T-GDAAV 1112-2024 馬間充質干細胞制備技術規(guī)范

馬間充質干細胞制備技術規(guī)范Technicalspecificationforthepreparationo 2 3 4 4 4 4 4 4 5 5 5 5 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 7 7 7 7 7 7 8 8 8 8 8 9 本文件由佛山科學技術學院、廣東省畜牧獸醫(yī)本文件起草單位：維賽（佛山）生物科技有限公司、佛山科學技本文件主要起草人：王丙云、詹小舒、李東升、陳勝鋒、李星穎、阮慧敏、葉彩方法治療效果較差、恢復時間長并且常復發(fā)，給賽馬業(yè)帶來了巨大的經濟損失。間充質干細胞CD90和CD105等表面標志物，而缺乏CD19、CD34、CD45和動物或人類疾病的最佳種子細胞。馬的間充質干細胞的產品標準化，制訂馬間充質干細胞生產標準的團體要求很有STR：短串聯(lián)重復序列（ShortTandem5.1.2應建立供體細胞采集的供體馬評估與篩選標準、采集方法、運輸標準和交接標準，保證動真菌、細菌、支原體、內毒素、EIV和JEV應為陰性。5.3.1擴增、凍存、復蘇等過程控制應符7m）注意事項。A.1供體馬篩選標準A.1.2健康狀況篩查：供體馬應由專業(yè)獸醫(yī)進行全面的健康評估，包括體格檢，血液檢查，并且A.1.3品種和遺傳背景：供體馬的品種信A.1.4心理和行為特征篩查：供體馬應具有良好的心理和行為特征。挑選溫順，易駕馭的馬作為A.2.3組織采集技術：根據(jù)目的間充質干細胞來源的不同，選擇合適的組織采集技術，例如皮下脂肪、脊髓和產后廢棄組織應選用不一樣的手術采集方法。手術全程遵循無菌原則。A.2.3供體馬術后護理：術后應對供體馬應進行體溫，行為和身體狀況等進行監(jiān)測；傷口需定期A.3馬組織器官運輸和交接標準運輸過程保證組織溫度保持在4℃~8℃,并于6h內將組織樣品運送至實驗室進行間充質干細胞分A.3.2交接標準：制定詳細的交接文件，記錄供體馬的身份信息收集待檢測細胞，用磷酸鹽緩沖液（B.2.1）配制細胞懸液，稀釋至合適的濃度。每個血球計格（即80個小格）計數(shù)。當遇到位于大格線上的計算兩次計數(shù)細胞倍增時間結果的平均值，記為細胞倍增C.2.2牛血清白蛋白（BSA純度≥98%。C.2.5按照相應要求使用電子天平（B.1.3）配制流式檢測所需的液體：洗滌液、抗體洗滌液和標記后的樣品于2℃~8℃保存。相關抗體遵照說明書保存。首先根據(jù)細胞大小和顆粒度設門圈出目標細胞分群1，排除死細胞和其他雜細胞，然后根據(jù)得到的檢測結果用軟件綜合分析，具體參考其軟件根據(jù)附錄A方法測定，計算馬間充質干細胞懸液活細胞濃度。按（1使用水平離心機（F.1.3）離心收集馬間充質干細胞于離心管中，用無菌磷酸鹽緩沖液輕輕重使用水平離心機（G.1.3）離心收集細胞于離心管中，用無菌磷酸鹽緩沖液輕輕重懸細胞，避使用水平離心機（H.1.3）離心收集細胞于離心管中，用無菌磷酸鹽緩沖液輕輕重懸細胞，避根據(jù)附錄A方法測定，使用血球計數(shù)板（H.1.1）及明使用水平離心機（