腎早期損傷定位標(biāo)志物研究課件

課題結(jié)題報(bào)告腎早期損傷定位標(biāo)志物研究結(jié)題報(bào)告腎早期損傷定位標(biāo)志物研究腎早期損傷定位標(biāo)志物研究

立項(xiàng)依據(jù)研究內(nèi)容研究結(jié)果項(xiàng)目完成情況預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果經(jīng)費(fèi)來源腎早期損傷定位標(biāo)志物研究一、立項(xiàng)依據(jù)

腎早期損傷定位標(biāo)志物研究研究背景妊娠期糖代謝異常：包括妊娠期糖耐量受損（GIGT）和妊娠期糖尿?。℅DM）。GIGT：一組已有糖代謝異常并可能向糖尿病發(fā)展的病理生理過程的中間階段。GDM：妊娠期首次發(fā)生或發(fā)現(xiàn)的不同程度的糖代謝異常。腎早期損傷定位標(biāo)志物研究

近年的研究表明,GDM與GIGT的總體發(fā)病率逐年升高,達(dá)7.61%。追蹤研究顯示30%-50%的GDM患者可在遠(yuǎn)期發(fā)生糖尿病，且有糖尿病家族史者，GDM患病機(jī)率增加，提示其有一定的免疫遺傳學(xué)背景。研究背景腎早期損傷定位標(biāo)志物研究

妊娠期糖代謝異常對妊娠的影響最常見的是導(dǎo)致巨大兒、胎兒窘迫和新生兒低血糖的發(fā)生；以及并發(fā)血管病變，增加妊娠期高血壓和手術(shù)產(chǎn)的發(fā)生率。國內(nèi)外的數(shù)據(jù)表明：未治療的GDM孕婦并發(fā)癥明顯增加，且圍生兒患病率主要與治療早晚有關(guān)，證明早期篩查、診斷、干預(yù)可以降低孕產(chǎn)婦的并發(fā)癥及圍生兒患病率。研究背景腎早期損傷定位標(biāo)志物研究

妊娠期糖代謝異常的發(fā)生與遺傳、環(huán)境及生活習(xí)慣密切相關(guān),近年來國內(nèi)外的研究表明,某些基因的多態(tài)性對妊娠期糖代謝異常的發(fā)生可能具有重要作用。如：葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因、葡萄糖激酶基因、磺脲類藥物受體基因、胰島素受體底物基因、人類主要組織相容性基因復(fù)合體以及鈣蛋白酶-10基因、尾加壓素Ⅱ基因、腫瘤壞死因子-α基因等均與妊娠期糖代謝異常發(fā)病有一定關(guān)聯(lián)。立項(xiàng)依據(jù)腎早期損傷定位標(biāo)志物研究

但是目前已有的研究成果還存在爭議,引起疾病的責(zé)任基因及其作用機(jī)理尚未明確。因此對致病基因的研究已日益成為臨床診療的迫切需要。探究及篩選與妊娠期糖代謝異常相關(guān)的基因多態(tài)性,將會對妊娠合并糖尿病、GDM及GIGT的預(yù)防、治療、改善預(yù)后及提高廣大妊娠婦女圍產(chǎn)期的生命質(zhì)量起到十分積極而重要的作用。同時(shí),對節(jié)約醫(yī)療資源、提高出生人口質(zhì)量也將有十分重要的意義。立項(xiàng)依據(jù)腎早期損傷定位標(biāo)志物研究二、研究內(nèi)容腎早期損傷定位標(biāo)志物研究對葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因、磺脲類藥物受體基因、人類主要組織相容性復(fù)合體基因、鈣蛋白酶-10基因、尾加壓素Ⅱ基因等五個(gè)可能的糖代謝異常相關(guān)基因及其相關(guān)位點(diǎn)的多態(tài)性進(jìn)行研究，以明晰它們與妊娠期糖代謝異常的發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。觀察可能與GIGT、GDM及T2DM的發(fā)生有關(guān)的危險(xiǎn)因素。研究內(nèi)容腎早期損傷定位標(biāo)志物研究關(guān)鍵技術(shù)或方法1采用酚-氯仿法提取基因組DNA23PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因片段PCR-RFLP方法檢測基因型4logistic回歸進(jìn)行數(shù)據(jù)分析腎早期損傷定位標(biāo)志物研究研究對象NGT組GIGT組GDM組T2DM組100例,貴陽醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院內(nèi)分泌科100例,貴陽市婦幼保

健院門診健康體檢者

各100例,貴陽市婦幼保

健院門診患者實(shí)驗(yàn)方法腎早期損傷定位標(biāo)志物研究1.GDM及GIGT的診斷方法（NDDG標(biāo)準(zhǔn)）◆

1、50g葡萄糖負(fù)荷試驗(yàn)篩查,＞7.8mmol/L為陽性者做糖耐量試驗(yàn)(OGTT)?！?/p>

2、OGTT試驗(yàn)：抽血前禁食8～12h,75g葡萄糖溶300ml水中3～5min服完,查空腹及服糖后1、2、3h血糖。兩次≥5.8、10.6、9.2、8.1mmol/L者診斷為GDM；兩次空腹血糖≥5.8或糖篩≥10.6mmol/L,空腹血≥5.8mmol/L即診斷為GDM?！?/p>

OGTT4項(xiàng)中任何一項(xiàng)異?；虻?小時(shí)≥6.7mmol/L診斷為GIGT。診斷標(biāo)準(zhǔn)腎早期損傷定位標(biāo)志物研究2.T2DM的診斷標(biāo)準(zhǔn)（1999年WHO標(biāo)準(zhǔn)）◆糖尿病癥狀+任意時(shí)間血漿葡萄糖水平≥11.1mmol/L或◆空腹血漿葡萄糖(FPG)水平≥7.0mmol/L或◆OGTT試驗(yàn)中，2h-PG水平≥11.1mmol/L

診斷標(biāo)準(zhǔn)腎早期損傷定位標(biāo)志物研究全血DNA的提取PCR-RFLP、PCR-AFLP凝膠電泳分離收集標(biāo)本PCR擴(kuò)增目的片段基因型的判定數(shù)據(jù)處理實(shí)驗(yàn)步驟腎早期損傷定位標(biāo)志物研究計(jì)數(shù)資料：基因頻率及基因型頻率：計(jì)量資料：危險(xiǎn)因素采用logistic回歸分析

百分?jǐn)?shù)描述

（X±S）描述，采用t檢驗(yàn)Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)；卡方檢驗(yàn)，P＜0.05統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)分析及處理：腎早期損傷定位標(biāo)志物研究三、研究結(jié)果腎早期損傷定位標(biāo)志物研究實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及圖表：腎早期損傷定位標(biāo)志物研究12型:404,372bp11型:372bp22型:404bpCAPN-1019位點(diǎn)多態(tài)性分析：腎早期損傷定位標(biāo)志物研究CAPN-1043位點(diǎn)多態(tài)性分析：GG型:144bpAA型:121,23bpGA型:144,121,23bp腎早期損傷定位標(biāo)志物研究CAPN-1063位點(diǎn)多態(tài)性分析：CT型:192,162,30bpTT型:192bpCC型:162,30bp腎早期損傷定位標(biāo)志物研究相關(guān)危險(xiǎn)因素分析：單因素logistic回歸分析結(jié)果腎早期損傷定位標(biāo)志物研究相關(guān)危險(xiǎn)因素分析：多因素logistic回歸分析結(jié)果

（GIGT組、GDM組與NGT組）腎早期損傷定位標(biāo)志物研究相關(guān)危險(xiǎn)因素分析：多因素logistic回歸分析結(jié)果

（T2DM組與NGT組）腎早期損傷定位標(biāo)志物研究項(xiàng)目完成情況：腎早期損傷定位標(biāo)志物研究主要考核指標(biāo)完成情況

：①對7個(gè)可能相關(guān)的基因及其相關(guān)位點(diǎn)的多態(tài)性與妊娠期糖代謝異常的關(guān)系進(jìn)行研究，明晰了它們與妊娠期糖代謝異常相關(guān)疾病的發(fā)生和發(fā)展之間的關(guān)系；②根據(jù)實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)及統(tǒng)計(jì)結(jié)果，我們可以得出以下結(jié)論：可能與妊娠期糖代謝異常發(fā)病相關(guān)目的基因及其位點(diǎn)7個(gè)，它們具體是：

技術(shù)指標(biāo)方面:腎早期損傷定位標(biāo)志物研究CAPN-10基因多態(tài)性可能與GDM、T2DM遺傳易感性有關(guān)；CAPN-10基因SNP43位點(diǎn)G等位基因可能與GDM的發(fā)生有關(guān)，而16和63位點(diǎn)則與GDM的發(fā)生無關(guān)。CAPN-10基因SNP43位點(diǎn)G等位基因可能與T2DM的發(fā)生有關(guān)，而16和63位點(diǎn)則與T2DM的發(fā)生無關(guān)。CAPN-10基因SNP43位點(diǎn)多態(tài)性、糖尿病家族史、BMI和年齡是GDM、T2DM發(fā)生的重要危險(xiǎn)因素。技術(shù)指標(biāo)方面：腎早期損傷定位標(biāo)志物研究尾加壓素Ⅱ基因rs228648位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性可能在決定受研究人群的妊娠期糖尿病遺傳易感性中起重要作用。G等位基因可能與GDM發(fā)生有關(guān),而rs228648位點(diǎn)的A型純合子可能是GDM的一個(gè)重要的保護(hù)因素。尾加壓素Ⅱ基因rs228648位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性可能在決定妊娠期糖尿病遺傳易感性中起重要作用。G等位基因可能與妊娠期糖代謝異常發(fā)生有關(guān)，rs228648的基因型頻率與糖尿病家族史有關(guān)聯(lián)。技術(shù)指標(biāo)方面：腎早期損傷定位標(biāo)志物研究GLUT1基因基因型頻率和等位基因頻率在GDM、GIGT和T2DM中分布差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示GLUT1基因可能與GDM、GIGT遺傳易感性無關(guān)。TNF-α基因的-308G/A、TNF-β基因的+252A/G單核苷酸多態(tài)性研究顯示：GDM患者存在TNF-α啟動子-308G-A等位基因的突變，可能是通過上調(diào)血漿TNF-α水平，增加胰島素抵抗，最終導(dǎo)致GDM發(fā)生。同時(shí)TNF-β基因多態(tài)性與GDM沒有顯著相關(guān)性。技術(shù)指標(biāo)方面：腎早期損傷定位標(biāo)志物研究脂聯(lián)素基因+45位點(diǎn)GG基因型與GDM的遺傳易感性顯著相關(guān)，與GIGT的遺傳易感性無關(guān)。TCF7L2基因rs7903146位點(diǎn)CT基因型與GDM遺傳易感性顯著相關(guān)，與GIGT的遺傳易感性無顯著相關(guān)性。同時(shí)，基因-基因的交互作用研究顯示：脂聯(lián)素基因+45位點(diǎn)、TNF-α基因-308位點(diǎn)基因型之間有交互作用。其他基因及位點(diǎn)間未顯示明顯的交互作用。技術(shù)指標(biāo)方面：腎早期損傷定位標(biāo)志物研究③撰寫研究論文6篇，2篇已發(fā)表于國家級核心期刊；其余均已出投到相關(guān)學(xué)術(shù)刊物待發(fā)表；④培養(yǎng)碩士研究生2名：周龍、闞林。2011年6月，二名研究生均以優(yōu)異成績從貴陽醫(yī)學(xué)院畢業(yè)，并且獲得碩士學(xué)位。技術(shù)指標(biāo)方面：腎早期損傷定位標(biāo)志物研究社會、環(huán)境效益方面

：社會效益：尋找妊娠期糖代謝異常致病過程中起關(guān)鍵作用的基因，具有至關(guān)重要的意義，是近年來婦產(chǎn)科、優(yōu)生及內(nèi)分泌領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。探索及篩選與妊娠期糖代謝異常相關(guān)的基因多態(tài)性,對妊娠合并糖尿病、GDM及GIGT的預(yù)防、治療、改善、預(yù)后及提高廣大妊娠婦女圍產(chǎn)期的生命質(zhì)量具有積極的作用。環(huán)境效益：本研究課題采用成本最低廉的酚-氯仿法從外周血有核細(xì)胞中提取基因組DNA