2025年高考生物復(fù)習(xí)之小題狂練300題（解答題）：現(xiàn)代生物技術(shù)及應(yīng)用（10題）

第1頁（共1頁）2025年高考生物復(fù)習(xí)之小題狂練300題（解答題）：現(xiàn)代生物技術(shù)及應(yīng)用（10題）一．解答題（共10小題）1．黑水虻是重要的資源昆蟲，體內(nèi)H基因編碼的抗菌肽HI﹣3具有抗菌、抗癌和免疫調(diào)節(jié)作用。科研人員利用酵母菌生產(chǎn)抗菌肽HI﹣3，并避免基因污染。請回答下列問題：（1）利用PCR技術(shù)擴增H基因，需根據(jù)H基因設(shè)計兩種引物，引物的作用有。A．為Taq酶提供結(jié)合位點B．決定擴增產(chǎn)物大小C．決定反應(yīng)的特異性D．決定變性時間（2）已知H基因編碼鏈的編碼區(qū)序列是：5′﹣CTCGAGATGCTGCAG………GGATCCTC﹣TAGA﹣3′，擴增H基因的編碼區(qū)段時，結(jié)合到編碼鏈上的引物序列是（方向為5′→3′，寫出5′端8個堿基序列）。獲得H基因產(chǎn)物后需要進行凝膠電泳，將符合要求的條帶以便提取純化并進行測序。（3）由于抗菌肽HI﹣3會損傷酵母細胞，組成型表達（持續(xù)表達）H基因的酵母菌最大種群數(shù)量偏低，限制了最終產(chǎn)量?？蒲腥藛T通過構(gòu)建誘導(dǎo)型啟動子來降低抗菌肽HI﹣3對酵母菌的傷害。在酵母菌基因組DNA中插入P和S基因，使質(zhì)粒上H基因的表達受紅光控制。紅光調(diào)控H基因表達的原理如圖1所示。P和S基因表達應(yīng)為（從“組成型表達”“紅光誘導(dǎo)型表達”選填）。紅光調(diào)控H基因表達的原理是S基因指導(dǎo)合成的S蛋白直接與啟動子Jub結(jié)合，P基因表達的P蛋白在，啟動H基因的表達過程。（4）發(fā)酵后菌體和產(chǎn)物分離是發(fā)酵工藝的基本環(huán)節(jié)。定位于細胞表面的F蛋白可使酵母細胞彼此結(jié)合，進而沉淀在發(fā)酵罐底部?？蒲腥藛T引入藍光激活系統(tǒng)如圖2，在酵母菌基因組中插入了兩個均能合成E蛋白的基因（E1、E2），使F基因的表達受到藍光控制如圖3。圖3中E2基因持續(xù)性表達少量的E蛋白時，酵母細胞具有接受藍光刺激的能力，E1基因的作用是。（5）制藥過程中需避免工程菌泄露到環(huán)境中引發(fā)基因污染?？蒲腥藛T利用兩種阻遏蛋白基因（T和L）和調(diào)控元件，使酵母細胞在紅光和藍光同時照射時才激活致死基因N的表達，進而誘導(dǎo)工程菌死亡，如圖4。若圖中①選用的啟動子為Jub，②處選用的啟動子為CYC，則③④處結(jié)合的阻遏蛋白分別為。（6）請結(jié)合上述分析，利用該工程菌發(fā)酵生產(chǎn)抗菌肽HI﹣3各階段需控制的光照條件是：Ⅰ菌種培養(yǎng)階段；Ⅱ菌種發(fā)酵階段；Ⅲ產(chǎn)物分離階段；Ⅳ安全處理階段紅光、藍光同時照射。2．研究發(fā)現(xiàn)，人溶菌酶（hLZ）是天然抗生素替代品?？茖W(xué)家培育出轉(zhuǎn)入溶菌酶基因山羊，以大規(guī)模生產(chǎn)人溶菌酶（從乳汁中提?。?，過程如圖所示，其中編號①～⑨表示過程。請回答下列問題：（1）圖中轉(zhuǎn)基因山羊生產(chǎn)人溶菌酶運用了等（至少填3項）現(xiàn)代生物工程技術(shù)。（2）過程①使用PCR技術(shù)在體外擴增hLZ基因，擴增時需要種引物。過程③形成重組質(zhì)粒需要的限制酶是。（3）將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入山羊成纖維細胞后，篩選出含重組質(zhì)粒的山羊胎兒成纖維細胞，用到的質(zhì)粒S中標(biāo)記基因為。⑥過程未受精的卵母細胞去核過程中，去除的“核”實際上是。（4）過程⑧體外培養(yǎng)得到早期胚胎，應(yīng)在時期進行胚胎的移植。此外，移植前要進行性別鑒定和遺傳病篩選等，要從胚胎的細胞取樣。為檢測過程⑨得到的轉(zhuǎn)基因山羊是否成功，最簡單的方法是。3．“中天楊”是由我國科學(xué)家采用生物轉(zhuǎn)基因技術(shù)，歷經(jīng)8年時間培育成功的抗鹽堿、耐干旱的楊樹新品種。該品種以八里莊楊為實驗材料，經(jīng)轉(zhuǎn)mtl﹣D基因培育獲得。如圖為培育“中天楊”的操作流程，①～⑥表示操作過程，該過程中可能用到的限制酶如表所示?；卮鹣铝袉栴}。注：Ti質(zhì)粒中的Tetr為四環(huán)素抗性基因，Ampr為氨節(jié)青霉素抗性基因。限制酶BclⅠEcoRⅠXbaⅠSau3AⅠBamHⅠ切割位點T↓GATCAG↓AATTCT↓CTAGA↓GATCG↓GATCC（1）與雜交育種相比，基因工程育種的優(yōu)點有（填序號）。①操作方法簡便②目的性強，能定向改造生物性狀③育種周期短④不受生殖隔離限制，能克服遠緣雜交不親和障礙⑤安全性高，對生態(tài)沒有威脅（2）過程①需要的酶是，過程②需要的工具酶是。（3）采用PCR技術(shù)擴增目的基因時，在PCR反應(yīng)體系中需加入引物，引物的作用是，若目的基因擴增3代，則共用引物個。PCR完成以后，常采用法來鑒定PCR的產(chǎn)物。（4）培育轉(zhuǎn)基因楊樹的核心工作是，在進行該工作時，應(yīng)在mtl﹣D基因的兩側(cè)添加限制酶的識別序列。（5）將目的基因?qū)胧荏w細胞除圖示方法外，還有。為了確認目的基因在植物細胞中是否成功表達，從分子水平通常使用法進行檢測。4．如圖為單克隆抗體制備流程示意圖。據(jù)圖回答問題：（1）給小鼠注射抗原后使其產(chǎn)生分泌相應(yīng)抗體的B淋巴細胞準(zhǔn)確地說是一種細胞，此過程屬于特異性免疫中的免疫。（2）制備單克隆抗體過程中要用到動物細胞培養(yǎng)和細胞融合技術(shù)，利用這種方法所得的雜交瘤細胞的主要特點是。（3）在進行細胞培養(yǎng)時，一般會出現(xiàn)貼壁生長和現(xiàn)象；培養(yǎng)液通常含有葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素、促生長因子等營養(yǎng)物質(zhì)，此外還要加入；培養(yǎng)時要向培養(yǎng)液中通入95%的空氣和5%的CO2的混合氣體，其中通入空氣的原因是。（4）細胞融合是隨機的過程，在HAT培養(yǎng)基中培養(yǎng)，目的是，而為選育出能產(chǎn)生高特異性抗體的細胞，要將從HAT培養(yǎng)基上篩選出的細胞稀釋到7～10個細胞/mL，每孔滴入0.1mL細胞稀釋液，其目的是。5．米諾環(huán)素（分子式：C23H27N3O7）是一種四環(huán)素類抗生素，一般用于人類疾病治療和畜禽養(yǎng)殖。米諾環(huán)素進入人體或動物體內(nèi)后不能完全被吸收，其進入環(huán)境后會在環(huán)境中殘留，造成環(huán)境污染。某研究人員在自然水域中通過篩選和分離得到了一種米諾環(huán)素高效降解菌DM13，并對該菌進行了相關(guān)研究。如表是相關(guān)過程中使用的培養(yǎng)基種類及培養(yǎng)基配方，回答下列問題。培養(yǎng)基種類配方BPM培養(yǎng)基蛋白胨5.0g、牛肉膏3.0g、氯化鈉5.0g，蒸餾水定容至1000mLBPMA培養(yǎng)基蛋白胨5.0g、牛肉膏3.0g、氯化鈉5.0g、瓊脂25.0g，蒸餾水定容至1000mL無機鹽培養(yǎng)基MgSO4?7H2O0.15g、FeSO4?7H2O0.01g、CaCl20.02g、KH2PO41g、Na2HPO41g、NH4NO31g、葡萄糖0.5g，蒸餾水定容至1000mL（1）培養(yǎng)基的配制：按配方通過計算、稱量、溶解等步驟配制培養(yǎng)基，培養(yǎng)基經(jīng)滅菌后使用。（2）擴大培養(yǎng)：在BPM培養(yǎng)基中添加一定濃度的，對采集的水樣中的微生物進行選擇培養(yǎng)，該物質(zhì)可以為微生物生長提供。（3）分離高效降解菌：用法接種經(jīng)上述選擇培養(yǎng)得到的微生物，該步驟選擇的培養(yǎng)基為（填“BPM”“BPMA”或“無機鹽”）培養(yǎng)基。（4）測定降解效果：為了測定菌株DM13在自然水體中降解米諾環(huán)素的效果，應(yīng)該用配制四種不同初始質(zhì)量濃度的米諾環(huán)素溶液。進行實驗：①8h處理后，在米諾環(huán)素溶液初始質(zhì)量濃度為100μg/L的水體中，空白對照組測得的米諾環(huán)素溶液質(zhì)量濃度為41.8μg/L，加入菌株DM13的實驗組測得的質(zhì)量濃度為24.3μg/L，相較于空白對照組，米諾環(huán)素降解菌DM13的降解率為（用百分數(shù)表示，保留一位小數(shù)）。②為了測定菌株DM13的實際降解效果，可選擇表中的無機鹽培養(yǎng)基替換自然水體，這樣做的目的是。6．科研人員采用轉(zhuǎn)基因體細胞克隆技術(shù)獲得轉(zhuǎn)基因綿羊，以便通過乳腺生物反應(yīng)器生產(chǎn)人凝血因子IX醫(yī)用蛋白，其技術(shù)路線如圖。請據(jù)圖回答：（1）B代表的技術(shù)是，C代表。由過程①獲得的A為，其組成成分一般包括。（2）在B之前，D的操作是，目的是。受體應(yīng)選用期的卵母細胞。（3）進行C時，應(yīng)該選擇身體健康的代孕母羊，并進行處理。由于代孕母羊?qū)σ迫胱訉m的重組胚胎基本上不發(fā)生，這為重組胚胎在代孕母羊體內(nèi)的存活提供了可能。（4）采用綿羊胎兒成纖維細胞進行轉(zhuǎn)基因體細胞克隆，理論上可獲得無數(shù)只轉(zhuǎn)基因綿羊，其原因是。（5）由重組細胞到轉(zhuǎn)基因綿羊的培育成功，體現(xiàn)了。7．生物合成基因簇（BGC）是一類非常重要的基因集合類型。普遍存在于各類生物基因組中，并且發(fā)揮著重要的代謝和調(diào)控作用。CRISPR/Cas介導(dǎo)的切割可以發(fā)生在任意的DNA位點。阿卡波糖為一種新型口服降血糖藥，在腸道內(nèi)競爭性抑制葡萄糖甙酶，可降低多糖的分解，減緩吸收。已知阿卡波糖生物合成基因簇全長大約41kb，克隆阿卡波糖生物合成基因簇過程如圖所示?；卮鹣铝袉栴}：（1）現(xiàn)在常用技術(shù)快速特異性地擴增目的基因，利用該方法進行擴增時所需的引物需要滿足的條件是。（2）圖1中Cas9酶能催化鍵水解，在構(gòu)建重組DNA時，通常選擇（填“改造”或“未改造”）的質(zhì)粒作為載體，經(jīng)過酶處理后形成重組DNA。為提高獲得重組DNA的效率，下列需要考慮的因素有（填序號）。A．適宜的外界條件B．目的基因簇和質(zhì)粒濃度C．DNA連接酶活性D．質(zhì)粒的純度（3）酵母菌的純培養(yǎng)一般采用（填培養(yǎng)基名稱）培養(yǎng)基。（4）步驟④進行篩選的方法是：。8．三白草和魚腥草是同科不同屬的兩種藥用植物，二者因療效相近且具有疊加效應(yīng)常被用作“藥對”?？蒲腥藛T將復(fù)方的配伍（兩種或兩種以上藥物配合使用）用到個體生長或生產(chǎn)過程，并實現(xiàn)有效成分的工廠化生產(chǎn)的具體操作如圖1，進一步研究不同的原生質(zhì)體密度對三白草和魚腥草原生質(zhì)體融合率的影響，結(jié)果如圖2。（1）圖1中①過程通過酶解法去除獲取原生質(zhì)體，并向三白草和魚腥草細胞酶解液中分別加入紅、綠熒光色素（帶熒光色素的原生質(zhì)體仍能融合和再生）。過程②利用化學(xué)誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)融合，隨后在熒光顯微鏡下選擇帶的雜種原生質(zhì)體。（2）由圖2可知，促進三白草和魚腥草原生質(zhì)體融合的最適密度為個/mL。（3）通常情況下，能增加免疫器官的重量表明該物質(zhì)具有一定的增強免疫力的作用。為判斷融合體對動物免疫力的影響，科研人員取同種小鼠30只，雌雄各半，隨機均分為三組，實驗處理如表。組別A組B組C組（空白對照組）實驗處理三白草和魚腥草雜種愈傷組織的蒸餾水提取物三白草和魚腥草直接混合后的蒸餾水提取物每天一次等量灌胃，連續(xù)一周，檢測各組小鼠的胸腺重量①表格中C組的實驗處理為。②若實驗結(jié)果為，則支持利用原生質(zhì)體融合技術(shù)將復(fù)方的配伍提前并實現(xiàn)有效成分的工廠化生產(chǎn)。9．毒物誘導(dǎo)型啟動子S在毒物誘導(dǎo)下可啟動轉(zhuǎn)錄。研究人員將PCR擴增得到的毒物誘導(dǎo)型啟動子S（如圖2，圖中箭頭表示轉(zhuǎn)錄方向）插入圖1載體的P區(qū)，構(gòu)建表達載體并轉(zhuǎn)入大腸桿菌，獲得能夠檢測水中毒物的大腸桿菌M?；卮鹣铝袉栴}：（1）基因中啟動子是識別和結(jié)合的部位。（2）切割質(zhì)粒載體最好用兩種限制酶，而啟動子S上不含有這些限制酶的酶切位點，需要在引物上添加。圖2中引物I、Ⅱ分別加入限制酶的識別序列。（3）表達載體的P區(qū)有一段核苷酸序列為“5′﹣ATCTCGAGCGGG﹣3′”，則對該序列進行剪切的XhoⅠ（酶切后產(chǎn)生黏性末端）識別的核苷酸序列（6個核苷酸）最可能為。（4）用處理大腸桿菌，便于轉(zhuǎn)入構(gòu)建好的表達載體?？梢允褂锰砑拥呐囵B(yǎng)基篩選轉(zhuǎn)入載體的菌株。（5）請寫出利用大腸桿菌M檢測水體是否被毒物污染的實驗思路，并預(yù)期實驗結(jié)果及結(jié)論。實驗思路：。預(yù)期實驗結(jié)果及結(jié)論：。10．轉(zhuǎn)基因技術(shù)可以改善作物品質(zhì)、提高作物產(chǎn)量，減少農(nóng)藥使用量，在解決糧食需求和保障農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展等方面發(fā)揮重要作用。但是轉(zhuǎn)基因技術(shù)存在種子公司轉(zhuǎn)基因技術(shù)的專利保護問題，還存在外源基因通過花粉和種子等途徑在種群之間漂移擴散、帶來生態(tài)安全隱患以及人們對轉(zhuǎn)基因食品安全性擔(dān)憂的問題?？茖W(xué)家采用葉綠體轉(zhuǎn)基因、“終結(jié)者”種子、“外源基因清除”技術(shù)試圖解決上述問題。（1）轉(zhuǎn)基因技術(shù)能按照人們的愿望，賦予生物新的，創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品。從技術(shù)操作層面看，轉(zhuǎn)基因技術(shù)是在DNA分子水平上進行的設(shè)計和施工，其核心步驟是。（2）“終結(jié)者”種子技術(shù)是通過植入“終結(jié)者基因”，阻滯種子胚胎后期發(fā)育，最后得到成熟但不育的種子?！敖K結(jié)者”種子技術(shù)在一定程度上解決了轉(zhuǎn)基因技術(shù)存在的問題，但危害到了農(nóng)民自行留種的權(quán)利，也不能消除人們對轉(zhuǎn)基因食品安全性的擔(dān)憂。（3）“外源基因清除”技術(shù)將“外源基因清除”調(diào)控組件與基因表達載體的必備組件重組后構(gòu)建出新的基因表達載體轉(zhuǎn)入受體細胞中表達，待外源基因完成相應(yīng)的功能后，“外源基因清除”調(diào)控組件將全部外源基因從花粉、種子和果實等特定器官中徹底清除?！巴庠椿蚯宄闭{(diào)控組件由“特定器官特異啟動子、重組酶（FLP）基因和融合識別位點（LF）”構(gòu)成，LF是利用噬菌體的Cre/LoxP系統(tǒng)和酵母的FLP/FRT系統(tǒng)創(chuàng)造出的融合識別位點。FLP基因在適當(dāng)?shù)臅r間和空間表達后，重組酶FLP可識別融合識別位點LF并在L與F之間完成切割，從而將兩個融合識別位點之間的序列在特定時期從特定植物器官的細胞基因組中全部清除。其技術(shù)原理如圖所示：圖中基因表達載體的必備組件包括。通過插入不同的，以決定在不同器官中表達重組酶，從而將相應(yīng)器官中的某些基因序列從基因組中徹底清除，按需獲得不含外基因的種子、果實等。請在答題卡方框中填寫重組酶發(fā)揮清除作用后剩余的序列組合。

2025年高考生物復(fù)習(xí)之小題狂練300題（解答題）：現(xiàn)代生物技術(shù)及應(yīng)用（10題）參考答案與試題解析一．解答題（共10小題）1．黑水虻是重要的資源昆蟲，體內(nèi)H基因編碼的抗菌肽HI﹣3具有抗菌、抗癌和免疫調(diào)節(jié)作用?？蒲腥藛T利用酵母菌生產(chǎn)抗菌肽HI﹣3，并避免基因污染。請回答下列問題：（1）利用PCR技術(shù)擴增H基因，需根據(jù)H基因設(shè)計兩種引物，引物的作用有ABC。A．為Taq酶提供結(jié)合位點B．決定擴增產(chǎn)物大小C．決定反應(yīng)的特異性D．決定變性時間（2）已知H基因編碼鏈的編碼區(qū)序列是：5′﹣CTCGAGATGCTGCAG………GGATCCTC﹣TAGA﹣3′，擴增H基因的編碼區(qū)段時，結(jié)合到編碼鏈上的引物序列是5'﹣TCTAGAGG﹣3'（方向為5′→3′，寫出5′端8個堿基序列）。獲得H基因產(chǎn)物后需要進行凝膠電泳，將符合要求的條帶切割和回收以便提取純化并進行測序。（3）由于抗菌肽HI﹣3會損傷酵母細胞，組成型表達（持續(xù)表達）H基因的酵母菌最大種群數(shù)量偏低，限制了最終產(chǎn)量?？蒲腥藛T通過構(gòu)建誘導(dǎo)型啟動子來降低抗菌肽HI﹣3對酵母菌的傷害。在酵母菌基因組DNA中插入P和S基因，使質(zhì)粒上H基因的表達受紅光控制。紅光調(diào)控H基因表達的原理如圖1所示。P和S基因表達應(yīng)為組成型表達（從“組成型表達”“紅光誘導(dǎo)型表達”選填）。紅光調(diào)控H基因表達的原理是S基因指導(dǎo)合成的S蛋白直接與啟動子Jub結(jié)合，P基因表達的P蛋白在紅光調(diào)控下，與結(jié)合在啟動子上的S蛋白結(jié)合，啟動H基因的表達過程。（4）發(fā)酵后菌體和產(chǎn)物分離是發(fā)酵工藝的基本環(huán)節(jié)。定位于細胞表面的F蛋白可使酵母細胞彼此結(jié)合，進而沉淀在發(fā)酵罐底部。科研人員引入藍光激活系統(tǒng)如圖2，在酵母菌基因組中插入了兩個均能合成E蛋白的基因（E1、E2），使F基因的表達受到藍光控制如圖3。圖3中E2基因持續(xù)性表達少量的E蛋白時，酵母細胞具有接受藍光刺激的能力，E1基因的作用是藍光照射后，快速表達大量E蛋白，進而激活F基因的表達。（5）制藥過程中需避免工程菌泄露到環(huán)境中引發(fā)基因污染?？蒲腥藛T利用兩種阻遏蛋白基因（T和L）和調(diào)控元件，使酵母細胞在紅光和藍光同時照射時才激活致死基因N的表達，進而誘導(dǎo)工程菌死亡，如圖4。若圖中①選用的啟動子為Jub，②處選用的啟動子為CYC，則③④處結(jié)合的阻遏蛋白分別為T蛋白、L蛋白。（6）請結(jié)合上述分析，利用該工程菌發(fā)酵生產(chǎn)抗菌肽HI﹣3各階段需控制的光照條件是：Ⅰ菌種培養(yǎng)階段黑暗；Ⅱ菌種發(fā)酵階段紅光照射；Ⅲ產(chǎn)物分離階段藍光照射；Ⅳ安全處理階段紅光、藍光同時照射?！究键c】基因工程的操作過程綜合；DNA片段的擴增與電泳鑒定．【專題】圖文信息類簡答題；基因工程．【答案】（1）ABC（2）5'﹣TCTAGAGG﹣3'切割和回收（3）組成型表達紅光調(diào)控下，與結(jié)合在啟動子上的S蛋白結(jié)合（4）藍光照射后，快速表達大量E蛋白，進而激活F基因的表達（5）T蛋白、L蛋白（6）黑暗紅光照射藍光照射【分析】基因工程技術(shù)的基本步驟：（1）目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸熘蝎@取、利用PCR技術(shù)擴增和人工合成。（2）基因表達載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標(biāo)記基因等，標(biāo)記基因可便于目的基因的鑒定和篩選。（3）將目的基因?qū)胧荏w細胞：根據(jù)受體細胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛毎姆椒ㄓ修r(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱游锛毎钣行У姆椒ㄊ秋@微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛毎姆椒ㄊ歉惺軕B(tài)細胞法。（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因——DNA分子雜交技術(shù)。②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA——分子雜交技術(shù)。③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)——抗原﹣抗體雜交技術(shù)。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等?！窘獯稹拷猓海?）引物是一小段能與DNA母鏈的一段堿基序列互補配對的短單鏈核酸，引物之間或引物內(nèi)部不能互補配對，用于PCR的引物長度通常為20﹣30個核苷酸，引物使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸，提供了DNA聚合酶所需的3'端（末端），即為Taq酶提供結(jié)合位點，引物的長度和位置決定了PCR擴增產(chǎn)物的大小，引物的設(shè)計基于已知的目標(biāo)DNA序列，決定反應(yīng)的特異性，ABC正確。故選：ABC。（2）引物是一小段能與DNA母鏈的一段堿基序列互補配對的短單鏈核酸，已知H基因編碼鏈的編碼區(qū)序列是：5'﹣CTCGAGATGCTGCAG………GGATCCTC﹣TAGA﹣3'，擴增H基因的編碼區(qū)段時，結(jié)合到編碼鏈上的引物序列是5'﹣TCTAGAGG﹣3'；獲得H基因產(chǎn)物后需要進行凝膠電泳，將符合要求的條帶切割和回收以便提取純化并進行測序。（3）由圖可知，P和S基因的表達不需要其他物誘導(dǎo)，因此屬于組成型表達，H基因?qū)儆诩t光誘導(dǎo)型表達；由圖可知，在沒有紅光誘導(dǎo)時，S基因指導(dǎo)合成的S蛋白直接與啟動子Jub結(jié)合，紅光調(diào)控下，P基因指導(dǎo)合成的P蛋白與結(jié)合在啟動子上的S蛋白結(jié)合，啟動H基因的表達（轉(zhuǎn)錄）過程。（4）依據(jù)題意可知，科研人員引入藍光激活系統(tǒng)目的是激活F基因表達產(chǎn)生F蛋白，使酵母細胞彼此結(jié)合，進而沉淀在發(fā)酵罐底部，與CYC相連的E1基因的作用是接受照射藍光后，快速表達大量E蛋白，進而激活F基因的表達。（5）依據(jù)題干可知，啟動子Jub接受紅光的誘導(dǎo)調(diào)控，啟動子CYC接受藍光的誘導(dǎo)調(diào)控，③和④為阻遏蛋白的結(jié)合位點，其與阻遏蛋白結(jié)合后會抑制相關(guān)基因的表達。致死基因N的表達會誘導(dǎo)工程菌死亡，若①選用的啟動子為Jub，②處啟動子為CYC，在紅光和藍光同時照射時，紅光調(diào)控Jub啟動子啟動T基因表達出T蛋白，結(jié)合在③處，抑制了L基因的表達，④處無L阻遏蛋白與之結(jié)合，在藍光調(diào)控下，CYC啟動N基因的表達而使酵母菌死亡，故③④分別是T蛋白、L蛋白。（6）根據(jù)題目信息，紅光照射使產(chǎn)物增多，藍光照射使產(chǎn)物凝集，紅藍光同時照射使工程菌死亡，I菌種培養(yǎng)階段應(yīng)在黑暗條件下培養(yǎng)至種群數(shù)量達到最適，Ⅱ菌種發(fā)酵階段紅光照射至抗菌肽HI﹣3在培養(yǎng)液中達到適宜濃度，II產(chǎn)物分離階段藍光照射至工程菌凝集，回收發(fā)酵產(chǎn)物；IV安全處理階段紅光藍光同時照射，殺死工程菌。故答案為：（1）ABC（2）5'﹣TCTAGAGG﹣3'切割和回收（3）組成型表達紅光調(diào)控下，與結(jié)合在啟動子上的S蛋白結(jié)合（4）藍光照射后，快速表達大量E蛋白，進而激活F基因的表達（5）T蛋白、L蛋白（6）黑暗紅光照射藍光照射【點評】本題主要考查的是基因工程的操作的相關(guān)知識，意在考查學(xué)生對基礎(chǔ)知識的理解掌握，難度適中。2．研究發(fā)現(xiàn)，人溶菌酶（hLZ）是天然抗生素替代品?？茖W(xué)家培育出轉(zhuǎn)入溶菌酶基因山羊，以大規(guī)模生產(chǎn)人溶菌酶（從乳汁中提?。^程如圖所示，其中編號①～⑨表示過程。請回答下列問題：（1）圖中轉(zhuǎn)基因山羊生產(chǎn)人溶菌酶運用了基因工程、PCR技術(shù)、早期胚胎培養(yǎng)、胚胎移植等（至少填3項）現(xiàn)代生物工程技術(shù)。（2）過程①使用PCR技術(shù)在體外擴增hLZ基因，擴增時需要2種引物。過程③形成重組質(zhì)粒需要的限制酶是BclⅠ和HindⅢ。（3）將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入山羊成纖維細胞后，篩選出含重組質(zhì)粒的山羊胎兒成纖維細胞，用到的質(zhì)粒S中標(biāo)記基因為四環(huán)素抗性基因。⑥過程未受精的卵母細胞去核過程中，去除的“核”實際上是紡錘體﹣染色體復(fù)合物。（4）過程⑧體外培養(yǎng)得到早期胚胎，應(yīng)在桑葚/囊胚時期進行胚胎的移植。此外，移植前要進行性別鑒定和遺傳病篩選等，要從胚胎的滋養(yǎng)層細胞取樣。為檢測過程⑨得到的轉(zhuǎn)基因山羊是否成功，最簡單的方法是檢測轉(zhuǎn)基因山羊乳汁中是否含有人溶菌酶?！究键c】基因工程在農(nóng)牧、醫(yī)療、食品等方面的應(yīng)用；動物細胞核移植技術(shù)；體外受精和胚胎移植；DNA片段的擴增與電泳鑒定．【專題】圖文信息類簡答題；胚胎工程．【答案】（1）基因工程、PCR技術(shù)、早期胚胎培養(yǎng)、胚胎移植（2）2BclⅠ和HindⅢ（3）四環(huán)素抗性基因紡錘體﹣染色體復(fù)合物（4）桑葚/囊胚滋養(yǎng)層檢測轉(zhuǎn)基因山羊乳汁中是否含有人溶菌酶【分析】分析題圖可知，過程①通過PCR技術(shù)擴增物質(zhì)A，過程②為對目的基因進行切割，過程③為基因表達載體的構(gòu)建過程，過程④表示將重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體細胞的過程，過程⑤為攝取山羊胎兒的成纖維細胞核，過程⑥為對未受精的卵母細胞去核，過程⑦為構(gòu)成重組細胞，過程⑧為早期胚胎培養(yǎng)，過程⑨為胚胎移植?！窘獯稹拷猓海?）由題圖可知，圖中轉(zhuǎn)基因山羊生產(chǎn)人溶菌酶運用了基因工程，PCR技術(shù)、早期胚胎培養(yǎng)、胚胎移植等現(xiàn)代生物工程技術(shù)。（2）在利用PCR技術(shù)擴增目的基因時，由于DNA聚合酶只能從3′端延伸DNA鏈，用兩種引物才能確保DNA兩條鏈同時被擴增，則題圖過程①使用PCR技術(shù)在體外擴增hLZ基因，擴增時需要兩種引物。過程③為基因表達載體的構(gòu)建過程，由題圖質(zhì)粒S和B中的限制酶種類可知，選用BclⅠ和HindⅢ分別對質(zhì)粒S和B進行酶切。（3）由題圖質(zhì)粒S和B中的限制酶種類可知，選用BclⅠ和HindⅢ分別對質(zhì)粒S和B進行酶切，則將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入山羊成纖維細胞后，篩選出含重組質(zhì)粒的山羊胎兒成纖維細胞，用到的質(zhì)粒S中標(biāo)記基因為四環(huán)素抗性基因。減數(shù)分裂Ⅱ中期（MⅡ期）卵母細胞中的“核”其實是紡錘體﹣染色體復(fù)合物；⑥過程未受精的卵母細胞去核過程中，去除的“核”實際上是紡錘體﹣染色體復(fù)合物。（4）過程⑧體外培養(yǎng)得到早期胚胎，應(yīng)在桑葚胚或囊胚階段才能進行移植。此外，移植前要進行性別鑒定和遺傳病篩選等，要從胚胎的滋養(yǎng)層細胞取樣。為檢測過程⑨得到的轉(zhuǎn)基因山羊是否成功，最簡單的方法是檢測轉(zhuǎn)基因山羊乳汁中是否含有人溶菌酶。故答案為：（1）基因工程、PCR技術(shù)、早期胚胎培養(yǎng)、胚胎移植（2）2BclⅠ和HindⅢ（3）四環(huán)素抗性基因紡錘體﹣染色體復(fù)合物（4）桑葚/囊胚滋養(yǎng)層檢測轉(zhuǎn)基因山羊乳汁中是否含有人溶菌酶【點評】本題考查胚胎工程的相關(guān)知識，意在考查學(xué)生的識記能力和判斷能力，具備運用所學(xué)知識綜合分析問題的能力是解答本題的關(guān)鍵。3．“中天楊”是由我國科學(xué)家采用生物轉(zhuǎn)基因技術(shù)，歷經(jīng)8年時間培育成功的抗鹽堿、耐干旱的楊樹新品種。該品種以八里莊楊為實驗材料，經(jīng)轉(zhuǎn)mtl﹣D基因培育獲得。如圖為培育“中天楊”的操作流程，①～⑥表示操作過程，該過程中可能用到的限制酶如表所示?；卮鹣铝袉栴}。注：Ti質(zhì)粒中的Tetr為四環(huán)素抗性基因，Ampr為氨節(jié)青霉素抗性基因。限制酶BclⅠEcoRⅠXbaⅠSau3AⅠBamHⅠ切割位點T↓GATCAG↓AATTCT↓CTAGA↓GATCG↓GATCC（1）與雜交育種相比，基因工程育種的優(yōu)點有②③④（填序號）。①操作方法簡便②目的性強，能定向改造生物性狀③育種周期短④不受生殖隔離限制，能克服遠緣雜交不親和障礙⑤安全性高，對生態(tài)沒有威脅（2）過程①需要的酶是逆轉(zhuǎn)錄酶和耐高溫的DNA聚合酶，過程②需要的工具酶是限制酶和DNA連接酶。（3）采用PCR技術(shù)擴增目的基因時，在PCR反應(yīng)體系中需加入引物，引物的作用是使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸，若目的基因擴增3代，則共用引物14個。PCR完成以后，常采用瓊脂糖凝膠電泳法來鑒定PCR的產(chǎn)物。（4）培育轉(zhuǎn)基因楊樹的核心工作是基因表達載體的構(gòu)建，在進行該工作時，應(yīng)在mtl﹣D基因的兩側(cè)添加限制酶XbaⅠ、BclⅠ的識別序列。（5）將目的基因?qū)胧荏w細胞除圖示方法外，還有花粉管通道法。為了確認目的基因在植物細胞中是否成功表達，從分子水平通常使用抗原—抗體雜交法進行檢測?！究键c】基因工程的操作過程綜合．【專題】圖文信息類簡答題；基因工程．【答案】（1）②③④（2）逆轉(zhuǎn)錄酶和耐高溫的DNA聚合酶限制酶和DNA連接酶（3）使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸14瓊脂糖凝膠電泳（4）基因表達載體的構(gòu)建XbaⅠ、BclⅠ（5）花粉管通道法抗原—抗體雜交【分析】基因工程的基本操作步驟主要包括四步：①目的基因的獲?。虎诨虮磉_載體的構(gòu)建；③將目的基因?qū)胧荏w細胞；④目的基因的檢測與表達。其中，基因表達載體的構(gòu)建是基因工程的核心?！窘獯稹拷猓海?）與雜交育種相比，基因工程育種的操作方法較復(fù)雜，容易造成基因污染進而對生態(tài)產(chǎn)生威脅，但基因工程育種的目的性強，能定向改變生物性狀，且育種周期短，不受生殖隔離限制，能克服遠緣雜交不親和障礙。（2）過程①以RNA為模板合成DNA并進行PCR，該過程需要逆轉(zhuǎn)錄酶和耐高溫的DNA聚合酶。過程②是將目的基因與Ti質(zhì)粒進行連接，需要限制酶切割目的基因和Ti質(zhì)粒，然后利用DNA連接酶將二者進行連接。（3）采用PCR技術(shù)擴增目的基因時，在PCR反應(yīng)體系中需加入引物，引物的作用是使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸，若目的基因擴增3代，則共用引物14個。PCR完成以后，常采用瓊脂糖凝膠電泳法來鑒定PCR的產(chǎn)物。（4）基因表達載體的構(gòu)建是基因工程的核心工作，在進行基因表達載體的構(gòu)建時，據(jù)題意可知，BamHⅠ和EcoRⅠ會破壞復(fù)制原點和標(biāo)記基因，不能選用，選用Sau3AⅠ也會導(dǎo)致復(fù)制原點和標(biāo)記基因，因此需要用XbaⅠ、BclⅠ切割質(zhì)粒，應(yīng)選擇兩種限制酶切割目的基因和Ti質(zhì)粒，因此需要在mtl﹣D基因的兩側(cè)添加限制酶XbaⅠ、BclⅠ的識別序列。（5）圖中利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因?qū)胧荏w細胞，除此方法外，還有花粉管通道法等。為了確認目的基因在植物細胞中是否成功表達，通常用抗原—抗體雜交法從分子水平進行檢測。故答案為：（1）②③④（2）逆轉(zhuǎn)錄酶和耐高溫的DNA聚合酶限制酶和DNA連接酶（3）使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸14瓊脂糖凝膠電泳（4）基因表達載體的構(gòu)建XbaⅠ、BclⅠ（5）花粉管通道法抗原—抗體雜交【點評】本題考查基因工程基本操作程序的相關(guān)知識，意在考查考生理解所學(xué)知識的要點，把握知識間的內(nèi)在聯(lián)系、分析題意以及解決問題的能力。4．如圖為單克隆抗體制備流程示意圖。據(jù)圖回答問題：（1）給小鼠注射抗原后使其產(chǎn)生分泌相應(yīng)抗體的B淋巴細胞準(zhǔn)確地說是一種漿細胞，此過程屬于特異性免疫中的體液免疫。（2）制備單克隆抗體過程中要用到動物細胞培養(yǎng)和細胞融合技術(shù)，利用這種方法所得的雜交瘤細胞的主要特點是既能產(chǎn)生特定的抗體，也能無限增殖。（3）在進行細胞培養(yǎng)時，一般會出現(xiàn)貼壁生長和接觸抑制現(xiàn)象；培養(yǎng)液通常含有葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素、促生長因子等營養(yǎng)物質(zhì)，此外還要加入動物血清或血漿；培養(yǎng)時要向培養(yǎng)液中通入95%的空氣和5%的CO2的混合氣體，其中通入空氣的原因是氧氣為細胞代謝必需物質(zhì)。（4）細胞融合是隨機的過程，在HAT培養(yǎng)基中培養(yǎng)，目的是篩選出雜交瘤細胞，而為選育出能產(chǎn)生高特異性抗體的細胞，要將從HAT培養(yǎng)基上篩選出的細胞稀釋到7～10個細胞/mL，每孔滴入0.1mL細胞稀釋液，其目的是使每個孔內(nèi)不多于一個細胞，以達到單克隆培養(yǎng)的目的?！究键c】單克隆抗體及其應(yīng)用．【專題】圖文信息類簡答題；克隆技術(shù)．【答案】（1）漿（或效應(yīng)B）體液（2）既能產(chǎn)生特定的抗體，也能無限增殖（3）接觸抑制動物血清或血漿氧氣為細胞代謝必需物質(zhì)（或答保證細胞能夠進行有氧呼吸）（4）篩選出雜交瘤細胞使每個孔內(nèi)不多于一個細胞，以達到單克隆培養(yǎng)的目的（或篩選出雜交瘤細胞單一細胞培養(yǎng)以保證抗體的純度）【分析】單克隆抗體制備流程：先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應(yīng)，之后從小鼠脾臟中獲取已經(jīng)免疫的B淋巴細胞；誘導(dǎo)B細胞和骨髓瘤細胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞；進行抗體檢測，篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細胞；進行克隆化培養(yǎng)，即用培養(yǎng)基培養(yǎng)和注入小鼠腹腔中培養(yǎng)；最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體?！窘獯稹拷猓海?）能夠產(chǎn)生抗體的細胞是漿細胞；漿細胞是體液免疫過程中產(chǎn)生的。（2）制備單克隆抗體過程中要用到動物細胞培養(yǎng)和細胞融合技術(shù)，利用這種方法所得的雜交瘤細胞的主要特點是既能產(chǎn)生特定的抗體（由特定的漿細胞產(chǎn)生），也能無限增殖（骨髓瘤細胞）。（3）在進行細胞培養(yǎng)時，一般會出現(xiàn)貼壁生長和接觸抑制（細胞生長到相互接觸時，生長受抑制）現(xiàn)象；培養(yǎng)液通常含有葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素、促生長因子等營養(yǎng)物質(zhì)，此外還要加入動物血清或血漿，以保證能正常生長；培養(yǎng)時要向培養(yǎng)液中通入95%的空氣和5%的CO2的混合氣體，其中通入空氣的原因是氧氣為細胞代謝必需物質(zhì)。（4）細胞融合是隨機的過程，在HAT培養(yǎng)基中培養(yǎng)，目的是篩選出雜交瘤細胞，原因是在該培養(yǎng)基上未融合的細胞和同種融合的細胞都死亡；為選育出能產(chǎn)生高特異性抗體的細胞，要將從HAT培養(yǎng)基上篩選出的細胞稀釋到7～10個細胞/mL，每孔滴入0.1mL細胞稀釋液，其目的是使每個孔內(nèi)不多于一個細胞，以達到單克隆培養(yǎng)的目的（或篩選出雜交瘤細胞單一細胞培養(yǎng)以保證抗體的純度）。故答案為：（1）漿（或效應(yīng)B）體液（2）既能產(chǎn)生特定的抗體，也能無限增殖（3）接觸抑制動物血清或血漿氧氣為細胞代謝必需物質(zhì)（或答保證細胞能夠進行有氧呼吸）（4）篩選出雜交瘤細胞使每個孔內(nèi)不多于一個細胞，以達到單克隆培養(yǎng)的目的（或篩選出雜交瘤細胞單一細胞培養(yǎng)以保證抗體的純度）【點評】本題主要考查單克隆抗體的制備以及應(yīng)用的相關(guān)知識，意在考查學(xué)生對基礎(chǔ)知識的理解掌握，難度適中。5．米諾環(huán)素（分子式：C23H27N3O7）是一種四環(huán)素類抗生素，一般用于人類疾病治療和畜禽養(yǎng)殖。米諾環(huán)素進入人體或動物體內(nèi)后不能完全被吸收，其進入環(huán)境后會在環(huán)境中殘留，造成環(huán)境污染。某研究人員在自然水域中通過篩選和分離得到了一種米諾環(huán)素高效降解菌DM13，并對該菌進行了相關(guān)研究。如表是相關(guān)過程中使用的培養(yǎng)基種類及培養(yǎng)基配方，回答下列問題。培養(yǎng)基種類配方BPM培養(yǎng)基蛋白胨5.0g、牛肉膏3.0g、氯化鈉5.0g，蒸餾水定容至1000mLBPMA培養(yǎng)基蛋白胨5.0g、牛肉膏3.0g、氯化鈉5.0g、瓊脂25.0g，蒸餾水定容至1000mL無機鹽培養(yǎng)基MgSO4?7H2O0.15g、FeSO4?7H2O0.01g、CaCl20.02g、KH2PO41g、Na2HPO41g、NH4NO31g、葡萄糖0.5g，蒸餾水定容至1000mL（1）培養(yǎng)基的配制：按配方通過計算、稱量、溶解等步驟配制培養(yǎng)基，培養(yǎng)基經(jīng)高壓蒸汽滅菌后使用。（2）擴大培養(yǎng)：在BPM培養(yǎng)基中添加一定濃度的米諾環(huán)素溶液，對采集的水樣中的微生物進行選擇培養(yǎng)，該物質(zhì)可以為微生物生長提供碳源、氮源。（3）分離高效降解菌：用平板劃線法或稀釋涂布平板法接種經(jīng)上述選擇培養(yǎng)得到的微生物，該步驟選擇的培養(yǎng)基為BPMA（填“BPM”“BPMA”或“無機鹽”）培養(yǎng)基。（4）測定降解效果：為了測定菌株DM13在自然水體中降解米諾環(huán)素的效果，應(yīng)該用自然水體中的水配制四種不同初始質(zhì)量濃度的米諾環(huán)素溶液。進行實驗：①8h處理后，在米諾環(huán)素溶液初始質(zhì)量濃度為100μg/L的水體中，空白對照組測得的米諾環(huán)素溶液質(zhì)量濃度為41.8μg/L，加入菌株DM13的實驗組測得的質(zhì)量濃度為24.3μg/L，相較于空白對照組，米諾環(huán)素降解菌DM13的降解率為41.9%（用百分數(shù)表示，保留一位小數(shù)）。②為了測定菌株DM13的實際降解效果，可選擇表中的無機鹽培養(yǎng)基替換自然水體，這樣做的目的是排除自然水體中其他微生物的影響?！究键c】微生物的選擇培養(yǎng)（稀釋涂布平板法）．【專題】表格數(shù)據(jù)類簡答題；微生物的分離、培養(yǎng)和應(yīng)用．【答案】（1）高壓蒸汽（2）米諾環(huán)素溶液；碳源、氮源（3）平板劃線法或稀釋涂布平板；BPMA（4）自然水體中的水；41.9%；排除自然水體中其他微生物的影響【分析】培養(yǎng)基是人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)；分為固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中一般含有水、碳源、氮源和無機鹽，其中碳源和氮源常采用蛋白胨和牛肉膏，因為它們來源于動物原料，含有糖、維生素和有機氮等營養(yǎng)物質(zhì)。在提供上述幾種主要營養(yǎng)物質(zhì)的基礎(chǔ)上，培養(yǎng)基還需要滿足微生物生長對特殊營養(yǎng)物質(zhì)和氧氣的要求?！窘獯稹拷猓海?）培養(yǎng)基常用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌。（2）分析題意可知，該步驟的目的是篩選并擴大培養(yǎng)能降解米諾環(huán)素的降解菌，故應(yīng)在BPM培養(yǎng)基中添加一定濃度的米諾環(huán)素溶液。米諾環(huán)素的分子式是C23H27N3O7由此可知其可為微生物的生長提供碳源和氮源。（3）分離高效降解菌時，接種方法可采用平板劃線法或稀釋涂布平板法，此時應(yīng)選用固體培養(yǎng)基，固體培養(yǎng)基中含有凝固劑瓊脂，故該步驟選擇的培養(yǎng)基為BPMA培養(yǎng)基。（4）分析題意，要測定菌株DM13在自然水體中降解米諾環(huán)素的效果，應(yīng)該用自然水體中的水配制四種不同初始質(zhì)量濃度的米諾環(huán)素溶液。①8h處理后，在米諾環(huán)素溶液初始質(zhì)量濃度為100ug/L的水體中，空白對照組測得的米諾環(huán)素溶液質(zhì)量濃度為41.8ug/L，加入菌株DMI3的實驗組測得的質(zhì)量濃度為24.3μgL，相較于空白對照組，米諾環(huán)素降解菌DM13的降解率為[（100﹣24.3）﹣（100﹣41.8）]÷41.8×100%≈41.9%。②為了測定菌株DM13的實際降解效果，應(yīng)選擇表中的無機鹽培養(yǎng)基替換自然水體，這樣可排除自然水體中其他微生物的影響。故答案為：（1）高壓蒸汽（2）米諾環(huán)素溶液；碳源、氮源（3）平板劃線法或稀釋涂布平板；BPMA（4）自然水體中的水；41.9%；排除自然水體中其他微生物的影響【點評】本題考查微生物培養(yǎng)的相關(guān)知識，意在考查學(xué)生的識記能力和判斷能力，運用所學(xué)知識綜合分析問題的能力是解答本題的關(guān)鍵。6．科研人員采用轉(zhuǎn)基因體細胞克隆技術(shù)獲得轉(zhuǎn)基因綿羊，以便通過乳腺生物反應(yīng)器生產(chǎn)人凝血因子IX醫(yī)用蛋白，其技術(shù)路線如圖。請據(jù)圖回答：（1）B代表的技術(shù)是核移植，C代表胚胎移植。由過程①獲得的A為含目的基因的表達載體，其組成成分一般包括啟動子、目的基因、終止子、標(biāo)記基因、復(fù)制原點等。（2）在B之前，D的操作是去掉受體卵母細胞的核，目的是保證核遺傳物質(zhì)來自含目的基因的成纖維細胞。受體應(yīng)選用減數(shù)第二次分裂中（或MⅡ）期的卵母細胞。（3）進行C時，應(yīng)該選擇身體健康的代孕母羊，并進行同期發(fā)情處理。由于代孕母羊?qū)σ迫胱訉m的重組胚胎基本上不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)，這為重組胚胎在代孕母羊體內(nèi)的存活提供了可能。（4）采用綿羊胎兒成纖維細胞進行轉(zhuǎn)基因體細胞克隆，理論上可獲得無數(shù)只轉(zhuǎn)基因綿羊，其原因是整合有目的基因的成纖維細胞可進行傳代培養(yǎng)。（5）由重組細胞到轉(zhuǎn)基因綿羊的培育成功，體現(xiàn)了動物細胞核的全能性?！究键c】體外受精和胚胎移植．【專題】圖文信息類簡答題；胚胎工程．【答案】（1）核移植胚胎移植含目的基因的表達載體啟動子、目的基因、終止子、標(biāo)記基因、復(fù)制原點等（2）去掉受體卵母細胞的核保證核遺傳物質(zhì)來自含目的基因的成纖維細胞減數(shù)第二次分裂中（或MⅡ）（3）同期發(fā)情免疫排斥反應(yīng)（4）整合有目的基因的成纖維細胞可進行傳代培養(yǎng)（5）動物細胞核的全能性【分析】動物核移植是將動物的一個細胞的細胞核，移入一個已經(jīng)去掉細胞核的卵母細胞中，使其重組并發(fā)育成一個新的胚胎，這個新的胚胎最終發(fā)育為動物個體。【解答】解：（1）B代表的技術(shù)是核移植，C代表胚胎移植。由過程①獲得的A為含目的基因的表達載體，其組成成分一般包括啟動子、目的基因、終止子、標(biāo)記基因、復(fù)制原點等。（2）在B核移植之前，D的操作是去掉受體卵母細胞的核，目的是保證核遺傳物質(zhì)來自含目的基因的成纖維細胞。受體應(yīng)選用減數(shù)第二次分裂中（或MⅡ）期的卵母細胞。（3）進行C胚胎移植時，應(yīng)該選擇身體健康的代孕母羊，并進行同期發(fā)情處理。由于代孕母羊?qū)σ迫胱訉m的重組胚胎基本上不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)，這為重組胚胎在代孕母羊體內(nèi)的存活提供了可能。（4）采用綿羊胎兒成纖維細胞進行轉(zhuǎn)基因體細胞克隆，理論上可獲得無數(shù)只轉(zhuǎn)基因綿羊，其原因是整合有目的基因的成纖維細胞可進行傳代培養(yǎng)。（5）由重組細胞到轉(zhuǎn)基因綿羊的培育成功，體現(xiàn)了動物細胞核的全能性。故答案為：（1）核移植胚胎移植含目的基因的表達載體啟動子、目的基因、終止子、標(biāo)記基因、復(fù)制原點等（2）去掉受體卵母細胞的核保證核遺傳物質(zhì)來自含目的基因的成纖維細胞減數(shù)第二次分裂中（或MⅡ）（3）同期發(fā)情免疫排斥反應(yīng)（4）整合有目的基因的成纖維細胞可進行傳代培養(yǎng)（5）動物細胞核的全能性【點評】本題主要考查的是胚胎工程的基本技術(shù)的相關(guān)知識，意在考查學(xué)生對基礎(chǔ)知識的理解掌握，難度適中。7．生物合成基因簇（BGC）是一類非常重要的基因集合類型。普遍存在于各類生物基因組中，并且發(fā)揮著重要的代謝和調(diào)控作用。CRISPR/Cas介導(dǎo)的切割可以發(fā)生在任意的DNA位點。阿卡波糖為一種新型口服降血糖藥，在腸道內(nèi)競爭性抑制葡萄糖甙酶，可降低多糖的分解，減緩吸收。已知阿卡波糖生物合成基因簇全長大約41kb，克隆阿卡波糖生物合成基因簇過程如圖所示。回答下列問題：（1）現(xiàn)在常用PCR技術(shù)快速特異性地擴增目的基因，利用該方法進行擴增時所需的引物需要滿足的條件是兩種引物分別與兩條模板鏈3'端的堿基序列互補配對。（2）圖1中Cas9酶能催化磷酸二酯鍵鍵水解，在構(gòu)建重組DNA時，通常選擇改造（填“改造”或“未改造”）的質(zhì)粒作為載體，經(jīng)過酶處理后形成重組DNA。為提高獲得重組DNA的效率，下列需要考慮的因素有ABCD（填序號）。A．適宜的外界條件B．目的基因簇和質(zhì)粒濃度C．DNA連接酶活性D．質(zhì)粒的純度（3）酵母菌的純培養(yǎng)一般采用馬鈴薯瓊脂（填培養(yǎng)基名稱）培養(yǎng)基。（4）步驟④進行篩選的方法是：抗藥性篩選法。【考點】基因工程的操作過程綜合；微生物的純培養(yǎng)．【專題】圖文信息類簡答題；基因工程．【答案】（1）PCR兩種引物分別與兩條模板鏈3'端的堿基序列互補配對（2）磷酸二酯鍵改造ABCD（3）馬鈴薯瓊脂（4）抗藥性篩選法【分析】基因工程技術(shù)的基本步驟：（1）目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸熘蝎@取、利用PCR技術(shù)擴增和人工合成。（2）基因表達載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標(biāo)記基因等。（3）將目的基因?qū)胧荏w細胞：根據(jù)受體細胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。（4）目的基因的檢測與鑒定?！窘獯稹拷猓海?）現(xiàn)在常用PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）技術(shù)快速特異性地擴增目的基因，利用該方法進行擴增時所需的引物需要滿足的條件是兩種引物分別與兩條模板鏈3'端的堿基序列互補配對。（2）解：由圖可示，圖中Cas9酶的作用是切割基因，基因的基本組成單位是脫氧核糖核苷酸，脫氧核糖核苷酸通過磷酸二酯鍵連接，因此它能催化磷酸二酯鍵的水解。在構(gòu)建重組DNA時，通常選擇改造的質(zhì)粒作為載體，以去除質(zhì)粒中一些不必要的限制酶酶切位點并添加部分抗性基因位點用于后續(xù)的篩選。構(gòu)建重組DNA時，除了考慮適宜的外界條件、目的基因和質(zhì)粒的濃度和DNA連接酶活性外，還需考慮質(zhì)粒的純度、黏性末端的種類和長短、DNA連接酶濃度，ABCD正確。故選：ABCD。（3）培養(yǎng)酵母菌的培養(yǎng)基一般采用馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基，因為微生物不能分利用瓊脂，加入瓊脂不會改變培養(yǎng)基營養(yǎng)成分。（4）④是將獲得的重組質(zhì)粒經(jīng)過富集培養(yǎng)后進行抗性篩選，目的是獲得含有目標(biāo)基因的重組質(zhì)粒。使用的方法是抗藥性篩選法，具體步驟是將含有目標(biāo)質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化菌株接種在含有安普霉素的培養(yǎng)基上，只有含有目標(biāo)質(zhì)粒的菌株才能生長并形成菌落，從而實現(xiàn)篩選。故答案為：（1）PCR兩種引物分別與兩條模板鏈3'端的堿基序列互補配對（2）磷酸二酯鍵改造ABCD（3）馬鈴薯瓊脂（4）抗藥性篩選法【點評】本題考查了基因工程的相關(guān)知識，意在考查考生理解所學(xué)知識要點，把握知識間內(nèi)在聯(lián)系的能力；能運用所學(xué)知識，對生物學(xué)問題作出準(zhǔn)確的判斷，難度適中。8．三白草和魚腥草是同科不同屬的兩種藥用植物，二者因療效相近且具有疊加效應(yīng)常被用作“藥對”?？蒲腥藛T將復(fù)方的配伍（兩種或兩種以上藥物配合使用）用到個體生長或生產(chǎn)過程，并實現(xiàn)有效成分的工廠化生產(chǎn)的具體操作如圖1，進一步研究不同的原生質(zhì)體密度對三白草和魚腥草原生質(zhì)體融合率的影響，結(jié)果如圖2。（1）圖1中①過程通過酶解法去除細胞壁獲取原生質(zhì)體，并向三白草和魚腥草細胞酶解液中分別加入紅、綠熒光色素（帶熒光色素的原生質(zhì)體仍能融合和再生）。過程②利用化學(xué)誘導(dǎo)劑聚乙二醇（PEG））誘導(dǎo)融合，隨后在熒光顯微鏡下選擇帶雙色的雜種原生質(zhì)體。（2）由圖2可知，促進三白草和魚腥草原生質(zhì)體融合的最適密度為1×106個/mL。（3）通常情況下，能增加免疫器官的重量表明該物質(zhì)具有一定的增強免疫力的作用。為判斷融合體對動物免疫力的影響，科研人員取同種小鼠30只，雌雄各半，隨機均分為三組，實驗處理如表。組別A組B組C組（空白對照組）實驗處理三白草和魚腥草雜種愈傷組織的蒸餾水提取物三白草和魚腥草直接混合后的蒸餾水提取物每天一次等量灌胃，連續(xù)一周，檢測各組小鼠的胸腺重量①表格中C組的實驗處理為加入等量的蒸餾水。②若實驗結(jié)果為A、B兩組小鼠的胸腺重量相同且都大于C組，則支持利用原生質(zhì)體融合技術(shù)將復(fù)方的配伍提前并實現(xiàn)有效成分的工廠化生產(chǎn)?！究键c】植物體細胞雜交技術(shù)及應(yīng)用．【專題】數(shù)據(jù)表格；植物的組織培養(yǎng)．【答案】（1）細胞壁聚乙二醇（PEG））雙色（2）1×106（3）①加入等量的蒸餾水②A、B兩組小鼠的胸腺重量相同且都大于C組【分析】植物體細胞雜交是指將不同種的植物體細胞，在一定條件下融合成雜種細胞，并把雜種細胞培育成新的植物體的技術(shù)。誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合的方法：物理法（離心、振動、電激等）和化學(xué)法（聚乙二醇等）?！窘獯稹拷猓海?）植物細胞壁的成分主要是纖維素和果膠，根據(jù)酶的專一性，可用纖維素酶和果膠酶去除植物細胞壁制備原生質(zhì)體；誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合的化學(xué)試劑是聚乙二醇（PEG）；由于向三白草和魚腥草細胞酶解液中分別加入紅、綠熒光色素（帶熒光色素的原生質(zhì)體仍能融合和再生），故要選擇雜交的細胞，應(yīng)選擇雙色的。（2）據(jù)圖分析，圖2中原生質(zhì)體密度在1×106個/mL時融合體百分比最高，說明促進三白草和魚腥草原生質(zhì)體融合的最適密度為1×106個/mL。（3）①分析題意，本實驗?zāi)康氖桥袛嗳诤象w對動物免疫力的影響，因為C組為對照組，因此根據(jù)對A、B兩組的處理，C組應(yīng)用等量的蒸餾水每天一次等量灌胃，連續(xù)一周。②若實驗結(jié)果為A、B兩組的胸腺重量相同且都大于C組，則支持利用原生質(zhì)體融合技術(shù)將復(fù)方的配伍提前并實現(xiàn)有效成分的工廠化生產(chǎn)。故答案為：（1）細胞壁聚乙二醇（PEG））雙色（2）1×106（3）①加入等量的蒸餾水②A、B兩組小鼠的胸腺重量相同且都大于C組【點評】題本主要考查植物組織體細胞雜交和免疫調(diào)節(jié)等相關(guān)知識，考查學(xué)生對基礎(chǔ)知識的理解與應(yīng)用，題目難度適中。9．毒物誘導(dǎo)型啟動子S在毒物誘導(dǎo)下可啟動轉(zhuǎn)錄。研究人員將PCR擴增得到的毒物誘導(dǎo)型啟動子S（如圖2，圖中箭頭表示轉(zhuǎn)錄方向）插入圖1載體的P區(qū)，構(gòu)建表達載體并轉(zhuǎn)入大腸桿菌，獲得能夠檢測水中毒物的大腸桿菌M?；卮鹣铝袉栴}：（1）基因中啟動子是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位。（2）切割質(zhì)粒載體最好用兩種限制酶，而啟動子S上不含有這些限制酶的酶切位點，需要在引物上添加。圖2中引物I、Ⅱ分別加入限制酶XhoⅠ、BamHⅠ的識別序列。（3）表達載體的P區(qū)有一段核苷酸序列為“5′﹣ATCTCGAGCGGG﹣3′”，則對該序列進行剪切的XhoⅠ（酶切后產(chǎn)生黏性末端）識別的核苷酸序列（6個核苷酸）最可能為5'一CTCGAG—3'。（4）用Ca2+處理大腸桿菌，便于轉(zhuǎn)入構(gòu)建好的表達載體。可以使用添加氨芐青霉素的培養(yǎng)基篩選轉(zhuǎn)入載體的菌株。（5）請寫出利用大腸桿菌M檢測水體是否被毒物污染的實驗思路，并預(yù)期實驗結(jié)果及結(jié)論。實驗思路：將大腸桿菌M加入待測水體，檢測待測水體是否發(fā)出綠色熒光。預(yù)期實驗結(jié)果及結(jié)論：若待測水體未發(fā)出綠色熒光，說明待測水體未被毒物污染；若待測水體發(fā)出綠色熒光，說明待測水體被毒物污染?！究键c】基因工程的操作過程綜合．【專題】圖文信息類簡答題；基因工程．【答案】（1）RNA聚合酶（2）XhoⅠ、BamHⅠ（3）5'一CTCGAG—3'（4）Ca2+氨芐青霉素（5）將大腸桿菌M加入待測水體，檢測待測水體是否發(fā)出綠色熒光若待測水體未發(fā)出綠色熒光，說明待測水體未被毒物污染；若待測水體發(fā)出綠色熒光，說明待測水體被毒物污染【分析】PCR技術(shù)：（1）概念：PCR全稱為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是一項在生物體外復(fù)制特定DNA的核酸合成技術(shù)。（2）原理：DNA雙鏈復(fù)制。（3）前提條件：要有一段已知目的基因的核苷酸序以便合成一對引物。（4）條件：模板DNA、四種脫氧核苷酸、ATP、一對引物、耐高溫的DNA聚合酶。（5）過程：高溫變性：DNA解旋過程（PCR擴增中雙鏈DNA解開不需要解旋酶，高溫條件下氫鍵可自動解開）；低溫復(fù)性：引物結(jié)合到互補鏈DNA上；中溫延伸：合成子鏈?！窘獯稹拷猓海?）基因中啟動子的作用是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，驅(qū)動基因的轉(zhuǎn)錄。（2）將所需的啟動子插入質(zhì)粒的P區(qū)，P區(qū)有XhoⅠ、EcoRⅠ和BamHⅠ四種限制酶，由于啟動子S內(nèi)部有EcoRⅠ的切割位點，故不能選擇EcoRⅠ，為使啟動子正確插入到質(zhì)粒上，需使用雙酶切的方法，故選用XhoⅠ、BamHⅠ兩種限制酶。根據(jù)啟動子到終止子的方向，則引物Ⅰ上添加XhoⅠ限制酶的識別序列，引物Ⅱ上添加BamHⅠ限制酶的識別序列。（3）限制酶切割DNA產(chǎn)生黏性末端，需兩條鏈都有識別位點（即識別片段兩條鏈序列成倒序），故推測該序列進行剪切的XhoⅠ識別的核苷酸序列（6個核苷酸）最可能為5'一CTCGAG—3'或3'一GAGCTC一5'。（4）用Ca2+處理農(nóng)桿菌，可使其成為感受態(tài)細胞，以便吸收周圍環(huán)境中的DNA分子。氨芐青霉素抗性基因為標(biāo)記基因，可使用添加氨芐青霉素的培養(yǎng)基篩選轉(zhuǎn)入載體的菌株。（5）毒物能誘導(dǎo)毒物誘導(dǎo)型啟動子S表達，若大腸桿菌M質(zhì)粒中的毒物誘導(dǎo)型啟動子S表達，可使大腸桿菌M的綠色熒光蛋白基因表達產(chǎn)生綠色熒光蛋白而發(fā)出綠色熒光，將大腸桿菌M加入待測水體，檢測加入待測水體是否發(fā)出綠色熒光來檢測水體是否被毒物污染。預(yù)期實驗結(jié)果及結(jié)論：若待測水體未發(fā)出綠色熒光，說明待測水體未被毒物污染；若待測水體發(fā)出綠色熒光，說明待測水體被毒物污染。故答案為：（1）RNA聚合酶（2）XhoⅠ、BamHⅠ（3）5'一CTCGAG—3'（4）Ca2+氨芐青霉素（5）將大腸桿菌M加入待測水體，檢測待測水體是否發(fā)出綠色熒光若待測水體未發(fā)出綠色熒光，說明待測水體未被毒物污染；若待測水體發(fā)出綠色熒光，說明待測水體被毒物污染【點評】本題主要考查的是基因工程的操作的相關(guān)知識，意在考查學(xué)生對基礎(chǔ)知識的理解掌握，難度適中。10．轉(zhuǎn)基因技術(shù)可以改善作物品質(zhì)、提高作物產(chǎn)量，減少農(nóng)藥使用量，在解決糧食需求和保障農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展等方面發(fā)揮重要作用。但是轉(zhuǎn)基因技術(shù)存在種子公司轉(zhuǎn)基因技術(shù)的專利保護問題，還存在外源基因通過花粉和種子等途徑在種群之間漂移擴散、帶來生態(tài)安全隱患以及人們對轉(zhuǎn)基因食品安全性擔(dān)憂的問題?？茖W(xué)家采用葉綠體轉(zhuǎn)基因、“終結(jié)者”種子、“外源基因清除”技術(shù)試圖解決上述問題。（1）轉(zhuǎn)基因技術(shù)能按照人們的愿望，賦予生物新的遺傳特性（或性狀），創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品。從技術(shù)操作層面看，轉(zhuǎn)基因技術(shù)是在DNA分子水平上進行的設(shè)計和施工，其核心步驟是構(gòu)建基因表達載體。（2）“終結(jié)者”種子技術(shù)是通過植入“終結(jié)者基因”，阻滯種子胚胎后期發(fā)育，最后得到成熟但不育的種子?！敖K結(jié)者”種子技術(shù)在一定程度上解決了轉(zhuǎn)基因技術(shù)存在的轉(zhuǎn)基因技術(shù)的專利保護（或外源基因通過種子擴散，帶來生態(tài)安全隱患）問題，但危害到了農(nóng)民自行留種的權(quán)利，也不能消除人們對轉(zhuǎn)基因食品安全性的擔(dān)憂。（3）“外源基因清除”技術(shù)將“外源基因清除”調(diào)控組件與基因表達載體的必備組件重組后構(gòu)建出新的基因表達載體轉(zhuǎn)入受體細胞中表達，待外源基因完成相應(yīng)的功能后，“外源基因清除”調(diào)控組件將全部外源基因從花粉、種子和果實等特定器官中徹底清除?！巴庠椿蚯宄闭{(diào)控組件由“特定器官特異啟動子、重組酶（FLP）基因和融合識別位點（LF）”構(gòu)成，LF是利用噬菌體的Cre/LoxP系統(tǒng)和酵母的FLP/FRT系統(tǒng)創(chuàng)造出的融合識別位點。FLP基因在適當(dāng)?shù)臅r間和空間表達后，重組酶FLP可識別融合識別位點LF并在L與F之間完成切割，從而將兩個融合識別位點之間的序列在特定時期從特定植物器官的細胞基因組中全部清除。其技術(shù)原理如圖所示：圖中基因表達載體的必備組件包括啟動子、目的基因、標(biāo)記基因、終止子。通過插入不同的特定器官特異啟動子，以決定在不同器官中表達重組酶，從而將相應(yīng)器官中的某些基因序列從基因組中徹底清除，按需獲得不含外基因的種子、果實等。請在答題卡方框中填寫重組酶發(fā)揮清除作用后剩余的序列組合?！究键c】基因工程的操作過程綜合．【專題】圖文信息類簡答題；基因工程．【答案】（1）遺傳特性（或性狀）構(gòu)建基因表達載體（2）轉(zhuǎn)基因技術(shù)的專利保護（或外源基因通過種子擴散，帶來生態(tài)安全隱患）（3）啟動子、目的基因、標(biāo)記基因、終止子特定器官特異啟動子【分析】基因工程是指按照人們的愿望，通過轉(zhuǎn)基因等技術(shù)，賦予生物新的遺傳特性，創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品。從技術(shù)操作層面看，由于基因工程是在DNA分子水平上進行設(shè)計和施工的，因此又叫作重組DNA技術(shù)?！窘獯稹拷猓海?）基因工程是指按照人們的愿望，通過轉(zhuǎn)基因等技術(shù)，賦予生物新的遺傳特性，創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品。從技術(shù)操作層面看，由于基因工程是在DNA分子水平上進行設(shè)計和施工的，因此又叫作重組DNA技術(shù)，其核心步驟是構(gòu)建基因表達載體。（2）“終結(jié)者”種子技術(shù)是通過植入“終結(jié)者基因”，阻滯種子胚胎后期發(fā)育，最后得到成熟但不育的種子，故就不能通過該種子擴散，避免了生態(tài)安全隱患問題。（3）基因表達載體的必備組件包括啟動子、目的基因、標(biāo)記基因、終止子，特定基因只能在特定器官中表達，因此清除不同器官中的外源基因時需要插入不同的特定器官特異啟動子。由題圖可知，特異啟動子驅(qū)動FLP基因表達產(chǎn)生重組酶，重組酶可以將“外源基因清除“調(diào)控組件將全部外源基因從花粉、種子和果實等特定器官中徹底清除，故剩余的序列為L﹣F﹣植物基因組。故答案為：（1）遺傳特性（或性狀）構(gòu)建基因表達載體（2）轉(zhuǎn)基因技術(shù)的專利保護（或外源基因通過種子擴散，帶來生態(tài)安全隱患）（3）啟動子、目的基因、標(biāo)記基因、終止子特定器官特異啟動子【點評】本題考查基因工程的相關(guān)知識，要求考生理解識記有關(guān)技術(shù)的原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細節(jié)，能將教材中的知識結(jié)合題中信息進行遷移應(yīng)用。

考點卡片1．微生物的純培養(yǎng)【知識點的認識】（1）由單一個體繁殖所獲得的微生物群體，稱為純培養(yǎng)物，獲得純培養(yǎng)物的過程就是純培養(yǎng)。微生物的純培養(yǎng)步驟有配置培養(yǎng)基、滅菌、接種、分離、培養(yǎng)等。（2）微生物常見的接種的方法：A、平板劃線法：把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細胞用接種環(huán)在平板培養(yǎng)基，通過分區(qū)劃線稀釋而得到較多獨立分布的單個細胞，經(jīng)培養(yǎng)后生長繁殖成單菌落，通常把這種單菌落當(dāng)作待分離微生物的純種。B、稀釋涂布平板法：將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進行培養(yǎng)。在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個細胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落?！久}方向】下列有關(guān)微生物的純培養(yǎng)、分離及計數(shù)的敘述，正確的是（）A．培養(yǎng)基配方中都含有碳源、氮源、水、無機鹽及瓊脂等成分B．用纖維素為唯一氮源的培養(yǎng)基可以選擇分離出尿素分解菌C．用稀釋涂布平板法統(tǒng)計的樣品活菌數(shù)目往往與實際數(shù)目多D．平板劃線法通過連續(xù)劃線將聚集的菌種分散，但不宜用于計數(shù)分析：微生物常見的接種的方法：（1）平板劃線法：把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細胞用接種環(huán)在平板培養(yǎng)基，通過分區(qū)劃線稀釋而得到較多獨立分布的單個細胞，經(jīng)培養(yǎng)后生長繁殖成單菌落，通常把這種單菌落當(dāng)作待分離微生物的純種。（2）稀釋涂布平板法：將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進行培養(yǎng)。在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個細胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落。解答：A、培養(yǎng)基配方中一般都含有碳源、氮源、水、無機鹽等成分，瓊脂是制作固體培養(yǎng)基所需要的凝固劑，A錯誤；B、用纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基可以選擇分離出纖維素分解菌，用尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基可以選擇分離出尿素分解菌，B錯誤；C、利用稀釋涂布平板法計數(shù)時，當(dāng)兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的是一個菌落，所以統(tǒng)計結(jié)果比活菌實際數(shù)目低，C錯誤；D、平板劃線法通過連續(xù)劃線將聚集的菌種分散，但平板劃線法不能對微生物進行計數(shù)，D正確。故選：D。點評：本題主要考查的是培養(yǎng)基的配制、微生物的純培養(yǎng)以及微生物的數(shù)量測定的相關(guān)知識，意在考查學(xué)生對基礎(chǔ)知識的理解掌握，難度適中?！窘忸}思路點撥】掌握微生物的純培養(yǎng)的相關(guān)知識是解題的關(guān)鍵。2．微生物的選擇培養(yǎng)（稀釋涂布平板法）【知識點的認識】土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)：1．分離菌株的思路（1）自然界中目的菌株的篩選①依據(jù)：根據(jù)它對生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找。②實例：PCR技術(shù)過程中用到的耐高溫的TaqDNA聚合酶，就是從熱泉中篩選出來的Taq細菌中提取出來的。（2）實驗室中目的菌株的篩選①原理：人為提供有利于目的菌株生長的條件（包括營養(yǎng)、溫度．pH等），同時抑制或阻止其他微生物生長。培養(yǎng)基選擇分解尿素的微生物的原理：培養(yǎng)基的氮源為尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作為氮源．缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生長發(fā)育繁殖，而受到抑制，所以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出分解尿素的微生物。②方法：能合成脲酶的細菌才能分解尿素．配制以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基，能夠生長的細菌就是能分解尿素的細菌。2．統(tǒng)計菌落數(shù)目的方法（1）稀釋涂布平板法（間接）①當(dāng)樣品的稀釋庋足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。②通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)來推測樣品中大約含有的活菌數(shù)。（2）利用顯微鏡直接計數(shù)3．分解尿素的細菌的鑒定細菌合成的脲酶將尿素分解成氨，氨會使培養(yǎng)基的堿性增強．在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑培養(yǎng)細菌，若指示劑變紅，可確定該種細菌能夠分解尿素。4．實驗流程土壤取樣→樣品的稀釋→將稀釋液涂布到以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基上→挑選能生長的菌落→鑒定?！久}方向】自生固氮菌是土壤中能獨立固定空氣中氮氣的細菌，科研人員進行了土壤中自生固氮菌的分離和固氮能力測定的研究，部分實驗流程如圖所示。下列敘述正確的是（）A.培養(yǎng)自生固氮菌時，可用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，接種完成后培養(yǎng)皿應(yīng)倒置B.該純化培養(yǎng)的方法是稀釋涂布平板法，統(tǒng)計細菌數(shù)量時通常會低于真實值C.步驟①獲取土壤一般來自深層土壤，為防止其他雜菌污染可對獲取土壤滅菌處理D.若④的平板上菌落平均數(shù)為58個，則每克土壤中含有的固氮菌約5.8×105個分析：培養(yǎng)基是人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)；分為固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中一般含有水、碳源、氮源和無機鹽，其中碳源和氮源常采用蛋白胨和牛肉膏，因為它們來源于動物原料，含有糖、維生素和有機氮等營養(yǎng)物質(zhì)。在提供上述幾種主要營養(yǎng)物質(zhì)的基礎(chǔ)上，培養(yǎng)基還需要滿足微生物生長對特殊營養(yǎng)物質(zhì)和氧氣的要求。解答：A、培養(yǎng)自生固氮菌時，一般不需要添加氮源，而牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基含有氮源，A錯誤；B、該純化培養(yǎng)的方法是稀釋涂布平板法，由于多個細菌連在一起時長出來的是單個菌落，因此統(tǒng)計細菌數(shù)量時通常會低于真實值，B正確；C、步驟①獲取土壤一般來自淺層土壤，對土壤滅菌處理時也殺死了固氮菌，C錯誤；D、10g土壤加到90mL無菌水后，稀釋了10倍，在④中相當(dāng)于稀釋了104倍，若在④的平板上統(tǒng)計的菌落的平均數(shù)量為58個，則每克土壤中含有的固氮菌為58÷0.1×104＝5.8×106個，D錯誤。故選：B。點評：本題主要考查微生物培養(yǎng)的相關(guān)知識，難度適中?！窘忸}思路點撥】掌握稀釋涂布平板法的相關(guān)步驟，結(jié)合題干進行分析解答3．植物體細胞雜交技術(shù)及應(yīng)用【知識點的認識】（1）植物體細胞雜交技術(shù)：將不同來源的植物體細胞，在一定條件下融合成雜種細胞，并把雜種細胞培育成新的植物體的技術(shù)。（2）去除植物細胞壁，獲得原生質(zhì)體的方法：酶解法（纖維素酶和果膠酶處理）。（3）誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合的方法：物理法：電融合法、離心法；化學(xué)法：聚乙二醇（PEG）融合法、高Ca2+_高pH融合法。（4）植物體細胞雜交的原理原生質(zhì)體融合的過程利用了細胞膜的流動性，雜種細胞發(fā)育成雜種植株利用了植物細胞的全能性。（5）植物體細胞雜交的意義打破生殖隔離，克服了遠緣雜交育種，培育植物新品種。【命題方向】擬矮牽牛的原生質(zhì)體在X培養(yǎng)基（A）上只能形成小細胞團，不能形成植株，在含放線菌素﹣D的X培養(yǎng)基（B）上培養(yǎng)結(jié)果相同；矮牽牛的原生質(zhì)體在A上能分化成植株，但在B上不能生長。在A、B上利用植物體細胞雜交技術(shù)均可培養(yǎng)出可育雜種矮牽牛。下列說法錯誤的是（）A．酶解法制備原生質(zhì)體時，應(yīng)在等滲或稍微高滲溶液中進行B．只有雜種細胞能在B上形成植株C．獲得的雜種矮牽牛可育，說明擬矮牽牛和矮牽牛屬于同一物種D．植物體細胞雜交技術(shù)應(yīng)用的原理是細胞膜的流動性和植物細胞的全能性分析：植物體細胞雜交的具體過程：解答：A、酶解法去壁制備原生質(zhì)體應(yīng)在等滲或略高滲透壓的溶液中進行，防止原生質(zhì)體在低滲溶液中會吸水漲破，A正確；B、根據(jù)題干信息“擬矮牽牛的原生質(zhì)體在X培養(yǎng)基（A）上只能形成小細胞團，不能形成植株，在含放線菌素﹣D的X培養(yǎng)基（B）上培養(yǎng)結(jié)果相同；矮牽牛的原生質(zhì)體在A上能分化成植株，但在B上不能生長”，說明只有雜種細胞能在含放線菌素﹣D的X培養(yǎng)基上形成植株，B正確；C、通過植物體細胞雜交獲得的雜種矮牽牛，不論擬矮牽牛和矮牽牛是否屬于同一物種，雜種矮牽牛都可育，C錯誤；D、植物體細胞雜交技術(shù)利用了細胞膜的流動性和植物細胞的全能性的原理，D正確。故選：C。點評：本題考查植物體細胞雜交的相關(guān)知識，要求考生識記植物體細胞雜交的具體過程及意義，能結(jié)合所學(xué)的知識準(zhǔn)確判斷各選項?！窘忸}思路點撥】4．單克隆抗體及其應(yīng)用【知識點的認識】1、抗體：一個B淋巴細胞只分泌一種特異性抗體．從血清中分離出的抗體產(chǎn)量低、純度低、特異性差．2、單克隆抗體的制備（1）制備產(chǎn)生特異性抗體的B淋巴細胞：向免疫小鼠體內(nèi)注射特定的抗原，然后從小鼠脾內(nèi)獲得相應(yīng)的B淋巴細胞（2）獲得雜交瘤細胞①將鼠的骨髓瘤細胞與脾細胞中形成的B淋巴細胞融合；②用特定的選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞，該雜種細胞既能夠增殖又能產(chǎn)生抗體．（3）克隆化培養(yǎng)和抗體檢測（4）將雜交瘤細胞在體外培養(yǎng)或注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖（5）提取單克隆抗體：從細胞培養(yǎng)液或小鼠的腹水中提取3、單克隆抗體的應(yīng)用（1）作為診斷試劑，具有準(zhǔn)確、高效、簡易、快速的優(yōu)點．（2）用于治療疾病和運載藥物．5．動物細胞核移植技術(shù)【知識點的認識】體細胞核移植過程（以克隆高產(chǎn)奶牛為例）：【命題方向】如圖為核移植實驗過程示意圖，根據(jù)圖示分析，下列敘述錯誤的是（）A．胚胎和動物細胞的培養(yǎng)均需提供95%的O2和5%的CO2B．核移植技術(shù)的基礎(chǔ)是動物細胞培養(yǎng)C．受體動物超數(shù)排卵后為胚胎提供了相同的生理環(huán)境D．成年動物細胞核移植成功率比胚胎細胞核移植成功率低分析：1、將動物的一個細胞的細胞核移入一個已經(jīng)去掉細胞核的卵母細胞中，使其重組并發(fā)育成一個新的胚胎，這個新的胚胎最終發(fā)育成動物個體。用核移植的方法得到的動物稱為克隆動物。原理是動物細胞的細胞核具有全能性。2、體細胞核移植過程（以克隆高產(chǎn)奶牛為例）：解答：A、胚胎和動物細胞的培養(yǎng)均需提供95%的空氣（有利于細胞呼吸，進行正常代謝活動）和5%的CO2（維持培養(yǎng)液的pH），A錯誤；B、體細胞核移植需要對移植后的動物細胞進行培養(yǎng)，因此基礎(chǔ)是動物細胞培養(yǎng)，B正確；C、受體動物進行同期發(fā)情處理后為胚胎提供了相同的生理環(huán)境，C錯誤；D、由于分化程度不同，即胚胎細胞的分化程度低于體細胞，因此成年動物細胞核移植成功率比胚胎細胞核移植成功率低，D正確。故選：AC。點評：本題考查細胞核移植技術(shù)，要求考生識記細胞核移植技術(shù)的概念、過程、類型及應(yīng)用，能結(jié)合所學(xué)的知識準(zhǔn)確答題?！窘忸}思路點撥】掌握動物細胞核移植技術(shù)的相關(guān)知識是解題的關(guān)鍵。6．體外受精和胚胎移植【知識點的認識】胚胎移植（1）胚胎移植是指將雌性動物的早期胚胎，或者通過體外受精及其它方式得到的胚胎，移植到同種的、生理