DB12T 866-2019 水和沉積物中孔雀石綠及其代謝物殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法　　

水和沉積物中孔雀石綠及其代謝物殘留量的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法天津市市場監(jiān)督管理委員會發(fā)布I本標準按照GB/T1.1-2009給出的規(guī)則起草。本標準由天津市漁業(yè)發(fā)展服務(wù)中心提出并歸口。本標準起草單位：農(nóng)業(yè)農(nóng)村部漁業(yè)環(huán)境及水產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗測試中心(天津)。本標準主要起草人：陳永平、李春青、時文博、高麗娜、李寶華。1水和沉積物中孔雀石綠及其代謝物殘留量的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)本標準規(guī)定了水質(zhì)及沉積物中孔雀石綠和無色孔雀石綠殘留凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法沉積物中孔雀石綠(MalachiteGreenMG)及其代謝物無色孔雀石綠(LeucomalachiteGreenLMG)殘留提取，利用N,N,N’,N'-四甲基對苯二胺(2,3,5,6-tetramethyl-1,4-phenylenediamin4試劑4.1孔雀石綠及無色孔雀石綠標準品：孔雀石綠純度>98%,無色孔雀石綠純度>98%。4.2乙腈：色譜純。4.4二氯甲烷。4.5實驗用水符合GB/T6682一級水指標4.62.0mmoL·L1乙酸銨緩沖溶液：稱取0.077g無水乙酸銨溶解于適量水中，再加入0.5mL甲酸，4.7TMPD溶液(1.0mgmL):稱取50mgN,N,N',N'-四甲基對苯二胺(TMPD)溶于50mL甲醇4.8孔雀石綠(MG)、無色孔雀石綠(LMG)標準儲備液(100μgmL1):準確稱取適量的孔雀石綠、無色孔雀石綠標準品，分別用乙腈溶解并定容，于-18℃避光保存，可使用1年。取適量的氘代孔雀石綠和氘代無色孔雀石綠標準品，分別用乙腈溶解并定容，用1年。4.10混合外標標準中間液(1.0μgmL1):分別準確吸取1.0mL孔雀石綠和無色孔雀石綠的標準儲備液(4.7)于100mL容量瓶中，用乙腈稀釋定容，于-18℃避光保存，可使用6個月。24.11混合內(nèi)標標準中間液(1.0μgmL1):分別準確吸取1.0mL氘代孔雀石綠和氘代無色孔雀石綠標準儲備液(4.8)于100mL容量瓶中，用乙腈稀釋定容，于-18℃避光保存，可使用6個月。4.12混合外標標準使用液(0.10μgmL1):準確吸取1.00mL混合外標標準中間液(4.9)于10.0mL容量瓶中，用乙腈稀釋定容，于-18℃避光保存，可使用1個月。4.13混合內(nèi)標標準使用液(0.10μgmL1):準確吸取1.00mL混合內(nèi)標標準中間液(4.10)于10.0mL容量瓶中，用乙腈稀釋定容，于-18℃避光保存，可使用1個月。4.14混合標準工作液：臨用時準確吸取相應(yīng)體積的混合外標標準使用液(4.11),再加入混合內(nèi)標標準使用液(4.12)20μL,用乙腈和2.0mmoL·L1乙酸銨緩沖溶液(1:1,V/V)稀釋定容至1mL,標準曲線系列濃度分別為0.5、1.0、2.0、5.5.1液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：配有電噴霧(ESI)離子源。5.2電子天平：感量1.0mg和0.01mg。5.3高速冷凍離心機：可制冷到4℃(最大轉(zhuǎn)速高于10000r/min)。5.6移液器(10μL,20μL,50μL,100μL,1000μL)。5.8純水器。5.9冰箱：具有4℃冷藏箱和達到-18℃以下冷凍箱。6測定步驟6.1樣品制備6.1.1水：將采集水樣過0.45μm濾膜，收集水樣體積1L,于4℃冰箱保存，6d內(nèi)測定。6.1.2沉積物：將沉積物置于陰涼處風干，研磨過篩(150目),收集沉積物質(zhì)量20g,于4℃冰箱6.2.1水：量取水樣500mL,置于分液漏斗中，加入40μL混合內(nèi)標標準使用液(4.12),再加入30mL的二氯甲烷，振搖5min,靜置30min,取下層二氯甲烷于錐形瓶中，再加入30mL二氯甲烷重復一次，若分層不明顯，取其下層液于50mL離心管中，冷凍離心機6000r/min離心3min,再取下層液，合并于錐形瓶中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度30℃,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至近干，殘留物加入2.0mL的乙腈-2mmoL·L1乙酸銨溶液(1:1,V/V)(4.5),渦旋振蕩1min,超聲波振蕩2min,過0.22μm有機相濾6.2.2沉積物：稱取粉末狀沉積物樣品(5.0±0.01)g于50mL聚乙烯離心管中，先加入200μLTMPD溶液(4.6),再加入40山混合內(nèi)標標準使用液(4.12),加入20mL二氯甲烷，渦旋2min,超聲波震蕩25min,6000r/min離心5min,取上層液于錐形瓶中，再向離心管中加入20mL二氯甲烷，重復上述操作，合并上清液錐形瓶中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度30℃,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至近干，殘留物加入2.0mL3的乙腈-2mmoL·L1乙酸銨溶液(1:1,V/)(4.5),渦旋振蕩1min,超聲波振蕩2min,過0.22μm6.3標準工作曲線制作分別準確移取100ng·mL1混合外標標準使用液(4.11),乙腈稀釋至0.50ngmL1、1.0ngmL1、6.4測定6.4.1色譜條件色譜柱：C柱，2.2μm,75mm×2.1mm(內(nèi)徑),或相當。柱溫：35℃。樣品室溫度：15℃。5.0μL;具體參數(shù)見表1。流速：0.25mL·min?1。表1流動相梯度洗脫程序時間(min)272926.4.2質(zhì)譜條件離子化模式：電噴霧離子源(ESI),正離子模式。離子源溫度：600℃。氣簾氣：25;碰撞氣：中；噴霧電壓：5000v;輔氣1:60;輔氣2:40。掃描模式：多反應(yīng)監(jiān)測(MRM,反應(yīng)監(jiān)測母離子、子離子、錐孔電壓和碰撞能量見表2。表2目標化合物質(zhì)譜條件目標化合物母離子(m/z)子離子(m/z)去簇電壓(v)碰撞能量(ev)46.5定性依據(jù)表3基峰與次強碎片離子豐度比要求次強碎片離子相對豐度(%)允許相對偏差(%)6.6定量測定6.7空白試驗7計算7.1用儀器自帶工作站按內(nèi)標法進行自動計算，以化合物上機響應(yīng)的峰面積與內(nèi)標物峰面積比值為縱7.2水樣品中孔雀石綠及其代謝物殘留量按式(1)計算。計算結(jié)果須扣除空白值。C——試樣溶液中目標物含量，單位為納克每毫升(ngmL1);V——試樣體積，單位為毫升(mL);V——試樣定容體積，單位為毫升(mL)。7.3沉積物樣品中孔雀石綠及其代謝物殘留量按式(2)計算。計算結(jié)果須扣除空白值。C試樣溶液中目標物含量，單位為納克每毫升(ngmL1);m——試樣質(zhì)量，單位為克(g);59.1水質(zhì)中添加濃度為4ng·L1~100ng·L1時回收率為70%～110%。9.2沉積物中添加濃度為0.4μg·kg1~106■XICof+MRM(6pairs):329300/313.100DalD:MG-313fromSample2(BLANK)ofDataSET1.wif(Turbo..2.052.773SXICof+MRM(6pairs):334.300318.200DalD:MG-DfromSample2(BLANK)ofDataSET1.wff(TurboS0.00XICof+MRM(6pairs):331.300/316.300DaID:LMG-316fromSample2(BLANK)ofDataSET1.wiff(Turb…3331.552.0706093139|2.180XICof+MRM(6pairs):337.300/322300DalD:LMG-DfromSample2(BLANK)ofDataSET1.wff(Turbo…7(資料性附錄)孔雀石綠及其代謝物混合標準特征離子色譜圖(10ng·mL1)XICof+MRM(6pairs):334DaID:MG-DfromSample7(10)ofDataSET1XICof+MRM(6pairs)DaID:LMG-316fromSample7XICof+MRM(6pairs):337.300/322.3DaID:LMG-DfromSample7(10)ofDataSET1.wif(TurboSpra..8(資料性附錄)沉積物加標特征離子色譜圖(2.0μgkg?)XICof+MRM(6pairs):329.300/313.100DaIXICof+MRM(6pairs):334.300/318.200DaID:MG-DfTime,minXICof+MRM(6pairs):331.300/316.30XICof+MRM(6pairs):337.300/322.9■XICof+MRM(6pairs):329300/313.100DalD:MG-313fromSam303.5XICof+MRM(6pairs):331.300/316.300DaID:LMG-316fromSample23(BLANK)ofDaXICof+MRM(6pairs):337.300/322.300DalD:LMG-DfromSample23(BLANK)ofD(資料性附錄)XICof+MRM(6