T-FJSPSH 002-2023 食品中苯甲酸、山梨酸、糖精鈉和脫氫乙酸的測定

CCSX04T/FJSPSHT/FJSPSH002—2023本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分:標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由泉州市壹合食品研究院有限公司提出。本文件由福建省食品企業(yè)商會歸口。本文件主要起草單位：泉州市壹合食品研究院有限公司、晉江市食品行業(yè)協(xié)會、福建省食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心、福建盼盼食品有限公司、泉州簡方食品有限公司、豪利時（福建）食品科技有限公司、福建愛鄉(xiāng)親食品股份有限公司、唯王（福建）食品有限公司、晉江市閩南水產(chǎn)開發(fā)有限公司、福建省福食安檢測技術(shù)有限公司、中紡檢測（福建）有限公司。本文件主要起草人：蔡麗純、陳昌熙、何曉玲、范國智、陳力、蔡鈺鑒、林志民、凌大偉、施志烈、蔡志興、李昆朋。T/FJSPSH002—2023食品中苯甲酸、山梨酸、糖精鈉和脫氫乙酸的測定本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了苯甲酸、山梨酸、糖精鈉和脫氫乙酸的測定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于各類食品中苯甲酸、山梨酸、糖精鈉和脫氫乙酸的測定。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法3原理用氫氧化鈉溶液提取試樣中的苯甲酸、山梨酸、糖精鈉和脫氫乙酸，經(jīng)沉淀蛋白、去脂處理，用配紫外或二極管陣列檢測器的液相色譜儀測定，以色譜峰的保留時間定性，外標(biāo)法定量。4試劑和材料除特殊注明外，所有試劑均為分析純，水為符合GB/T6682規(guī)定的一級水。4.1試劑4.1.1甲醇（CH4O）：色譜級。4.1.2氫氧化鈉（NaOH）。4.1.3硫酸鋅（ZnSO4·7H2O）。4.1.4正己烷（C6H14）。4.1.5乙酸銨（C2H6O2N）。4.2試劑配制4.2.10.50mol/L氫氧化鈉溶液：稱取20g氫氧化鈉,溶于水并稀釋至1L。4.2.20.42mol/L硫酸鋅溶液：稱取120g硫酸鋅,溶于水并稀釋至1L。4.2.30.02mol/L乙酸銨溶液：稱取1.54g乙酸銨,溶于水并稀釋至1L。4.3標(biāo)準(zhǔn)品4.3.1苯甲酸(C6H5COOH,CAS號:65-85-0),純度≥99.0%；苯甲酸鈉(C6H5COONa,CAS號:532-32-1),純度≥99.0%，或經(jīng)國家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。4.3.2山梨酸(C6H8O2,CAS號:110-44-1),純度≥99.0%；山梨酸鉀(C6H7KO2,CAS號:590-00-1),純度≥99.0%，或經(jīng)國家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。4.3.3糖精鈉(C6H4CONNaSO2,CAS號:128-44-9),純度≥80.0%，或經(jīng)國家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。4.3.4脫氫乙酸(C8H8O4,CAS:520-45-6):純度≥99.0%，或經(jīng)國家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。4.4標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備T/FJSPSH002—20234.4.1苯甲酸、山梨酸標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液(1000mg/L):分別準(zhǔn)確稱取適量的苯甲酸（苯甲酸鈉）、山梨酸（山梨酸鉀）標(biāo)準(zhǔn)品,用甲醇（苯甲酸鈉、山梨酸鉀用水）溶解并分別定容至50mL。于4℃貯存,保存期為3個月。4.4.2糖精鈉(以糖精計)和脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液(1000mg/L):分別準(zhǔn)確稱取適量的糖精鈉和脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)品,用水溶解并分別定容至50mL。于4℃貯存,保存期為3個月。注:糖精鈉含結(jié)晶水,使用前需在120℃烘4h,干燥器中冷卻至室溫后備用。脫氫乙酸若存在不能完全溶解的情況，可先用氫氧化鈉溶液（4.2.1）溶解，再用水定容。4.4.3苯甲酸、山梨酸、糖精鈉(以糖精計)和脫氫乙酸混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液(200mg/L):分別準(zhǔn)確吸取苯甲酸、山梨酸、糖精鈉(以糖精計)和脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液各10.0mL于50mL容量瓶中,用水定容。于4℃貯存,保存期為1個月。4.4.5苯甲酸、山梨酸、糖精鈉(以糖精計)和脫氫乙酸混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液:分別準(zhǔn)確吸取苯甲酸、山梨酸、糖精鈉(以糖精計)和脫氫乙酸混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液0.05mL、0.25mL、0.50mL、1.00mL、2.50mL、5.00mL和10.0mL,用水定容至10mL,配制成質(zhì)量濃度分別為1.00mg/L、5.00mg/L、10.0mg/L、20.0mg/L、50.0mg/L、100mg/L和200mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液。臨用現(xiàn)配。4.5材料4.5.1水相微孔濾膜：0.22μm。4.5.2刻度塑料離心管：50mL。4.5.3pH試紙：范圍為5.5-9.0。4.5.4容量瓶：25mL。4.5.5量筒：25mL。5儀器和設(shè)備5.1高效液相色譜儀：配紫外或二極管陣列檢測器。5.2分析天平：感量為0.001g和0.0001g。5.3超聲波清洗器。5.4水浴鍋。5.5離心機：轉(zhuǎn)速≥8000r/min。5.6渦旋混合機。5.7組織勻漿機。5.8研磨機。6分析步驟6.1試樣制備固體樣品用研磨機充分粉碎并攪拌均勻；均勻液態(tài)樣品直接混合；膠基糖果應(yīng)用剪刀將膠基糖果剪成細(xì)條狀；碳酸飲料應(yīng)在50°C水浴上除去二氧化碳；水果及其制品試樣如有果核首先需要去掉果核；對于水果及其制品、蔬菜及其制品、食用菌等非均勻的樣品用組織勻漿機按試樣與水的質(zhì)量比為1∶4進(jìn)行勻漿。6.2提取6.2.1蔬菜及其制品、蜜餞涼果、豆制品、焙烤食品餡料、復(fù)合調(diào)味料、植物蛋白飲料、乳酸菌飲料、乳及乳制品等試樣準(zhǔn)確稱取1g（精確至0.0001g）試樣（勻漿試樣稱取5g）于50mL離心管中，加入15mL水，渦旋混勻，用氫氧化鈉溶液調(diào)pH至7.5，于50℃水浴超聲20分鐘（超聲期間振搖2-3次），冷卻至室溫后，加硫酸鋅溶液和氫氧化鈉溶液各1.0mL，混勻，轉(zhuǎn)移至25mL容量瓶，加水稀釋至刻T/FJSPSH002—2023度，搖勻。置于離心管中，于50℃水浴超聲10分鐘（超聲期間振搖1-2次）后，以8000r/min離心5分鐘，取上清液過0.22μm水系濾膜，待液相色譜分析。6.2.2糕點、面包、餅干、肉及其制品、水產(chǎn)及其制品、奶油、油炸食品、膨化食品、堅果與籽類、巧克力及其制品、黃油等試樣準(zhǔn)確稱取1g（精確至0.0001g）試樣（勻漿試樣稱取5g）于50mL離心管中，加入15mL水，渦旋混勻，用氫氧化鈉溶液調(diào)pH至7.5，于50℃水浴超聲20分鐘（超聲期間振搖2-3次），冷卻至室溫后，加硫酸鋅溶液和氫氧化鈉溶液各1.0mL，混勻，轉(zhuǎn)移至25mL容量瓶，加水稀釋至刻度，搖勻。置于離心管中，于50℃水浴超聲10分鐘（超聲期間振搖1-2次）后，加入10mL正己烷，振搖2分鐘，以4000r/min離心5分鐘，棄去正己烷相。再以8000r/min離心5分鐘，取上清液過0.22μm水系濾膜，待液相色譜分析。注:若正己烷提取一遍后，仍有明顯油脂，應(yīng)重復(fù)加入正己烷去脂，直至大部分脂肪去除。6.2.3果凍、糖果、蜂蜜等試樣準(zhǔn)確稱取1g（精確至0.0001g）試樣（勻漿試樣稱取5g）于50mL離心管中，加入15mL水，渦旋混勻，用氫氧化鈉溶液調(diào)pH至7.5，于70℃水浴加熱溶解試樣,于50℃水浴超聲20分鐘（超聲期間振搖2-3次），冷卻至室溫后，加硫酸鋅溶液和氫氧化鈉溶液各1.0mL，混勻，轉(zhuǎn)移至25mL容量瓶，加水稀釋至刻度，搖勻。置于離心管中，于50℃水浴超聲10分鐘（超聲期間振搖1-2次）后，以8000r/min離心5分鐘，取上清液過0.22μm水系濾膜，待液相色譜分析。6.2.4碳酸飲料、果酒、葡萄酒等試樣準(zhǔn)確稱取1g（精確至0.0001g）試樣（勻漿試樣稱取5g）于50mL離心管中，加入15mL水，渦旋混勻，用氫氧化鈉溶液調(diào)pH至7.5，于50℃水浴超聲20分鐘（超聲期間振搖2-3次），冷卻至室溫后轉(zhuǎn)移至25mL容量瓶，加水稀釋至刻度，搖勻。置于離心管中，于50℃水浴超聲10分鐘（超聲期間振搖1-2次）后，以8000r/min離心5分鐘，取上清液過0.22μm水系濾膜，待液相色譜分析。6.3儀器參考條件6.3.1色譜柱：C18柱，5μm，250mm×4.6mm(內(nèi)徑)或相當(dāng)者。6.3.2流動相：甲醇+0.02mol/L乙酸銨(10+90,體積比)。6.3.3波長：苯甲酸、山梨酸、糖精鈉為230nm；脫氫乙酸為293nm。6.3.4流速：1.0mL/min。6.3.5柱溫：30℃。6.3.6進(jìn)樣量：10μL。6.4定性分析依據(jù)保留時間一致性進(jìn)行定性識別，根據(jù)苯甲酸、山梨酸、糖精鈉和脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)品的保留時間（參見附錄A.1）,確定試樣中苯甲酸、山梨酸、糖精鈉和脫氫乙酸的色譜峰位置。必要時應(yīng)采用其他方法進(jìn)一步定性確證，例如用苯甲酸、山梨酸、糖精鈉和脫氫乙酸的標(biāo)準(zhǔn)品光譜圖（參見附錄A.2）來進(jìn)行對比。6.5標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作將苯甲酸、山梨酸、糖精鈉(以糖精計)和脫氫乙酸混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液(4.4.5)注入液相色譜儀中，測定相應(yīng)的峰面積，分別以標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。6.6測定將測定溶液注入液相色譜儀中,測得相應(yīng)峰面積,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線分別得到測定溶液中的苯甲酸、山梨酸、糖精鈉和脫氫乙酸濃度。T/FJSPSH002—20237結(jié)果計算試樣中苯甲酸、山梨酸、糖精鈉(以糖精計)和脫氫乙酸的含量按下式計算：X=X=式中:X——試樣中待測組分的含量，單位為克每千克(g/kg)；C——由標(biāo)準(zhǔn)曲線得出的試樣液中待測物的質(zhì)量濃度,單位為毫克每升(mg/L)；V——試樣定容體積,單位為毫升(mL)；M——試樣質(zhì)量,單位為克(g)；k——稀釋倍數(shù)；1000——由mg/kg轉(zhuǎn)換為g/kg的換算因子。計算結(jié)果保留三位有效數(shù)字。8精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10%。9其他苯甲酸、山梨酸、糖精鈉和脫氫乙酸的檢出限分別為0.001g/kg、0.002g/kg、0.002g/kg、0.005g/kg，定量限分別為0.003g/kg、0.006g/kg、0.006g/kg、0.015g/kg。T/FJSPSH002—2023苯甲酸、山梨酸、糖精鈉和脫氫乙酸的液相色譜圖及光譜圖A.1苯甲酸、山梨酸、糖精鈉和脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的液相色譜圖