生理學實驗技術課件

專題I：溶液的配制2010年9月2010級碩士研究生課動物生理學實驗技術生理學實驗技術1、實驗臺準備生理學實驗技術2、器皿的準備生理學實驗技術3、藥品的準備生理學實驗技術4、濃度的確定及計算（1）摩爾濃度

1L溶液里含有多少摩爾溶質表示的溶液濃度稱為摩爾濃度，M，計算公式：例1：蔗糖的C12H22O11分子量=342，1升水中溶解了171g蔗糖，求蔗糖溶液的摩爾濃度？例2：請配制1mM(1mol/L)蔗糖溶液100mL

例3：請配制125mM的NaOH溶液1mL生理學實驗技術含結晶水的鹽溶液摩爾濃度的配制需配制0.1M的Na2CO3溶液1mL，現(xiàn)有藥品為Na2CO3?10H2O，如何配制？需稱多少克？答案：2.86×10-2g生理學實驗技術（2）當量濃度當量濃度(N，normality)：1升溶液所含溶質的克當量數。過去常用，現(xiàn)只用于部分酸溶液。當量濃度與摩爾濃度的換算：與化合價有關，一當量即得失一個電子

鹽酸放出一個H+，化合價為1，1NHCl=1MHCl

硫酸化合價2,放2質子，1MH2SO4=2NH2SO4常用濃鹽酸的濃度為36%，密度1.1789生理學實驗技術（3）百分比濃度1%NaCl：1g，100mL75%乙醇，V/V請用95%乙醇配制75%乙醇100mL做酒精棉球生理學實驗技術要配250mL1M的硫酸溶液，市售的濃硫酸為密度1.836g/cm3、濃度98%，問取多少mL這樣的濃硫酸?答案：13.6mL生理學實驗技術5、稱量固體：顆粒藥品粉末藥品膏狀藥品易潮解藥品腐蝕性藥品：強堿液體：揮發(fā)性液體強酸有機溶劑自我防護、防污染生理學實驗技術配制標準溶液配制步驟：例：配制1升0.01mol/L的KMnO4溶液配制標準溶液的步驟：1．計算所需溶質KMnO4的質量：n=0.01×1=0.01mol

質量m=0.01mol×158=1.58克2．稱量：稱取1.58g固體KMnO43．溶解：在燒杯中用50ml左右的蒸餾水溶解KMnO44．移液：溶液必須冷卻后才能轉移到容量瓶中。5．洗滌燒杯3次，一并移入容量瓶6．定容7．振蕩搖勻，裝入試劑瓶，貼上寫好的標簽（濃度、時間、人）容量瓶：用于配制標準溶液或稀釋溶液，有25、50、100、250、500、和1000ml等規(guī)格。需注意:1．溶質先在燒杯內全部溶解然后再移入容量瓶。2．不能加熱，不能代替試劑瓶用來存放溶液。生理學實驗技術干粉傾倒入三角瓶時的注意事項生理學實驗技術普通溶液的配制：量筒：多數生化試劑量杯：生理鹽溶液帶刻度的燒杯試管：濃度要求不高的洗滌溶液，浸泡載波片的2%鹽酸，洗液帶刻度的離心管鉻酸洗液：1：強洗液重鉻酸鉀150g，蒸餾水300ml，濃硫酸3000ml2：中等強度洗液濃硫酸50%，蒸餾水50%，重鉻酸鉀5%3：操作：將重鉻酸鉀加入蒸餾水中，使之自然溶解或水浴溶解，慢慢加入濃硫酸，邊加邊攪拌，如發(fā)熱過劇則冷卻后再繼續(xù)加。操作時要穿橡皮圍裙、長統(tǒng)膠靴、戴上眼鏡和厚膠皮手套，以保安全。生理學實驗技術蒸餾水：一蒸，二蒸，三蒸開水：自來水：去離子水：水的選擇生理學實驗技術PH的調節(jié)精密pH試紙：室溫，自然光照pH計，用標準溶液定期標定校準生理學實驗技術貯備溶液及其稀釋室溫4℃NaN3,柳硫汞1/1000-20℃50%甘油，5%生理學實驗技術特殊溶液的配制及其注意事項1、EDTANa2，只能溶解于pH8.0的水中2、DNA樣品：濃溶液形式溶解于pH8.0以上的堿性水溶液中3、RNA樣品：濃溶液形式溶解于pH5.2以下的酸性水溶液中4、蛋白溶液：濃溶液溶于中性緩沖液PBS中5、抗菌問題：0.05-0.1%疊氮鈉，0.01%柳硫汞生理學實驗技術1、蘇木精蘇木精是從南美的蘇木（熱帶豆科植物）干枝中用乙醚浸制出來的一種色素，是最常用的染料之一。蘇木精不能直接染色，必須暴露在通氣的地方，使他變成氧化蘇木精（又叫蘇木素）后才能使用，這叫做“成熟”。蘇木精的“成熟”過程需時較長，配置后時間愈久，染色力愈強。被染材料必須經金屬鹽作媒劑作用后才有著色力。所以在配制蘇木精染劑時都要用媒染劑。常用的媒染劑有硫酸鋁按、鉀明礬和鐵明礬等。蘇木精是淡黃色到銹紫色的結晶體，易溶于酒精，微溶于水和甘油，是染細胞核的優(yōu)良材料，他能把細胞中不同的結構分化出各種不同的顏色。分化時組織所染的顏色因處理的情況而異，用酸性溶液（如鹽酸—酒精）分化后呈紅色，水洗后仍恢復青藍色，用堿性溶液（如氨水）分化后呈藍色，水洗后呈藍黑色。生理學實驗技術2、洋紅洋紅又叫胭脂紅或卡紅。一種熱帶產的雌性胭脂蟲干燥后，磨成粉末，提取出蟲紅，再用明礬處理，除去其中雜質，就制成洋紅。單純的洋紅不能染色，要經酸性或堿性溶液溶解后才能染色。常用的酸性溶液有冰醋酸或苦味酸，堿性溶液有氨水、硼砂等。洋紅使細胞核的優(yōu)良染料，染色的標本不易褪色。用作切片或組織塊染都適宜，尤其適宜于小型材料的整體染色。用洋紅配成的溶液染色后能保持幾年。洋紅溶液出現(xiàn)渾濁時要過濾后再用。生理學實驗技術人工染料種類很多，應用極廣。缺點是經日照易褪色，苯胺藍、亮綠、甲基綠等更易褪色。在制片中注意掌握酸堿度，并避免日光直射，也能經幾年不褪色。1、伊紅：有很多種。常用的伊紅Y，酸性染料，呈紅色帶藍的小結晶或棕色粉末狀，溶于水（15攝氏度時溶解44%）和酒精（無水酒精中溶解2%）。動物制片常用，是很好的細胞質染料2、固綠：酸性染料，能溶于水（溶解度為4%）和酒精（溶解度為9%）。應用極廣，與蘇木精、番紅并列為植物組織學最常用的染料。3、蘇丹Ⅲ，脂肪染色劑。弱酸性染料，紅色粉末狀，易溶于脂肪和酒精（溶解度為0.15%）生理學實驗技術4、酸性品紅：酸性染料，紅色粉末，能溶于水，略溶于酒精（0.3%）。良好的細胞質染色劑，用于動物和植物切片。與甲基綠同染，能顯示線粒體。組織切片在染色前先浸酸性水中，可增強它的染色力。酸性品紅容易跟堿起作用，所以染色過度，易在自來水中褪色。5、剛果紅：酸性染料，呈棗紅色粉末狀，能溶于水和酒精，遇酸呈藍色。染細胞質時，在動物組織制片中用來染神經軸、彈性纖維、胚胎材料等。剛果紅可以跟蘇木素作二重染色，也可用作類淀粉染色，由于它能溶于水和酒精，所以洗滌和脫水處理要迅速。6、甲基藍：弱酸性染料，能溶于水和酒精。應用極廣。與伊紅合用能染神經細胞，還用于染細菌制、原生動物的活體染色劑。甲基藍極易氧化，因此染色后不能長久保存。生理學實驗技術7、堿性品（復）紅：堿性染料，呈暗紅色粉末或結晶狀，能溶于水（溶解度1%）和酒精（溶解度8%）。用來染色膠原纖維、彈性纖維、嗜復紅性顆粒和中樞神經組織的核質。在細菌學制片中，常用來鑒別結核桿菌。8、結晶紫：堿性染料，能溶于水（溶解度9%）和酒精（溶解度8.75%）。細胞核染色常用，用來顯示染色體的中心體，并可染淀粉、纖維蛋白、神經膠質等。凡是用番紅和蘇木精或其它染料染細胞核不成功時，用它能得到良好的結果。用番紅和結晶紫作染色體的二重染色，染色體染成紅色，紡錘絲染成紫色，所以也是一種顯示細胞分裂的優(yōu)良染色劑。用結晶紫染纖毛，效果也很好。缺點是不易長久保存切片。9、龍膽紫：混合的堿性染料，結晶紫和甲基紫的混合物。能與結晶紫互相替用。醫(yī)藥上用的紫藥水，主要成分是甲基紫，需要時能代替龍膽紫和結晶紫。生理學實驗技術10、中性紅：弱堿性染料，紅色粉末，能溶于水（溶解度4%）和酒精（溶解度1.8%）。它的堿性溶液中呈現(xiàn)黃色，在強堿性溶液中呈藍色，而在弱酸性溶液中呈紅色，故用作指示劑。中性紅無毒，常做活體染色的染料，用來染原生動物和顯示動植物組織中活細胞的內含物等。陳久的中性紅水溶液，用作顯示尼氏小體的常用染料。11、番紅：堿性染料，能溶于水和酒精。能染細胞核、染色體和植物蛋白質，還能染孢子囊。12、亞甲藍或美藍：堿性染料，藍色粉末，能溶于水（9.5%）和酒精（6%）。細胞核染料，染色不會過深。13、甲基綠：堿性染料。綠色粉末，能溶于水（8%）和酒精（3%）常用于染染色質生理學實驗技術試劑的保存與放置Na2CO3、Na3PO4等弱酸強堿鹽溶液不能用磨口玻璃瓶貯存？象Na2CO3、Na3PO4等弱酸強堿鹽在水溶液極易水解生成OH－，OH－與玻璃中的SiO2成分反應生成SiO32－，這種反應在磨口玻璃瓶的磨砂處（表面積大）更易進行，所以既容