淄職畢業(yè)論文哌拉西林和他唑巴坦的含量測定

淄博職業(yè)學院畢業(yè)論文-9-摘要應用反相高效液相色譜法同時測定哌拉西林和他唑巴坦的含量。方法：以咖啡因為內標，uBondapakC18為固定相。甲醇-水(34.5:65.5)為流動相，檢測波長為220nm流速為1.0ml/min。結果:哌拉西林的線性范圍為40～200ug/ml（r=0.9996，n=6)，他唑巴坦的線性范圍為5.0～25.0ug/ml(r=0.9991，n=6)，平均回收率RSD(n=5)為哌拉西林(100.2±0.61)%，他唑巴坦唑(99.03±0.90)%。結論：本法簡便、快速、準確。關鍵詞：哌拉西林；他唑巴坦；含量測定引言哌拉西林(piperacillin)是廣譜高效半合成青霉素，已臨床使用多年，對革蘭氏陽性菌和陰性菌均有良好的抗菌活性，但對多種細菌耐藥株產生的β-內酰胺酶不穩(wěn)定；他唑巴坦(tazobactam)是新一代不可逆競爭性β-內酰胺酶抑制劑，其抑制作用優(yōu)于克拉維酸、舒巴坦．他唑巴坦通過抑制內酰胺酶使哌拉西林對眾多產酶革蘭氏陽性菌、陰性菌和厭氧桿菌抗菌作用增強，抗菌譜寬，較已臨床應用多年的舒巴坦/氨芐西林，克拉維酸/阿莫西林等具更廣的抗菌譜和適應性，兩藥制成復方制劑的抗菌譜廣、抗菌作用強。國內研究測定哌拉西林含量的方法較多，有旋光法[1]、高效液相色譜法[2.3]等。本文應用反相高效液相色譜法，建立一種內標法同時測定哌拉西林和他唑巴坦制劑中兩組分含量的方法。1儀器和試劑1.1儀器Waters高效液相色譜儀，Waters510高壓泵、Waters484紫外檢測器、U6K進樣器(美國Waters公司)；WDL-95工作站(科學院大連化學物理研究所、國家色譜研究分析中心)；uBondapakC18色譜拄(大連依利特科技儀器有限公司)；Mil1i-QLaBo小型純水機(Millipore公司)；765MC紫外分光光度計(上海第三分析儀器廠)。1.2試劑哌拉西林對照品(中國藥品生物制品檢定所提供，含量91.3%)；他唑巴坦對照品(中國藥品生物制品檢定所提供，含量96.42%)；咖啡因對照品(上海融禾醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司)；甲醇(色譜純，天津四友化工有限公司)；注射用哌拉西林鈉/他唑巴坦鈉（齊魯天和惠世制藥有限公司)；四丁基溴化銨(分析純)。2方法與結果2.1色譜條件色譜柱：uBondapakC18(300mm×40mm)；流動相：甲醇-水(每1000ml水中含濃度5.0mmol/L四丁基溴化銨27.3ml，用磷酸調節(jié)pH至5.0±0.1(34.5:65.5)；內標：咖啡因；檢測波長：220nm；流速：1.0ml/min；柱溫：室溫。2.2標準曲線的制備2.2.1貯備液的制備：取哌拉西林對照品約50mg和他唑巴坦對照品約50mg，精密稱定，分別置50ml和500ml容量瓶中。用甲醇溶解后加超純水稀釋至刻度，混勻，得哌拉西林和他唑巴坦的濃度分別約為1000ug/ml和100ug/ml的貯備液。取咖啡因對照品15mg，精密稱定，置100ml容量瓶中，用熱水溶解后加超純水稀釋至刻度，混勻，得濃度為150ug/ml的內標貯備液。2.2.2標準曲線的制備分別精密吸取哌拉西林貯備液0.4、0.6、0.8、1.2、1.6、2.0ml和他唑巴坦貯備液0.5、0.75、1.0，1.5、2.0、2.5ml于10ml容量瓶中．各加入1.0ml咖啡因溶液，加超純水稀釋至刻度，混勻。配成的濃度分別為哌拉西林40、60、80、120、160、200ug/ml，他唑巴坦5、7．5、10、15、20、25ug/ml；內標濃度為15ug/ml的標準溶液，進樣量l0ul，以組分峰與內標峰面積比為R，相應的組分濃度為C．得回歸方程：哌拉西林：C：38.5010R-7.7387，r-0.9996；他唑巴坦C：66.9643R-4.2188，r-0.9991。2.3精密度試驗取注射用哌拉西林鈉/他唑巴坦鈉樣品約120mg，精密稱定，置100ml容量瓶中，加超純水至刻度，混勻。精密吸取樣品溶掖lml置l0ml容量瓶中，加入內標液1.0ml，加超純水至刻度，經微孔濾膜過濾后取10ul濾液進樣。連續(xù)測定5次，計算其精密度，得結果：哌拉西林RSD為0.60%．他唑巴坦RSD為0.65%。2.4穩(wěn)定性試驗取上述樣品溶液在室溫下放置0、2、4、8、12h后分別測定含量，并分別于1、2、3、4、5d后測定含量結果顯示：1d后哌拉西林含量為99.27%，他唑巴坦含量為99.83%；5d后哌拉西林降為82.22%，他唑巴坦降為92.05%。哌拉西林和他唑巴坦的日內RSD分別為0.79%和1.8%，日間RSD為9.3%和3.6%：兩者在ld內穩(wěn)定。2.5加樣回收試驗精密稱取已知含量的樣品粉末約50mg。加精密稱定的哌拉西林和他唑巴坦對照品適量，配成高、中、低3種濃度的試液，分別為哌拉西林50、65、80ug/ml，他唑巴坦15、20、25ug/ml。按標準曲線項下方法測定兩組分含量，計算回收率：按《中國藥典》[5]方法測定樣品中哌拉西林的加樣回收率，并對結果進行比較。結果見表1。 表1內標法與CHP外標法加樣回收試驗對比(n=5)藥物濃度內標法CHP法PH值X（%）RSD(%)X（%）RSD(%)哌拉西林低99.900.1099.401.5＞0.05中100.90.7299.920.58＞0.05高99.840.27100.31.2＞0.05他唑巴坦低99.360.46中98.450.44高99.680.872.6樣品含量測定取同一批號注射用哌拉西林鈉/他唑巴坦鈉5瓶，測定平均裝量。精密稱取樣品3份，分別置100ml容量瓶中，配成約含他唑巴坦12ug/ml、哌拉西林96ug/ml的溶液，經過濾后，按標準曲線項下方法操作，計算其濃度。按產品標準的測定方法[4]和《中國藥典》[5]方法對樣品進行測定，并經統(tǒng)計學處理，結果見表2。表2注射用哌拉西林鈉/他唑巴坦鈉含量測定(n=3)批號藥物內標法產品方法CHP法P值※含量（%）RSD(%)含量（%）RSD(%)含量（%）RSD(%)081024301哌102.51.999.920.41101.60.87＞0.05他98.032.099.880.38＞0.05081024401哌101.10.50102.50.84100.00.26＞0.05他98.260.2197.061.3＞0.05081024501哌100.40.35101.40.7598.530.87＞0.05他98.130.2198.060.94＞0.05注：哌：哌拉西林，他：他唑巴坦；※P值是產品方法和《中國藥典》方法分別與內標法進行比較。3討論3.1pH的選擇有文獻報道，在pH4.0條件下可同時測定哌拉西林和他唑巴坦的含量，但在實驗測定時發(fā)現(xiàn)，在pH4.0條件下哌拉西林保留時間長且峰形寬，隨著流動相pH值的升高，哌拉西林的保留時間變短，峰形變窄，當pH5.0±0.1時，能使它與內標分離良好且保留時間短，峰形對稱，哌拉西林和他唑巴坦兩峰高的比例合適。3.2流動相的選擇本方法采用甲醇-水作為流動相，比用乙腈【5】作為流動相安全且經濟，配制方法簡單、方便。水相中加入四丁基溴化銨反相離子，可改善他唑巴坦的峰形，減少拖尾；哌拉西林對甲醇量的變化靈敏，隨著甲醇量的增加，峰形將變窄，保留時間變短。經過反復實驗測定，得到合適的流動相配比為甲醇:水-34.5:65.5，此時各峰峰形好，分析時間短(在8min內完成)。3.3內標的選擇分別對咖啡因和與他唑巴坦結構相近的舒巴坦進行考察，在不同色譜條件下進行測定，發(fā)現(xiàn)舒巴坦與他唑巴坦不能完全分離，而咖啡因能與各峰分離良好。且咖啡因穩(wěn)定性好，可長時間放置，在同一色譜條件下峰形穩(wěn)定。3.4波長的選擇經紫外掃描得哌拉西林最大吸收約在230nm，他唑巴坦的最大吸收約在210nm。為提高靈敏度且減少雜質峰的影響．檢測波長應為220nm。3.5穩(wěn)定性樣品在一天內穩(wěn)定，他唑巴坦穩(wěn)定性良好，但哌拉西林五天后含量降為82.22%。建議樣品的測定最好在一天內完成。3.6方法比較按產品標準的測定方法，在相同固定相下，以甲醇-水-10%四丁基氫氧化銨溶液(450:535:15，用磷酸調節(jié)pH至3.5)為流動相，檢測波長為220nm，對相同樣品進行測定。結果顯示，他唑巴坦前有一不完全分離的雜峰,影響計算結果，而且哌拉西林保留時間長，兩組分的檢測靈敏度低。含量測定方法因《中國藥典》、《美國藥典》、《英國藥典》均只收載了哌拉西林的測量測定方法，沒有他唑巴坦測量測定方法，因此只作哌拉西林的對照。本方法得到的結果與《中國藥典》方法、產品標準方法相比無明顯差異，但能同時測定極性相差較大的哌拉西林和他唑巴坦兩組分的含量，而且檢測靈敏度高，操作簡便、準確，分析時間短。參考文獻[1]黃老金.旋光法測定注射用哌拉西林鈉的含量[J]．上海醫(yī)藥，1997，(1)35.[2]袁耀佐，胡昌勤，金少鴻.他唑巴坦及其制劑注射用哌拉西林鈉/他唑坦鈉的HPLC含量測定方法的建立[J]．藥物分析雜志，1999，19(4)：256.[3]TsukamotoT，UshioT．Determinationof(2S，3S，5R)-3-methyl-7-oxo-3-(1H-1,2,3-triazo-1-ylreeky)-4-tkia-1-azobicyclo[3.2.0]heptane-2-carboxylicacid4,4-deoxide(YTR一830H)andpiperacillininpharmaceuticalpreparationsbybigh-performanceliquidchromatographv[J]．Chromatogr.A、1994，678(1)：69.[4]中華人民共和國國家藥品監(jiān)督管理局試行標準[S]．WS-198(X-170)-99(1).[5]中華人民共和國藥典委員會.中國藥典(二部)[S]．2000年版．北京：化學工業(yè)出版社，2000，470.謝辭在這里我首先要感謝的是我的指導老師，本論文是在老師的親切關懷和耐心指導下完成的。論文成稿，得到了老師的熱情鼓勵和悉心指導，凝聚了恩師心血。她嚴謹的治學態(tài)度，精益求精的工作作風，深深地感染和激勵著我，使我受益匪淺。老師不僅在學業(yè)上給我以精心指導，同時還在生活上給我以無微不至的關懷，在此謹向老師致以誠摯的謝意和崇高的敬意。在實習過程中，得到上司的悉心指導和無私幫助，同時還