T-GDSF 0003-2024 花鱸苗種質量檢驗技術規(guī)范

GDSFSpecificationforexaminationofqualityinspectionforseedingsofspotted本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)定本文件主要起草人：王鵬飛、邱麗華、趙超，1花鱸苗種質量檢驗技術規(guī)范GB/T18654.3養(yǎng)殖魚類種質檢驗第3部分：性狀測定4.3可數(shù)指標4,4疫病按照GB/T18654.3規(guī)定的方法5.3.1全長、體重合格率檢驗25.3.2畸形、傷殘率檢驗5.4疫病檢驗錄A和附錄B。采用PCR方法檢測花鱸苗種是否攜帶真鯛虹彩病毒，詳見附錄6.2抽樣方法3行腦組織RNA提取。采用商品化cDNA合成試劑盒將提取的腦組織RNA逆轉錄為cDNA，用于PCR擴增。無癥狀的魚最多15尾為1個樣品，有癥狀的魚每1尾A.3.1設置對照中提取的RNA所逆轉錄的cDNA、或純化的NNVRNA所逆轉錄的cDNA；陰性對照為從未感染NNV的健康魚組）；）；），將轉錄好的NNVcDNA進行第一輪PCR擴A.4結果判定陽性對照滿足第一輪PCR擴增在1017bp附近有特異性目的條帶或第二輪PC樣品的第一輪PCR擴增在1017bp附近有特異性目的條帶，或第二輪PCR擴增在777bp附近有特異性），樣品的第一輪PCR擴增在1017bp附近無特異性目的條帶，且第二輪PCR擴增在777bp附近無特異性41ATGGTACGCAAAGGTGAGAAGAAATTGGCAAAACCCGCG61CAACCCCGCCGACGTGCTAACAATCGTCGGCGTAGTAACCGCACTGACGCA121AAGGCCTCGACTGTGACCGGATTTGGACGTGGGACCAAT181TCGAGAATCTCCCAGGCCGTCCTCCCAGCCGGGACAGGA241GACGCAACCATCGTCCCCGACCTCCTGCCACGACTGGGACACGCTGCTAG301CGATACGCTGTTGAAACACTGGAGTTTGAAATTCAGCCAATGTGCCCCGC361GGTGGTTACGTTGCTGGCTTCCTGCCTGATCCAACTGACAACGACCACAC421CTTCAAGCAACTCGTGGTGCAGTCGTTGCCAAATGGTGGGAAAGCAGAACAGTC481CAGTACACCCGCACGCTCCTCTGGACCTCGTCGGGAAAGGAGCAGCGTCTCATG541GGTCGGCTGATACTCCTGTGTGTCGGCAACAACACTGATGTGGTCAACGT601TGTCGCTGGAGTGTTCGACTGAGCGTTCCATCTCTTGAGACACCTGAGGAG661CCCATCATGACACAAGGTTCCCTGTACAACGATTCCCTTTCCACAAATGAC721ATCCTCCTAGGATCCACACCACTGGACATTGCCCCTGATGGAGCAGTCT781CGTCCGCTGTCCATTGACTACAGCCTTGGAACTGGAGATGTTGATCGAG841CACCTCAAGAAGTTTGCTGGAAATGCTGGCACACCTGCAGGCTGGTTTCGCT901TGGGACAACTTCAACAAGACGTTCACAGATGGCGTTGCCTACTACTCTGATG961CGTCAAATCCTGCTGCCTGTTGGCACTGTCTGCACCAGGGTTGACTCG1AGCCGGGACAGGAACAGACGGATACGTTGTTGTTGACGC61GCCACGACTGGGACACGCTGCTAGAATCTTCCAGCGATACGCTGTTGAAAC121TGAAATTCAGCCAATGTGCCCCGCAAACACGGGCGGTGG181TGATCCAACTGACAACGACCACACCTTCGACGCGCTTCA241TGCCAAATGGTGGGAAAGCAGAACAGTCCGACCCCAGTACACCCGCACGC301CTCGTCGGGAAAGGAGCAGCGTCTCATGTCACCTGGTCGGCTGATACTC361CAACAACACTGATGTGGTCAACGTGTCAGTACTGTGTCGCTGGAGTGTTC421TCCATCTCTTGAGACACCTGAGGAGACAACCGCTCCCATCATGACACAAGGTTC481CAACGATTCCCTTTCCACAAATGACTTCAAGTCCATCCTCCTAGGATCCACACC541CATTGCCCCTGATGGAGCAGTCTTCCAGCTGGACCGTCCGCTGTCCATTG601TGGAACTGGAGATGTTGATCGAGCTGTCTATTGGCACCTCAAGAAGTTTGC661TGGCACACCTGCAGGCTGGTTTCGCTGGGGCATCTGGGACAACTTCAACAA721AGATGGCGTTGCCTACTACTCTGATGAGCAGCCCCGTCAAATCCT5引物IV-F1和IV-R1是第一輪PCR引物，目的產(chǎn)物大小為570bp；引物IV-F2在PCR擴增過程中，應設立陽性對照、陰性對照和空白對照。陽性對照為從確定感染RSIV的病魚組）；），將提取好的組織DNA同時用引物對IV-F1/R1和IV-F2/R2進行PCR擴增，程序為：95℃陽性對照PCR擴增在570bp附近有特異性目的條帶，同時陰性對照和空白擴增在567bp附近有特異性目的條帶，判定檢測結果為樣品攜帶R擴增在567bp附近無特異性目的條帶，判定檢測結果樣品攜帶傳染性脾腎壞死病毒（ISKNV），而帶RSIV。IV-F1/R1及IV-F2/R2擴增的序列61CTCAAACACTCTGGCTCATCTATGTCATCGTAGTCGTCC61AGCAGTGTAGGCGGTGGAGTAACATTATCGGLGTCTGTTGGCAGCTCACAT121ACACAAGGCTGACTGTCAGATGAGATGCGGCLGGCGTGG181TGAGGTTTCAGCTTGATGACAGACAAGATGGTACCGTCA241AGGACTTCACTGCTGTTGCGGCCTACATGGACCACCTCGCCATGTACAAC301AAGAGGCTGTTGCTGTCGCTTGACCAAACAATCTTCACATCCGTCTCTCG361CAGCTGAGGGTGGTCGTCTGGTTGTCGATTTCCAGGTTATAGAAGGTGGT421CACGCCACAGTCAGCAACAGAAGAAGTAGCAGGGTCGCCATTGCTCATGTAGCT481CACAGTAGTCACCTATGACATGAGGATATTCAAAATTTTTATACAAGTAAAAGA541CTGTGCTTGAGATAGGAGAT1CGGGGGCAATGACGACTACATACTGCGGCCGCAAGCTGA61TCAAGACGGTGGTGGGCGCTACCATTGTGTACGGCGACACCGACTCATGCT121TGGGCCACGACCGCGCATCACTCGATGAACTGTGGCAGA181CTGTGTCGGCCTTCTTTGAGCGCCCGGTGCGCCTCGAGT241AGTTCATCATCTTCACCAAGAAACGTTATGTGTACAGGGCATTCACACGC301AGCGAACAGGCAGCAAGGGTGTCATGTTGTCCAGACGTGACAGCGCCATG361ACACGTATGCAGC