2025年高考生物復(fù)習(xí)新題速遞之基因工程（2024年9月）

第1頁(yè)（共1頁(yè)）2025年高考生物復(fù)習(xí)新題速遞之基因工程（2024年9月）一．選擇題（共18小題）1．關(guān)于“DNA的粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn)，下列說法錯(cuò)誤的是（）A．過濾液沉淀過程在4℃冰箱中進(jìn)行是為了防止DNA降解 B．DNA既溶于2mol/LNaCl溶液也溶于蒸餾水 C．粗提取的DNA中含有核蛋白、多糖等雜質(zhì) D．將粗提取的DNA溶于2mol/LNaCl溶液中，加入二苯胺試劑DNA被染成藍(lán)色2．大腸桿菌經(jīng)溶菌酶和洗滌劑處理后，擬核DNA就會(huì)纏繞在細(xì)胞壁碎片上，靜置一段時(shí)間，質(zhì)粒分布在上清液中，利用上述原理可初步獲得質(zhì)粒DNA。用三種限制酶處理提取的產(chǎn)物，電泳結(jié)果如圖所示。下列關(guān)于質(zhì)粒的粗提取和鑒定的敘述不正確的是（）A．提取DNA時(shí)可加入酒精，使溶于酒精的蛋白質(zhì)等物質(zhì)溶解 B．將提取的DNA溶于2mol/LNaCl溶液后；可用二苯胺試劑進(jìn)行鑒定 C．電泳鑒定DNA利用了DNA在電場(chǎng)中會(huì)向著它所帶電荷相反的電極移動(dòng)的原理 D．根據(jù)電泳結(jié)果，質(zhì)粒上一定沒有限制酶Ⅰ和Ⅱ的切割位點(diǎn)，而有限制酶Ⅲ的切割位點(diǎn)3．某同學(xué)擬用限制酶（酶1、酶2、酶3和酶4）、DNA連接酶為工具，將目的基因（兩端含相應(yīng)限制酶的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)）和質(zhì)粒進(jìn)行切割、連接，以構(gòu)建重組表達(dá)載體。限制酶的切割位點(diǎn)如圖所示，下列分析合理的是（）A．可選擇酶3切割質(zhì)粒和目的基因，再用E.coliDNA連接酶連接 B．可選擇酶2和酶4切割質(zhì)粒和目的基因，再用E.coliDNA連接酶連接 C．可選擇酶2切割質(zhì)粒、酶4切割目的基因，再用E.coliDNA連接酶連接，連接后的片段仍能被酶2和酶4切割 D．為了讓重組表達(dá)載體的構(gòu)建合理且高效，可用酶1和酶2切割質(zhì)粒和目的基因，再用T4DNA連接酶連接4．將馬鈴薯胰蛋白酶抑制劑基因PinⅡ?qū)霔顦浼?xì)胞，培育成了抗蟲楊樹。如圖表示含目的基因的DNA分子和農(nóng)桿菌質(zhì)粒，圖中Ampr表示氨芐青霉素抗性基因，Neor表示新霉素抗性基因，箭頭表示識(shí)別序列完全不同的幾種限制酶的切割位點(diǎn)。下列敘述正確的是（）A．用圖中的限制酶構(gòu)建重組質(zhì)粒無(wú)法確定目的基因的插入方向 B．可以用TthⅢ和BamHⅠ對(duì)目的基因和載體雙酶切構(gòu)建重組載體 C．成功導(dǎo)入重組質(zhì)粒的細(xì)胞會(huì)表現(xiàn)為不抗氨芐青霉素、抗新霉素 D．通過PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)目的基因成功導(dǎo)入楊樹細(xì)胞中即成功培育了抗蟲楊樹5．dNTP（包括dATP、dTTP、dGTP、dCTP）的結(jié)構(gòu)與ATP類似，除堿基不同外，dNTP含有脫氧核糖。與dNTP相比，ddNTP的五碳糖為雙脫氧核糖，其3'碳位為﹣H且不能與磷酸形成化學(xué)鍵?，F(xiàn)有甲～丁四個(gè)PCR反應(yīng)體系，甲體系中含有放射性磷標(biāo)記的ddATP（記作ddATP+）和DNA模板鏈。PCR完成后，經(jīng)電泳（分子量小的DNA在電場(chǎng)中移動(dòng)快）將甲體系中一組長(zhǎng)度不等的DNA單鏈分離。丙、乙、丁三個(gè)PCR體系與甲相似，分別用于檢測(cè)T、C、G的堿基序列，檢測(cè)結(jié)果如圖。下列說法正確的是（）A．ddATP+中的放射性磷酸基團(tuán)應(yīng)位于ddATP的末端 B．甲體系中除含ddATP+外，還應(yīng)含有dTTP、dGTP、dCTP C．新?lián)饺朊撗鹾塑账嵬ㄟ^磷酸二酯鍵連接在子鏈的5′端 D．模板DNA的堿基序列為3'CTGGACTGACAT5′6．BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ三種限制酶的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)依次為5′﹣G↓GATCC﹣3′、5′↓GATC﹣3′、5′﹣CCC↓GGG﹣3′。如圖表示某DNA片段的部分堿基序列，已知其余序列不含這三種限制酶的識(shí)別序列。下列敘述正確的是（）A．若用SmaⅠ完全切割該DNA，則其產(chǎn)物的長(zhǎng)度為634bp、896bp、758bp B．若虛線方框內(nèi)的堿基對(duì)被T﹣A替換，則用SmaⅠ完全切割該DNA可產(chǎn)生3種片段 C．若用MboⅠ和BamHⅠ切割DNA，可形成相同的黏性末端 D．用SmaⅠ切割DNA產(chǎn)生的片段，可用E.coliDNA連接酶重新將其連接7．水中E物質(zhì)污染會(huì)導(dǎo)致魚類雌性化異常。將綠色熒光蛋白（GFP）基因、Gal4蛋白基因等轉(zhuǎn)入斑馬魚，可用于監(jiān)測(cè)水體E物質(zhì)，如圖中ERE和UAS是兩種誘導(dǎo)型啟動(dòng)子，分別被E物質(zhì)﹣受體復(fù)合物和Gal4蛋白特異性激活，啟動(dòng)下游基因表達(dá)。下列敘述錯(cuò)誤的是（）A．根據(jù)題意可知斑馬魚的某些細(xì)胞存在E物質(zhì)的受體 B．用ERE直接驅(qū)動(dòng)GFP基因表達(dá)可提高監(jiān)測(cè)的靈敏度 C．用于監(jiān)測(cè)E物質(zhì)污染的轉(zhuǎn)基因斑馬魚最好是不育的 D．基因表達(dá)載體最好以顯微注射法導(dǎo)入斑馬魚受精卵8．科研人員將寒帶地區(qū)海魚中的抗凍基因轉(zhuǎn)入千禧果細(xì)胞中，成功培育出抗凍千禧果。如圖為培育過程中使用的Ti質(zhì)粒示意圖，其中Vir區(qū)的基因活化能促進(jìn)T﹣DNA的加工和轉(zhuǎn)移，下列敘述正確的是（）A．構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，最好選擇限制酶Ⅱ和Ⅲ來切割質(zhì)粒 B．利用PCR擴(kuò)增抗凍基因，需提前檢測(cè)抗凍基因的全部堿基序列 C．Vir區(qū)的基因活化促進(jìn)抗凍基因整合到千禧果細(xì)胞的染色體DNA上 D．利用含卡那霉素的培養(yǎng)基可篩選出成功導(dǎo)入抗凍基因的千禧果細(xì)胞9．為了對(duì)重金屬污染的土壤進(jìn)行生物修復(fù)，研究者將從楊樹中克隆的重金屬轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（HMA3）基因與外源高效啟動(dòng)子連接，導(dǎo)入楊樹基因組中（如圖）。為檢測(cè)獲得的轉(zhuǎn)基因楊樹苗中是否含有導(dǎo)入的HMA3基因，同時(shí)避免內(nèi)源HMA3基因的干擾，在進(jìn)行PCR擴(kuò)增時(shí)，應(yīng)選擇的引物組合是（）（注：①、②、③、④表示引物）A．①+③ B．①+② C．③+② D．③+④10．蛋白質(zhì)工程開創(chuàng)了按照人類意愿改造、創(chuàng)造符合人類需要的蛋白質(zhì)的新時(shí)代。如通過蛋白質(zhì)工程，將干擾素結(jié)構(gòu)上的兩個(gè)半胱氨酸改為絲氨酸，就可以使其保存半年，而活性不受影響。下列關(guān)于蛋白質(zhì)工程的敘述，正確的是（）A．蛋白質(zhì)工程的操作流程與中心法則的方向相同 B．蛋白質(zhì)工程需要改造或合成蛋白質(zhì)的編碼基因 C．對(duì)干擾素的改造無(wú)需考慮其空間結(jié)構(gòu) D．蛋白質(zhì)工程需要改變蛋白質(zhì)分子的所有氨基酸序列11．為了構(gòu)建可以直接利用纖維素發(fā)酵的釀酒酵母工程菌，研究人員構(gòu)建基因表達(dá)載體（如圖所示），并導(dǎo)入不能合成尿嘧啶的酵母菌。下列相關(guān)分析不正確的是（）A．尿嘧啶合成基因可以作為表達(dá)載體上的標(biāo)記基因 B．該方法需利用限制酶和DNA連接酶實(shí)現(xiàn)目的基因與載體的連接 C．?dāng)U增目的基因時(shí)應(yīng)在引物的5′端添加與線性化載體兩端相同的DNA序列 D．在以纖維素為唯一碳源的液體培養(yǎng)基中檢測(cè)酒精含量確定工程菌發(fā)酵效果12．“篩選”是生物技術(shù)與工程中常用的技術(shù)手段。下列敘述錯(cuò)誤的是（）A．培育轉(zhuǎn)基因抗蟲棉時(shí)，需從分子水平及個(gè)體水平進(jìn)行篩選 B．制備單克隆抗體時(shí)，需從分子水平篩選能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞 C．胚胎移植前，需對(duì)通過體外受精或其他方式得到的胚胎進(jìn)行質(zhì)量篩選 D．單倍體育種時(shí)，需對(duì)F1的花藥進(jìn)行篩選后才可繼續(xù)進(jìn)行組織培養(yǎng)13．科學(xué)家利用蛋白質(zhì)工程技術(shù)將水蛭素（一種可用于預(yù)防和治療血栓的蛋白質(zhì)）第47位的天冬酰胺替換為賴氨酸，顯著提高了它的抗凝血活性，流程圖如圖。已知天冬酰胺對(duì)應(yīng)的密碼子為AAU、AAC，賴氨酸對(duì)應(yīng)的密碼子為AAA、GUA等。下列敘述錯(cuò)誤的是（）A．圖中的操作流程是從預(yù)期的水蛭素功能出發(fā)的 B．在這項(xiàng)替換研究中目前可行的直接操作對(duì)象是基因 C．如圖中大分子物質(zhì)a和b的單體序列均是唯一的 D．用蛋白質(zhì)工程可生產(chǎn)基因工程所不能生產(chǎn)的蛋白質(zhì)14．反轉(zhuǎn)錄PCR又稱逆轉(zhuǎn)錄PCR（RT﹣PCR），是以mRNA為模板進(jìn)行的特殊PCR，過程如圖。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）A．圖示過程需要控制溫度，否則可能得不到產(chǎn)物 B．RT﹣PCR技術(shù)中，不需已知mRNA的全部序列 C．過程③中子鏈沿著模板鏈的5′→3′方向延伸 D．RT﹣PCR技術(shù)可應(yīng)用于是否被RNA病毒感染的檢測(cè)15．人類γ基因啟動(dòng)子上游的調(diào)控序列中含有BCL11A蛋白結(jié)合位點(diǎn)，該位點(diǎn)結(jié)合BCL11A蛋白后，γ基因的表達(dá)被抑制。通過改變?cè)摻Y(jié)合位點(diǎn)的序列，解除對(duì)基因表達(dá)的抑制，可對(duì)某種地中海貧血癥進(jìn)行基因治療?？蒲腥藛T擴(kuò)增了γ基因上游不同長(zhǎng)度的片段（Fn與R），將這些片段分別插入表達(dá)載體中進(jìn)行轉(zhuǎn)化和熒光檢測(cè)，以確定BCL11A蛋結(jié)合位點(diǎn)的具體位置。相關(guān)信息如圖所示。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）A．為將擴(kuò)增后的產(chǎn)物定向插入載體，指導(dǎo)熒光蛋白基因表達(dá)，需用MunⅠ和XhoⅠ處理載體 B．從產(chǎn)物擴(kuò)增到載體構(gòu)建完成的整個(gè)過程需構(gòu)建7種載體 C．將構(gòu)建的載體導(dǎo)入去除BCL11A基因的受細(xì)胞，可能出現(xiàn)含F(xiàn)1與R擴(kuò)增產(chǎn)物的受體細(xì)胞無(wú)熒光，而含F(xiàn)2﹣F7與R擴(kuò)增產(chǎn)物的受體細(xì)胞有熒光 D．向培養(yǎng)液中添加適量的雌激素，可導(dǎo)致部分受體細(xì)胞不再有熒光16．蘇云金桿菌能產(chǎn)生具有殺蟲能力的Bt毒素蛋白。如圖是一種轉(zhuǎn)Bt毒素蛋白基因棉花的重組DNA形成過程示意圖，下列敘述錯(cuò)誤的是（）A．可通過設(shè)計(jì)特異性引物，利用PCR技術(shù)特異性獲取和擴(kuò)增Bt毒素蛋白基因 B．經(jīng)過①②得到的重組質(zhì)粒，目的基因轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)物可能不同 C．取棉花葉片組織與重組Ti質(zhì)粒共培養(yǎng)，經(jīng)組織培養(yǎng)并篩選后可獲得抗蟲棉 D．可用相應(yīng)抗體進(jìn)行抗原﹣抗體雜交，檢測(cè)Bt毒素蛋白基因是否成功表達(dá)17．現(xiàn)代生物技術(shù)造福人類的同時(shí)也能引起安全和倫理問題，下列說法恰當(dāng)?shù)氖牵ǎ〢．在動(dòng)物克隆技術(shù)發(fā)展初期進(jìn)行生殖性克隆人的研究 B．全面禁止轉(zhuǎn)基因微生物研究以免用于制造生物武器 C．為挽救患病的孩子可取用嬰兒的造血干細(xì)胞或器官 D．對(duì)于轉(zhuǎn)基因生物產(chǎn)品實(shí)施標(biāo)識(shí)，供消費(fèi)者自主選擇18．人們利用生物技術(shù)對(duì)生物體進(jìn)行不同層次的設(shè)計(jì)、控制、改造或模擬，產(chǎn)生巨大生產(chǎn)力的同時(shí)，也帶來了多種涉及安全和倫理的問題。下列相關(guān)敘述，正確的是（）A．如果確實(shí)有證據(jù)表明某種轉(zhuǎn)基因食品有害，就應(yīng)該禁止轉(zhuǎn)基因技術(shù)的應(yīng)用 B．利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)制造的新型致病菌具有極大的危害性，其原因之一是人體不會(huì)對(duì)它們產(chǎn)生免疫反應(yīng) C．試管嬰兒技術(shù)已經(jīng)成熟，移植前可對(duì)胚胎進(jìn)行遺傳學(xué)診斷和基因改造 D．科學(xué)家將α﹣淀粉酶基因與目的基因一起轉(zhuǎn)入植物中，可以阻斷淀粉儲(chǔ)藏使花粉失去活性，從而防止轉(zhuǎn)基因花粉傳播造成基因污染二．解答題（共2小題）19．瘦素是一種由脂肪組織合成和分泌的肽類激素。P載體含有的綠色熒光蛋白（GFP）基因能在真核細(xì)胞中表達(dá)GFP。將目的基因插入GFP基因后，能表達(dá)出目的蛋白和GFP的融合蛋白，根據(jù)熒光的強(qiáng)弱，可確定目的基因在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)情況。為研究瘦素的功能，科學(xué)家構(gòu)建了瘦素基因真核表達(dá)載體，檢測(cè)瘦素基因在小鼠成纖維細(xì)胞中的表達(dá)情況。瘦素基因及P載體的結(jié)構(gòu)如圖所示?；卮鹣铝袉栴}。（1）PCR擴(kuò)增瘦素基因時(shí)，與引物1互補(bǔ)的a鏈左側(cè)是脫氧核苷酸鏈的（填“5′”或“3′”）端。據(jù)圖推測(cè)，構(gòu)建該基因表達(dá)載體時(shí)，P載體上應(yīng)有啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因、復(fù)制原點(diǎn)、。（2）已知HindⅢ和BamHⅠ在P載體上的切割位點(diǎn)非常接近。為確定重組質(zhì)粒是否構(gòu)建成功，用HindⅢ、BamHⅠ分別對(duì)瘦素基因PCR產(chǎn)物、P載體和重組質(zhì)粒雙酶切，再進(jìn)行電泳，結(jié)果如圖所示。若重組質(zhì)粒構(gòu)建成功，請(qǐng)?jiān)趫D中將酶切結(jié)果對(duì)應(yīng)位置的條帶涂黑。（3）Kanr/Neor是一種抗性基因，在真核細(xì)胞中表達(dá)具有新霉素抗性，而在原核細(xì)胞中表達(dá)具有卡那霉素抗性。本實(shí)驗(yàn)中為篩選轉(zhuǎn)化的細(xì)胞，應(yīng)在培養(yǎng)基中添加。（4）為檢測(cè)瘦素基因是否成功表達(dá)，可用的鑒定方法是（答出2種）。為進(jìn)一步獲得更多能表達(dá)融合蛋白的細(xì)胞，還需要進(jìn)行。20．黨的二十大對(duì)保障糧食安全提出了更高要求，馬鈴薯塊莖富含淀粉，而且其中的維生素是所有糧食中最全的，因此我國(guó)科學(xué)家對(duì)馬鈴薯這種重要糧食作物開展了大量研究。馬鈴薯因?yàn)樽越徊挥H和，所以只能進(jìn)行無(wú)性繁殖，我國(guó)科學(xué)家用CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)定點(diǎn)敲除二倍體馬鈴薯的自交不親和基因獲得了二倍體自交系的馬鈴薯。如圖1所示：（1）該技術(shù)利用一段與靶序列互補(bǔ)的向?qū)NA引導(dǎo)Cas9蛋白對(duì)特異靶向DNA進(jìn)行識(shí)別和定點(diǎn)敲除自交不親和基因，其中的Cas9蛋白相當(dāng)于酶，若要將自交不親和基因從目標(biāo)DNA上切除下來，需要設(shè)計(jì)種不同的向?qū)NA。若靶序列為5′﹣AGCAT……GTACCT﹣3′，則設(shè)計(jì)的向?qū)NA中相應(yīng)的序列應(yīng)為。（2）MAP30蛋白是一種能使I型核酸核糖體失活的蛋白質(zhì)，實(shí)驗(yàn)表明MAP30蛋白具有抗pvx病毒功能，為培育高效表達(dá)該基因的馬鈴薯新品種，科研團(tuán)隊(duì)利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將MAP30基因?qū)腭R鈴薯細(xì)胞內(nèi)，如圖2所示：①選擇Ti質(zhì)粒做載體的原因是，構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)為避免反向拼接應(yīng)選擇識(shí)別切割質(zhì)粒，再用連接。②個(gè)體水平上，可通過的方法檢測(cè)轉(zhuǎn)基因馬鈴薯是否具有抗病毒的特性，具體做法是。

2025年高考生物復(fù)習(xí)新題速遞之基因工程（2024年9月）參考答案與試題解析一．選擇題（共18小題）1．關(guān)于“DNA的粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn)，下列說法錯(cuò)誤的是（）A．過濾液沉淀過程在4℃冰箱中進(jìn)行是為了防止DNA降解 B．DNA既溶于2mol/LNaCl溶液也溶于蒸餾水 C．粗提取的DNA中含有核蛋白、多糖等雜質(zhì) D．將粗提取的DNA溶于2mol/LNaCl溶液中，加入二苯胺試劑DNA被染成藍(lán)色【考點(diǎn)】DNA的粗提取與鑒定．【專題】正推法；從生物材料提取特定成分．【答案】D【分析】DNA的粗提取與鑒定的實(shí)驗(yàn)原理是：①DNA的溶解性，DNA和蛋白質(zhì)等其他成分在不同濃度的氯化鈉溶液中的溶解度不同，利用這一特點(diǎn)可以選擇適當(dāng)濃度的鹽溶液可以將DNA溶解或析出，從而達(dá)到分離的目的；②DNA不溶于酒精溶液，細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)可以溶解于酒精，利用這一原理可以將蛋白質(zhì)和DNA進(jìn)一步分離；③在沸水浴的條件下DNA遇二苯胺會(huì)呈現(xiàn)藍(lán)色。【解答】解：A、低溫時(shí)DNA酶的活性較低，過濾液沉淀過程在4℃冰箱中進(jìn)行是為了防止DNA降解，A正確；B、DNA既溶于2mol/LNaCl溶液也溶于蒸餾水，在2mol/LNaCl溶液中溶解度較高，B正確；C、粗提取的DNA中含有核蛋白、多糖等雜質(zhì)，因此為了獲得純度較高的DNA需要進(jìn)一步提純，C正確；D、將粗提取的DNA溶于2mol/LNaCl溶液中，加入二苯胺試劑后經(jīng)過水浴加熱可發(fā)現(xiàn)DNA被染成藍(lán)色，D錯(cuò)誤。故選：D。【點(diǎn)評(píng)】本題主要考查的是DNA的粗提取與鑒定的相關(guān)知識(shí)，意在考查學(xué)生對(duì)基礎(chǔ)知識(shí)的理解掌握，難度適中。2．大腸桿菌經(jīng)溶菌酶和洗滌劑處理后，擬核DNA就會(huì)纏繞在細(xì)胞壁碎片上，靜置一段時(shí)間，質(zhì)粒分布在上清液中，利用上述原理可初步獲得質(zhì)粒DNA。用三種限制酶處理提取的產(chǎn)物，電泳結(jié)果如圖所示。下列關(guān)于質(zhì)粒的粗提取和鑒定的敘述不正確的是（）A．提取DNA時(shí)可加入酒精，使溶于酒精的蛋白質(zhì)等物質(zhì)溶解 B．將提取的DNA溶于2mol/LNaCl溶液后；可用二苯胺試劑進(jìn)行鑒定 C．電泳鑒定DNA利用了DNA在電場(chǎng)中會(huì)向著它所帶電荷相反的電極移動(dòng)的原理 D．根據(jù)電泳結(jié)果，質(zhì)粒上一定沒有限制酶Ⅰ和Ⅱ的切割位點(diǎn)，而有限制酶Ⅲ的切割位點(diǎn)【考點(diǎn)】DNA的粗提取與鑒定．【專題】模式圖；從生物材料提取特定成分．【答案】D【分析】DNA的粗提取和鑒定：利用DNA不溶于酒精，某些蛋白質(zhì)溶于酒精，以及DNA在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同，可以將DNA與蛋白質(zhì)分離開；在一定溫度下，DNA遇二苯胺試劑會(huì)呈現(xiàn)藍(lán)色，因此二苯胺試劑可以作為鑒定DNA的試劑。【解答】解：A、由于蛋白質(zhì)可溶于酒精，而DNA在冷酒精中溶解度很低，所以在提取DNA時(shí)加入酒精，使溶于酒精的蛋白質(zhì)等物質(zhì)溶解，而讓DNA析出，A正確；B、由于DNA在2mol/LNaCl溶液中溶解度較大，DNA遇二苯胺試劑會(huì)呈現(xiàn)藍(lán)色，所以將提取的DNA溶于2mol/LNaCl溶液后，可用二苯胺試劑在沸水條件進(jìn)行鑒定，B正確；C、DNA帶負(fù)電，電泳鑒定DNA利用了DNA在電場(chǎng)中會(huì)向著它所帶電荷相反的電極移動(dòng)的原理，C正確；D、因?yàn)橘|(zhì)粒的本質(zhì)是環(huán)狀的DNA，限制酶Ⅰ和Ⅱ處理后電泳只有一條條帶，可能是該質(zhì)粒上有一個(gè)切割位點(diǎn)，也可能沒有切割位點(diǎn)，D錯(cuò)誤。故選：D?！军c(diǎn)評(píng)】本題考查DNA的粗提取和鑒定的相關(guān)知識(shí)，意在考查學(xué)生的識(shí)記能力和判斷能力，運(yùn)用所學(xué)知識(shí)綜合分析問題的能力。3．某同學(xué)擬用限制酶（酶1、酶2、酶3和酶4）、DNA連接酶為工具，將目的基因（兩端含相應(yīng)限制酶的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)）和質(zhì)粒進(jìn)行切割、連接，以構(gòu)建重組表達(dá)載體。限制酶的切割位點(diǎn)如圖所示，下列分析合理的是（）A．可選擇酶3切割質(zhì)粒和目的基因，再用E.coliDNA連接酶連接 B．可選擇酶2和酶4切割質(zhì)粒和目的基因，再用E.coliDNA連接酶連接 C．可選擇酶2切割質(zhì)粒、酶4切割目的基因，再用E.coliDNA連接酶連接，連接后的片段仍能被酶2和酶4切割 D．為了讓重組表達(dá)載體的構(gòu)建合理且高效，可用酶1和酶2切割質(zhì)粒和目的基因，再用T4DNA連接酶連接【考點(diǎn)】基因表達(dá)載體的構(gòu)建．【專題】模式圖；基因工程．【答案】D【分析】DNA連接酶：（1）根據(jù)酶的來源不同分為兩類：E.coliDNA連接酶、T4DNA連接酶。這二者都能連接黏性末端，此外T4DNA連接酶還可以連接平末端，但連接平末端時(shí)的效率比較低。（2）DNA連接酶連接的是兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵。【解答】解：A、使用酶3切割出的末端為平末端，需用T4DNA連接酶連接，A錯(cuò)誤；B、使用酶4切割質(zhì)粒和目的基因時(shí)會(huì)破壞質(zhì)粒上的抗性基因，B錯(cuò)誤；C、酶2和酶4切割后得到的DNA片段，連接后不能被酶2和酶4識(shí)別，C錯(cuò)誤；D、質(zhì)粒用酶3切割后得到平末端，不利于連接，酶4切割質(zhì)粒和目的基因，會(huì)破壞質(zhì)粒上的抗生素抗性基因，不便于篩選，所以質(zhì)粒和目的基因都用酶1和酶2切割后得到黏性末端，用T4DNA連接酶連接后，還能保證目的基因在質(zhì)粒上的連接方向，此重組表達(dá)載體的構(gòu)建方案最合理且高效，D正確。故選：D。【點(diǎn)評(píng)】本題考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生理解識(shí)記有關(guān)技術(shù)的原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)，能將教材中的知識(shí)結(jié)合題中信息進(jìn)行遷移應(yīng)用。4．將馬鈴薯胰蛋白酶抑制劑基因PinⅡ?qū)霔顦浼?xì)胞，培育成了抗蟲楊樹。如圖表示含目的基因的DNA分子和農(nóng)桿菌質(zhì)粒，圖中Ampr表示氨芐青霉素抗性基因，Neor表示新霉素抗性基因，箭頭表示識(shí)別序列完全不同的幾種限制酶的切割位點(diǎn)。下列敘述正確的是（）A．用圖中的限制酶構(gòu)建重組質(zhì)粒無(wú)法確定目的基因的插入方向 B．可以用TthⅢ和BamHⅠ對(duì)目的基因和載體雙酶切構(gòu)建重組載體 C．成功導(dǎo)入重組質(zhì)粒的細(xì)胞會(huì)表現(xiàn)為不抗氨芐青霉素、抗新霉素 D．通過PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)目的基因成功導(dǎo)入楊樹細(xì)胞中即成功培育了抗蟲楊樹【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．【專題】模式圖；基因工程．【答案】C【分析】題圖分析：為使目的基因與質(zhì)粒高效重組，防止質(zhì)粒和含目的基因的外源DNA片段自身環(huán)化，最好選用兩種不同的限制酶作用于含目的基因的DNA和質(zhì)粒，要想切割出目的基因，限制酶應(yīng)該位于目的基因的兩側(cè)；又因?yàn)橄拗泼窹stⅠ和限制酶TthⅢ分別位于標(biāo)記基因Ampr和NeOr中，因此限制酶PstⅠ和限制酶TthⅢⅠ不能同時(shí)使用，即一定需要用到限制酶EcoRⅠ；如果限制酶EcoRⅠ和TthⅢ同時(shí)使用，會(huì)破壞質(zhì)粒中的標(biāo)記基因NeOr，同時(shí)會(huì)切除復(fù)制原點(diǎn)。因此只能選用EcoRⅠ和PstⅠ切割目的基因和質(zhì)粒，然后再在DNA連接酶的作用下形成重組質(zhì)粒?！窘獯稹拷猓篈BC、根據(jù)圖中所示限制酶的位置，為使目的基因與質(zhì)粒高效重組，防止質(zhì)粒和含目的基因的外源DNA片段自身環(huán)化，最好選用兩種不同的限制酶作用于含目的基因的DNA和質(zhì)粒，要想切割出目的基因，限制酶應(yīng)該位于目的基因的兩側(cè)；又因?yàn)橄拗泼窹stⅠ和限制酶TthⅢ分別位于標(biāo)記基因Ampr和NeOr中，因此限制酶PstⅠ和限制酶TthⅢ不能同時(shí)使用，即一定需要用到限制酶EcoRⅠ；如果限制酶EcoRⅠ和TthⅢ同時(shí)使用，會(huì)破壞質(zhì)粒中的標(biāo)記基因NeOr，因此應(yīng)選用EcoRⅠ和PstⅠ兩種酶分別切割目的基因和質(zhì)粒，能確定基因的插入方向，并破壞了氨芐青霉素抗性基因，成功導(dǎo)入重組質(zhì)粒的細(xì)胞會(huì)表現(xiàn)為不抗氨芐青霉素、抗新霉素，A、B錯(cuò)誤，C正確；D、需要進(jìn)行個(gè)體水平的檢測(cè)才能確定是否成功培育了抗蟲楊樹，D錯(cuò)誤。故選：C?！军c(diǎn)評(píng)】本題主要考查的是基因工程的操作的相關(guān)知識(shí)，意在考查學(xué)生對(duì)基礎(chǔ)知識(shí)的理解掌握，難度適中。5．dNTP（包括dATP、dTTP、dGTP、dCTP）的結(jié)構(gòu)與ATP類似，除堿基不同外，dNTP含有脫氧核糖。與dNTP相比，ddNTP的五碳糖為雙脫氧核糖，其3'碳位為﹣H且不能與磷酸形成化學(xué)鍵?，F(xiàn)有甲～丁四個(gè)PCR反應(yīng)體系，甲體系中含有放射性磷標(biāo)記的ddATP（記作ddATP+）和DNA模板鏈。PCR完成后，經(jīng)電泳（分子量小的DNA在電場(chǎng)中移動(dòng)快）將甲體系中一組長(zhǎng)度不等的DNA單鏈分離。丙、乙、丁三個(gè)PCR體系與甲相似，分別用于檢測(cè)T、C、G的堿基序列，檢測(cè)結(jié)果如圖。下列說法正確的是（）A．ddATP+中的放射性磷酸基團(tuán)應(yīng)位于ddATP的末端 B．甲體系中除含ddATP+外，還應(yīng)含有dTTP、dGTP、dCTP C．新?lián)饺朊撗鹾塑账嵬ㄟ^磷酸二酯鍵連接在子鏈的5′端 D．模板DNA的堿基序列為3'CTGGACTGACAT5′【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定．【專題】模式圖；PCR技術(shù)．【答案】D【分析】DNA分子復(fù)制的場(chǎng)所、過程和時(shí)間：（1）DNA分子復(fù)制的場(chǎng)所：細(xì)胞核、線粒體和葉綠體；（2）DNA分子復(fù)制的過程：①解旋：在解旋酶的作用下，把兩條螺旋的雙鏈解開；②合成子鏈：以解開的每一條母鏈為模板，以游離的四種脫氧核苷酸為原料，遵循堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，在有關(guān)酶的作用下，各自合成與母鏈互補(bǔ)的子鏈；③形成子代DNA：每條子鏈與其對(duì)應(yīng)的母鏈盤旋成雙螺旋結(jié)構(gòu)，從而形成2個(gè)與親代DNA完全相同的子代DNA分子；（3）DNA分子復(fù)制的時(shí)間：有絲分裂的間期和減數(shù)第一次分裂前的間期?！窘獯稹拷猓篈、由于ddNTP的五碳糖為雙脫氧核糖，其3'碳位為﹣H且不能與磷酸形成化學(xué)鍵，因此ddATP+中的放射性磷酸基團(tuán)不應(yīng)位于ddATP的末端，A錯(cuò)誤；B、甲體系中除含ddATP+外，還應(yīng)含有dATP、dTTP、dGTP、dCTP，B錯(cuò)誤；C、PCR擴(kuò)增時(shí)，由5'端向3'端延伸，則新?lián)饺朊撗鹾塑账嵬ㄟ^磷酸二酯鍵連接在子鏈的3'端，C錯(cuò)誤；D、當(dāng)ddNTP結(jié)合時(shí)，DNA合成終止，因此DNA合成鏈可能隨機(jī)停止在任何堿基處，根據(jù)四種堿基的條帶位置反向推出DNA序列。PCR擴(kuò)增時(shí)，由5'端向3'端延伸，則根據(jù)電泳圖及分子量小的DNA在電場(chǎng)中移動(dòng)快可知，該DNA片段的待測(cè)堿基序列為5'GACCTGACTGTA3'，因此模板DNA的堿基序列為3'CTGGACTGACAT5'，D正確。故選：D?！军c(diǎn)評(píng)】本題主要考查的是基因工程的操作的相關(guān)知識(shí)，意在考查學(xué)生對(duì)基礎(chǔ)知識(shí)的理解掌握，難度適中。6．BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ三種限制酶的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)依次為5′﹣G↓GATCC﹣3′、5′↓GATC﹣3′、5′﹣CCC↓GGG﹣3′。如圖表示某DNA片段的部分堿基序列，已知其余序列不含這三種限制酶的識(shí)別序列。下列敘述正確的是（）A．若用SmaⅠ完全切割該DNA，則其產(chǎn)物的長(zhǎng)度為634bp、896bp、758bp B．若虛線方框內(nèi)的堿基對(duì)被T﹣A替換，則用SmaⅠ完全切割該DNA可產(chǎn)生3種片段 C．若用MboⅠ和BamHⅠ切割DNA，可形成相同的黏性末端 D．用SmaⅠ切割DNA產(chǎn)生的片段，可用E.coliDNA連接酶重新將其連接【考點(diǎn)】限制性內(nèi)切核酸酶；DNA連接酶．【專題】模式圖；基因工程．【答案】C【分析】（1）限制性內(nèi)切核酸酶的作用原理：識(shí)別雙鏈DNA分子的特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的磷酸二酯鍵斷開。（2）限制性內(nèi)切核酸酶切割產(chǎn)生的DNA片段通常有黏性末端和平末端?！窘獯稹拷猓篈、SmaⅠ的識(shí)別序列為5′﹣CCC↓GGG﹣3′，則用SmaⅠ完全切割該DNA會(huì)產(chǎn)生三個(gè)片段，即637bp、890bp、761bp，A錯(cuò)誤；B、若虛線方框內(nèi)的堿基對(duì)被T﹣A替換，則用SmaⅠ完全切割該DNA可產(chǎn)生2種片段，B錯(cuò)誤；C、BamHⅠ、MboⅠ識(shí)別的序列分別為5′﹣G↓GATCC﹣3′、5′↓GATC﹣3′，則二者切割DNA，可形成相同的黏性末端，C正確；D、用SmaⅠ切割DNA產(chǎn)生的片段為平末端，可用T4DNA連接酶重新將其連接，D錯(cuò)誤。故選：C?！军c(diǎn)評(píng)】本題主要考限制酶的相關(guān)知識(shí)點(diǎn)，意在考查學(xué)生對(duì)相關(guān)知識(shí)點(diǎn)的理解和掌握。7．水中E物質(zhì)污染會(huì)導(dǎo)致魚類雌性化異常。將綠色熒光蛋白（GFP）基因、Gal4蛋白基因等轉(zhuǎn)入斑馬魚，可用于監(jiān)測(cè)水體E物質(zhì)，如圖中ERE和UAS是兩種誘導(dǎo)型啟動(dòng)子，分別被E物質(zhì)﹣受體復(fù)合物和Gal4蛋白特異性激活，啟動(dòng)下游基因表達(dá)。下列敘述錯(cuò)誤的是（）A．根據(jù)題意可知斑馬魚的某些細(xì)胞存在E物質(zhì)的受體 B．用ERE直接驅(qū)動(dòng)GFP基因表達(dá)可提高監(jiān)測(cè)的靈敏度 C．用于監(jiān)測(cè)E物質(zhì)污染的轉(zhuǎn)基因斑馬魚最好是不育的 D．基因表達(dá)載體最好以顯微注射法導(dǎo)入斑馬魚受精卵【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．【專題】模式圖；基因工程．【答案】B【分析】基因工程技術(shù)的基本步驟：（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定?！窘獯稹拷猓篈、將綠色熒光蛋白（GFP）基因、Ga14蛋白基因等轉(zhuǎn)入斑馬魚，可用于監(jiān)測(cè)水體王物質(zhì)，推測(cè)斑馬魚的某些細(xì)胞存在E物質(zhì)的受體，A正確；B、結(jié)合題圖，ERE誘導(dǎo)Gal4轉(zhuǎn)錄，其翻譯產(chǎn)物Gal4蛋白與USA結(jié)合驅(qū)動(dòng)GFP基因表達(dá)可提高監(jiān)測(cè)的靈敏度，這是一個(gè)間接驅(qū)動(dòng)而非直接驅(qū)動(dòng)的過程，B錯(cuò)誤；C、用于監(jiān)測(cè)E物質(zhì)污染的轉(zhuǎn)基因斑馬魚最好是不育的，避免因有性生殖帶來的基因污染，C正確；D、基因表達(dá)載體最好以顯微注射法導(dǎo)入斑馬魚受精卵，受精卵全能性高，基因成功表達(dá)的概率大，D正確。故選：B?！军c(diǎn)評(píng)】本題主要考基因工程的操作過程的相關(guān)知識(shí)點(diǎn)，意在考查學(xué)生對(duì)相關(guān)知識(shí)點(diǎn)的理解和掌握。8．科研人員將寒帶地區(qū)海魚中的抗凍基因轉(zhuǎn)入千禧果細(xì)胞中，成功培育出抗凍千禧果。如圖為培育過程中使用的Ti質(zhì)粒示意圖，其中Vir區(qū)的基因活化能促進(jìn)T﹣DNA的加工和轉(zhuǎn)移，下列敘述正確的是（）A．構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，最好選擇限制酶Ⅱ和Ⅲ來切割質(zhì)粒 B．利用PCR擴(kuò)增抗凍基因，需提前檢測(cè)抗凍基因的全部堿基序列 C．Vir區(qū)的基因活化促進(jìn)抗凍基因整合到千禧果細(xì)胞的染色體DNA上 D．利用含卡那霉素的培養(yǎng)基可篩選出成功導(dǎo)入抗凍基因的千禧果細(xì)胞【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．【專題】模式圖；基因工程．【答案】C【分析】1、PCR是一種在體外快速擴(kuò)增DNA的技術(shù)，其原理是DNA雙鏈復(fù)制，包括變性、復(fù)性、延伸三個(gè)步驟。2、基因工程的基本操作程序是：目的基因的篩選與獲取、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞、目的基因的檢測(cè)與鑒定，其中基因表達(dá)載體的構(gòu)建是基因工程的核心步驟?！窘獯稹拷猓篈、使用限制酶Ⅱ會(huì)破壞Vir區(qū)的基因，Vir區(qū)的基因活化能促進(jìn)T?DNA的加工和轉(zhuǎn)移，是T?DNA轉(zhuǎn)移整合到受體細(xì)胞DNA上必不可少的，不能選限制酶Ⅱ，A錯(cuò)誤；B、使用PCR技術(shù)擴(kuò)增抗凍基因，只需要知道抗凍基因兩端堿基序列設(shè)計(jì)引物即可，B錯(cuò)誤；C、農(nóng)桿菌侵染植物細(xì)胞后，Ti質(zhì)粒上的T?DNA能轉(zhuǎn)移到被侵染的細(xì)胞并整合到該細(xì)胞的染色體DNA上，所以Vir區(qū)基因活化可促進(jìn)抗凍基因整合到千禧果細(xì)胞的染色體DNA上，C正確；D、成功的植株染色體DNA上整合了T﹣DNA區(qū)，應(yīng)用含四環(huán)素的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，D錯(cuò)誤。故選：C?！军c(diǎn)評(píng)】本題考查了基因工程的相關(guān)知識(shí)，意在考查考生理解所學(xué)知識(shí)要點(diǎn)，把握知識(shí)間內(nèi)在聯(lián)系的能力；能運(yùn)用所學(xué)知識(shí)，對(duì)生物學(xué)問題作出準(zhǔn)確的判斷，難度適中。9．為了對(duì)重金屬污染的土壤進(jìn)行生物修復(fù)，研究者將從楊樹中克隆的重金屬轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（HMA3）基因與外源高效啟動(dòng)子連接，導(dǎo)入楊樹基因組中（如圖）。為檢測(cè)獲得的轉(zhuǎn)基因楊樹苗中是否含有導(dǎo)入的HMA3基因，同時(shí)避免內(nèi)源HMA3基因的干擾，在進(jìn)行PCR擴(kuò)增時(shí)，應(yīng)選擇的引物組合是（）（注：①、②、③、④表示引物）A．①+③ B．①+② C．③+② D．③+④【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定．【專題】模式圖；PCR技術(shù)．【答案】B【分析】根據(jù)圖示中引物的位置可知，引物①擴(kuò)增的片段含有啟動(dòng)子和HMA3基因，引物③擴(kuò)增的片段不含啟動(dòng)子，引物②擴(kuò)增的片段既含有啟動(dòng)子，又含有HMA3基因序列。圖示中克隆的重金屬轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（HMA3）基因與外源高效啟動(dòng)子連接，導(dǎo)入楊樹基因組中，若要檢測(cè)獲得的轉(zhuǎn)基因楊樹苗中是否含有導(dǎo)入的HMA3基因和高效啟動(dòng)子，需要檢測(cè)是否含有高效啟動(dòng)子序列和HMA3基因序列?！窘獯稹拷猓篈、引物①③同向，另一端缺少引物，A錯(cuò)誤；B、引物①擴(kuò)增的片段含有啟動(dòng)子和HMA3基因，引物②擴(kuò)增的片段既含有啟動(dòng)子，又含有HMA3基因序列，B正確；C、引物③擴(kuò)增的片段不含啟動(dòng)子，不含外源高效啟動(dòng)子片段，C錯(cuò)誤；D、引物③擴(kuò)增的片段不含啟動(dòng)子，不含外源高效啟動(dòng)子片段，D錯(cuò)誤。故選：B。【點(diǎn)評(píng)】本題綜合考查基因工程、PCR技術(shù)等知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理及操作步驟、識(shí)記PCR技術(shù)的過程，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題。10．蛋白質(zhì)工程開創(chuàng)了按照人類意愿改造、創(chuàng)造符合人類需要的蛋白質(zhì)的新時(shí)代。如通過蛋白質(zhì)工程，將干擾素結(jié)構(gòu)上的兩個(gè)半胱氨酸改為絲氨酸，就可以使其保存半年，而活性不受影響。下列關(guān)于蛋白質(zhì)工程的敘述，正確的是（）A．蛋白質(zhì)工程的操作流程與中心法則的方向相同 B．蛋白質(zhì)工程需要改造或合成蛋白質(zhì)的編碼基因 C．對(duì)干擾素的改造無(wú)需考慮其空間結(jié)構(gòu) D．蛋白質(zhì)工程需要改變蛋白質(zhì)分子的所有氨基酸序列【考點(diǎn)】蛋白質(zhì)工程基本原理．【專題】正推法；基因工程．【答案】B【分析】蛋白質(zhì)工程是指以蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其生物功能的關(guān)系作為基礎(chǔ)，通過基因修飾或基因合成，對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行改造，或制造一種新的蛋白質(zhì)，以滿足人類的生產(chǎn)和生活的需求（基因工程在原則上只能生產(chǎn)自然界已存在的蛋白質(zhì)）。【解答】解：A、蛋白質(zhì)工程的操作流程與中心法則的方向相反，A錯(cuò)誤；B、蛋白質(zhì)工程是對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行改造，或制造一種新的蛋白質(zhì)，最終通過基因改造或合成新基因來完成，B正確；C、對(duì)干擾素進(jìn)行改造需要從預(yù)期的蛋白質(zhì)功能出發(fā)，設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，C錯(cuò)誤；D、蛋白質(zhì)工程不需要改變蛋白質(zhì)分子的所有氨基酸序列，如通過蛋白質(zhì)工程，將干擾素結(jié)構(gòu)上的兩個(gè)半胱氨酸改為絲氨酸，就可以使其保存半年，而活性不受影響，D錯(cuò)誤。故選：B?！军c(diǎn)評(píng)】本題考查基因工程、蛋白質(zhì)工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生理解識(shí)記有關(guān)技術(shù)的原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)，能將教材中的知識(shí)結(jié)合題中信息進(jìn)行遷移應(yīng)用。11．為了構(gòu)建可以直接利用纖維素發(fā)酵的釀酒酵母工程菌，研究人員構(gòu)建基因表達(dá)載體（如圖所示），并導(dǎo)入不能合成尿嘧啶的酵母菌。下列相關(guān)分析不正確的是（）A．尿嘧啶合成基因可以作為表達(dá)載體上的標(biāo)記基因 B．該方法需利用限制酶和DNA連接酶實(shí)現(xiàn)目的基因與載體的連接 C．?dāng)U增目的基因時(shí)應(yīng)在引物的5′端添加與線性化載體兩端相同的DNA序列 D．在以纖維素為唯一碳源的液體培養(yǎng)基中檢測(cè)酒精含量確定工程菌發(fā)酵效果【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．【專題】模式圖；基因工程．【答案】B【分析】基因工程中常用限制酶切割目的基因和質(zhì)粒（載體），用DNA連接酶連接目的基因和載體。【解答】解：A、由題意可知，表達(dá)載體導(dǎo)入不能合成尿嘧啶的酵母菌，所以可將尿嘧啶合成基因作為表達(dá)載體上的標(biāo)記基因，若導(dǎo)入表達(dá)載體后酵母菌能產(chǎn)生尿嘧啶，說明導(dǎo)入成功，A正確；B、該方法需利用DNA連接酶實(shí)現(xiàn)目的基因與載體的連接，限制酶用于切割目的基因和質(zhì)粒，B錯(cuò)誤；C、擴(kuò)增目的基因時(shí)應(yīng)在引物的5'端添加與線性化載體兩端相同的DNA序列，以便引物目的基因配對(duì)，C正確；D、在以纖維素為唯一碳源的液體培養(yǎng)基中檢測(cè)酒精含量確定工程菌發(fā)酵效果，若能利用纖維素發(fā)酵，則證明轉(zhuǎn)基因成功，D正確。故選：B。【點(diǎn)評(píng)】本題考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，意在考查考生對(duì)相關(guān)知識(shí)的理解和識(shí)記能力。12．“篩選”是生物技術(shù)與工程中常用的技術(shù)手段。下列敘述錯(cuò)誤的是（）A．培育轉(zhuǎn)基因抗蟲棉時(shí)，需從分子水平及個(gè)體水平進(jìn)行篩選 B．制備單克隆抗體時(shí)，需從分子水平篩選能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞 C．胚胎移植前，需對(duì)通過體外受精或其他方式得到的胚胎進(jìn)行質(zhì)量篩選 D．單倍體育種時(shí)，需對(duì)F1的花藥進(jìn)行篩選后才可繼續(xù)進(jìn)行組織培養(yǎng)【考點(diǎn)】基因工程在農(nóng)牧、醫(yī)療、食品等方面的應(yīng)用；單克隆抗體及其應(yīng)用；體外受精和胚胎移植．【專題】正推法；育種；基因工程；克隆技術(shù)；胚胎工程．【答案】D【分析】1、單倍體育種過程中包括兩個(gè)技術(shù)：花藥離體培養(yǎng)、秋水仙素處理單倍體幼苗。2、單克隆抗體制備流程：先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應(yīng)，之后從小鼠脾臟中獲取已經(jīng)免疫的B淋巴細(xì)胞；誘導(dǎo)B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行抗體檢測(cè)，篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行克隆化培養(yǎng)，即用培養(yǎng)基培養(yǎng)和注入小鼠腹腔中培養(yǎng)；最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體。3、胚胎移植的基本程序主要包括：①對(duì)供、受體的選擇和處理（選擇遺傳特性和生產(chǎn)性能優(yōu)秀的供體，有健康的體質(zhì)和正常繁殖能力的受體，用激素進(jìn)行同期發(fā)情處理，用促性腺激素對(duì)供體母牛做超數(shù)排卵處理）；②配種或人工授精；③對(duì)胚胎的收集、檢查、培養(yǎng)或保存（對(duì)胚胎進(jìn)行質(zhì)量檢查，此時(shí)的胚胎應(yīng)發(fā)育到桑椹或胚囊胚階段）；④對(duì)胚胎進(jìn)行移植；⑤移植后的檢查。4、標(biāo)記基因的作用：鑒定受體細(xì)胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來。【解答】解：A、培育轉(zhuǎn)基因抗蟲棉時(shí)，需從分子水平以及個(gè)體生物學(xué)水平進(jìn)行篩選和效果評(píng)估，A正確；B、單克隆抗體制備過程中，第一次篩選出雜交瘤細(xì)胞，第二次從分子水平篩選出產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞，B正確；C、胚胎移植前，需對(duì)通過體外受精或其他方式得到的胚胎進(jìn)行質(zhì)量篩選，C正確；D、單倍體育種中，通過對(duì)F1的花藥離體培養(yǎng)獲得的單倍體，需要利用秋水仙素處理幼苗使染色體加倍后，才能篩選出符合要求的品種，D錯(cuò)誤。故選：D?！军c(diǎn)評(píng)】本題綜合考查基因工程、單倍體育種、胚胎移植、單克隆抗體的制備等生物技術(shù)中“篩選”的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理及操作步驟，識(shí)記單倍體育種、胚胎移植和單克隆抗體的制備過程，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確判斷各選項(xiàng)。13．科學(xué)家利用蛋白質(zhì)工程技術(shù)將水蛭素（一種可用于預(yù)防和治療血栓的蛋白質(zhì)）第47位的天冬酰胺替換為賴氨酸，顯著提高了它的抗凝血活性，流程圖如圖。已知天冬酰胺對(duì)應(yīng)的密碼子為AAU、AAC，賴氨酸對(duì)應(yīng)的密碼子為AAA、GUA等。下列敘述錯(cuò)誤的是（）A．圖中的操作流程是從預(yù)期的水蛭素功能出發(fā)的 B．在這項(xiàng)替換研究中目前可行的直接操作對(duì)象是基因 C．如圖中大分子物質(zhì)a和b的單體序列均是唯一的 D．用蛋白質(zhì)工程可生產(chǎn)基因工程所不能生產(chǎn)的蛋白質(zhì)【考點(diǎn)】蛋白質(zhì)工程基本原理．【專題】模式圖；基因工程．【答案】C【分析】蛋白質(zhì)工程：指以蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其生物功能的關(guān)系作為基礎(chǔ)，通過基因修飾或基因合成，對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行改造，或制造一種新的蛋白質(zhì)，以滿足人類的生產(chǎn)和生活的需求。【解答】解：A、蛋白質(zhì)工程是通過分析預(yù)期的水蛭素功能推導(dǎo)出蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)，進(jìn)而明確氨基酸序列，最終確定基因中堿基對(duì)的排列順序，A正確；B、蛋白質(zhì)的改造工程直接改變的是控制蛋白質(zhì)合成所對(duì)應(yīng)的基因，B正確；C、一種氨基酸可以對(duì)應(yīng)1種或幾種密碼子，因此大分子物質(zhì)a和b的單體序列均不是唯一的，C錯(cuò)誤；D、基因工程是利用已有的基因生產(chǎn)蛋白質(zhì)，而蛋白質(zhì)工程師通過改造基因從而獲得原本沒有的蛋白質(zhì)，因此用蛋白質(zhì)工程可生產(chǎn)基因工程所不能生產(chǎn)的蛋白質(zhì)，D正確。故選：C?！军c(diǎn)評(píng)】本題主要考查的是蛋白質(zhì)工程的原理的相關(guān)知識(shí)，意在考查學(xué)生對(duì)基礎(chǔ)知識(shí)的理解掌握，難度適中。14．反轉(zhuǎn)錄PCR又稱逆轉(zhuǎn)錄PCR（RT﹣PCR），是以mRNA為模板進(jìn)行的特殊PCR，過程如圖。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）A．圖示過程需要控制溫度，否則可能得不到產(chǎn)物 B．RT﹣PCR技術(shù)中，不需已知mRNA的全部序列 C．過程③中子鏈沿著模板鏈的5′→3′方向延伸 D．RT﹣PCR技術(shù)可應(yīng)用于是否被RNA病毒感染的檢測(cè)【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定．【專題】模式圖；PCR技術(shù)．【答案】C【分析】PCR原理：在解旋酶作用下，打開DNA雙鏈，每條DNA單鏈作為母鏈，以4種游離脫氧核苷酸為原料，合成子鏈，在引物作用下，DNA聚合酶從引物3'端開始延伸DNA鏈，即DNA的合成方向是從子鏈的5'端自3'端延伸的。實(shí)際上就是在體外模擬細(xì)胞內(nèi)DNA的復(fù)制過程。DNA的復(fù)制需要引物，其主要原因是DNA聚合酶只能從3′端延伸DNA鏈。【解答】解：A、圖示過程需要控制溫度，如變性解旋時(shí)溫度需要控制在90℃左右，A正確；B、PCR技術(shù)中，不需要已知mRNA的全部序列，只需一段已知mRNA的部分序列即可，B正確；C、過程③中，在引物作用下，DNA聚合酶從引物3'端開始延伸DNA鏈，即子鏈沿著模板鏈的3'→5'方向延伸，C錯(cuò)誤；D、RT﹣PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增相結(jié)合的技術(shù)，可應(yīng)用于是否被RNA病毒感染的檢測(cè)，D正確。故選：C?！军c(diǎn)評(píng)】本題考查PCR技術(shù)的相關(guān)知識(shí)，要求考生理解并識(shí)記有關(guān)的原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)，能將教材中的知識(shí)結(jié)合題中信息進(jìn)行遷移應(yīng)用。15．人類γ基因啟動(dòng)子上游的調(diào)控序列中含有BCL11A蛋白結(jié)合位點(diǎn)，該位點(diǎn)結(jié)合BCL11A蛋白后，γ基因的表達(dá)被抑制。通過改變?cè)摻Y(jié)合位點(diǎn)的序列，解除對(duì)基因表達(dá)的抑制，可對(duì)某種地中海貧血癥進(jìn)行基因治療。科研人員擴(kuò)增了γ基因上游不同長(zhǎng)度的片段（Fn與R），將這些片段分別插入表達(dá)載體中進(jìn)行轉(zhuǎn)化和熒光檢測(cè)，以確定BCL11A蛋結(jié)合位點(diǎn)的具體位置。相關(guān)信息如圖所示。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）A．為將擴(kuò)增后的產(chǎn)物定向插入載體，指導(dǎo)熒光蛋白基因表達(dá)，需用MunⅠ和XhoⅠ處理載體 B．從產(chǎn)物擴(kuò)增到載體構(gòu)建完成的整個(gè)過程需構(gòu)建7種載體 C．將構(gòu)建的載體導(dǎo)入去除BCL11A基因的受細(xì)胞，可能出現(xiàn)含F(xiàn)1與R擴(kuò)增產(chǎn)物的受體細(xì)胞無(wú)熒光，而含F(xiàn)2﹣F7與R擴(kuò)增產(chǎn)物的受體細(xì)胞有熒光 D．向培養(yǎng)液中添加適量的雌激素，可導(dǎo)致部分受體細(xì)胞不再有熒光【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合；基因工程在農(nóng)牧、醫(yī)療、食品等方面的應(yīng)用．【專題】模式圖；基因工程．【答案】C【分析】基因工程技術(shù)的基本步驟：（1）目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸?kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定?！窘獯稹拷猓篈、觀察載體的部分結(jié)構(gòu)的圖示，熒光蛋白基因的左側(cè)為終止子，為了將擴(kuò)增后的產(chǎn)物定向插入載體指導(dǎo)熒光蛋白基因表達(dá)，擴(kuò)增后的產(chǎn)物的插入點(diǎn)應(yīng)在熒光蛋白基因的右側(cè)，而熒光蛋白基因的右側(cè)有三個(gè)限制酶切點(diǎn)，分別是MunⅠ、EcoRⅠ和XhoⅠ限制酶的切點(diǎn)，但因?yàn)橛肊coRⅠ會(huì)破壞熒光蛋白基因，所以只能用MunⅠ和XhoⅠ限制酶切割，A正確；B、據(jù)圖中對(duì)限制酶的注釋可知，限制酶MunⅠ識(shí)別并切割后的黏性末端與限制酶EcoRⅠ識(shí)別并切割后的黏性末端相同，故R末端添加的序列所對(duì)應(yīng)的限制酶是EcoRⅠ，在F1～F7末端添加的序列所對(duì)應(yīng)的限制酶是SalⅠ，從產(chǎn)物擴(kuò)增到載體構(gòu)建完成的整個(gè)過程需構(gòu)建7種載體，即F1～F7與R的相關(guān)載體，B正確；C、據(jù)圖可知，F(xiàn)1與R的序列要長(zhǎng)于F2﹣F7與R序列，故不可能出現(xiàn)含F(xiàn)1與R擴(kuò)增產(chǎn)物的受體細(xì)胞無(wú)熒光，而含F(xiàn)2﹣F7與R擴(kuò)增產(chǎn)物的受體細(xì)胞有熒光的現(xiàn)象，C錯(cuò)誤；D、分析題意可知，P是在雌激素誘導(dǎo)下發(fā)揮作用的啟動(dòng)子，向培養(yǎng)液中添加適量的雌激素，雌激素能誘導(dǎo)啟動(dòng)子發(fā)揮作用，構(gòu)建的載體含有BCL11A基因，導(dǎo)入構(gòu)建載體的受體細(xì)胞能合成BCL11A蛋白，r基因的表達(dá)被抑制，故向培養(yǎng)液中添加適量的雌激素，可導(dǎo)致部分受體細(xì)胞不再有熒光，D正確。故選：C?！军c(diǎn)評(píng)】本題考查基因工程的相關(guān)知識(shí)點(diǎn)，要求考生掌握基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程，掌握目的基因的檢測(cè)與鑒定原理，并能結(jié)合題意進(jìn)行分析作答。16．蘇云金桿菌能產(chǎn)生具有殺蟲能力的Bt毒素蛋白。如圖是一種轉(zhuǎn)Bt毒素蛋白基因棉花的重組DNA形成過程示意圖，下列敘述錯(cuò)誤的是（）A．可通過設(shè)計(jì)特異性引物，利用PCR技術(shù)特異性獲取和擴(kuò)增Bt毒素蛋白基因 B．經(jīng)過①②得到的重組質(zhì)粒，目的基因轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)物可能不同 C．取棉花葉片組織與重組Ti質(zhì)粒共培養(yǎng)，經(jīng)組織培養(yǎng)并篩選后可獲得抗蟲棉 D．可用相應(yīng)抗體進(jìn)行抗原﹣抗體雜交，檢測(cè)Bt毒素蛋白基因是否成功表達(dá)【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．【專題】模式圖；基因工程．【答案】C【分析】基因工程技術(shù)的基本步驟：（1）目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸?kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定?！窘獯稹拷猓篈、PCR是一項(xiàng)體外擴(kuò)增DNA的技術(shù)，該技術(shù)需要一對(duì)引物，可通過設(shè)計(jì)特異性引物，利用PCR技術(shù)特異性獲取和擴(kuò)增Bt毒素蛋白基因，A正確；B、轉(zhuǎn)錄是以DNA的一條鏈為模板合成RNA的過程，經(jīng)過①②得到的重組質(zhì)粒，目的基因轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)物可能不同，B正確；C、受傷葉片傷口處的細(xì)胞釋放出的大量酚類物質(zhì)，可吸引農(nóng)桿菌移向這些細(xì)胞，因此農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法時(shí)選用棉花受傷的葉片與含重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌共培養(yǎng)，再經(jīng)組織培養(yǎng)并篩選后可獲得抗蟲棉，C錯(cuò)誤；D、Bt毒素蛋白基因的表達(dá)產(chǎn)物是蛋白質(zhì)，抗原與抗體結(jié)合具有特異性，故可用相應(yīng)抗體進(jìn)行抗原﹣抗體雜交，檢測(cè)Bt毒素蛋白基因是否成功表達(dá)，D正確。故選：C?！军c(diǎn)評(píng)】本題主要考查的是基因工程的操作的相關(guān)知識(shí)，意在考查學(xué)生對(duì)基礎(chǔ)知識(shí)的理解掌握，難度適中。17．現(xiàn)代生物技術(shù)造福人類的同時(shí)也能引起安全和倫理問題，下列說法恰當(dāng)?shù)氖牵ǎ〢．在動(dòng)物克隆技術(shù)發(fā)展初期進(jìn)行生殖性克隆人的研究 B．全面禁止轉(zhuǎn)基因微生物研究以免用于制造生物武器 C．為挽救患病的孩子可取用嬰兒的造血干細(xì)胞或器官 D．對(duì)于轉(zhuǎn)基因生物產(chǎn)品實(shí)施標(biāo)識(shí)，供消費(fèi)者自主選擇【考點(diǎn)】生物技術(shù)引發(fā)的倫理問題；生物武器對(duì)人類的威脅；轉(zhuǎn)基因食品的安全性．【專題】正推法；生物技術(shù)的安全性和倫理問題．【答案】D【分析】1、轉(zhuǎn)基因生物的安全性問題：食物安全（滯后效應(yīng)、過敏源、營(yíng)養(yǎng)成分改變）、生物安全（對(duì)生物多樣性的影響）、環(huán)境安全（對(duì)生態(tài)系統(tǒng)穩(wěn)定性的影響）。對(duì)待轉(zhuǎn)基因技術(shù)的正確做法是趨利避害，不能因噎廢食。2、對(duì)生物技術(shù)中的倫理問題的爭(zhēng)論，中國(guó)政府的態(tài)度：禁止生殖性克隆人，堅(jiān)持四不原則（不贊成、不允許、不支持、不接受任何生殖性克隆人實(shí)驗(yàn)），不反對(duì)治療性克隆人?！窘獯稹拷猓篈、我國(guó)政府的態(tài)度是禁止生殖性克隆，A錯(cuò)誤；B、對(duì)待轉(zhuǎn)基因技術(shù)的正確做法是趨利避害，不能因噎廢食，B錯(cuò)誤；C、不能用嬰兒的造血干細(xì)胞或器官來挽救患病的孩子，C錯(cuò)誤；D、2002年，我國(guó)農(nóng)業(yè)部頒布了《農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物標(biāo)識(shí)管理辦法》，要求對(duì)轉(zhuǎn)基因生物產(chǎn)品及其加工品加貼標(biāo)注，供消費(fèi)者自主選擇，D正確。故選：D。【點(diǎn)評(píng)】本題考查生物技術(shù)倫理與安全的相關(guān)知識(shí)，意在考查學(xué)生的識(shí)記能力和判斷能力，具備運(yùn)用所學(xué)知識(shí)綜合分析問題的能力是解答本題的關(guān)鍵。18．人們利用生物技術(shù)對(duì)生物體進(jìn)行不同層次的設(shè)計(jì)、控制、改造或模擬，產(chǎn)生巨大生產(chǎn)力的同時(shí)，也帶來了多種涉及安全和倫理的問題。下列相關(guān)敘述，正確的是（）A．如果確實(shí)有證據(jù)表明某種轉(zhuǎn)基因食品有害，就應(yīng)該禁止轉(zhuǎn)基因技術(shù)的應(yīng)用 B．利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)制造的新型致病菌具有極大的危害性，其原因之一是人體不會(huì)對(duì)它們產(chǎn)生免疫反應(yīng) C．試管嬰兒技術(shù)已經(jīng)成熟，移植前可對(duì)胚胎進(jìn)行遺傳學(xué)診斷和基因改造 D．科學(xué)家將α﹣淀粉酶基因與目的基因一起轉(zhuǎn)入植物中，可以阻斷淀粉儲(chǔ)藏使花粉失去活性，從而防止轉(zhuǎn)基因花粉傳播造成基因污染【考點(diǎn)】轉(zhuǎn)基因食品的安全性．【專題】正推法；基因工程．【答案】D【分析】轉(zhuǎn)基因生物的安全性問題：食物安全（滯后效應(yīng)、過敏源、營(yíng)養(yǎng)成分改變）、生物安全（對(duì)生物多樣性的影響）、環(huán)境安全（對(duì)生態(tài)系統(tǒng)穩(wěn)定性的影響）。【解答】解：A、轉(zhuǎn)基因作為一項(xiàng)技術(shù)本身是中性的，所以只要有證據(jù)表明產(chǎn)品有害，就應(yīng)該禁止該產(chǎn)品的使用，而不是禁止轉(zhuǎn)基因技術(shù)的應(yīng)用，A錯(cuò)誤；B、轉(zhuǎn)基因技術(shù)制造的新型致病菌，致病能力、傳染能力以及抗藥能力等大幅增強(qiáng)，因而導(dǎo)致其危害性增大，B錯(cuò)誤；C、試管嬰兒技術(shù)已經(jīng)成熟，可對(duì)植入前胚胎進(jìn)行遺傳學(xué)診斷，判斷其是否含有遺傳病基因或者異常染色體，但是不能進(jìn)行定向基因改造，C錯(cuò)誤；D、將玉米的α﹣淀粉酶基因與目的基因轉(zhuǎn)入植物中，由于α﹣淀粉酶基因可以阻斷淀粉儲(chǔ)藏而使花粉失活，因此可以防止轉(zhuǎn)基因花粉的傳播，D正確。故選：D?！军c(diǎn)評(píng)】本題考查生物技術(shù)安全性與倫理問題，意在考查學(xué)生識(shí)記所學(xué)知識(shí)要點(diǎn)、把握知識(shí)間的內(nèi)在聯(lián)系、形成知識(shí)網(wǎng)絡(luò)的能力，同時(shí)獲取題干信息準(zhǔn)確答題。二．解答題（共2小題）19．瘦素是一種由脂肪組織合成和分泌的肽類激素。P載體含有的綠色熒光蛋白（GFP）基因能在真核細(xì)胞中表達(dá)GFP。將目的基因插入GFP基因后，能表達(dá)出目的蛋白和GFP的融合蛋白，根據(jù)熒光的強(qiáng)弱，可確定目的基因在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)情況。為研究瘦素的功能，科學(xué)家構(gòu)建了瘦素基因真核表達(dá)載體，檢測(cè)瘦素基因在小鼠成纖維細(xì)胞中的表達(dá)情況。瘦素基因及P載體的結(jié)構(gòu)如圖所示。回答下列問題。（1）PCR擴(kuò)增瘦素基因時(shí)，與引物1互補(bǔ)的a鏈左側(cè)是脫氧核苷酸鏈的3'（填“5′”或“3′”）端。據(jù)圖推測(cè)，構(gòu)建該基因表達(dá)載體時(shí)，P載體上應(yīng)有啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因、復(fù)制原點(diǎn)、HindⅢ和BamHⅠ切割位點(diǎn)。（2）已知HindⅢ和BamHⅠ在P載體上的切割位點(diǎn)非常接近。為確定重組質(zhì)粒是否構(gòu)建成功，用HindⅢ、BamHⅠ分別對(duì)瘦素基因PCR產(chǎn)物、P載體和重組質(zhì)粒雙酶切，再進(jìn)行電泳，結(jié)果如圖所示。若重組質(zhì)粒構(gòu)建成功，請(qǐng)?jiān)趫D中將酶切結(jié)果對(duì)應(yīng)位置的條帶涂黑。（3）Kanr/Neor是一種抗性基因，在真核細(xì)胞中表達(dá)具有新霉素抗性，而在原核細(xì)胞中表達(dá)具有卡那霉素抗性。本實(shí)驗(yàn)中為篩選轉(zhuǎn)化的細(xì)胞，應(yīng)在培養(yǎng)基中添加新霉素。（4）為檢測(cè)瘦素基因是否成功表達(dá)，可用的鑒定方法是抗原—抗體雜交、檢測(cè)細(xì)胞綠色熒光的強(qiáng)度（答出2種）。為進(jìn)一步獲得更多能表達(dá)融合蛋白的細(xì)胞，還需要進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．【專題】圖文信息類簡(jiǎn)答題；基因工程．【答案】（1）3'；HindⅢ和BamHⅠ切割位點(diǎn)（2）（3）新霉素（4）抗原—抗體雜交、檢測(cè)細(xì)胞綠色熒光的強(qiáng)度；動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)【分析】基因工程的基本操作程序：目的基因的篩選和獲取、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞、目的基因的檢測(cè)和鑒定?！窘獯稹拷猓海?）PCR擴(kuò)增瘦素基因時(shí)，引物1需與脫氧核苷酸鏈的3'端相結(jié)合。據(jù)圖推測(cè)，構(gòu)建該基因表達(dá)載體時(shí)，P載體上應(yīng)有啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因、復(fù)制原點(diǎn)、HindⅢ和BamHⅠ切割位點(diǎn)。（2）如圖，HindⅢ和BamHⅠ對(duì)瘦素基因PCR產(chǎn)物酶切后的條帶為第2個(gè)條帶；P載體為4700bp，且HindⅢ和BamHⅠ在P載體上的切割位點(diǎn)非常接近，故HindⅢ和BamHⅠ切割P載體之后的條帶在標(biāo)準(zhǔn)條帶5000bp附近，即第1個(gè)條帶；重組質(zhì)粒是目的基因和質(zhì)粒拼接形成的，故雙酶切后形成2個(gè)條帶，如圖：。（3）由題意，實(shí)驗(yàn)?zāi)康臑闄z測(cè)瘦素基因在小鼠成纖維細(xì)胞中的表達(dá)情況，重組質(zhì)粒需要導(dǎo)入真核細(xì)胞，即實(shí)驗(yàn)中篩選轉(zhuǎn)化的細(xì)胞使應(yīng)在培養(yǎng)基中添加新霉素。（4）由題意，P載體含有的綠色熒光蛋白（GFP）基因，故為檢測(cè)瘦素基因是否成功表達(dá)，可用的鑒定方法是抗原—抗體雜交、檢測(cè)細(xì)胞綠色熒光的強(qiáng)度。進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)，可以獲得更多能表達(dá)融合蛋白的細(xì)胞。故答案為：（1）3'；HindⅢ和BamHⅠ切割位點(diǎn)（2）（3）新霉素（4）抗原—抗體雜交、檢測(cè)細(xì)胞綠色熒光的強(qiáng)度；動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)【點(diǎn)評(píng)】本題考查基因工程等相關(guān)知識(shí)，意在考查學(xué)生的識(shí)記能力和判斷能力，運(yùn)用所學(xué)知識(shí)綜合分析問題的能力是解答本題的關(guān)鍵。20．黨的二十大對(duì)保障糧食安全提出了更高要求，馬鈴薯塊莖富含淀粉，而且其中的維生素是所有糧食中最全的，因此我國(guó)科學(xué)家對(duì)馬鈴薯這種重要糧食作物開展了大量研究。馬鈴薯因?yàn)樽越徊挥H和，所以只能進(jìn)行無(wú)性繁殖，我國(guó)科學(xué)家用CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)定點(diǎn)敲除二倍體馬鈴薯的自交不親和基因獲得了二倍體自交系的馬鈴薯。如圖1所示：（1）該技術(shù)利用一段與靶序列互補(bǔ)的向?qū)NA引導(dǎo)Cas9蛋白對(duì)特異靶向DNA進(jìn)行識(shí)別和定點(diǎn)敲除自交不親和基因，其中的Cas9蛋白相當(dāng)于限制酶，若要將自交不親和基因從目標(biāo)DNA上切除下來，需要設(shè)計(jì)2種不同的向?qū)NA。若靶序列為5′﹣AGCAT……GTACCT﹣3′，則設(shè)計(jì)的向?qū)NA中相應(yīng)的序列應(yīng)為3′﹣UCGUACAUGGA﹣5′。（2）MAP30蛋白是一種能使I型核酸核糖體失活的蛋白質(zhì)，實(shí)驗(yàn)表明MAP30蛋白具有抗pvx病毒功能，為培育高效表達(dá)該基因的馬鈴薯新品種，科研團(tuán)隊(duì)利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將MAP30基因?qū)腭R鈴薯細(xì)胞內(nèi)，如圖2所示：①選擇Ti質(zhì)粒做載體的原因是Ti質(zhì)粒上的T﹣DNA可轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞，并且整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上，構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)為避免反向拼接應(yīng)選擇XbaⅠ和HindⅢ識(shí)別切割質(zhì)粒，再用DNA連接酶連接。②個(gè)體水平上，可通過接種感染的方法檢測(cè)轉(zhuǎn)基因馬鈴薯是否具有抗病毒的特性，具體做法是向轉(zhuǎn)基因馬鈴薯植株和非轉(zhuǎn)基因馬鈴薯植株接種pvx病毒，觀察并對(duì)比它們的感染情況。【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．【專題】圖文信息類簡(jiǎn)答題；基因工程．【答案】（1）限制23′﹣UCGUACAUGGA﹣5′（2）Ti質(zhì)粒上的T﹣DNA可轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞，并且整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上XbaⅠ和HindⅢDNA連接酶接種感染向轉(zhuǎn)基因馬鈴薯植株和非轉(zhuǎn)基因馬鈴薯植株接種pvx病毒，觀察并對(duì)比它們的感染情況【分析】1、由圖可知，CRISPR/Cas基因編輯技術(shù)可以定點(diǎn)敲除目標(biāo)基因。向?qū)NA是一條單鏈RNA，能夠引導(dǎo)Cas9蛋白到一個(gè)特定的基因位點(diǎn)進(jìn)行切割。2、基因工程技術(shù)的基本步驟：（1）目的基因的獲?。豪肞CR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成法。（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法和花粉管通道法。農(nóng)桿菌細(xì)胞內(nèi)含有Ti質(zhì)粒，當(dāng)它侵染植物細(xì)胞后，能將Ti質(zhì)粒上的T﹣DNA（可轉(zhuǎn)移的DNA）轉(zhuǎn)移到被侵染的細(xì)胞，并且將其整合到該細(xì)胞的染色體DNA上。根據(jù)農(nóng)桿菌的這種特點(diǎn)，如果將目的基因插入TI質(zhì)粒的T﹣DNA中，通過農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化作用，就可以使目的基因進(jìn)入植物細(xì)胞。將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法，將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)和個(gè)體水平上的鑒定?！窘獯稹拷猓海?）①普通（非轉(zhuǎn)基因）馬鈴薯不能自交，科學(xué)家通過CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)定點(diǎn)敲除倍體馬鈴薯的自交不親和基因后可解決自交不親和現(xiàn)象，說明其不能自交的根本原因是存在自交不親和基因。②識(shí)圖分析可知，向?qū)NA引導(dǎo)Cas9蛋白對(duì)特異靶向DNA進(jìn)行識(shí)別和定點(diǎn)敲除自交不親和基因，Cas9蛋白能夠切割DNA，斷裂的是磷酸二酯鍵，因而Cas9蛋白具有類似限制酶的作用。根據(jù)題圖及題干信息，向?qū)NA的識(shí)別序列是單鏈RNA序列，能夠利用堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，進(jìn)行特異性識(shí)別目標(biāo)DNA的作用，因而必須根據(jù)靶（目標(biāo)）基因的序列（自交不親和基因序列）來設(shè)計(jì)2種不同的向?qū)NA。若靶序列為5′﹣AGCAT……GTACCT﹣3′，則根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，設(shè)計(jì)的向?qū)NA中相應(yīng)的序列應(yīng)為3′﹣UCGUACAUGGA﹣5′。（2）①利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法可以將目的基因?qū)腭R鈴薯細(xì)胞內(nèi)，農(nóng)桿菌中含有Ti質(zhì)粒，在Ti質(zhì)粒中含有T﹣DNA，即可轉(zhuǎn)移的DNA，選擇Ti質(zhì)粒做載體可以將目的基因插入到T﹣DNA中，Ti質(zhì)粒上的T﹣DNA可轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞，并且整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上。構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)需要將目的基因插入到Ti質(zhì)粒的T﹣DNA中，為避免目的基因與質(zhì)粒的反向拼接，同時(shí)為了避免破壞目的基因并將其插入啟動(dòng)子和終止子之間進(jìn)行正向連接，應(yīng)選擇XbaⅠ和HindⅢ兩種限制酶，再用DNA連接酶連接。②檢測(cè)轉(zhuǎn)基因馬鈴薯是否具有抗病毒的特性，在個(gè)體水平上可以用接種感染法。向轉(zhuǎn)基因馬鈴薯植株和非轉(zhuǎn)基因馬鈴薯植株接種pvx病毒，觀察并對(duì)比它們的感染情況，如果轉(zhuǎn)基因表達(dá)成功，那么病毒對(duì)轉(zhuǎn)基因馬鈴薯幾乎沒有影響。故答案為：（1）限制23′﹣UCGUACAUGGA﹣5′（2）Ti質(zhì)粒上的T﹣DNA可轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞，并且整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上XbaⅠ和HindⅢDNA連接酶接種感染向轉(zhuǎn)基因馬鈴薯植株和非轉(zhuǎn)基因馬鈴薯植株接種pvx病毒，觀察并對(duì)比它們的感染情況【點(diǎn)評(píng)】本題考查了基因工程的相關(guān)知識(shí)，意在考查考生理解所學(xué)知識(shí)要點(diǎn)，把握知識(shí)間內(nèi)在聯(lián)系的能力；能運(yùn)用所學(xué)知識(shí)，對(duì)生物學(xué)問題作出準(zhǔn)確的判斷，難度適中。

考點(diǎn)卡片1．單克隆抗體及其應(yīng)用【知識(shí)點(diǎn)的認(rèn)識(shí)】1、抗體：一個(gè)B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體．從血清中分離出的抗體產(chǎn)量低、純度低、特異性差．2、單克隆抗體的制備（1）制備產(chǎn)生特異性抗體的B淋巴細(xì)胞：向免疫小鼠體內(nèi)注射特定的抗原，然后從小鼠脾內(nèi)獲得相應(yīng)的B淋巴細(xì)胞（2）獲得雜交瘤細(xì)胞①將鼠的骨髓瘤細(xì)胞與脾細(xì)胞中形成的B淋巴細(xì)胞融合；②用特定的選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，該雜種細(xì)胞既能夠增殖又能產(chǎn)生抗體．（3）克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè)（4）將雜交瘤細(xì)胞在體外培養(yǎng)或注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖（5）提取單克隆抗體：從細(xì)胞培養(yǎng)液或小鼠的腹水中提取3、單克隆抗體的應(yīng)用（1）作為診斷試劑，具有準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速的優(yōu)點(diǎn)．（2）用于治療疾病和運(yùn)載藥物．2．體外受精和胚胎移植【知識(shí)點(diǎn)的認(rèn)識(shí)】胚胎移植（1）胚胎移植是指將雌性動(dòng)物的早期胚胎，或者通過體外受精及其它方式得到的胚胎，移植到同種的、生理狀態(tài)相同的其它雌性動(dòng)物的體內(nèi)，使之繼續(xù)發(fā)育為新個(gè)體的技術(shù)．其中提供胚胎的個(gè)體稱為“供體”，接受胚胎的個(gè)體稱為“受體”．（供體為優(yōu)良品種，作為受體的雌性動(dòng)物應(yīng)為常見或存量大的品種．）地位：如轉(zhuǎn)基因、核移植，或體外受精等任何一項(xiàng)胚胎工程技術(shù)所生產(chǎn)的胚胎，都必須經(jīng)過胚胎移植技術(shù)才能獲得后代，是胚胎工程的最后一道“工序”．（2）胚胎移植的意義：大大縮短了供體本身的繁殖周期，充分發(fā)揮雌性優(yōu)良個(gè)體的繁殖能力．（3）生理學(xué)基礎(chǔ)：①動(dòng)物發(fā)情排卵后，同種動(dòng)物的供、受體生殖器官的生理變化是相同的．這就為供體的胚胎移入受體提供了相同的生理環(huán)境．②早期胚胎在一定時(shí)間內(nèi)處于游離狀態(tài)．這就為胚胎的收集提供了可能．③受體對(duì)移入子宮的外來胚胎不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)．這為胚胎在受體的存活提供了可能．④供體胚胎可與受體子宮建立正常的生理和組織聯(lián)系，但供體胚胎的遺傳特性在孕育過程中不受影響．（4）基本程序主要包括：①對(duì)供、受體的選擇和處理．選擇遺傳特性和生產(chǎn)性能優(yōu)秀的供體，有健康的體質(zhì)和正常繁殖能力的受體，供體和受體是同一物種．并用性激素進(jìn)行同期發(fā)情處理，用促性腺激素對(duì)供體母牛做超數(shù)排卵處理．②配種或人工授精．③對(duì)胚胎的收集、檢查、培養(yǎng)或保存．配種或輸精后第7天，用特制的沖卵裝置，把供體母牛子宮內(nèi)的胚胎沖洗出來（也叫沖卵）．對(duì)胚胎進(jìn)行質(zhì)量檢查，此時(shí)的胚胎應(yīng)發(fā)育到桑椹或胚囊胚階段．直接向受體移植或放入﹣196℃的液氮中保存．④對(duì)胚胎進(jìn)行移植．⑤移植后的檢查．對(duì)受體母牛進(jìn)行是否妊娠的檢查．3．限制性內(nèi)切核酸酶【知識(shí)點(diǎn)的認(rèn)識(shí)】（1）限制性內(nèi)切核酸酶的作用原理：識(shí)別雙鏈DNA分子的特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的磷酸二酯鍵斷開。（2）限制性內(nèi)切核酸酶切割產(chǎn)生的DNA片段通常有粘性末端和平末端?！久}方向】DNA重組技術(shù)需要使用多種工具酶，如圖為4種限制性內(nèi)切核酸酶的切割位點(diǎn)示意圖。下列敘述正確的是（）A．限制性內(nèi)切核酸酶的識(shí)別序列只能由6個(gè)核苷酸組成B．SpeⅠ和XbaⅠ切割的DNA片段可以用T4DNA連接酶連接C．SmaⅠ和EcoRⅤ切割的DNA片段可以用E.coliDNA連接酶連接D．SpeⅠ和XbaⅠ切割的DNA片段連接后，仍能被SpeⅠ和XbaⅠ識(shí)別切割分析：1、分析圖示可知：EcoRⅠ和PstⅠ切割DNA后產(chǎn)生的是黏性末端，SmaⅠ和EcoRⅤ切割DNA后產(chǎn)生的是平末端。2、E.coliDNA連接酶只能連接黏性末端；T4DNA連接酶既可連接平末端，又可連接黏性末端。解答：A、多數(shù)限制酶識(shí)別的序列是6個(gè)核苷酸組成的，也有少數(shù)限制酶的識(shí)別序列由4、5或8個(gè)核苷酸組成，A錯(cuò)誤；B、SpeⅠ和XbaⅠ切割的DNA片段有相同的黏性末端，可以用T4DNA連接酶連接，B正確；C、由圖可知，SmaⅠ和EcoRV切出的為平末端，應(yīng)用T4DNA連接酶連接，C錯(cuò)誤；D、由圖可知，SpeⅠ和XbaⅠ識(shí)別序列不同，SpeⅠ和XbaⅠ切割的DNA片段連接后，若為SpeⅠ切割的兩個(gè)片段連接，則不能被XbaⅠ切割，反之亦然，D錯(cuò)誤。故選：B。點(diǎn)評(píng)：本題主要考查DNA重組技術(shù)的基本工具、目的基因的獲取的內(nèi)容，要求考生識(shí)記相關(guān)知識(shí)，并結(jié)合所學(xué)知識(shí)準(zhǔn)確答題。【解題思路點(diǎn)撥】掌握限制性內(nèi)切核酸酶的相關(guān)知識(shí)是解題的關(guān)鍵。4．DNA連接酶【知識(shí)點(diǎn)的認(rèn)識(shí)】基因工程操作過程中，DNA連接酶常用的種類和異同。常用類型E?coliDNA連接酶T4DNA連接酶來源大腸桿菌T4噬菌體功能只縫合黏性末端縫合黏性末端和平末端（連接平末端的效率相對(duì)較低）【命題方向】如圖為部分限制酶的酶切位點(diǎn)，下列相關(guān)敘述正確的是（）A．限制酶識(shí)別單鏈DNA分子的特定核苷酸序列B．限制酶作用于DNA分子一端后可產(chǎn)生4個(gè)游離磷酸基團(tuán)C．限制酶HindⅠ作用后，產(chǎn)生的黏性末端可表示為﹣AGCTTD．限制酶SpeⅠ和XbaⅠ作用后的黏性末端可被DNA連接酶連接分析：限制酶具有特異性，能夠識(shí)別DNA分子中的特定核苷酸序列并進(jìn)行切割，使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂，最終形成黏性末端或平末端。解答：A、限制酶能識(shí)別雙鏈DNA分子的特定核苷酸序列，A錯(cuò)誤；B、限制酶作用于DNA分子一端后有1個(gè)切口，可產(chǎn)生2個(gè)游離磷酸基團(tuán)，B錯(cuò)誤；C、據(jù)圖可知，限制酶HindⅢ作用后，產(chǎn)生的黏性末端可表示為﹣AGCT，C錯(cuò)誤；D、據(jù)圖可知，限制酶SpeⅠ和XbaⅠ作用后的黏性末端均為﹣GATC，可被DNA連接酶連接，D正確。故選：D。點(diǎn)評(píng)：本題考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)，能將教材中的知識(shí)結(jié)合題中信息進(jìn)行遷移應(yīng)用?！窘忸}思路點(diǎn)撥】掌握DNA連接酶的相關(guān)知識(shí)是解題的關(guān)鍵。5．DNA的粗提取與鑒定【知識(shí)點(diǎn)的認(rèn)識(shí)】DNA粗提取和鑒定的原理：（1）DNA的溶解性：DNA和蛋白質(zhì)等其他成分在不同濃度NaCl溶液中溶解度不同；DNA不溶于酒精溶液，但細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)溶于酒精；DNA對(duì)酶、高溫和洗滌劑的耐受性。（2）DNA的鑒定：在沸水浴的條件下，DNA遇二苯胺會(huì)被染成藍(lán)色?！久}方向】下列有關(guān)“DNA粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn)的敘述，正確的是（）A．植物材料需先用洗滌劑破壞細(xì)胞壁再吸水漲破，釋放DNAB．在新鮮豬血中加入適量的檸檬酸鈉，混合均勻后離心取血細(xì)胞液C．在含有DNA的2mol/L的氯化鈉溶液中加入蒸餾水，攪拌出現(xiàn)絲狀物后停止加水D．鑒定DNA時(shí)，將絲狀物溶解于2mol/L的氯化鈉溶液中，再加入二苯胺試劑進(jìn)行沸水浴分析：DNA粗提取和鑒定的原理：（1）DNA的溶解性：DNA和蛋白質(zhì)等其他成分在不同濃度NaCl溶液中溶解度不同；DNA不溶于酒精溶液，但細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)溶于酒精；DNA對(duì)酶、高溫和洗滌劑的耐受性。（2）DNA的鑒定：在沸水浴的條件下，DNA遇二苯胺會(huì)被染成藍(lán)色。解答：A、植物材料需先用洗滌劑破壞細(xì)胞膜，再吸水漲破，釋放DNA，A錯(cuò)誤；B、哺乳動(dòng)物（豬血）成熟的紅細(xì)胞沒有DNA，不能用于提取DNA，在新鮮雞血中加入適量的檸檬酸鈉，目的是防止血液凝固，混合均勻后離心，取血細(xì)胞的沉淀物，B錯(cuò)誤；C、在含有DNA的2mol/L的氯化鈉溶液中加入蒸餾水，NaCl的濃度逐漸降低，DNA析出，待絲狀物不再增加后停止加水，C錯(cuò)誤；D、鑒定DNA時(shí)，將絲狀物溶解于水中，再加入二苯胺試劑進(jìn)行沸水浴，出現(xiàn)藍(lán)色，D正確。故選：D。點(diǎn)評(píng)：本題主要考查的是DNA的粗提取與鑒定的相關(guān)知識(shí)，意在考查學(xué)生對(duì)基礎(chǔ)知識(shí)的理解掌握，難度適中。【解題思路點(diǎn)撥】掌握DNA的粗提取與鑒定的相關(guān)知識(shí)是解題的關(guān)鍵。6．基因表達(dá)載體的構(gòu)建【知識(shí)點(diǎn)的認(rèn)識(shí)】構(gòu)建基因表達(dá)載體的過程：首先用一定的限制酶切割載體，使它出現(xiàn)一個(gè)切口；然后用同種限制酶或能產(chǎn)生相同末端的限制酶切割含有目的基因的DNA片段；再利用DNA連接酶將目的基因片段拼接到載體的切口處，這樣就形成了一個(gè)重組DNA分子?！久}方向】構(gòu)建基因表達(dá)載體的過程是基因工程的核心步驟，下列相關(guān)說法正確的是（）A．基因表達(dá)載體的構(gòu)建至少需要兩種工具酶B．構(gòu)建基因表達(dá)載體的目的是使目的基因在受體細(xì)胞中能穩(wěn)定存在且遺傳給下一代C．一個(gè)基因表達(dá)載體一般包括目的基因、標(biāo)記基因、起始密碼子和終止密碼子等結(jié)構(gòu)D．基因表達(dá)載體中啟動(dòng)子具有DNA聚合酶的結(jié)合部位，啟動(dòng)復(fù)制過程分析：1、基因工程需要用到的工具酶是限制酶和DNA連接酶。2、基因工程的基本步驟：（1）目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸?kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因﹣﹣DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA﹣﹣分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)﹣﹣抗原﹣抗體雜交技術(shù)。個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。解答：A、基因表達(dá)載體的構(gòu)建是基因工程的核心步驟，需要限制酶和DNA連接酶的參與，A正確；B、目的基因不能直接導(dǎo)入受體細(xì)胞，因此構(gòu)建基因表達(dá)載體是為了使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在且遺傳給下一代，B正確；C、基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因等部分，而密碼子是mRNA上的三個(gè)相鄰的堿基構(gòu)成的，C錯(cuò)誤；D、基因表達(dá)載體中啟動(dòng)子具有RNA聚合酶的結(jié)合部位，啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄過程，D錯(cuò)誤。故選：AB。點(diǎn)評(píng)：本題考查基因工程的原理及技術(shù)，要求考生識(shí)記基因工程的概念、原理、工具、操作步驟及應(yīng)用，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確判斷各選項(xiàng)，屬于考綱識(shí)記和理解層次的考查?！窘忸}思路點(diǎn)撥】掌握基因表達(dá)載體的構(gòu)建的相關(guān)知識(shí)是解題的關(guān)鍵。7．基因工程的操作過程綜合【知識(shí)點(diǎn)的認(rèn)識(shí)】基因工程的概念基因工程是指按照人們的愿望，進(jìn)行嚴(yán)格的設(shè)計(jì)，通過體外DNA重組和轉(zhuǎn)基因技術(shù)，賦予生物以新的遺傳特性，創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品．基因工程是在DNA分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)和施工的，又叫做DNA重組技術(shù)．（一）基因工程的基本工具1、“分子手術(shù)刀”﹣﹣限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）（1）來源：主要是從原核生物中分離純化出來的．（2）功能：能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開，因此具有專一性．（3）結(jié)果：經(jīng)限制酶切割產(chǎn)生的DNA片段末端通常有兩種形式：黏性末端和平末端．2、“分子縫合針”﹣﹣DNA連接酶（1）兩種DNA連接酶（E?coliDNA連接酶和T4DNA連接酶）的比較：①相同點(diǎn)：都縫合磷酸二酯鍵．②區(qū)別：E?coliDNA連接酶來源于大腸桿菌，只能將雙鏈DNA片段互補(bǔ)的黏性末端之間的磷酸二酯鍵連接起來；而T4DNA連接酶來源于T4噬菌體，可用于連接粘性末端和平末端，但連接效率較低．（2）與DNA聚合酶作用的異同：DNA聚合酶只能將單個(gè)核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯鍵．DNA連接