生理學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)課件

專題I：溶液的配制2010年9月2010級(jí)碩士研究生課動(dòng)物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)生理學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)1、實(shí)驗(yàn)臺(tái)準(zhǔn)備生理學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)2、器皿的準(zhǔn)備生理學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)3、藥品的準(zhǔn)備生理學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)4、濃度的確定及計(jì)算（1）摩爾濃度

1L溶液里含有多少摩爾溶質(zhì)表示的溶液濃度稱為摩爾濃度，M，計(jì)算公式：例1：蔗糖的C12H22O11分子量=342，1升水中溶解了171g蔗糖，求蔗糖溶液的摩爾濃度？例2：請(qǐng)配制1mM(1mol/L)蔗糖溶液100mL

例3：請(qǐng)配制125mM的NaOH溶液1mL生理學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)含結(jié)晶水的鹽溶液摩爾濃度的配制需配制0.1M的Na2CO3溶液1mL，現(xiàn)有藥品為Na2CO3?10H2O，如何配制？需稱多少克？答案：2.86×10-2g生理學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)（2）當(dāng)量濃度當(dāng)量濃度(N，normality)：1升溶液所含溶質(zhì)的克當(dāng)量數(shù)。過(guò)去常用，現(xiàn)只用于部分酸溶液。當(dāng)量濃度與摩爾濃度的換算：與化合價(jià)有關(guān)，一當(dāng)量即得失一個(gè)電子

鹽酸放出一個(gè)H+，化合價(jià)為1，1NHCl=1MHCl

硫酸化合價(jià)2,放2質(zhì)子，1MH2SO4=2NH2SO4常用濃鹽酸的濃度為36%，密度1.1789生理學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)（3）百分比濃度1%NaCl：1g，100mL75%乙醇，V/V請(qǐng)用95%乙醇配制75%乙醇100mL做酒精棉球生理學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)要配250mL1M的硫酸溶液，市售的濃硫酸為密度1.836g/cm3、濃度98%，問(wèn)取多少mL這樣的濃硫酸?答案：13.6mL生理學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)5、稱量固體：顆粒藥品粉末藥品膏狀藥品易潮解藥品腐蝕性藥品：強(qiáng)堿液體：揮發(fā)性液體強(qiáng)酸有機(jī)溶劑自我防護(hù)、防污染生理學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)配制標(biāo)準(zhǔn)溶液配制步驟：例：配制1升0.01mol/L的KMnO4溶液配制標(biāo)準(zhǔn)溶液的步驟：1．計(jì)算所需溶質(zhì)KMnO4的質(zhì)量：n=0.01×1=0.01mol

質(zhì)量m=0.01mol×158=1.58克2．稱量：稱取1.58g固體KMnO43．溶解：在燒杯中用50ml左右的蒸餾水溶解KMnO44．移液：溶液必須冷卻后才能轉(zhuǎn)移到容量瓶中。5．洗滌燒杯3次，一并移入容量瓶6．定容7．振蕩搖勻，裝入試劑瓶，貼上寫(xiě)好的標(biāo)簽（濃度、時(shí)間、人）容量瓶：用于配制標(biāo)準(zhǔn)溶液或稀釋溶液，有25、50、100、250、500、和1000ml等規(guī)格。需注意:1．溶質(zhì)先在燒杯內(nèi)全部溶解然后再移入容量瓶。2．不能加熱，不能代替試劑瓶用來(lái)存放溶液。生理學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)干粉傾倒入三角瓶時(shí)的注意事項(xiàng)生理學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)普通溶液的配制：量筒：多數(shù)生化試劑量杯：生理鹽溶液帶刻度的燒杯試管：濃度要求不高的洗滌溶液，浸泡載波片的2%鹽酸，洗液帶刻度的離心管鉻酸洗液：1：強(qiáng)洗液重鉻酸鉀150g，蒸餾水300ml，濃硫酸3000ml2：中等強(qiáng)度洗液濃硫酸50%，蒸餾水50%，重鉻酸鉀5%3：操作：將重鉻酸鉀加入蒸餾水中，使之自然溶解或水浴溶解，慢慢加入濃硫酸，邊加邊攪拌，如發(fā)熱過(guò)劇則冷卻后再繼續(xù)加。操作時(shí)要穿橡皮圍裙、長(zhǎng)統(tǒng)膠靴、戴上眼鏡和厚膠皮手套，以保安全。生理學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)蒸餾水：一蒸，二蒸，三蒸開(kāi)水：自來(lái)水：去離子水：水的選擇生理學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)PH的調(diào)節(jié)精密pH試紙：室溫，自然光照pH計(jì)，用標(biāo)準(zhǔn)溶液定期標(biāo)定校準(zhǔn)生理學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)貯備溶液及其稀釋室溫4℃NaN3,柳硫汞1/1000-20℃50%甘油，5%生理學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)特殊溶液的配制及其注意事項(xiàng)1、EDTANa2，只能溶解于pH8.0的水中2、DNA樣品：濃溶液形式溶解于pH8.0以上的堿性水溶液中3、RNA樣品：濃溶液形式溶解于pH5.2以下的酸性水溶液中4、蛋白溶液：濃溶液溶于中性緩沖液PBS中5、抗菌問(wèn)題：0.05-0.1%疊氮鈉，0.01%柳硫汞生理學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)1、蘇木精蘇木精是從南美的蘇木（熱帶豆科植物）干枝中用乙醚浸制出來(lái)的一種色素，是最常用的染料之一。蘇木精不能直接染色，必須暴露在通氣的地方，使他變成氧化蘇木精（又叫蘇木素）后才能使用，這叫做“成熟”。蘇木精的“成熟”過(guò)程需時(shí)較長(zhǎng)，配置后時(shí)間愈久，染色力愈強(qiáng)。被染材料必須經(jīng)金屬鹽作媒劑作用后才有著色力。所以在配制蘇木精染劑時(shí)都要用媒染劑。常用的媒染劑有硫酸鋁按、鉀明礬和鐵明礬等。蘇木精是淡黃色到銹紫色的結(jié)晶體，易溶于酒精，微溶于水和甘油，是染細(xì)胞核的優(yōu)良材料，他能把細(xì)胞中不同的結(jié)構(gòu)分化出各種不同的顏色。分化時(shí)組織所染的顏色因處理的情況而異，用酸性溶液（如鹽酸—酒精）分化后呈紅色，水洗后仍恢復(fù)青藍(lán)色，用堿性溶液（如氨水）分化后呈藍(lán)色，水洗后呈藍(lán)黑色。生理學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)2、洋紅洋紅又叫胭脂紅或卡紅。一種熱帶產(chǎn)的雌性胭脂蟲(chóng)干燥后，磨成粉末，提取出蟲(chóng)紅，再用明礬處理，除去其中雜質(zhì)，就制成洋紅。單純的洋紅不能染色，要經(jīng)酸性或堿性溶液溶解后才能染色。常用的酸性溶液有冰醋酸或苦味酸，堿性溶液有氨水、硼砂等。洋紅使細(xì)胞核的優(yōu)良染料，染色的標(biāo)本不易褪色。用作切片或組織塊染都適宜，尤其適宜于小型材料的整體染色。用洋紅配成的溶液染色后能保持幾年。洋紅溶液出現(xiàn)渾濁時(shí)要過(guò)濾后再用。生理學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)人工染料種類很多，應(yīng)用極廣。缺點(diǎn)是經(jīng)日照易褪色，苯胺藍(lán)、亮綠、甲基綠等更易褪色。在制片中注意掌握酸堿度，并避免日光直射，也能經(jīng)幾年不褪色。1、伊紅：有很多種。常用的伊紅Y，酸性染料，呈紅色帶藍(lán)的小結(jié)晶或棕色粉末狀，溶于水（15攝氏度時(shí)溶解44%）和酒精（無(wú)水酒精中溶解2%）。動(dòng)物制片常用，是很好的細(xì)胞質(zhì)染料2、固綠：酸性染料，能溶于水（溶解度為4%）和酒精（溶解度為9%）。應(yīng)用極廣，與蘇木精、番紅并列為植物組織學(xué)最常用的染料。3、蘇丹Ⅲ，脂肪染色劑。弱酸性染料，紅色粉末狀，易溶于脂肪和酒精（溶解度為0.15%）生理學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)4、酸性品紅：酸性染料，紅色粉末，能溶于水，略溶于酒精（0.3%）。良好的細(xì)胞質(zhì)染色劑，用于動(dòng)物和植物切片。與甲基綠同染，能顯示線粒體。組織切片在染色前先浸酸性水中，可增強(qiáng)它的染色力。酸性品紅容易跟堿起作用，所以染色過(guò)度，易在自來(lái)水中褪色。5、剛果紅：酸性染料，呈棗紅色粉末狀，能溶于水和酒精，遇酸呈藍(lán)色。染細(xì)胞質(zhì)時(shí)，在動(dòng)物組織制片中用來(lái)染神經(jīng)軸、彈性纖維、胚胎材料等。剛果紅可以跟蘇木素作二重染色，也可用作類淀粉染色，由于它能溶于水和酒精，所以洗滌和脫水處理要迅速。6、甲基藍(lán)：弱酸性染料，能溶于水和酒精。應(yīng)用極廣。與伊紅合用能染神經(jīng)細(xì)胞，還用于染細(xì)菌制、原生動(dòng)物的活體染色劑。甲基藍(lán)極易氧化，因此染色后不能長(zhǎng)久保存。生理學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)7、堿性品（復(fù)）紅：堿性染料，呈暗紅色粉末或結(jié)晶狀，能溶于水（溶解度1%）和酒精（溶解度8%）。用來(lái)染色膠原纖維、彈性纖維、嗜復(fù)紅性顆粒和中樞神經(jīng)組織的核質(zhì)。在細(xì)菌學(xué)制片中，常用來(lái)鑒別結(jié)核桿菌。8、結(jié)晶紫：堿性染料，能溶于水（溶解度9%）和酒精（溶解度8.75%）。細(xì)胞核染色常用，用來(lái)顯示染色體的中心體，并可染淀粉、纖維蛋白、神經(jīng)膠質(zhì)等。凡是用番紅和蘇木精或其它染料染細(xì)胞核不成功時(shí)，用它能得到良好的結(jié)果。用番紅和結(jié)晶紫作染色體的二重染色，染色體染成紅色，紡錘絲染成紫色，所以也是一種顯示細(xì)胞分裂的優(yōu)良染色劑。用結(jié)晶紫染纖毛，效果也很好。缺點(diǎn)是不易長(zhǎng)久保存切片。9、龍膽紫：混合的堿性染料，結(jié)晶紫和甲基紫的混合物。能與結(jié)晶紫互相替用。醫(yī)藥上用的紫藥水，主要成分是甲基紫，需要時(shí)能代替龍膽紫和結(jié)晶紫。生理學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)10、中性紅：弱堿性染料，紅色粉末，能溶于水（溶解度4%）和酒精（溶解度1.8%）。它的堿性溶液中呈現(xiàn)黃色，在強(qiáng)堿性溶液中呈藍(lán)色，而在弱酸性溶液中呈紅色，故用作指示劑。中性紅無(wú)毒，常做活體染色的染料，用來(lái)染原生動(dòng)物和顯示動(dòng)植物組織中活細(xì)胞的內(nèi)含物等。陳久的中性紅水溶液，用作顯示尼氏小體的常用染料。11、番紅：堿性染料，能溶于水和酒精。能染細(xì)胞核、染色體和植物蛋白質(zhì)，還能染孢子囊。12、亞甲藍(lán)或美藍(lán)：堿性染料，藍(lán)色粉末，能溶于水（9.5%）和酒精（6%）。細(xì)胞核染料，染色不會(huì)過(guò)深。13、甲基綠：堿性染料。綠色粉末，能溶于水（8%）和酒精（3%）常用于染染色質(zhì)生理學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)試劑的保存與放置Na2CO3、Na3PO4等弱酸強(qiáng)堿鹽溶液不能用磨口玻璃瓶貯存？象Na2CO3、Na3PO4等弱酸強(qiáng)堿鹽在水溶液極易水解生成OH－，OH－與玻璃中的SiO2成分反應(yīng)生成SiO32－，這種反應(yīng)在磨口玻璃瓶的磨砂處（表面積大）更易進(jìn)行，所以既容