紫外可見分光光度法

第九章紫外-可見分光光度法

1．能夠說出分光光度法的特點(diǎn)2．知道吸收光譜的繪制方法及意義3．能夠說出光的吸收定律、吸光系數(shù)的意義并學(xué)會有關(guān)的計(jì)算4．知道分光光度法中常用的定量分析方法并學(xué)會有關(guān)的計(jì)算5．能夠說出紫外-可見分光光度計(jì)的基本結(jié)構(gòu)學(xué)習(xí)目標(biāo)12345

第一節(jié)概述

根據(jù)待測物質(zhì)發(fā)射或吸收的電磁輻射以及待測物質(zhì)與電磁輻射的相互作用而建立起來的定性、定量和結(jié)構(gòu)分析方法，統(tǒng)稱為光學(xué)分析法。分光光度法即是其中的一種。在紫外光區(qū)(200～400nm)和可見光區(qū)(400～760nm)，根據(jù)待測物質(zhì)對不同波長電磁輻射的吸收程度不同而建立起來的分析方法，稱為紫外-可見分光光度法。12345

第一節(jié)概述紫外-可見分光光度法主要有如下特點(diǎn)：1.靈敏度高被測物最低濃度一般為10-5～10-6mol/L，適用于微量或者痕量組分分析。2.準(zhǔn)確度高相對誤差在1%～5%，對微量組分的分析已能滿足要求。3.儀器設(shè)備簡單、操作簡便、測定快速由于采用選擇性高的顯色劑和適當(dāng)?shù)谋壬珬l件，可以不經(jīng)分離干擾物質(zhì)，即可直接進(jìn)行測定，從而縮短分析時間。4.應(yīng)用范圍廣幾乎所有的無機(jī)離子和有機(jī)化合物均可直接或間接用紫外-可見分光光度法進(jìn)行測定。12345

第一節(jié)概述一、光的本質(zhì)與物質(zhì)的顏色物質(zhì)的顏色與光的組成和物質(zhì)本身的結(jié)構(gòu)有關(guān)。人的視覺所能感覺到的光稱為可見光，波長范圍在400～760nm。人的眼睛感覺不到的還有紅外光（波長＞760nm）、紫外光（波長<400nm）、X射線等。

幾種光的波長范圍

具有單一波長的光稱為單色光。由不同波長的光組成的光稱為復(fù)合光，它是是由各種不同顏色的光按一定強(qiáng)度比例混合而成。白光通過棱鏡，便可分解為紅、橙、黃、綠、青、藍(lán)、紫七種顏色的光，這種現(xiàn)象稱為光的色散。兩種適當(dāng)顏色的單色光按一定強(qiáng)度比例混合可成為白光，這兩種單色光稱為互補(bǔ)色光。

第一節(jié)概述光的互補(bǔ)色示意圖

物質(zhì)的顏色是由于物質(zhì)選擇性地吸收了可見光中某一波長的光而產(chǎn)生的。當(dāng)一束白光通過一溶液時，如果該溶液對各種顏色的光都不吸收，則溶液無色透明；如果完全吸收，則溶液顯黑色；如果某些波長的光被溶液吸收，另一些波長的光不被吸收而透過溶液，溶液的顏色就是它所吸收的光的顏色的互補(bǔ)色。

第一節(jié)概述二、光的吸收定律

（一）透光率（T）和吸光度（A）當(dāng)一束單色光照射到均勻而無散射的溶液時，假設(shè)I0為入射光的強(qiáng)度，Ia為溶液吸收光的強(qiáng)度，It為透過光強(qiáng)度，則：I0=Ia+It

透射光的強(qiáng)度It與入射光強(qiáng)度I0之比稱為透光率，用符號T表示：

第一節(jié)概述透光度率的負(fù)對數(shù)稱為為吸光度，用A表示。

第一節(jié)概述

（二）光的吸收定律實(shí)驗(yàn)證明，當(dāng)入射光的波長一定時，溶液對光的吸收程度與該溶液的濃度和溶液的厚度有關(guān)。其定量關(guān)系服從朗伯-比爾定律，即當(dāng)一束平行的單色光通過均勻、無散射的溶液時，在單色光波長、強(qiáng)度、溶液的溫度等條件不變的情況下，溶液的吸光度與溶液的濃度及液層厚度的乘積成正比。其數(shù)學(xué)表達(dá)式為：A＝

朗伯－比爾定律又稱為光的吸收定律，是分光光度法定量分析的依據(jù)。但它只適用于稀溶液和單色光。在濃溶液或復(fù)合光時，誤差較大。三、吸光系數(shù)朗伯－比爾定律中的K稱為吸光系數(shù)，是物質(zhì)的特征常數(shù)之一。其物理意義是吸光物質(zhì)在單位濃度、單位液層厚度時的吸光度。當(dāng)溶液的濃度選用不同的表示方法時，吸光系數(shù)的表示方法也不同。常用的表示方法有兩種：

第一節(jié)概述

（一）摩爾吸光系數(shù)是指在波長一定時，吸光物質(zhì)的溶液濃度為1mol/L，液層厚度為1cm時的吸光度。常用表示。單位為L/(mol·cm)

（二）百分吸光系數(shù)在藥物分析工作中，應(yīng)用較多的是百分吸光系數(shù)。是指在波長一定時，吸光物質(zhì)的溶液濃度為1g/100ml(1%)，液層厚度為1cm時的吸光度，單位為100ml/(g·cm)。常用表示。

第一節(jié)概述摩爾吸光系數(shù)（）和百分吸光系數(shù)（）之間的換算關(guān)系是：=

M為吸光物質(zhì)的摩爾質(zhì)量,其單位為g/mol。

第一節(jié)概述

例9-1

某化合物的摩爾質(zhì)量為125g/mol，摩爾吸光系數(shù)2.5

105L/(mol·cm)，配制該化合物溶液1L，將其稀釋200倍，于1.00cm吸收池中測得其吸光度0.6000，問需要該化合物的質(zhì)量是多少？解已知M=125g/mol=2.5

105L/(mol·cm)

L=1.00cmA=0.6000V=1L設(shè)需要該化合物的質(zhì)量為x根據(jù)公式

A=ε

cL

得0.6000=2.5×105××1.00X=0.0600g答需要該化合物質(zhì)量為0.0600g。第一節(jié)概述

例9-2

用氯霉素（摩爾質(zhì)量為323.15g/mol）純品配制100ml含2.00mg的溶液，在1.00cm厚的吸收池中，于278nm波長處測得其吸光度為0.614，試計(jì)算氯霉素在278nm波長處的百分吸光系數(shù)和摩爾吸光系數(shù)。根據(jù)公式

得==307[100ml/(g·cm)]A=0.614L=1.00cm根據(jù)公式

得==307×=9920L/(mol·cm)答氯霉素在278nm波長處的百分吸光系數(shù)和摩爾吸光系數(shù)分別為307[100ml/(g·cm)]和9920L/(mol·cm)。解已知M=323.15g/mol=2.00mg/100ml=2.00×10-3g/100mlA=0.614L=1.00cm

吸光系數(shù)在一定條件下是一個常數(shù)，它與入射光的波長、溶質(zhì)的本性以及溶液的溫度有關(guān)，也與儀器的質(zhì)量有關(guān)，它的數(shù)值越大，說明有色溶液對光越容易吸收，測定的靈敏度越高。一般ε值在103以上即可用于分光光度法的測定。

不同物質(zhì)對同一波長單色光可以有不同的吸光系數(shù)。同一物質(zhì)對不同波長單色光也會有不同吸光系數(shù)。一般用物質(zhì)最大吸收波長(λmax)處的吸光系數(shù)作為一定條件下衡量靈敏度的特征常數(shù)，因此，吸光系數(shù)是吸光光度法進(jìn)行定性和定量分析的重要依據(jù)。

第一節(jié)概述四、吸收光譜

吸收光譜又稱吸收光譜曲線或吸收曲線，它是在濃度一定的條件下，以波長（λ）為橫坐標(biāo)，以吸光度（A）為縱坐標(biāo)，所繪制的曲線。曲線上吸光度最大的地方稱為最大吸收峰，它所對應(yīng)的波長稱為最大吸收波長，用λmax表示。

第一節(jié)概述高錳酸鉀溶液的吸收光譜曲線從不同濃度KMnO4溶液的吸收光譜曲線可以看出：

1．KMnO4溶液的λmax為525nm，說明其對波長525nm附近的綠色光有最大吸收，故KMnO4溶液顯現(xiàn)綠色光的互補(bǔ)色即紫色。

2．不同濃度KMnO4溶液在相同的波長范圍內(nèi)所形成的吸收峰高度不同。濃度越大，吸收峰越高，即吸光度越大。即吸光度的大小與濃度有關(guān)。這是分光光度法定量分析的依據(jù)。

3．在相同條件下不同濃度的KMnO4溶液，其吸收光譜曲線的形狀非常相似，最大吸收波長相同，說明吸收光譜的形狀與溶液中溶質(zhì)的結(jié)構(gòu)有關(guān)。這是分光光度法定性分析的依據(jù)。

4．當(dāng)溶液的濃度、溫度、液層的厚度一定時，溶液對λmax的光吸收程度最大。因此，常用λmax的光作為測定溶液吸光度的入射光，以獲得較高的測定靈敏度。

第一節(jié)概述第二節(jié)分光光度法

分光光度法是通過測定溶液對單色光的吸收程度來進(jìn)行定性和定量的分析方法。分光光度法所用的儀器是分光光度計(jì)。一、分光光度計(jì)分光光度計(jì)根據(jù)所用的光源不同，可分為紫外分光光度計(jì)、可見分光光度計(jì)、紅外分光光度計(jì)。由于紫外分光光度計(jì)和可見分光光度計(jì)的構(gòu)造原理相同，常合并在一個儀器上，統(tǒng)稱為紫外-可見分光光度計(jì)。在200nm～760nm波長范圍內(nèi)，能夠任意選擇不同波長的單色光來測定溶液吸光度的儀器，稱為紫外-可見分光光度計(jì)。本節(jié)主要介紹紫外-可見分光光度計(jì)。（一）基本結(jié)構(gòu)

紫外-可見分光光度計(jì)主要由光源、單色器、吸收池、檢測器及信號顯示系統(tǒng)五個部件組成。第二節(jié)分光光度法1.光源是提供入射光的部件。

2.單色器是將光源發(fā)射的復(fù)合光色散分離出單色光的光學(xué)裝置。

3.吸收池是用于盛放分析液的器皿，也叫比色皿或比色杯。

4.檢測器是檢測單色光通過溶液被吸收后透過光的強(qiáng)度，并把光信號轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘柕难b置。

5.信號顯示系統(tǒng)是放大信號并以適當(dāng)?shù)姆绞斤@示或記錄信息。

（二）基本類型

1.可見分光光度計(jì)在實(shí)際工作中，常用722型可見分光光度計(jì)。國產(chǎn)722型可見分光光度計(jì)的外形如下圖。第二節(jié)分光光度法234675891011.試樣室蓋2.數(shù)字顯示屏3.確認(rèn)鍵4.0%T鍵5.100%T鍵6.功能鍵

7.波長讀數(shù)窗8.波長旋鈕9.試樣室

10.試樣架推拉桿

2.紫外-可見分光光度計(jì)紫外-可見分光光度計(jì)根據(jù)光學(xué)系統(tǒng)不同分為單波長分光光度計(jì)和雙波長分光光度計(jì)兩大類。單波長又分為單光束分光光度計(jì)和雙光束分光光度計(jì)。國產(chǎn)UV755B型分光光度計(jì)的外形如下圖。

第二節(jié)分光光度法123451.波長讀數(shù)窗2.試樣架推拉桿3.試樣室蓋4.數(shù)字顯示屏確認(rèn)鍵５.功能鍵

（三）722型可見分光光度計(jì)的使用方法

1.接通電源，依次打開儀器開關(guān)和試樣室蓋，將選擇開關(guān)置于“T”位，波長旋鈕調(diào)整至測定所需波長值、靈敏度旋鈕調(diào)至低位，預(yù)熱30min。

2.將空白溶液、標(biāo)準(zhǔn)溶液、待測溶液依次在儀器的樣品架上放好。

3.使空白溶液處于光路位置，調(diào)節(jié)“0”旋鈕，使讀數(shù)顯示為“0.00”，蓋上試樣室蓋，調(diào)節(jié)“100％”旋鈕，使讀數(shù)顯示為“100.0”。

4.反復(fù)調(diào)節(jié)“0”和“100％”旋鈕，即打開試樣室蓋用零點(diǎn)調(diào)節(jié)鈕調(diào)“0”，關(guān)閉試樣室蓋調(diào)“100％”，直至穩(wěn)定不變。第二節(jié)分光光度法5．蓋上箱蓋，依次拉出吸收池架推拉桿，將標(biāo)準(zhǔn)溶液、待測溶液置入光路，分別記錄透光率讀數(shù)。

6．若測定吸光度A，將選擇開關(guān)置于“A”位，調(diào)節(jié)“消光零”旋鈕，使顯示數(shù)字為“0.000”，然后將標(biāo)準(zhǔn)溶液、待測溶液移人光路，則顯示的數(shù)值為吸光度。

7．若測量濃度c，將選擇開關(guān)旋至“c”，將標(biāo)準(zhǔn)溶液置于光路，調(diào)節(jié)“濃度”旋鈕，使數(shù)字顯示為標(biāo)定值，將被測樣品移人光路，即可讀出被測樣品的濃度值。

8．測定完畢，關(guān)閉儀器開關(guān)，切斷電源，將各旋鈕恢復(fù)至原位，將比色皿清洗干凈，置于濾紙上晾干后裝入比色皿盒，罩好儀器。做好儀器使用記錄。第二節(jié)分光光度法二、定性、定量分析方法

(一)定性分析方法

1.比較吸收光譜的一致性在相同條件下，分別測定未知物和標(biāo)準(zhǔn)品的吸收光譜，比較二者的一致性。當(dāng)沒有標(biāo)準(zhǔn)物時，可以將未知藥物的吸收光譜與《中華人民共和國藥典》（2010年版，二部）中收錄的該藥物的標(biāo)準(zhǔn)圖譜進(jìn)行嚴(yán)格的對照比較。如果這兩個吸收光譜特征，如形狀、肩峰、吸收峰的數(shù)目、峰位和強(qiáng)度(吸光系數(shù))等完全一致，則可以初步認(rèn)為是同一化合物。但只有在用其他光譜方法進(jìn)一步證實(shí)后，才能得出較為肯定的結(jié)論。因?yàn)楣倌軋F(tuán)相同的物質(zhì)，可能會產(chǎn)生非常相似、甚至相同的光譜曲線，所以，吸收光譜曲線相同不一定是同一種化合物。但如果這兩個吸收光譜曲線的光譜特征有差異，則可以肯定不是同一種化合物。第二節(jié)分光光度法智能臺燈設(shè)計(jì)與開發(fā)2.4智能臺燈應(yīng)用設(shè)計(jì)WebApp框架設(shè)計(jì)智能臺燈功能設(shè)計(jì)智能臺燈應(yīng)用測試測試WebApp框架設(shè)計(jì)

WEBApp介紹在移動app的開發(fā)中，為了實(shí)現(xiàn)一些復(fù)雜并且豐富的界面功能，通常會在App中調(diào)用使用WEB技術(shù)（HTML5、CSS、js）編寫的靜態(tài)頁面。所有的或者大部分的App界面和功能都使用WEB技術(shù)來實(shí)現(xiàn)，最終在安卓App中調(diào)用這個WEB文件，形成一樣通過WEB技術(shù)實(shí)現(xiàn)應(yīng)用功能的安卓App,稱之為WebApp。WebApp框架設(shè)計(jì)

WEBApp優(yōu)勢WEB的界面使用HTML5開發(fā)，HTML5自適應(yīng)性非優(yōu)秀，WEBApp不必針對不同的屏幕大小和比例進(jìn)行適配，大大減少了開發(fā)周期和開發(fā)的工作量。HTML5可跨平臺使用，開發(fā)成本相對低廉。使用WEBApp，上線更快，版本迭代更新迅速WebApp框架設(shè)計(jì)

WEBApp技術(shù)實(shí)現(xiàn)1將WEB文件放在指定的位置在安卓源碼中，有一個叫做assets的文件，將編寫好的WEB文件放入其中即可。2引入webview控件在安卓工程的MainActivity.java文件中，引入webview控件，具體方法是import相關(guān)的包。3設(shè)置相關(guān)參數(shù)4最終加載放在assets文件夾內(nèi)的WEB文件mWebView.loadUrl("file:///android_asset/index.html")；WebApp框架設(shè)計(jì)

智能臺燈應(yīng)用界面邏輯在智能臺燈控制軟件的界面設(shè)計(jì)上，采用兩級菜單的形式：第一級菜單為大的類別菜單，有“功能”、“設(shè)置”、“其他”、“擴(kuò)展”四個大類。每個一級導(dǎo)航菜單都配有若干二級導(dǎo)航菜單，這些二級導(dǎo)航菜單是對第一級導(dǎo)航的細(xì)化，分布在界面左部。WebApp框架設(shè)計(jì)

智能臺燈應(yīng)用界面邏輯“功能”應(yīng)用界面”溫濕度”框架?！肮δ堋睉?yīng)用界面”燈光控制”框架。WebApp框架設(shè)計(jì)

智能臺燈應(yīng)用界面邏輯“功能”應(yīng)用界面”RGB設(shè)置”框架。WebApp框架設(shè)計(jì)

智能臺燈應(yīng)用界面邏輯“設(shè)置”應(yīng)用界面“時間日期”框架。“設(shè)置”應(yīng)用界面“鬧鐘設(shè)置”框架。智能臺燈功能設(shè)計(jì)

環(huán)境采集溫濕度、光照度采集主要對應(yīng)的ZXBee協(xié)議參數(shù)分別是A0、A1、A2這幾個參數(shù)是主動上報的，只需要在應(yīng)用界面中將收到的參數(shù)的值，以各種形式顯示出來即可。智能臺燈功能設(shè)計(jì)

燈光控制燈光控制為4個LED的亮滅控制?？刂芁ED通過參數(shù)D1的bit0、bit1、bit2、bit3四位來控制，bit0為0則熄滅LED1；為1則點(diǎn)亮LED1。燈光控制分為手動模式和自動模式。模式切換實(shí)現(xiàn)自動與手動模式。智能臺燈功能設(shè)計(jì)

燈光控制模式設(shè)置切換功能顯示。智能臺燈功能設(shè)計(jì)

燈光控制手動模式下實(shí)現(xiàn)燈光控制的關(guān)鍵代碼，首先獲取滑塊1（#nstSlider1）左邊數(shù)值。接著將獲取的數(shù)值，通過位的轉(zhuǎn)換控制智能臺燈四個LED燈的亮滅。智能臺燈功能設(shè)計(jì)

燈光控制自動模式下，通過閾值與光照閾值比較自動控制4個LED燈亮滅。首先獲取滑塊2（#nstSlider2）左右兩邊設(shè)置閾值。智能臺燈功能設(shè)計(jì)

燈光控制接著將獲取的光照度閾值值，打包發(fā)送給底層。智能臺燈功能設(shè)計(jì)

燈光控制界面4個LED燈亮滅，通過位計(jì)算控制。智能臺燈功能設(shè)計(jì)

RGB設(shè)置智能臺燈控制軟件上，有一個取色器，當(dāng)選取了相關(guān)的顏色，會將顏色轉(zhuǎn)化成V3、V4、V5三個參數(shù)，并將三個參數(shù)發(fā)送給智能水杯應(yīng)將以調(diào)整RGB燈的顏色。智能臺燈功能設(shè)計(jì)

RGB設(shè)置界面RGB燈顏色同步。智能臺燈功能設(shè)計(jì)

時間日期與鬧鐘設(shè)置時間對應(yīng)的ZXBee

協(xié)議的參數(shù)為V1，鬧鐘為V2；這是兩個可讀可寫的參數(shù)。可以通過查詢指令來獲取當(dāng)前的時間，也可以通過賦值指令來設(shè)置時間和鬧鐘。第二節(jié)分光光度法2.比較吸收光譜的特征數(shù)據(jù)最大吸收波長（λmax）和吸光系數(shù)是用于定性鑒別的主要光譜特征數(shù)據(jù)。在不同化合物的吸收光譜中，最大吸收波長（λmax）可以相同，但因相對分子質(zhì)量不同，百分吸光系數(shù)值會有差別。有些化合物的吸收峰較多，而各吸收峰對應(yīng)的吸光度或百分吸光系數(shù)的比值是一定的，因此，也可以通過比較吸光度或百分吸光系數(shù)的比值的一致性，進(jìn)行定性鑒別。第二節(jié)分光光度法

（二)定量分析方法朗伯—比爾定律是分光光度法定量分析的依據(jù)。被測溶液的吸光度與其濃度、液層的厚度之間符合A=KcL關(guān)系式。在符合光的吸收定律的條件下，選用λmax光作為入射光，對標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液在相同條件下測出它們的吸光度，即可計(jì)算出被測組分的含量。常用的方法主要有三種：第二節(jié)分光光度法1．標(biāo)準(zhǔn)曲線法（1）配制標(biāo)準(zhǔn)系列取若干個相同規(guī)格的容量瓶，按照由少到多的順序依次加入標(biāo)準(zhǔn)溶液，并分別加入等體積的試劑及顯色劑，再加溶劑稀釋至標(biāo)線，搖勻備用。（2）配制樣品溶液另取一個相同規(guī)格的容量瓶，精密吸取一定體積的原樣品溶液，按照與標(biāo)準(zhǔn)系列相同的操作程序和實(shí)驗(yàn)條件，配制一定濃度的樣品溶液。（3）測定標(biāo)準(zhǔn)系列和樣品溶液的吸光度選擇合適的參比(空白)溶液，在相同的條件下，以該溶液最大吸收波長(λmax)的光作為入射光，分別測定標(biāo)準(zhǔn)系列各溶液和樣品溶液所對應(yīng)的吸光度。第二節(jié)分光光度法

（4）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線根據(jù)測定結(jié)果，以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度(c)為橫坐標(biāo)，所對應(yīng)的吸光度(A)為縱坐標(biāo)，繪制吸光度-濃度曲線，稱為標(biāo)準(zhǔn)曲線，也稱為工作曲線或A-c曲線。（5）計(jì)算原樣品溶液的濃度根據(jù)測定的樣品溶液的吸光度，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上的縱坐標(biāo)上找到樣品的吸光度（A樣），再在標(biāo)準(zhǔn)曲線的橫坐標(biāo)上確定所對應(yīng)的樣品溶液的濃度(c樣)。用下式計(jì)算原樣品溶液的濃度(c原樣)。c原樣＝c樣×稀釋倍數(shù)使用標(biāo)準(zhǔn)曲線法一般要用4～7個標(biāo)準(zhǔn)溶液，其濃度范圍應(yīng)在溶液的吸光度與其濃度呈線性關(guān)系的區(qū)間內(nèi)，且溶液的吸光度最好控制在0.2～0.8范圍內(nèi)。第二節(jié)分光光度法

如果標(biāo)準(zhǔn)系列的濃度適當(dāng)，測定條件合適，那么理想的標(biāo)準(zhǔn)曲線就是一條通過坐標(biāo)原點(diǎn)的直線（見下圖）。在實(shí)際工作中，很多因素可能導(dǎo)致A偏離光的吸收定律，常出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線在高濃度端發(fā)生彎曲現(xiàn)象，給測定結(jié)果帶來誤差（見下圖）

。

標(biāo)準(zhǔn)曲線（A-c曲線）偏離光的吸收定律示意圖第二節(jié)分光光度法2．標(biāo)準(zhǔn)品對照法在相同的條件下，配制濃度為c標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)溶液和濃度為c樣的樣品溶液，在最大吸收波長λmax處，分別測定二者的吸光度值為A標(biāo)、A樣，依據(jù)朗伯-比爾定律，A標(biāo)=K標(biāo)c標(biāo)L標(biāo)

A樣=K樣c樣L樣。由于用的是同一種物質(zhì)、同一臺儀器、相同厚度的吸收池在同一波長處測定，因此

再根據(jù)稀釋倍數(shù)求出原樣品液的濃度：c原樣＝c樣×稀釋倍數(shù)為了減少誤差，標(biāo)準(zhǔn)品對照法配制的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度常與樣品溶液的濃度相接近。第二節(jié)分光光度法

例9-3

精密吸取KMnO4樣品溶液5.00ml，加蒸餾水稀釋至25.00ml。另配制KMnO4標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為25.0μg/ml。在λmax=525nm處，用1cm厚的吸收池，測定樣品溶液和標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度分別為0.220和0.250，求原樣品溶液中KMnO4的濃度。解已知A標(biāo)=0.250A樣=0.220c標(biāo)=25.0μg/ml根據(jù)公式

得根據(jù)公式c原樣＝c樣×稀釋倍數(shù)得c原樣＝c樣×稀釋倍數(shù)=

(μg/ml)答原樣品溶液中KMnO4的濃度為110μg/ml。第二節(jié)分光光度法3.吸光系數(shù)法吸光系數(shù)法又稱絕對法，是直接利用朗伯-比爾定律的數(shù)學(xué)表達(dá)式A＝KcL進(jìn)行計(jì)算的定量分析方法。在相關(guān)的手冊中查出待測物質(zhì)在最大吸收波長λmax處的吸光系數(shù)（、），并在相同條件下測量樣品溶液的吸光度A，則其濃度可根據(jù)以下公式計(jì)算：或第二節(jié)分光光度法

例9-4維生素B12的水溶液在=361nm處的百分吸光系數(shù)

=207[100ml/(g·cm)]。若用1cm的吸收池，測得維生素B12樣品溶液在361nm波長處的吸光度A=0.621，試求該溶液的質(zhì)量濃度。解已知=207[100ml/(g·cm)]L＝1.00cmA=0.621根據(jù)公式得

(g/100ml)答該溶液的質(zhì)量濃度為0.00300g/100ml。達(dá)標(biāo)測評

一、名詞解釋

1．工作曲線2．吸收光譜曲線

3．最大吸收波長4．光的吸收定律

5．摩爾吸光系數(shù)6．百分吸光系數(shù)達(dá)標(biāo)測評

二、單項(xiàng)選擇題

1.有色物質(zhì)的濃度、最大吸收波長、吸光度三者的關(guān)系是（）。

A.增加、增加、增加B.減小、不變、減小C.減小、增加、增加D.增加、不變、減小E.減小、不變、增加

2.某濃度的溶液在1cm吸收池中測得透光率為T，若濃度增大1倍，則透光率為（）。A．T2B．T/2C．2TD．

E．2

3.以下說法錯誤的是（）。

A.吸光度隨濃度增加而增加

B.吸光度隨液層厚度增加而增加

C.吸光度隨入射光的波長減小而增加

D.吸光度隨透光率的增大而減小

E.在λmax處溶液的吸光度最大

達(dá)標(biāo)測評

4.下列關(guān)于吸收光譜曲線的描述中，不正確的是（）。A.吸收光譜曲線表明了吸光度隨波長的變化情況B.吸收光譜曲線以波長為縱坐標(biāo)，以吸光度為橫坐標(biāo)C.吸收光譜曲線中，最大吸收峰處的波長為最大吸收波長D.吸收光譜曲線表明了吸光物質(zhì)的光吸收特性E.同一物質(zhì)不同濃度的溶液吸收光譜曲線的形狀相似，最大吸收波長相同

達(dá)標(biāo)測評達(dá)標(biāo)測評

5.用1cm吸收池測定某有色溶液的吸光度為A，若改用2cm吸收池，則吸光度為（）。

A.2A

B.A/2

C.A

D.4AE.3A6.吸收光譜曲線是（）。

A.吸光度（A）-時間（t）曲線B.吸光度（A）-波長（λ）曲線C.吸光度（A）-濃度（c）曲線