T-ARAA 001-2024 水果中克百威的快速檢測方法膠體金免疫層析法

ICS67.040CCSG25ARAARapiddetectionofprocymidoneinfruitsColloidalgoldimmunochromatographyIT/ARAA001—2024本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由阿克蘇地區(qū)檢驗檢測中心提出并組織實施。本文件由阿克蘇地區(qū)市場監(jiān)督管理局歸口。本文件起草單位：阿克蘇地區(qū)地區(qū)檢驗檢測中心、阿克蘇地區(qū)農業(yè)科技創(chuàng)新中心、阿克蘇地區(qū)林業(yè)技術推廣服務中心、阿克蘇蘋果協(xié)會。本文件主要起草人：許瑛、田鋒、徐學里、李娟、楊婧、楊俊翔、付英、?，摤摗㈥惡Ｔ?、譚慧林、張燕、秦江南、阿衣努爾·艾海買提、宋海波、朱藝、鄧會。本文件實施中的疑問請咨詢阿克蘇地區(qū)檢驗檢測中心作解釋。對本文件的修改意見建議，請反饋至阿克蘇地區(qū)檢驗檢測中心。1T/ARAA001—2024水果中克百威的快速檢測方法膠體金免疫層析法本標準規(guī)定了水果等農產(chǎn)品中克百威的膠體金免疫層析快速檢測方法。本標準適用于水果等農產(chǎn)品中克百威的快速檢測。水果中克百威最大殘留：0.02mg/kg。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB2763食品安全國家標準食品中農藥最大殘留限量。NY/T1276農藥安全使用規(guī)范總則GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法。3術語和定義本文件沒有需要界定的術語和定義。4原理本方法采用競爭抑制免疫層析原理。樣品中克百威與膠體金標記的克百威特異性抗體結合，抑制抗體和檢測卡中檢測線（T線）上克百威抗原的結合，從而導致檢測線顏色深淺的變化。通過檢測線與質控線（C線）顏色深淺比較，對樣品中目標克百威進行定性判定。5試劑或材料實除另有規(guī)定外，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的二級水。5.1試劑5.1.1甲醇（CH3OH）5.2標準品5.2.1克百威，純度≥95％，或經(jīng)國家認證并授予標準物質證書的標準物質。5.3標準溶液配制5.3.1克百威標準儲備液（1000μg/mL精密稱取適量克百威標準品（5.2置于10mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為1000μg/mL的克百威標準儲備液；或可直接購克百威標2T/ARAA001—2024準儲備液。-18℃避光保存?zhèn)溆?，有效?個月。5.3.2克百威標準工作液（1μg/mL分別吸取克百威標準儲備液（1000μg/mL）100μL于100mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，配制成濃度為1μg/mL的克百威標準中間液。6儀器和設備6.1移液器：20～200μL，100～1000μL，1～10mL。6.2分析天平：感量分別為0.01g和0.01mg。6.3旋渦振蕩器。6.4組織勻漿機。6.5離心機：轉速≥4000r/min。6.6膠體金免疫層析檢測試紙條。6.7離心管：1.5mL、50mL。7樣品制備7.1樣品前處理稱取2g待測水果等樣品表皮（約1cm2大小再加5mL提取液，震蕩混勻2min，取管中液體即為樣品提取液。8測定8.1所有操作需在室溫下（20℃-30℃)進行。8.2檢測卡測定步驟吸取150～200μL樣品待測液于檢測卡加樣孔中，室溫反應5～8min，進行結果判定。8.3試劑條與金標微孔測定步驟吸取150～200μL樣品待測液于金標微孔中，抽吸5～10次使混合均勻，不要有氣泡，反應5min，將檢測試紙條樣品端垂直向下插入金標微孔中，室溫跑樣5min，從微孔中取出試紙條，進行結果判定。8.4空白試驗稱取空白試樣，按照8.3和8.3的步驟同法操作。8.5加標質控試驗準確稱取空白試樣2g（精確至0.01g）置于50mL離心管中，加入40μL克百威標準工作液（1μg/mL），使試樣中克百威終濃度為0.02mg/kg，按照8.3和8.3的步驟操作。注：試劑條（或檢測卡）具體檢測步驟可參考相應的說明書操作。9結果分析3T/ARAA001—20249.1結果判定通過對比控制線和檢測線的顏色深淺進行結果判定。由于長時間放置會引起檢測線顏色的變化，需在規(guī)定時間內進行結果判定。目視結果判讀依據(jù)如圖1所示。9.1.1陰性檢測線（T線）顏色比控制線（C線）顏色深或者檢測線（T線）顏色與控制線（C線）顏色相當，表明樣品中克百威農藥殘留濃度低于方法檢出限或無克百威農藥殘留，判為陰性。9.1.2陽性檢測線（T線）不顯色，表明樣品中目標檢測物高于方法檢測限，判為陽性。9.1.3無效控制線（C線）不顯色，表明操作不正確或試紙條/檢測卡無效。9.2質控試驗要求空白試驗測定結果應為陰性，加標質控試驗測定結果應為陽性。否則表示不滿足質控試驗要求，此批樣品結果無效。10性能指標10.1按附錄A的規(guī)定計算快速檢測方法性能指標。10.2檢出限：0.02mg/kg10.3靈敏度：靈敏度應≥99%。10.4特異性：特異性應≥85%。10.5假陰性率：假陰性率應≤1%。10.6假陽性率：假陽性率應≤15%。4T/ARAA001—2024本標準所述試劑、試劑盒信息及操作步驟是為給方法使用者提供方便，在使用本方法時不做限定。方法使用者在使用替代試劑、試劑盒或操作步驟前，須對其進行考察，應滿足本方法規(guī)定的各項性能指標。本方法參比標準為《食品安全國家標準植物源性食品中9種氨基甲酸酯類農藥及其代謝物殘留量的測定液