL甲醇，混勻。5.2.3流動相A1%甲酸水溶液：準確吸取甲酸1mL至1L容量瓶中，水定容至刻度，搖勻。5.2.4流動相B1%甲酸乙腈溶液：準確吸取甲酸1mL至1L容量瓶中，乙腈定容至刻度，搖勻。-4-5.3標準品5.3.1矮牽牛素（Petunidinchloride）：CAS號1429-30-7，純度≥96%。5.3.2錦葵素（Malvidin）：CAS號643-84-5，純度≥96%。5.3.3飛燕草素（Delphinidin）：CAS號528-53-0，純度≥96%?；蛸徺I經(jīng)國家認證并授予標準物質(zhì)證書的標準溶液。5.4標準溶液配制5.4.1單標儲備溶液分別準確稱取矮牽牛素、錦葵素和飛燕草素標準物質(zhì)各5.0mg，用10%鹽酸甲醇溶解并定容至5mL，充分搖勻，配制成1000mg/L的標準儲備液，于-18℃冷凍保存。在密閉棕色玻璃瓶中保存有效期為6個月。5.4.2混合標準使用液將單一標準儲備液進行等比例混合后，用10%鹽酸甲醇溶液作為溶劑，并逐級稀釋成矮牽牛素、錦葵素和飛燕草素濃度為0.5mg/L、1.0mg/L、5.0mg/L、10.0mg/L、25.0mg/L、50.0mg/L、100.0mg/L，該標準系列現(xiàn)用現(xiàn)配，于4℃條件下保存。5.5材料5.5.1濾膜：0.45μm微孔濾膜。5.5.2比色管：50mL帶刻度具塞比色管。6儀器與設備6.1高效液相色譜儀：帶紫外或二極管陣列檢測器。6.2天平：精度0.01mg，0.01g。6.3水浴鍋：精度±2℃。6.4勻漿機。6.5超聲清洗機。7分析步驟7.1試樣制備采用四分法分取樣品，取約200g樣品于勻漿機中勻漿。制得樣品在-18℃下保存。7.2提取稱取5g（精確至0.01g）制備好的試樣于50mL具塞比色管中，加入提取液（5.2.1）至刻度，混勻1min，超聲提取15min。7.3水解超聲提取后，于沸水浴中水解1h，取出冷卻后，用提取液（5.2.1）定容至刻度，搖勻，靜置。準確吸取上清液1.0mL至10mL容量瓶中，用提取液（5.2.1）定容至刻度，搖勻，靜置。取其上清液用0.45μm微孔濾膜過濾，上機檢測。制備好的樣品可在4℃條件下保存不超過48h。-5-7.4空白試驗隨同試樣一起進行雙份空白試驗，除不加試樣外，與試樣制備過程一致。7.5測定7.5.1儀器參考條件7.5.1.1色譜柱：C18柱，150mm×4.6mm×5μm或性能相當；7.5.1.2流動相A：1%甲酸水溶液，流動相B：1%甲酸乙腈溶液；7.5.1.3檢測波長：530nm；7.5.1.4柱溫：35℃;7.5.1.5進樣量：20μL；7.5.1.6梯度洗脫條件，見表1。表1梯度洗脫條件表時間(min)流速(mL/min)流動相A(%)流動相B(%)00.89282.00.85.00.80.8200.875250.870300.8554520.00.82022.00.892830.00.89287.5.2標準曲線的制作將混合標準系列工作溶液分別注入液相色譜儀中，測定相應的峰面積，以混合標準系列工作溶液的質(zhì)量濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。7.5.3試樣溶液的測定將試樣溶液注入液相色譜儀中，得到樣品溶液峰面積，以保留時間定性，根據(jù)標準曲線得到試樣中待測物的質(zhì)量濃度。色譜圖參見附錄A。8結(jié)果計算樣品中花青素含量為矮牽牛素、飛燕草素和錦葵素之和。其含量以質(zhì)量分數(shù)ω計，單位以克每百克（g/100g）計，按式（1）計算。1）-6-式中：ρ—待測液中花青素的質(zhì)量濃度之和，單位為毫克每升（mg/LV—定容體積，單位